Universidade de São Paulo Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz

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Transcrição:

Universidade de São Paulo Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz Diversidade genética em germoplasma de arroz japonês utilizando marcadores moleculares e agromorfológicos Fátima Bosetti Tese apresentada para obtenção do título de Doutor em Ciências. Área de concentração: Genética e Melhoramento de Plantas Piracicaba 2012

Fátima Bosetti Engenheira Agrônoma Diversidade genética em germoplasma de arroz japonês utilizando marcadores moleculares e agromorfológicos Orientador: Prof. Dr. JOSÉ BALDIN PINHEIRO Tese apresentada para obtenção do título de Doutor em Ciências. Área de concentração: Genética e Melhoramento de Plantas Piracicaba 2012

Dados Internacionais de Catalogação na Publicação DIVISÃO DE BIBLIOTECA - ESALQ/USP Bosetti, Fátima Diversidade genética em germoplasma de arroz japonês utilizando marcadores moleculares e agromorfológicos / Fátima Bosetti.- - Piracicaba, 2012. 183 p: il. Tese (Doutorado) - - Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz, 2012. 1. Arroz 2. Diversidade genética 3. Germinação 4. Germoplasma vegetal 5. Marcador molecular I. Título CDD 633.18 B743d Permitida a cópia total ou parcial deste documento, desde que citada a fonte O autor

3 Aos meus pais, Hermes e Beatris, por tudo o que fizeram pela minha formação, pelo amor incondicional, apoio e incentivo. Ao meu irmão, Ezequiel, pelo ombro amigo de sempre. DEDICO.

4

5 AGRADECIMENTOS À Deus pela benção da vida, por cada dia e cada experiência. Ao Prof. Dr. José Baldin Pinheiro pela acolhida e orientação, e mais do que isso, pela paciência, amizade, abertura e exemplo profissional. À Profª. Drª. Maria Imaculada Zucchi pelas contribuições, incentivo, amizade e disponibilidade em ajudar sempre. À Profª. Drª. Ana Dionísia Novembre e à Helena Pescarin Chamma pela disponibilização da estrutura do Laboratório de Sementes e auxílio nos experimentos de caracterização de tolerância ao frio. Aos professores, colegas e funcionários do departamento de Genética, em especial ao Márcio Araújo Silva, Domingos de Salvio Amaral e Cláudio Roberto Segatelli pela ajuda nos experimentos de campo e sempre que necessário. Ao Dr. Alisson Fernando Chiorato e à Dr. Aluana Gonçalves de Abreu pelo auxílio e discussões de análise de dados. A cada um dos colegas do Laboratório de Diversidade Genética e Melhoramento pela convivência nesses cinco anos, amizade, troca de ideias, ajudas, momentos de descontração, por tudo. À Camila Montebelli pelas constantes ajudas na implantação e avaliação dos experimentos, estendendo o agradecimento para Thiago, Glauber, Carlos, Michelle, Milene, Carlos Eduardo, Talita, Jake, Natália, Keila e Mariza, e a cada um que, mesmo não citado aqui, auxiliou em algum momento. Muito Obrigada! À Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz e ao Departamento de Genética pelo ensino de qualidade. Ao CNPq e à Capes pelos períodos de bolsa de estudos concedida. À FAPESP pelo financiamento deste trabalho (processo n 2007/06615-6). À Embrapa Arroz e Feijão pelo fornecimento de sementes dos genótipos utilizados como padrões nas análises de diversidade molecular. À Pioneer Hi-Bred International Inc. pelo auxílio financeiro e à Dr.ª Sandra Cristina Kothe Milach, ao Dr. Charlie Messina e Dr. Zhanshan Dong pelo incentivo e exemplo de dedicação à pesquisa. Aos meus pais, Hermes e Beatris, por acreditarem e sem medir esforços me apoiarem em cada passo. Ao meu irmão, Ezequiel, pelas conversas e discussões. À todos os familiares e amigos pelas palavras de incentivo e carinho. À todos que colaboraram para a realização desse trabalho. Muito Obrigada!

6

7 SUMÁRIO RESUMO... 11 ABSTRACT... 13 LISTA DE FIGURAS... 15 LISTA DE TABELAS... 19 1 INTRODUÇÃO... 23 Referências... 26 2 DIVERSIDADE FENOTÍPICA EM GERMOPLASMA DE ARROZ JAPONÊS... 31 Resumo... 31 Abstract... 31 2.1 Introdução... 32 2.2 Material e Métodos... 35 2.2.1 Instalação e condução dos experimentos... 35 2.2.2 Caracterização e avaliação dos acessos... 36 2.2.2.1 Descritores utilizados no ano agrícola 2007/2008... 36 2.2.2.2 Descritores utilizados no ano agrícola 2008/2009... 38 2.2.3 Análise de dados... 39 2.2.3.1 Estatísticas descritivas, análise univariada e estimativa de parâmetros... 39 2.2.3.2 Análises multivariadas... 40 2.3 Resultados... 43 2.3.1 Características avaliadas no ano agrícola 2007/2008... 43 2.3.2 Características avaliadas no ano agrícola 2008/2009... 58 2.3.3 Análises considerando os dois anos de avaliação... 60 2.4 Discussão... 63 Referências... 70 3 DIVERSIDADE GENÉTICA MOLECULAR EM GERMOPLASMA DE ARROZ JAPONÊS UTILIZANDO MARCADORES MOLECULARES ANÔNIMOS E EXPRESSOS (SSRs E EST-SSRs)... 75 Resumo... 75 Abstract... 75 3.1 Introdução... 76 3.2 Material e Métodos... 78

8 3.2.1 Material vegetal... 78 3.2.2 Extração de DNA e Genotipagem com marcadores SSR... 79 3.2.3 Análise de dados... 81 3.3 Resultados... 82 3.3.1 Diversidade detectada pelos marcadores SSRs... 82 3.3.2 Análises de agrupamento e estrutura populacional... 88 3.4 Discussão... 99 Referências... 105 4 VARIABILIDADE PARA TOLERÂNCIA AO FRIO NA GERMINAÇÃO EM GERMOPLASMA DE ARROZ DE ORIGEM JAPONESA... 111 Resumo... 111 Abstract... 111 4.1 Introdução... 112 4.2 Material e Métodos... 115 4.2.1 Material Vegetal... 115 4.2.2 Avaliação da tolerância ao frio... 115 4.2.3 Análise de dados... 119 4.3 Resultados... 121 4.3.1 Experimento I: Germinação a 13ºC e 28ºC... 121 4.3.2 Experimento II: Germinação em grandiente de temperaturas... 130 4.3.3 Experimento III: Tolerância ao frio na fase de germinação-emergência e desenvolvimento inicial... 138 4.4 Discussão... 140 Referências... 146 5 OBTENÇÃO DE UMA COLEÇÃO NUCLEAR DE ACESSOS JAPONESES DE ARROZ... 151 5.1 Introdução... 152 5.2 Material e Métodos... 155 5.2.1 Dados fenotípicos e moleculares usados na obtenção da coleção nuclear... 155 5.2.2 Obtenção e representatividade da coleção nuclear... 155 5.3 Resultados... 158 5.3.1 Coleção nuclear... 158 5.3.2 Comparação de propriedades fenotípicas... 159 5.3.3 Comparação de propriedades moleculares... 165

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