PCR em Tempo Real (RT-PCR) para o diagnóstico laboratorial das meningites bacterianas

Transcrição

1 PCR em Tempo Real (RT-PCR) para o diagnóstico laboratorial das meningites bacterianas Loeci Natalina Timm Daniele Menezes Julho de bacteriologia@fepps.rs.gov.br fone: (51)

2 Princípios do PCR Alvos detectados: N. meningitidis, S. pneumoniae e H. influenzae Diagnóstico definitivo: Cultura Limitações da Cultura: Uso prévio de antibióticos, condições de cultivo e transporte inadequados Gram e Aglutinação em Látex: menor sensibilidade

3 RT-PCR (Real time Polimerase Chain Reaction) Implantação da técnica padronizada pelo IAL-SP Aumento da sensibilidade e especificidade Liquor Agente Nº amostras Sensibilidade Especificidade Men % 98,9% Spn 46 97,8% 100% Hi 03 66,7% 100% Soro Agente Nº amostras Sensibilidade Especificidade Men 21 57,1% 94,1% Spn 10 80% 100% Hi 02 0% 100%

4 RT-PCR (Real time Polimerase Chain Reaction) Implantação da técnica padronizada pelo IAL-SP Redução do tempo de reação Amplificação/detecção dos genes alvo ocorrem simultaneamente

5 Critérios para realização do PCR Tipos de amostras: Líquor, líquido pleural, sangue total, sangue pós-óbito, soro, plasma e tecidos Qualidade da amostra volume mínimo 1 ml manuseio acondicionamento transporte

6 Critérios para realização do PCR Exemplos de frascos CORRETOS, que devem ser utilizados para coleta de LCR e soro: Exemplos de frascos INCORRETOS, que NÃO devem ser utilizados para coleta de LCR e soro:

7 Avaliação dos resultados obtidos no período de 04/05/ /07/2015 Tipo de amostra x volume Liquor Insuficiente 26% Liquor Suficiente 47% Soro Insuficiente 1% Total de amostras processadas: 152 Soro Suficiente 26%

8 Critérios para realização do PCR Dados clínicos - Data de início dos sintomas - Febre - Rigidez de nuca - Dor de cabeça - Petéquias/sufusões - Abaulamento de fontanela - Irritabilidade - Choro contínuo

9 Critérios para realização do PCR Dados Laboratoriais - Glicorraquia/glicemia - Proteínas no LCR - Leucócitos - Relação neutrófilos/linfócitos - Bacterioscopia

10 Secretaria da Saúde do Rio Grande do Sul Instituto de Pesquisas Biológicas Laboratório Central de Saúde Pública IPB/LACEN/RS Av Av.Ipiranga, Bairro Jardim Botânico Porto Alegre/RS CEP Fone/fax: Sistema Gerenciador de Ambiente Laboratorial GAL REQUISIÇÃO DE EXAMES MENINGITE BACTERIANA SOROLOGIA 1. Nº Requisição: 2. Unidade de Saúde: * 3. Nº CNES: * 4. Município de atendimento: 5. UF: 6. Código IBGE: * 7. Responsável pela solicitação: * Telefone: * * 8. Registro profissional / matrícula: * 9. Assinatura: * 10. Data solicitação: 11. Data primeiros sintomas: 12. Caso: ( ) 1- Suspeito 2- Comunicante 3- Acompanhamento 9- Ignorado 13. Tratamento ( ) Quantidade ( ) 1- Dia 2- Semana 3- Mês 4- Ano 9- Ignorado 14. Etapa de tratamento: ( ) 1- Pré-tratamento 2- Tratamento 3- Retratamento 4- Avaliação de Resistência 9- Ignorado 15. Paciente tomou vacina? ( ) 1- Sim 2- Não 16. Data da última dose: 9- Ignorado DADOS DO PACIENTE 17. Nome do paciente: * 18. Data nascimento: * 19. Idade: ( ) 20. Sexo: * ( ) 21. Idade gestacional: ( ) Dados clínicos e laboratoriais 22. Nome da mãe: 23. Documento 24. Documento Endereço: Logradouro (Rua, Avenida...) 26. Número: 27. Complemento: 28. Ponto de referência: 29. Bairro: 30. Município de residência: * 31. Código IBGE: * 32. UF: 33. CEP: 34. DDD / Telefone: 35. Zona: ( ) 1- Urbana 2- Rural 3- Perurbana 9- Ignorado 36. País (se residir fora do Brasil): * AMOSTRA / EXAME 37. Exame solicitado: ( ) Contraimuno eletroforese CIE ( ) Látex 38. Material enviado: ( ) Líquor ( ) Soro ( ) Outros 39. Amostra: * ( ) única ( ) 40. Data da coleta: * Data de envio ao IPB/LACEN: 41. Uso de antibiótico antes da coleta? ( ) Sim ( ) Não Data do início do antibiótico: SINAN 42. Agravo / doença: * 43. CID 10: * 44. Nº notif. SINAN: * 45. Data solicitação: * 46. Unidade de saúde notificante: * 47. CNES: * 48. Município de notificação: 49. UF: 50. Cód. IBGE: * DADOS CLÍNICOS LABORATORIAIS Fatores relacionados ao surgimento da doença: ( ) Febre ( ) Petéquias ( ) Náusea ( ) Cefaléia ( ) Rigidez ( )Kerning Brudzinski ( ) Convulsões ( ) Exantema ( ) Outros. Quais? Dados laboratoriais: Exame do Líquor: Aspecto:... Glicose:...mg/dl Proteínas...mg/dl Cloreto:...mEq/ Leucócitos:.../mm Eritrócitos:.../mm Neutrófilos:... % Linfócitos:...% Monócitos:... % BACTERIOSCOPIA:... CULTURA:... * Campo de preenchimento obrigatório Revisão 03

11 Resultados obtidos no período de 04/05/ /07/2015 Negativo (106) S.pneumoniae (15) N.meningitidis B (2) N.meningitidis C (16) Total de amostras processadas: 152 N.meningitidis W (1)

12 Comparativo PCR x Cultura Material Volume PCR Cultura Liquor Suficiente Negativo Negativa Soro Suficiente Negativo Negativa Liquor Insuficiente S.pneumoniae Positiva Liquor Suficiente N.meningitidis C Positiva Liquor Insuficiente Negativo Positiva

13 IPB-LACEN 113 ANOS