Uso de Extratos de Plantas no Controle de Rhipicephalus (Boophilus) microplus em Ensaios in vitro

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1 Uso de Extratos de Plantas no Controle de Rhipicephalus (Boophilus) microplus em Ensaios in vitro Use of Plant Extracts in the Control of Rhipicephalus (Boophilus) microplus in vitro Experiments COSTA JUNIOR, Rômulo Gonçalves 1 ; SANTI, Francielen Maria 2 ; BUKOWSKI, Sávia Sanches 1 ; SOUZA, Karolaine Alves 1 ; MATOS, Carla Araújo 3 ; GORDIN, Leonardo Willian 4 Escola Estadual Castro Alves, Dourados, MS, romulogcosta@hotmail.com; savia_bukowski@hotmail.com, karolaine.id@hotmail.com; 2 Faculdade Anhanguera de Dourados FAD, Dourados, MS, francielenmaria@yahoo.com.br; 4 Escola Agrícola Padre André Capélli, Dourados, MS, flaviaamatos@yahoo.com.br; 4 Faculdade da Amazônia FAMA, Vilhena, RO, lwillianf@hotmail.com. Resumo: No bovino o carrapato Boophilus microplus é responsável por sérios prejuízos de natureza econômica, que se manifestam por perdas na produção de carne, leite, ou sanitária, comportando-se como vetor de agentes infecciosos como Babesia spp. e Anaplasma spp, hematozoários responsáveis pelos maiores índices de mortalidade em rebanhos bovinos de regiões tropicais e subtropicais. Neste estudo objetivou-se avaliar a eficácia de fitoterápicos no controle do Boophilus microplus. Foram avaliados, in vitro, cinco extratos de produtos vegetais, Azadirachta indica (Neen), Capsicum baccatum (Pimenta malagueta), Ocimum basilicum (Manjericão), Cyperus rotundus (Tiririca) e a Ruta graveolens (Arruda). Os resultados revelaram eficácia inferior a 95% para os extratos testados. Os fitoterápicos apresentaram indícios de atividade biológica na mortalidade de fêmeas ingurgitadas e inibição de eclosão, e a Ruta graveolens alcançou os melhores índices de eficácia com 60,35%, sendo a melhor opção dentre os fitoterápicos testados neste experimento. Palavras-chave: Bovinos, Carrapatos, Fitoterapia, Resistência parasitária Abstract: Boophilus microplus, the bovine tick, is responsible for serious economic damages, what can be expressed by losses in meat or milk production and sanitary losses, behaving as infectious agents vector like Babesia spp. and Anaplasma spp. hematozoa, which are responsible for the largest mortality rate in bovine flocks of tropical and subtropical areas. The aim of this research was to evaluate the efficacy of plant extracts in the control of Boophilus microplus. Five plant extracts, Azadirachta indica, Capsicum baccatum, Ocimum basilicum, Cyperus rotundus and Ruta graveolens, were evaluated for Boophilus microplus control. The results showed that the plant extracts tested had efficacy lower than 95%. The extracts of all plants have shown some biological activity in the mortality of ingurgitated females and inhibition of egg crash, and the extract of Ruta graveolens presented efficacy than 60,35%, being the best sample tested in this experiment. Key-words: Bovines, Ticks, Extracts of plants, Parasite resitance 1

2 Introdução No Brasil, o carrapato Rhipicephallus (Boophilus) microplus é um problema para a bovinocultura (PIZANOTO; SILVA 2012), fato este está relacionado com as características climáticas que favorece o desenvolvimento desses parasitas (BUZATTI et al., 2011). Os carrapatos são hematófagos e seu principal hospedeiro é o bovino, podendo parasitar também ovinos, equinos e até mesmo seres humanos, estando amplamente distribuído nos grandes rebanhos bovinos da América, África, Ásia e Oceania (JOHNSTON; KEMP; PEARSON, 1986). Durante a hematofagia, os carrapatos inoculam toxinas que promovem alterações fisiológicas nos animais infectados. De acordo com Campos et al. (2012), neste processo pode ainda ocorrer a transmissão de agentes infecciosos, principalmente Anaplasma sp. e Babesia sp., responsáveis pelo complexo Tristeza Parasitaria Bovina (TPB). Segundo cálculos do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abatecimento MAPA, o carrapato Boophilus microplus causa prejuízo anual de dois bilhões de dólares à bovinocultura brasileira. Patarroyo; Lombana (2004) comenta que um carrapato adulto que ataca o gado diminui a sua produção de leite em 8,9ml/dia. Somadas as dezenas de carrapatos que atacam um único boi, observa-se a dimensão do leite perdido, redução da qualidade do couro do animal devido às cicatrizes ocasionadas na pele do hospedeiro durante a sua alimentação, além de prejudicar o desenvolvimento do animal, causando perda de peso, baixo crescimento, queda na eficiência reprodutiva, queda na produção de leite e aumento dos custos de produção (FERNANDES; FREITAS, 2001). O combate a esses parasitos tem consumido recursos no emprego de acaricidas químicos, contudo, o desenvolvimento de resistência a esses produtos tem progredido rapidamente (FERNANDES, 2000). Diversas pesquisas relacionadas ao controle de R. microplus estão sendo desenvolvidas, tais como: o desenvolvimento de vacinas, rotação de pastagens, cruzamentos com raças bovinas resistentes, controle biológico com alguns tipos de fungos e uso de homeopatia e extratos vegetais. Contudo, a maior parte dos pecuaristas utiliza ou tem acesso, apenas a produtos químicos para fazer o controle desse ectoparasita (CAMPOS et al., 2012). O mesmo autor comenta que a aplicações constantes de pesticidas sintéticos e o descarte indiscriminado da solução residual de carrapaticida têm sido responsáveis pelo aumento da resistência dos carrapatos aos pesticidas utilizados, intoxicação dos animais e dos aplicadores, resíduos de carrapaticidas nos produtos de origem animal e contaminação de solos e águas. Diante deste contexto, existe a necessidade imediata de uma alternativa aos produtos organossintéticos utilizados atualmente. 2

3 Desta forma, torna-se cada vez mais importante a busca de tratamentos naturais, entre os quais se destaca a utilização de vegetais. O uso de plantas para o controle de parasitas é considerado uma importante alternativa, podendo reduzir os impactos econômicos e causar menos danos ao ecossistema, quando comparada ao uso de pesticidas sintéticos. Além disso, a busca por produtos mais baratos e de fácil utilização e o aumento da resistência dos parasitos aos produtos alopáticos tem, nos últimos anos, incentivando o uso de plantas para o controle das parasitoses (SANTOS et al.; 2009). Objetivou-se por meio desse trabalho avaliar a eficácia de diferentes tipos de extratos etanólicos sobre teleóginas de R. microplus em experimentos in vitro. Metodologia O trabalho foi desenvolvido entre os meses de maio e junho de As plantas utilizadas para a produção dos extratos etanólicos foram extraídas do setor de plantas medicinais da Escola Agrícola Padre André Capélli. Foram utilizadas 200 g do material vegetal para cada tipo de tratamento aplicado (Tabela 1). Os extratos etanólicos foram obtidos por meio de um método de maceração a frio em etanol. O material vegetal foi seco a sombra por 10 dias, macerado e imerso em álcool cereal 90% por sete dias, e posteriormente realizada a filtração. Tabela 1. Plantas utilizadas quanto ao potencial carrapaticida Nome científico Nome vulgar Parte utilizada Azadirachta indica Neen Folhas Capsicum baccatum Pimenta malagueta Folhas Ocimum basilicum Manjericão Folhas, flores e haste Cyperus rotundus Tiririca Bulbo Ruta graveolens Arruda Folhas Com os extratos prontos, os mesmos foram envazados em frascos de vidros, acondicionados fora do alcance do sol. O processo de captura das teleóginas foi realizado nas primeiras horas do dia em uma propriedade rural de atividade leiteira do município de Dourados MS, foram coletadas aproximadamente 90 teleóginas ingurgitadas e em sequência encaminhadas para o laboratório de Biologia da Faculdade Anhanguera de Dourados FAD. Os animais foram selecionados, higienizadas em água destilada, pesadas e distribuídas em grupos de cinco de forma homogênea, para cada diluição de extrato 3

4 testado. Os animais foram selecionados quanto a sua integridade física, observando o aparelho bucal, lesões e número de patas (Figura 1). Figura 1. Teleóginas ingurgitadas na placa de Petri. O experimento foi desenvolvido em um Delineamento Inteiramente Casualizado (DIC) avaliando cinco extratos etanólicos e um tratamento controle negativo com uso de água destilada. Realizado em triplicada com 5 teleóginas por repetição. Cada grupo foi imerso nos tratamentos durante cinco minutos. Após esse procedimento, os grupos foram secos em papel toalha e colocados em placas de Petri, sendo acondicionados em estufa B.O.D. (± 27ºC e UR > 80%), durante 24 dias, período necessário para que ocorresse a postura (Figura 2). 4

5 Figura 2. Postura dos ovos de R. microplus após o período de 24 dias. Ao final do período de postura, a massa de ovos foi pesada, introduzida em seringas plásticas adaptadas (Figura 3) e acondicionadas em estufa B.O.D. (± 27ºC e UR > 80%) durante 21 dias, para a eclosão dos ovos, adaptado de Castro et al., (2010). Figura 3. Seringas adaptadas contendo ovos de R. microplus. 5

6 Para a análise da eclodibilidade dos ovos, as seringas foram colocadas no freezer, para sacrifício das larvas. Em seguida, depositou-se o conteúdo de cada seringa em frascos contendo álcool etílico e a eclodibilidade (%) foi estimada pela média da contagem de ovos e larvas em três alíquotas. A Eficácia dos Produtos (EP) foi calculada empregando-se as seguintes fórmulas propostas por Drummond et al. (1973): ER: Eficiência Reprodutiva * = estimativa do número de larvas em 1g de ovos. Os dados foram submetidos à análise de variância e quando significativo, foram submetidos ao teste de comparação de médias pelo teste de Tukey (p<0,05). Resultados e discussões Os dados de peso de postura, eclodibilidade e eficácia do produto, encontram-se na Tabela 1. Houve diferença para a variável, peso da postura (p<0,05), os tratamentos com o uso de extratos etanólicos de folhas de pimenta malagueta (C. baccatum) e folhas de arruda (R. graveolens) apresentaram 0,13 g e 0,15 g respectivamente, pesos estes bem inferiores aos do grupo controle (0,27 g). Segundo Barbosa et al., (2000) a arruda possui indicações terapêuticas contra doenças dos olhos, sarna, micoses e piolhos (Planta toda/decocção aplicado sobre as áreas afetadas). Ramon et al., (2011) avaliando o uso da pimenta malagueta em uma comunidade de várzea às margens do rio Amazonas em Santarém PA, observaram que esta variedade é indicada no tratamento de 30 tipos de enfermidades, entre elas estão: piolho, coceiras, ferroada de arraia e escorpião e febre. Guimarães et al. (2013) testando diversos tipos de soluções utilizando uma espécie da família Anacardiacea, observaram que o uso extrato etanólico não inibiu a postura das teleóginas. 6

7 TABELA 1. Médias peso de postura, eclodibilidade e Eficácia do Produto conforme os diferentes extratos etanólicos sobre teleóginas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Dourados, MS, Brasil, Extrato etanólico Peso da Postura (g) Eclodibilidade (%) Eficiência do Produto (%) Controle negativo 0,27 c 86,00 d 0,00 e Folhas de neen 0,26 c 75,00 b 13,49 d Folhas de pimenta malagueta 0,13 a 84,00 cd 43,98 b Folhas, flores e hastes de manjericão 0,20 b 61,33 a 42,94 b Raiz de tiririca 0,22 b 78,00 bc 22,44 c Folhas de arruda 0,15 a 55,00 a 60,35 a CV(%) 6,45 3,49 8,42 *Médias seguidas de letra iguais na mesma coluna não diferem entre si pelo teste de Tukey a 5% de significância. Já a variável eclodibilidade, verificou-se que as teleóginas tratadas com extratos etanóicos de folhas de arruda e folhas, flores e haste de manjericão foram mais eficientes (p<0,05), quando comparadas aos demais tratamentos, com 55 e 61,33% de eclodibilidade, respectivamente. Santos; Vogel; Monteiro (2012) avaliando o uso de óleo essencial de manjericão obteve resultados diferentes aos do presente trabalho, onde houve inibição de até 100% da eclodibilidade dos ovos. Resultados estes podem ser justificados pelos tipos de soluções utilizadas, uma vez que o uso que o óleo essencial permanece por maior período de tempo em contato com as teleóginas, quando comparado com o extrato etanólico por ser uma solução volátil. Diversas pesquisas avaliaram óleos essenciais e compostos isolados de plantas do gênero Ocimum e constataram que estes fitoterápicos possuem ação inseticida e acaricida (MWANGI et al., 1995; MURUGAN; MURUGAN; NOORTHEN, 2007, KOSTIC et al., 2008; DEL FABRO; NAZZI, 2008). O extrato de folhas de arruda foi o mais eficiente (p<0,05), com 60,35% de eficácia do produto, seguidos por 43,98% e 42,94% para tratamento com folhas de pimenta malagueta e folhas, flores e haste de manjericão. Soares (2003) testando Azadirachta indica (neem) in vitro sobre fêmeas ingurgitadas de R. (B) microplus obteve eficácia acima de 95% tanto para solução aquosa quanto para alcoólica. No entanto, testando o Cymbopogon citratus (capim cidreira) obteve eficácia de apenas 48%. 7

8 Em estudos in vitro, Heimerdinger et al. (2009) encontraram eficácia média de 45% utilizando o extrato alcoólico de C. citratus (capim limão), o que indica controle parcial deste fitoterápico sobre o carrapato bovino. Assim como no presente experimento, existem diversos fitoterápicos que não apresentam 100% de eficácia sobre o R. (B) microplus, mas poderiam ser utilizados de forma auxiliar no seu controle, uma vez que possuem ação acaricida e apresentam controle parcial do parasita. Santos; Vogel (2012) ressaltam que o uso de fitoterápicos é uma interessante opção para diminuir a aplicação de acaricidas químicos, embora geralmente apresentem uma eficácia inferior a estes produtos. Porém, associadas às formas de controle como a rotação de piquetes de pastagens e ação de predadores naturais, como a garça vaqueira (AMBROSANO, 1999), são estratégias que, somadas, podem minimizar os efeitos negativos causados pelo carrapato. Conclusões O extrato etanólico de folha de R. graveolens (arruda), folhas de C. baccatum (pimenta malagueta) e folhas, flores e haste de O. basilicum (manjericão), apresentam controle parcial em teleóginas ingurgitadas de R. microplus em ensaios in vitro, e, após avaliações in vivo, pode possuir um uso promissor como carrapaticida, inclusive em populações resistentes a bases químicas. Agradecimentos A Faculdade Anhanguera de Dourados por ter aberto as portas para a realização da presente pesquisa. Referências bibliográficas AMBROSANO, E Agricultura Ecológica, Guaíba: Agropecuária. 398p. BARBOSA, A. da S.; SOUSA, E.G. de; SILVA M.A.; OLIVEIRA, H.S.M.C.; MEDEIROS, M.B. de. Plantas Medicinais: Aspectos do Uso de Fitoterápicos na Melhoria da Qualidade de Vida Humana. Anais... X Encontro de Iniciação à docência João Pessoa. Disponível em: PMT01.pdf Acessado em: 07 de out

9 BUZATTI, A. KRAWCZAK, F. DA S.; PIVOTO, F.L.; VOGELI, F.S.F.; BOTTON, S. DE A.; ZANETTII, G.D.; MANFRON, M.P.; SANGIONI, L.A. Atividade acaricida in vitro de Glechon spathulata Benth. sobre teleóginas de R. (B.) microplus. Cienc. Rural, Santa Maria, v.41, n.10, p , CAMPOS, R.N.S.; BACCI, L.; ARAÚJO, A.P.A.; BLANK, A.F.; ARRIGONI-BLANK, M.F.; SANTOS, G.R.A.; RONER, M.N.B. Óleos essenciais de plantas medicinais e aromáticas no controle do carrapato Rhipicephalus microplus. Arch. Zootec. v.61, p.67-78, CASTRO, K.N. de C.; ISHIKAWA, M.M.; CAMPOLIN, A.I.; CATTO, J.B.; PEREIRA, Z.V.; CARDOSO, C.A.L.; CASTRO, M.M. de; SILVA, V.C. Prospecção de plantas medicinais para controle do carrapato dos bovinos. Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento. Embrapa Meio-Norte, Teresina PI, n.85, 33p, DRUMMOND, R.O.; ERNST, S.T.; TREVINO, J.L.; GLADNEY, W.J.; GRAHAM, O.H. Boophilus annulatus and B. microplus: laboratory tests of insecticides. Journal Economic Entomology, Annapolis, v.66, n.1, p , DEL FABRO, S.; NAZZI, F. Repellent effect of sweet basil compounds on Idoxes ricinus ticks. Experimental and Applied Acarology, Amsterdam, v. 45, n. 3, p , FERNANDES, F. de F; FREITAS, E. de P e S. Análise do uso de fenthion via epicutânea em cães para o controle de Rhipicephalus sanguineus. Rev. Soc. Bras. Med. Trop., Brasília, v.34, n 4, p , FERNANDES, F. de F. In vitro activity of permetrin, cipermetrin and deltamethrin on larvae of Rhipicephalus sanguineus. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, Belo Horizonte, v. 52, p , GUIMARÃES, R.E.; SCHNEIDER, A.; CORREA, J.; VIERO, L.M.; GEHRKE, I.T.S.; COLET. C. de F. Uso de preparacões a base de plantas no controle de Rhipicephallus (boophilus) microplus. Salão do conhecimento: Ciência, Saúde e Esporte. Anais XXI Seminário de Iniciação Científica. Ijuí SC. 4p, HEIMERDINGER, A.; MOLENTO, M.B.; OLIVO, C.J.; CARVALHO, N.M. DE; DEPNER, R.; AGNOLIN, C.A.; MEINERZ. G.R. Extratos de capim-cidreira e amitraz em teste in vitro sobre o carrapato bovino. Livestock Research for Rural Development, Cali, v.21, n.1, article 5, Disponível em: < Acesso em: 29 agosto JOHNSTON, L.A.Y.; KEMP, D.H.; PEARSON, R.D. Immunization of cattle against Boophilus microplus using extracts derived from adult female ticks: effects of induced 9

10 immunity on tick populations. International Journal for Parasitology, Sydney, v.16, n.1, p , KOSTIC, M.; POPOVIC, Z.; BRKIC, D.; MILANOVIC, S.; SIVCEV, I.; STANKOVIC, S. Larvicidal and antifeedant activity of some plant-derived compounds to Lymantria dispar L. (Lepidoptera: Limantriidae). Bioresource Technology, Miramar, v. 99, n. 16, p , MURUGAN, K.; MURUGAN, P.; NOORTHEN, A. Larvicidal and repellent potential of Albizzia amara Boivin and Ocimum basilicum Linn against dengue vector Aedes aegypti (Insecta: Diptera: Culicidae), Bioresource Technology, Miramar, v. 98, n. 1, p , MWANGI, E. N.; HASSANALI, A.; ESSUMAN, S.; MYANDAT, E.; MOREKA, L.; KIMONDO, M. Repellent and acaricidal properties of Ocimum suave against Rhipicephalus appendiculatus ticks. Experimental and Applied Acarology, Amsterdam, v. 19, n. 1, p , PATARROYO, J.H.S.; LOMBANA, C.G. Resposta imune a vacinas sintéticas anti Boophilus microplus. Revista Brasileira Parasitologia Veterinária, Rio de Janeiro, v.13, n.1, p , PIZONATO, R.; SILVA, A.S. Biocarrapaticidograma: Uma técnica a serviço do produtor. SB Rural. Chapecó, ed.88, ano , 1p. ROMAN, A.L.C.; MING, L.C.; CARVALHO, I. de ; SABLAYROLLES, M. das G. P. Uso medicinal da pimenta malagueta (Capsicum frutescens L.) em uma comunidade de várzea à margem do rio Amazonas, Santarém, Pará, Brasil. Bol. Mus. Para. Emílio Goeldi. Cienc. Hum., Belém, v.6, n.3, p , SANTOS, F.C.C. dos; VOGEL, F.S.F. Avaliação in vitro da ação do óleo essencial de capim limão (Cymbopogon citratus) sobre o carrapato bovino Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.14, n.4, p , SANTOS, F.C.C. dos; VOGEL, F.S.F.; MONTEIRO, S.G. Efeito do óleo essencial de manjericão (Ocimum basilicum L.) sobre o carrapato bovino Rhipicephalus (Boophilus) microplus em ensaios in vitro. Semina: Ciências Agrárias, Londrina, v. 33, n. 3, p SANTOS, T.R.B.; FARIAS, N.A.R.; CUNHA FILHO, N.A.; PAPPEN, F.G.; VAZ JUNIOR, I.S. Abordagem sobre o controle do carrapato R. (B.) microplus no sul do Rio Grande do Sul. Pesq. Vet. Bras. Seropédica, n.29, v.1, p.65-70,

11 SOARES, M.C.S.C. Avaliação comparativa da eficácia de fitoterápicos e produtos químicos carrapaticidas no controle de Boophilus microplus (Canestrini, 1887) por meio do biocarrapaticidograma Dissertação (Mestrado em Ciência Veterinária) Departamento de Medicina Veterinária. Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife. 11