Citoesqueleto e movimento celular Prof. Dr. Vinicius Farias Campos GBIOTEC - PPGB fariascampos@gmail.com
Abordagens... O que é e qual é a constituição do citoesqueleto Quais funções o citoesqueleto desempenha na célula Tipos de Filamentos do citoesqueleto Aplicações Biotecnológicas
O que é o citoesqueleto? é uma rede complexa de filamentos de proteínas que se estendem por todo citoplasma; forma um arcabouço interno para o grande volume do citoplasma, sustentando-o da mesma forma que uma estrutura metálica sustenta um prédio; é uma estrutura altamente dinâmica que se reorganiza rápida e continuamente; presente em células eucarióticas.
Composição Composto por 3 tipos de filamentos protéicos 1. Microfilamentos (filamentos de actina) 7 nm 2. Filamentos Intermediários 10 nm 3. Microtúbulos 25 nm Esses 3 tipos interagem entre si conferido estabilidade e dinâmica no citoesqueleto. Cada tipo de filamento é formado pela polimerização de monômeros específicos
Funções do citoesqueleto Dar estrutura e forma a célula Permitir que a célula altere sua forma Permitir o movimento celular Fornece a maquinaria necessária para movimentos intracelulares Na divisão celular segregação dos cromossomos Na interação célula-célula Na interação célula-matriz extracelular
25 nm 7 nm 10 nm Microfilamentos Filamentos intermedios 25nm 25µm 25nm 25µm Microtúbulos 25nm 25µm
Microfilamentos
Microfilamentos Principal proteína: Actina Estrutura: Polímeros helicoidais, duas cadeias de actina (G-Actina + ATP + Mg e K = Polímero) Estruturas flexíveis, com diâmetro de 5 a 9 nm, Organizados na forma de feixes lineares, redes bidimensionais e géis tridimensionais.
Filamentos de actina Células de rim de ratos PtK2 line
Microfilamentos Filamentos de actina concentrados logo abaixo da membrana plasmática Endocitose, pinocitose, migração celular, contração muscular Forma as microvilosidades superfície celular Encontra-se nas junções celulares manter células unidas Associam-se com inúmeros complexos protéicos
Microfilamentos em microvilosidades
Microfilamentos em protusões temporárias
Microfilamentos na contração muscular
Microfilamentos na citocinese Anel contráctil de actina e miosina
Microtúbulos (MT)
Microtúbulos (MT) São polímeros rígidos formados por 13 protofilamentos de tubulina a e b, em forma de filamentos longos e ocos, com 25 nm de diâmetro e são muito mais rígidos do que os filamentos de actina.
Microtúbulos (MT) shows the microtubules in longitudinal sample
Microtúbulos (MT) MET mostrando a distribuição de microtúbulos em células
Microtúbulos - imunofluorescência
Funções dos Microtúbulos Transporte (vesículas, organelas, cromossomos, etc) Formação do fuso mitótico Arquitetura celular (junto com FI e Microfilamentos) Movimento axonal Movimento de vesículas e organelas Movimento de cílios e Flagelos
Polimerização
Microtúbulos (MT) Nas células em interfase os microtúbulos partem do centrossoma, onde se encontram os centríolos e uma reserva de tubulina. A polimerização dos dímeros de tubulina possibilita o alongamento do microtúbulo e a despolimerização seu encurtamento. O sentido da polimerização da tubulina vai conferir uma polaridade ao microtúbulo: uma extremidade + (positiva) onde continua a polimerização e outra (-) negativa.
Polarização 1. Microtubulos organizam o interior da célula 2. A maioria das células diferenciadas são polarizadas
Polarização 1. Microtubulos são responsáveis pelo movimento de organelas, vesículas, proteínas
Microtúbulos nos neurônios - imunofluorescência
Microtúbulos Possuem polaridade - É essa polaridade que possibilita proteínas motoras trafegarem vesículas, organelas ou complexos protéicos associados aos microtúbulos num ou noutro sentido. DINEÍNA leva vesículas para o polo (-) CINESINA para o polo (+).
MT proteínas motoras
Transporte Pelos Microtúbulos DINEÍNA leva vesículas para o polo (-) CINESINA leva para o polo (+)
MT proteínas motoras
MT proteínas motoras 1. Organelas movem-se pelos microtúbulos 2. ER e Golgi são posicionado pelos microtúbulos
Microtúbulos Organizados Tipos Estruturas Localização Flagelos Cílios Centríolo Corpúsculo basal 9+2 9+2 3x9 3x9 Espermatozóides e em protozoários Células epiteliais do pulmão, deslocamento do óvulo Todas as células animais; região organizadora de microtúbulos Ancoragem e origem dos cílios
Cílios e Flagelos - Estruturas responsáveis pela motilidade celular - Constituídos por pequenos apêndices, especialmente diferenciados, que variam em número e tamanho - Se são escassos e longos recebem o nome de flagelos - Se numerosos e curtos são denominados cílios
Cílios
Cílios e Flagelos Desenho mostrando as diferenças de movimentos entre o cílios e o flagelo
Dineína gera movimento dos cilios e flagelos
Cilio Micrografia eletrônica de secções transversal e vertical de um cílio (arranjo em 9+2) corpúsculo basal
Centríolo - Estruturas cilíndricas, com 0,2 mm de largura e 0,4 mm de comprimento. - 9 grupos de três microtúbulos, fundidos em tripletes, formam a parede do centríolo e cada triplete se incline para dentro como as lâminas de uma turbina. Desenho esquemático do corpúsculo basal e Centríolo
Microtúbulos - imunofluorescência
Centríolo 1. É formado de um par e dispostos em em um ângulo reto 2. Formam o fuso mitótico para segregação dos cromossomos
Características comuns a microfilamentos e microtúbulos 1) Tanto os microfilamentos como os microtúbulos são constituidos por proteínas globulares 2) Em ambos casos, ~ 50% da proteína constituinte se encontra em forma solúvel os 50% restantes em forma de filamentos. 3) Formam estruturas MUITO DINÂMICAS, com um intercambio rápido de subunidades entre o "pool" solúvel e filamentoso. 4) Tanto os microfilamentos como os microtúbulos são estruturas "polarizadas (extremos distintos). 5) As estruturas formadas por microtúbulos e/ou microfilamentos, possuem a capacidade de transportar e gerar forças, sendo chamadas de citomusculatura
Filamentos Intermediários
Filamentos Intermediários São polímeros constituídos de polipeptídios fibrosos. Diâmetro entre 8 e 12 nm Parte mais estável do Citoesqueleto Participam: estrutura, estabilidade, sustentação, resistência, interação celular.
Filamentos Intermediários Grupos heterogêneos (+50) de proteínas de FI Citoqueratina - células epiteliais, bexiga Vimentina Células de fibroblastos, leucócitos Neurofilamentos das células nervosas Lamina - forma a lâmina fibrosa que se estende sob o envelope nuclear
Vimetina em células HeLa (verde) - imunofluorescência
2. Monômeros de FI
2. Versatilidade FI
Vídeo http://www.youtube.com/watch?v=rlo8xfpxvms
Como o citoesqueleto pode ser usado em biotecnologia? Alvo para drogas Alvo para detecção de câncer
Ação de drogas no citoesqueleto Cochicina, Colcemida e Nocadazol inibem a polimerização de MT inibindo a ligação nas extremidades + Vincristina e a vimblastina se agregam aos MT e levam a despolimerização dos MT Taxol - acelera a polimerização e estabiliza os microtúbulos, impedindo a despolimerização
Ação de drogas no citoesqueleto Iwamoto, Biol. Pharm. Bull. 36(5) 715 718 (2013)
Identificação de tumores através Biópsias de tumores do citoesqueleto Imunocitoquímica para identificar proteínas específicas dos filamentos intermediários Identificação da origem do tumor (tipo celular) Auxílio no direcionamento do tratamento
Fim!!! Obrigado pela atenção!!! Vinicius Farias Campos fariascampos@gmail.com