NOVOS AVANÇOS NA SUPEROVULAÇÃO DE

NOVOS AVANÇOS NA SUPEROVULAÇÃO DE BOVINOS Pietro S. Baruselli Departamento de Reprodução Animal, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia Universidade de São Paulo

6 time increase 75% 25% IVF ET Figure. Brazilianbovineembryoproduction 2000 to 2008. (ET = in vivo embryotransfer, IVF = in vitroembryotransfer) Viana - SBTE, 2009

Brazilian ET market (2008) ET in vivo Nº of ET Embr/SOV = 70.000 5,0 = 14.000 SOV ET in vitro Nº of ET Embr/OPU* = 220.000 5,0 = 44.000 OPU * Mean of 15 viable oocyte per OPU with 30% of in vitro embryo production

1. Esquema tradicional de superovulação PGF 2α Detecção de estro PGF 2α FSH (12/12h) Detecção de estro Colheita de embriões D-0 D-10 D-13 D-0 D-7 2. Superovulação com sincronização da onda de crescimento folicular Detecção de estro BE + P4 P4 PGF 2α FSH (12/12h) Detecção de estro Colheita de embriões D-0 D-4 D-7 D-8 D-15 3. Superovulação com sincronização da onda de crescimento folicular e da ovulação Detecção de estro BE+P4 P4 PGF 2α FSH (12/12h) Detecção de estro LH Colheita de embriões D-0 D-4 D-7 D-8 D-15

Fixed-time AI protocols for superstimulated Bos indicus donors EB + P4 PGF 2α LH FTAI LH 14 10 P4 FSH (4 days; 12/12h) P4 E2 + Estrus behaviour mm 6 2 Day 0 Day 4 Day 7 Day 8

PGF (Day 6 AM) P4 (12h) P4 (24h) P4 (36h) P12/LH48 P24/LH48 P36/LH48 FSH (4 Days;12/12h) LH (Day 8 AM) AI AI Semen viability Ultrasonography (12h) Semen viability % of ovulations P12 vs P24 = >0.05 P12 vs P36 = <0.05 P24 vs P36 = <0.05 0 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 Hours after PGF Distribution of ovulations (indicated in hours after the first PGF) in superstimulated Nelore (Bos indicus) donors treated with progesterone releasing devices (DIB) for 6.5d (P12), 7d (P24) or 7.5d (P36) with LH treatment on Day 8 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Martins et al., 2005

Diferenças entre Bos taurus e Bos indicus

Mean (± SEM) interval from treatment to follicular wave emergence and number of follicles recruited per wave in Bos indicus, Bos indicus x Bos taurus, and Bos taurus heifers treated with 2 mg estradiol benzoate and CIDR insert. N Number of follicles recruited per wave Bos indicus 23 33.4 ± 3.2 a Bos indicus x Bos taurus 25 29.6 ± 2.5 ab Bos taurus 22 25.4 ± 2.5 b ab Means within the same column with different superscripts differ (P < 0.05). Carvalho et al., 2004

Quantidade de folículos nos ovários de Bos taurus e de Bos indicus Ovário Ovário

Diameter of the dominant follicle at the time of deviation and the diameter at which the dominant follicle acquired the capacity to ovulate in Bos indicus

Diameter of the dominant follicle at the time of deviation Folicular dia ameter (cm) Bos indicus = 6.0 mm (Sartorelli et al., 2005) 1,2 DEVIATION 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 FD FS -36-24 -12 0 12 24 36 48 60 72 moment (h) DF: 6.2 ± 0.2 mm SF: 5.8 ± 0.2 mm 64.6±5.5 h after ovulation Bos taurus = 8.5 mm (Ginther et al., 1996) Gimenes et al., SBTE (2005)

mm Capacidade ovulatória conforme o diâmetro folicular em Bos taurus LH 80,0% a (8/10) 10 8,5 7 LH 0,0% b (0/9) LH 0,0% b (0/9) Sartori et al. (Biology of Reproduction, v. 65, p. 1404-1409, 2001)

mm 10 8,5 7 Capacidade ovulatória conforme o diâmetro folicular em Bos indicus 90,0% a LH 33,3% b (3/9) 80,0% a (8/10) LH (9/10) LH Gimenes et al., SBTE (2005)

mm Hipótese experimental LH 10 LH 8 3

Agropecuária Agrindus Medico Veterinário Carlos Alberto Rodrigues

Grupo 1 (n=10) Colocação do CRESTAR BE + P4 FSH PGF 2α Retirada do CRESTAR GnRH 12h IA IA Colheita De Embrião 1 CRESTAR D0 Grupo 2 (n=10) Colocação do CRESTAR BE + P4 D4 D5 FSH D6 PGF 2α D7 T Retirada do CRESTAR D8 M D8 T GnRH 24h IA D9 M IA D15 M Colheita De Embrião 1 CRESTAR D0 D4 D5 D6 D7 T D8 T D9 M D9 T D15 M

4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 4.14 2.7 n=20 n=20 12h 24h Embriões trasnferíveis Figura - Efeito do momento da aplicação do GnRH (48 ou 60 h) após a aplicação de prostaglandina (12 ou 24h após o último FSH) na produção de embriões transferíveis em vacas Holandesas de alta produção superovuladas. Descalvado SP, 2003. Rodrigues et al., 2004 (SBTE)

3.5 3 2.5 3.5 a 2 1.5 1 0.5 0 1.7 b n=20 n=20 12h 24h Folículos > 10mm no dia da colheita (D15) Figura - Efeito do momento da aplicação do GnRH (48 ou 60 h) após a aplicação de prostaglandina (12 ou 24h após o último FSH) no número de folículos grandes no dia da colheita em vacas Holandesas de alta produção superovuladas. Descalvado SP, 2003. Rodrigues et al., 2004 (SBTE)

Grupo P24 LH48 (n=8) Retirada do DIB Colocação do DIB BE PGF 2α 200mg Folltropin LH 12 h IA IA Colheita De Embrião DIB D -1 D0 Grupo P24 LH60 (n=8) D4 D6 D7 M Retirada do DIB D8 M D8 T D9 M D15 Colocação do DIB BE PGF 2α 200mg Folltropin LH 24 h IA IA Colheita De Embrião DIB D -1 D0 D4 D6 D7 M D8 T D9 M D9 T D15

Grupo P36 LH48 (n=8) Retirada do DIB Colocação do DIB BE PGF 2α 200mg Folltropin LH 12 h IA IA Colheita De Embrião DIB D -1 D0 Grupo P36 LH60 (n=8) D4 D6 D7 T Retirada do DIB D8 M D8 T D9 M D15 Colocação do DIB BE PGF 2α 200mg Folltropin LH 24 h IA IA Colheita De Embrião DIB D -1 D0 D4 D6 D7 T D8 T D9 M D9 T D15

Desenho Experimental 1 a Réplica (35d) 2 a Réplica (35d) 3 a Réplica (35d) 4 a Réplica Grupo P24/LH48 (238; 258; 308 ) Grupo P24/LH60 (238; 258; 308 ) Grupo P36/LH48 (238; 258; 308 ) Grupo P36/LH60 (238; 258; 308 ) Grupo P24/LH60 (271; 285; 296) Grupo P36/LH48 (271; 285; 296) Grupo P36/LH60 (271; 285; 296) Grupo P24/LH48 (271; 285; 296) Grupo P36/LH48 (266; 275; 300) Grupo P36/LH60 (266; 275; 300) Grupo P24/LH48 (266; 275; 300) Grupo P24/LH60 (266; 275; 300) Grupo P36/LH60 (259; 303; 304) Grupo P24/LH48 (259; 303; 304) Grupo P36/LH60 (259; 303; 304) Grupo P36/LH48 (259; 303; 304) Empregou-se a mesma partida de sêmen para IATF de todas as doadoras superovuladas Grupo P24/LH48 Grupo P24/LH60 Grupo P36/LH48 Grupo P36/LH60

5 4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 4.7 b 2.3 a n=24 n=24 12h 24h Embriões trasnferíveis Figura - Efeito do momento da aplicação do GnRH (48 ou 60 h) após a aplicação de prostaglandina (12 ou 24h após o último FSH) na produção de embriões transferíveis em vacas Holandesas de alta produção superovuladas. Descalvado SP, 2003. Martins et al. SBTE (2005)

Effect of delaying the induction of ovulation in superstimulated Bos indicus donors

Group 1 (n=20) DIB remove (AM) EB PGF 2α LH 12h Flushing FSH (100mg Folltr.) IA IA DIB vaginal device D0 Group 2 (n=20) D4 D5 D6 D7 M D8 D8 D9 M T M D15 M DIB remove (AM) EB PGF 2α LH 24h Flushing FSH (100mg Folltr.) IA IA DIB vaginal device D0 D4 D5 D6 D7 M D8 T D9 M D9 T D15 T

Experimental design 1st Replicate (35d) 2 nd Replicate Group P24/LH48 (n=10) Group P24/LH60 (n=10) Group P24/LH60 (n=10) Group P24/LH48 (n=10) The same sires were used in all replicates Grupo P24/LH48 Grupo P24/LH60

7 6 5 6.2 a 4 3 2 1 0 3.1 b n=20 n=20 12h 24h Embriões trasnferíveis Figura - Efeito do momento da aplicação do GnRH (48 ou 60 h) após a aplicação de prostaglandina (12 ou 24h após o último FSH) na produção de embriões transferíveis em Nelore. Poços de Caldas, MG, 2005. Martins et al. SBTE (2005)

Indução da ovulação para IATF em vacas superovuladas Espécie horas após último FSH Bos taurus 24h Bos indicus 12h

4. FSH dosages for superstimulation of Bos indicus cattle

HYPOTHESIS It is possible to reduce the dose of FSH in superstimulated Bos indicus donors

Pontal de Ouro Farm - Campo Grande - MS Dr. Luiz Fernando Tonissi Nasser

EB (2,5mg) + P4 (50mg) Remove D7 (AM; 24h) Group 1: 100mg CIDR vaginal device FSH? (Follptropin) LH (25mg) (AM) Group 2: 133mg Group 3: 200mg D0 D4 D5 D6 D7 D8 D15 PGF2α (AM / PM) FTAI 12 and 24h after LH Flushing

Experimental design 1st Replicate (60d) 2nd Replicate (60d) 3rd Replicate Group 100mg (n=8) Group133mg (n=8) Group 200mg (n=8) Group 133mg (n=8) Group 200mg (n=8) Group 100mg (n=8) Group 200mg (n=7) Group 100mg (n=7) Group 133mg (n=7) The same sires were used in all replicates Group 100mg Folltropin Group 133mg Folltropin Group 200mg Folltropin

Means (± SEM) superovulatory response and ova/embryo production in Nelore cows utilizing three different doses of Folltropin-V. Total dose of Folltropin-V 100 mg 133 mg 200 mg N 23 23 23 Number of CL 13.0 ± 7.2 12.1 ± 7.0 14.9 ± 11.6 Total ova/embryos 10.0 ± 7.8 9.9 ± 7.0 10.6 ± 8.6 Transferable embryos (Grade 1, 2 and 3) Freezable embryos (Grade 1 and 2) 7.7 ± 7.4 5.6 ± 4.1 6.5 ± 7.7 6.4 ± 6.5 4.4 ± 3.2 5.7 ± 7.0 Means did not differ

5. Number of FTAI in superstimulated Bos indicus donors

PGF (Day 6 AM) P4 (12h) P4 (24h) P4 (36h) FSH (12/12h) P12/LH48 P24/LH48 P36/LH48 LH (Day 8 AM) AI AI Semen viability Ultrasonography (12/12h) Semen viability 0 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 AI Hours after PGF Distribution of ovulations (indicated in hours after the first PGF) in superstimulated Nelore (Bos indicus) donors treated with progesterone releasing devices (DIB) for 6.5d (P12), 7d (P24) or 7.5d (P36) with LH treatment on Day 8 % of ovulations 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

Experimental design 10 Nelore (Bos indicus) cows cross-over experimental design Superstimulated twice 35 d apart

Experimental design 1st Replicate Group 1 FTAI (16h after LH) (n=5) (35d) 2nd Replicate Group 2 FTAI (12 and 24h after LH) (n=5) Group 2 FTAI (12 and 24h after LH) (n=5) Group 1 FTAI (16h after LH) (n=5) Cows were fixed-time inseminated with the same batch of frozen-thawed semen Group 1 IATF Group 2 IATF

Group 1 (n=10) DIB insert BE (D0) PGF 2α DIB removal LH 12h Flushing FSH (100mg Folltr.) DIB vaginal device AI 12h 24h AI D-0 Group 2 (n=10) DIB inset BE (D0) D4 D5 DIB vaginal device D6 PGF 2α FSH (100mg Folltr.) D7 D8 D8 D9 D15 PM AM PM AM AM DIB removal LH 12h 16h AI Flushing D0 D4 D5 D6 D7 PM D8 AM D9 D15 AM

Effect of number of fixed-time inseminations (1 vs 2 FTAI) on embryo production in Nelore donors superstimulated with Folltropin-V and induced to ovulate with Lutropin-V (means ± SEM) 1 FTAI (n = 10) 2 FTAI (n = 10) P value Number of follicles > 8mm at plh 16.2 ± 1.4 14.8 ± 1.2 0.20 Number of CL at ova/embryo collection 10.5 ± 1.3 9.2 ± 0.7 0.23 Total ova/embryos collected 8.2 ± 0.9 7.2 ± 0.8 0.35 Unfertilized ova 0.6 ± 0.2 0.8 ± 0.2 0.57 Degenerated embryos 3.3 ± 0.9 2.2 ± 0.3 0.36 Transferable embryos (Grade 1, 2 and 3) 4.3 ± 0.7 4.2 ± 0.6 0.91 Freezable embryos (Grade 1 and 2) 2.9 ± 0.6 2.8 ± 0.4 0.89 Martins et al., (2005)

FTAI protocol in superstimulated Bos indicus Day 0 1 2 4 6 AM PM P4 Device + EB (2mg) 3 5 7 Day 4 FSH FSH Day 5 FSH FSH Day 6 FSH + PGF FSH + PGF 8 Day 7 FSH FSH + P4 device removal 10 Day 8 LH / GnRH FTAI Day 9 FTAI 12 Day 15 Flushing 13 9 11

FTAI protocol in superstimulated Bos taurus Day 0 1 2 AM PM P4 Device + EB (2mg) 3 Day 4 FSH FSH 4 6 Day 5 FSH FSH 5 7 Day 6 FSH + PGF FSH + PGF Day 7 FSH FSH + P4 device removal Day 8 LH / GnRH Day 9 FTAI FTAI Day 15 8 11 9 10 12 13 Flushing

FSH vs ecg for superstimulation Bos indicus cattle

HIPÓTESE ecg LH ecg ecg E2 E2 FD

FSH vs ecg para superovulação em Bos indicus EB (2,0mg) Remove D7 (PM; 36h) Group 1: 100mg DIB Group 2: 2.000UI ecg FSH LH (25mg) (AM) Group 3: 2.500UI D0 D4 D5 D6 D7 D8 D15 PGF2α (AM / PM) FTAI 16 after LH Flushing

Experimental design 1st Replicate (32d) 2nd Replicate (32d) 3rd Replicate Group 100mg (n=4) Group 2.000UI (n=4) Group 2.500UI (n=4) Group 2.000UI (n=4) Group 2.500UI (n=4) Group 100mg (n=4) Group 2.500UI (n=4) Group 100mg (n=4) Group 2.000UI (n=4) The same sires were used in all replicates Group 100mg Folltropin Group 2.000UI ecg Group 2.500UI ecg

7 6.9 6 5 4 3 2 1 0 4.6 n=12 FSH- 100mg ecg 2000UI 4.4 n=12 n=12 ecg 2500UI Transferable embryos Figure - Effect superovulatory treatment with FSH or ecg on number of transferable embryos in Nelore (Bos indicus) cows, Poços de Caldas, MG, 2006. Martins et al., 2006

TABELA Taxa de concepção em receptoras recendo embriões produzidos através de diferentes protocolos de superovulação. Médias N emb transf. N Prenhes % 2000 ecg 59 34 57,63 2500 ecg 40 14 35,00 100 FSH 41 18 43,90 Martins et al., 2006

FSH vs ecg para superovulação em Bos indicus EB (2,0mg) Remove D7 (PM; 36h) Group 1: 133mg DIB Group 2: 1.500UI ecg FSH LH (25mg) (AM) Group 3: 2.000UI D0 D4 D5 D6 D7 D8 D15 PGF2α (AM / PM) FTAI 16 after LH Flushing

8 7 6 5 4 3 2 1 0 7.4 a n=12 FSH- 133mg 3.1 b ecg 1500UI 6.7 a n=12 n=12 ecg 2000UI Transferable embryos Figure - Effect superovulatory treatment with FSH or ecg on number of transferable embryos in Nelore (Bos indicus) cows, Poços de Caldas, MG, 2006. Martins et al., 2006

SUPEROVULAÇÃO COM INSEMINAÇÃO ARTIFICIAL EM TEMPO FIXO EM DOADORAS BOS TAURUS TRATADAS COM FSHp OU COM ecg

9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 7.9 n=12 FSH- 200mg 6.7 ecg 2000UI 8.1 n=12 n=12 ecg 2500UI Transferable embryos Figure - Effect of superovulatory treatment with FSH or ecg on number of transferable embryos in Holstein (Bos taurus) cows, Poços de Caldas, MG, 2006. Martins et al., 2008

Utilização contínua da ecg para superovular doadoras Nelore (Bos indicus) ecg Produção de anticorpos?

Desenho Experimental 1 a Réplica (35d) 2 a Réplica (35d) 3 a Réplica (35d) 4 a Réplica Grupo FSH 133mg (10 doadoras) Grupo FSH 133mg (10 doadoras) Grupo FSH 133mg (10 doadoras) Grupo FSH 133mg (10 doadoras) Grupo ecg 2000UI (10 doadoras) Grupo ecg 2000UI (10 doadoras) Grupo ecg 2000UI (10 doadoras) Grupo ecg 2000UI (10 doadoras) Empregou-se o mesmo acasalamento nas doadoras superovuladas Grupo FSH 133mg Grupo ecg 2000UI

16 14 12 12.4 11.7 Todos animais com FSH N embr transf 10 8 6 9.0 8.2 9.9 6.4 8.9 8.2 5.9 4 2 0 133 mg FSH 2000 UI ecg 1st Flushing 2nd Flushing 3rd Flushing 4th Flushing 5th Flushing 3.7 Gráfico. Número de embriões transferíveis (grau 1, 2 e 3) em doadoras Nelore (Bos indicus) superovuladas por 4 vezes (intervalo de 35 dias) com FSH (n=10) ou com ecg (n=10) e inseminadas em tempo fixo. Martins et al., 2007

% embr transf 120 100 80 60 40 100.0 100.0 91.1 94.4 71.2 79.8 71.8 * 41.8 ** Todos animais com FSH 70.1 72.3 20 0 133 mg FSH 2000 UI ecg 1st Flushing 2nd Flushing 3rd Flushing 4th Flushing 5th Flushing Gráfico. Percentual do número de embriões transferíveis (grau 1, 2 e 3) em relação ao primeiro flushing em doadoras Nelore (Bos indicus) superovuladas por 4 vezes (intervalo de 35 dias) com FSH (n=10) ou com ecg (n=10) e inseminadas em tempo fixo. Martins et al., 2007

20 18 16 16,1 16,4 Todos animais com FSH 14 12 14,1 14,4 13,5 12,4 13,2 N CL 10 8 12,1 9,2 6 4 2 0 133 mg FSH 2000 UI ecg 1s t Flushing 2nd Flus hing 3rd Flus hing 4th Flus hing 5th Flus hing 6,1 Gráfico. Número de CL no dia do Flushing em doadoras Nelore (Bos indicus) superovuladas por 4 vezes (intervalo de 35 dias) com FSH (n=10) ou com ecg (n=10). Martins et al., 2007

120 100 80 100.0 100.0 102.1 102.2 83.8 85.9 * Todos animais com FSH 77.3 80.2 % CL 60 40 42.9 ** 63.6 20 0 133 mg FSH 2000 UI ecg 1st Flushing 2nd Flushing 3rd Flushing 4th Flushing 5th Flushing Gráfico. Percentual de redução do número de CL no dia do Flushing em doadoras Nelore (Bos indicus) superovuladas e inseminadas em tempo fixo por 4 vezes (intervalo de 35 dias) com FSH (n=10) ou com ecg (n=10). Martins et al., 2007

100 Taxa a de recuperação (%) 90 80 70 60 50 40 30 20 10 82,2 88,2 83,1 82,0 84,9 84,8 78,0 78,9 133 mg FSH 2000 UI ecg 83,3 69,9 0 1st Flus hing 2nd Flushing 3rd Flus hing 4th Flushing 5th Flushing Gráfico. Taxa de recuperação de embriões (N o de estruturas embrionárias / N o de CL) em doadoras Nelore (Bos indicus) superovuladas por 4 vezes (intervalo de 35 dias) com FSH (n=10) ou com ecg (n=10) e inseminadas em tempo fixo. Martins et al., 2007

Conclusão Verificou-se efeito semelhante da superovulação com ecg e FSH até o terceiro tratamento Quando o tratamento com FSH foi utilizado novamente as doadoras obtiveram a mesma eficiência

FTAI protocol in superstimulated Bos indicus Day 0 Day 4 Day 5 Day 6 1 2 AM P4 Device + EB (2mg) ecg (2.000UI) PM Day 7 PGF + P4 device removal Day 8 LH / GnRH FTAI Day 9 Day 15 4 6 7 FTAI Flushing 3 5

FTAI protocol in superstimulated Bos taurus Day 0 Day 4 Day 5 Day 6 1 2 AM P4 Device + EB (2mg) ecg (2.500UI) PM Day 7 Day 8 PGF + P4 device removal LH / GnRH Day 9 FTAI FTAI Day 15 5 3 4 6 7 Flushing

Emprego do sêmen sexado em doadoras superovuladas e inseminadas em tempo fixo (SOTF)

Ejaculado Congelamento convencional Sexagem Congelamento

Grupo sêmen convencional (n=10) Retirada do CRESTAR BE (2mg) FSH PGF 2α GnRH 12h IA IA Colheita de Embrião CRESTAR D0 D4 Grupo sêmen sexado (n=10) D5 D6 D7 D8 D8 D9 D15 T M T M M Retirada do CRESTAR BE (2mg) FSH PGF 2α GnRH 12h IA IA Colheita de Embrião CRESTAR D0 D4 D5 D6 D7 T D8 M D8 T D9 M D15 M

Experimental design 1st Replicate (35d) 2nd Replicate Sêmen convencional (n=5) Sêmen sexado (n=5) Sêmen sexado (n=5) Sêmen convencional (n=5) The same sires were used in all replicates Group P24/LH48 Group P24/LH60

Tabela 1 - Produção de embriões em vacas Nelore (Bos indicus) superestimuladas e inseminadas em tempo fixo com sêmen sexado e convencional, Poços Caldas, MG, 2007. Sêmen Convencional (n=10) Sêmen Sexado (n=10) Trat P Rep Trat vs Rep Total estruturas (n) 9.90 ± 0.78 8.40 ± 1.40 0.28 0.81 0.71 Emb. transferíveis (n) 6.80 ± 0.66 4.20 ± 0.74 0.03 0.88 0.88 Emb. congeláveis (n) 5.90 ± 0.71 3.50 ± 0.65 0.03 0.43 0.99 Emb. não fertilizados (n) 1.50 ± 0.48 3.70 ± 0.88 0.01 0.82 0.46 Emb. degenerados (n) 1.60 ± 0.37 0.50 ± 0.16 0.04 0.54 0.78 Taxa de emb. viáveis (%)* 68.7 50.0 0.01 0.68 0.54 Taxa de emb. congeláveis (%)** 59.6 41.7 0.02 0.32 0.73 *Taxa de emb. viáveis = (emb. viáveis/total de estruturas)*100 **Taxa de emb. congeláveis = (emb. congeláveis/total de estruturas)*100 Martins et al., 2007

68,7 a Convencional Sexado 70 Taxa de embr riões viáveis (%) 60 50 40 30 20 10 0 Total embriões de embriões e 50.0 b 34,4 45.0 (68/99) (42/84) (34/99) (38/84) embriões ou Gráfico - Estimativa de produção de embriões transferíveis (macho e fêmea) com o emprego de sêmen convencional e sexado em doadoras Nelore superovuladas e inseminadas em tempo fixo. Martins et al., 2007

Tabela - Taxa de prenhez aos 30 e 60 dias após a transferência de embriões provenientes de inseminação com sêmen convencional e sexado e porcentagem de fêmeas na sexagem fetal. Embriões produzidos N Taxa de prenhez 30 dias (%) Taxa de prenhez 60 dias (%) Sexagem fetal (% de fêmeas) Sêmen convencional 68 57,3 (39/68) 52,9 (36/68) 52,7 (19/36) Sêmen sexado 42 57,1 (24/42) 47,6 (20/42) 90,0 (18/20) Martins et al., 2007

Group Conventional ans sexed semen DIB insert BE (D0) PGF 2α DIB removal LH 12h Flushing FSH (133mg Folltr.) DIB vaginal device AI 12h 24h AI D-0 Group sexed semen DIB inset BE (D0) D4 D5 DIB vaginal device D6 PGF 2α FSH (133mg Folltr.) D7 D8 D8 D9 D15 PM AM PM AM AM DIB removal LH 12h AI 18h 30h AI Flushing D0 D4 D5 D6 D7 PM D8 AM D8 PM D9 AM D15 AM

Experimental design 1st Replicate (60d) 2nd Replicate (60d) 3rd Replicate Group Conv 12/24h (n=4) Group Sexed 12/24h (n=4) Group Sexed 18/30h (n=4) Group Sexed Group Sexed 12/24h (n=4) 18/30h (n=4) Group Conv 12/24h (n=4) Group Sexed 18/30h (n=4) Group Conv 12/24h (n=4) Group Sexed 12/24h (n=4) The same sires were used in all replicates Group Convencional semen (AI 12/24h after LH) Group sexed semen (AI 12/24h after LH) Group sexed semen (AI 18/30h after LH)

A parte de imagem com identificação de relação rid4 não foi encontrada no arquivo. Médico Veterinário: Claudiney de Melo Martins Fazenda: Santa Bárbara, Botenhos - MG

8 7 6 5 4 3 7.25a b 3.25 b 5.17 Transferable embryos 2 1 0 Conv 12/24h Sexed 12/24h Sexed 18/30h Figure - Effect of type of semen (conventional vs. sexed) and timed artificial insemination after LH (12 and 24 vs. 18 and 30) in Nelore cows (Bos indicus) superstimulated, Poços de Caldas, MG, 2008. Martins et al., 2008

4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.75 4.3 b 3.9 b Unfertilized 0.5 0 a Conv 12/24h Sexed 12/24h Sexed 18/30h Figure - Effect of type of semen (conventional vs. sexed) and timed artificial insemination after LH (12 and 24 vs. 18 and 30) in Nelore cows (Bos indicus) superstimulated, Poços de Caldas, MG, 2008. Martins et al., 2008

Group Conventional ans sexed semen DIB insert BE (D0) PGF 2α DIB removal LH 24h Flushing FSH (200mg Folltr.) DIB vaginal device AI 12h 24h AI D-0 Group sexed semen DIB inset BE (D0) D4 D5 DIB vaginal device D6 PGF 2α FSH (200mg Folltr.) D7 D8 D8 D9 D15 PM AM PM AM AM DIB removal LH 24h AI 18h 30h AI Flushing D0 D4 D5 D6 D7 PM D8 AM D8 PM D9 AM D15 AM

9 8 7 6 5 4 3 8.92 a 4.41 b 5.92 b Transferable embryos 2 1 0 Conv 12/24h Sexed 12/24h Sexed 18/30h Figure - Effect of type of semen (conventional vs. sexed) and timed artificial insemination after LH (12 and 24 vs. 18 and 30) in Holstein heifers (Bos taurus) superstimulated, Poços de Caldas, MG, 2008. Martins et al., 2008

6 5.6 5 4 3 2 1 0 0.83 a Conv 12/24h b Sexed 12/24h 4.2 b Sexed 18/30h Unfertilized Figure - Effect of type of semen (conventional vs. sexed) and timed artificial insemination after LH (12 and 24 vs. 18 and 30) in Holstein heifers (Bos taurus) superstimulated, Poços de Caldas, MG, 2008. Martins et al., 2008

CONCLUSÃO Os dados são indicativos de que o atraso em 6 horas em cada IA possibilitam a utiliação do sêmen sexado em protocolos de SOTF. Novos experimentos estão sendo realizados para confirmar esses achados