ISSN Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado

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1 40 ISSN Janeiro, Outubro Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado

2 ISSN Janeiro, 2009 Empresa Brasileir asileira a de Pesquisa Agr gropecuár opecuária Centro de Pesquisa Agr gropecuár opecuária dos Tabuleir abuleiros Costeir eiros Ministério io da Agr gricult icultur ura, Pecuár ecuária e Abasteciment ecimento Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento 40 Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado Zilna Brito de Rezende Quirino Sarah Brandão Santa Cruz Barboza (in memorian) Pedro Roberto Almeida Viégas Ana da Silva Ledo Aracaju, SE 2009

3 Disponível em: Embrapa Tabuleiros Costeiros Av. Beira Mar, 3250, Aracaju, SE, CEP Caixa Postal 44 Fone: (79) Fax: (79) Comitê Local de Publicações Presidente: Ronaldo Souza Resende Secretária-Executiva: Raquel Fernandes de Araújo Rodrigues Membros: Semíramis Rabelo Ramalho Ramos, Julio Roberto Araujo de Amorim, Ana da Silva Ledo, Daniel Luis Mascia Vieira, Maria Geovânia Lima Manos, Ana Veruska Cruz da Silva Muniz, Hymerson Costa Azevedo. Supervisora editorial: Raquel Fernandes de Araújo Rodrigues Tratamento de ilustrações: Thâmara Cristina Tojal Gomes Editoração eletrônica:thâmara Cristina Tojal Gomes Foto da Capa: Ana da Silva Ledo 1 a edição Todos os direitos reservados. A reprodução não-autorizada desta publicação, no todo ou em parte, constitui violação dos direitos autorais (Lei no 9.610). Dados Internacionais de Catalogação na Publicação (CIP) Embrapa Tabuleiros Costeiros Quirino, Zilna Brito de Resende Multiplicação in vitro do abacaxizeiro ornamental, ananas comosus var. Erectifolius, em meio líquido e gelificado / Zilna Brito de Resende et al. -- Aracaju: Embrapa Tabuleiros Costeiros, p. : il.- (Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento / Embrapa Tabuleiros Costeiros, ISSN ; 40). Disponível em: 1. Abacaxi. 2. Produção in vitro. 3. Fruta tropical. I. Barboza, Sara Brandão Santa Cruz. II. Viégas, Pedro Roberto Almeida. III. Lédo, Ana da Silva. IV. Título. V. Série. CDD

4 Sumário Resumo... 5 Abstract... 7 Introdução... 8 Material e Métodos... 9 Resultados e Discussão Conclusões Referências Bibliográficas... 17

5 Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado 5 Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado Zilna Brito de Rezende Quirino, Sarah Brandão Santa Cruz Barboza, Pedro Roberto Almeida Viégas, Ana da Silva Ledo Resumo O abacaxi ornamental Ananas comosus var. erectifolius, também conhecido por Curauá é uma espécie vegetal pertencente à família Bromeliaceae, de porte herbáceo, muito comum na Amazônia, cuja folha é aproveitada para a produção de fibra. O objetivo deste trabalho foi avaliar a taxa de proliferação in vitro de brotos do abacaxizeiro Ananas comosus var. erectifolius em meio líquido e gelificado, na presença e ausência de auxinas e citocininas. O estudo foi realizado no Laboratório de Cultura de Tecidos de Plantas da Embrapa Tabuleiros Costeiros. Para avaliar o potencial de proliferação de brotos foram utilizados oito tratamentos, com quatro repetições e quatro plantas por repetição (meio líquido sem regulador de crescimento; meio gelificado sem regulador de crescimento; meio líquido + BAP 2 mg L -1 ; meio gelificado + BAP 2 mg L -1 ; meio líquido + BAP 2 mg L -1 + ANA 2 mg L -1 ; meio gelificado + BAP 2 mg L -1 + ANA 2 mg.l -1 ; meio líquido + CIN 5 mg L -1 ; meio gelificado + CIN 5 mg L -1. A taxa de proliferação de brotos também foi avaliada em explantes submetidos a diferentes volumes de meio líquido (10 ml; 20 ml e 30 ml). As avaliações ocorreram por três subcultivos a intervalos de 45 dias, em ambos os experimentos. Com base nos resultados alcançados estimou-se número de brotos viáveis em cada subcultivo nos diferentes tratamentos. O abacaxizeiro ornamental, Ananas comosus var. erectifolius apresenta diferentes taxas de multiplicação entre os subcultivos como resposta a um mesmo protocolo. Maiores taxas de multiplicação e número total de brotos de Ananas comosus var. erectifolius, ao final do terceiro subcultivo, são obtidas em meio MS gelificado contendo 2,0 mg L -1 de BAP + 2,0 mg L -1 ANA. Palavras-chave: Curauá; micropropagação; reguladores de crescimento. 1 Engenheira Agrônoma Bolsista AP CNPq/Sergipetec/ Embrapa Tabuleiros Costeiros 2 Pesquisadora da Emdagro, in memorian; 3 Engenheiro Agrônomo, D. SC. Professor da Universidade Federal de Sergipe, Bairro Rosa Elze, São Cristovão, SE; 4 Pesquisadora da Embrapa Tabuleiros Costeiros, Av. Beira Mar, 3250, C.P. 44, Aracaju, SE, CEP: analedo@cpatc.embrapa.br.

6 Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado 7 In vitro multiplication of ornamental pineapple, ananas comosus var. erectifolius, in liquid and solid medium Abstract The ornamental pineapple Ananas comosus var. erectifolius, also known as Curauá, is a species belonging to the family of Bromeliaceae, very common at Amazon, whose leaf is used for fiber production. The objective of this work was to evaluate the proliferation rates of in vitro shoots of A. comosus var. erectifolius in liquid and solid culture medium, in the presence and absence of auxins (naphthaleneacetic-ana) and cytokinins (kinetin-kin, benzilaminepurine- BAP). This study was done at Laboratory of Plant Tissue Culture at Embrapa Coastal Tablelands. To evaluate the potential of shoots proliferation, eight treatments were used, with four repetitions and four plants by repetition (liquid medium without growth regulator; solid medium without growth regulator; liquid medium + BAP 2 mg L -1 ; solid medium + BAP 2 mg L -1 ; liquid medium + BAP 2 mg L -1 + ANA 2 mg L -1 ; solid medium + BAP 2 mg L -1 + ANA 2 mg L -1 ; liquid medium + KIN 5 mg L -1 ; solid medium + KIN 5 mg L -1 ). The shoots proliferation rates were also evaluated in explants submitted to different volumes of liquid medium (10mL, 20mL and 30mL). The evaluations were done in three subcultures with intervals of 45 days, in both experiments. Based on the results, the viable shoots number was estimated in each subculture at different treatments. Ananas comosus var. erectifolius presents different multiplication rates among subcultures in response to the same protocol. Larger multiplication rates and total number of shoots, at the end of the third subculture, was obtained at MS solid culture medium containing 2,0 mg L -1 of BAP and 2,0 mg L -1 ANA. key-words: Curauá; micropropagation; growth regulators.

7 8 Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado Introdução O Ananas comosus var. erectifolius é uma espécie vegetal pertencente à família Bromeliaceae, de porte herbáceo, muito comum na Amazônia, e que apresenta duas variedades: a roxa e a branca, cuja folha é aproveitada para a produção de fibra no estado do Pará. A espécie tem sido pouco investigada em relação a sua composição química. (FUJIHASHI & BARBOSA, 2002) Diferentes espécies do gênero Ananas vem se destacando como fruteira ornamental e atualmente é o segundo produto mais exportado da floricultura do Ceará. Entretanto, essa comercialização está relacionada com apenas duas cultivares, o Ananas comosus var. erectifolius (= lucidus) e Ananas comosus var. bracteatus (= Ananas porteanus) (SOUZA et al., 2007). O Ananas comosus var. erectifolius, até pouco tempo conhecido como Ananas lucidus é a variedade de abacaxizeiro mais conhecida e explorada como planta ornamental no Brasil (BOMFIM, 2006). Caracteriza-se por ser terrestre, geralmente se desenvolve em campo aberto sob alta luminosidade, em ambientes de solos arenosos e de clima tropical. Apresenta folhagem sem espinhos e de coloração púrpura, com infrutescências vermelhas medindo entre 8 e 10 cm de comprimento, dispostas na posição apical de hastes de até 80 cm de comprimento. Em 2003, as exportações de abacaxi ornamental no Ceará alcançaram US$ 298,9 mil, sendo os principais destinos Holanda (72%), Alemanha (13%) e Portugal (9%). Em 2004, as exportações aumentaram em 34%, chegando a US$ 412,9 mil, sendo os principais países importadores Holanda (70%), EUA (12%), Portugal (8%) e Alemanha (5%) (BAIMA, 2005 citado por CARVALHO, 2008). As principais espécies de abacaxi ornamental comercializadas são: Ananas comosus var. erectifolius (corresponde a 75%), Ananas comosus var. bracteatus e Ananas comosus var. ananassoides (CARVALHO, 2008). Técnicas de cultura de tecidos vegetais estão sendo aplicadas para a micropropagação clonal de variedades melhoradas, que além de disponibilizar maior quantidade de mudas em curto tempo permite o controle total das condições ambientais durante a propagação e a preservação de plantas matrizes sem riscos de infecção (BARBOZA & CALDAS, 2001; MOREIRA et. al., 2003).

8 Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado 9 A utilização de mudas de abacaxi ornamental produzidas em laboratório no Brasil ainda é muito restrita, pelo reduzido número de laboratórios, pelo preço da muda relativamente alto e pelo fato do cultivo de abacaxi, como planta ornamental, ser uma atividade recente. No entanto, a demanda por esse tipo de muda tem crescido, porque os produtores estão constatando que devido ao melhor estado fitossanitário das mudas micropropagadas as plantas apresentam desempenho no campo superior às obtidas por rebentos. Este trabalho teve como objetivo avaliar a taxa de proliferação de brotos in vitro do abacaxi ornamental Ananas comosus var. erectifolius em meio líquido e gelificado; em diferentes volumes de meio MS líquido e na presença e ausência de concentrações de auxinas e citocininas. Material e Métodos Os trabalhos foram desenvolvidos no Laboratório de Cultura de Tecidos de Plantas da Embrapa Tabuleiros Costeiros, em Aracaju, SE. Os explantes utilizados foram pequenos brotos já estabelecidos in vitro de plântulas de abacaxi Ananas var. erectifolius. O meio de cultura básico foi o MS (MURASHIGE & SKOOG, 1962), com 30 g L -1 de sacarose, 2 mg L -1 de vitamina, gelificado com ágar a 7 g L -1, ph ajustado para 5,8 e autoclavado por 15 minutos a 120 C. Para avaliar a potencial de proliferação de brotos do abacaxi ornamental Ananas var. erectifolius foram utilizados oito tratamentos, com quatro repetições e quatro plantas por repetição: meio líquido sem fitorregulador (ML SH); meio gelificado sem fitorregulador (MG SH); meio líquido + BAP 2 mg L -1 (ML BAP); meio gelificado + BAP 2 mg L -1 (MG BAP); meio líquido + BAP mg L -1 + ANA 2 mg L -1 (ML BAP + ANA); meio gelificado + BAP mg L -1 + ANA 2 mg L -1 (MG BAP + ANA); meio líquido + CIN 5 mg L -1 (ML CIN); meio gelificado + CIN 5 mg L -1 (MG CIN). Em cada recipiente contendo 30 ml de meio de cultivo foi inoculado um explante (broto). A taxa de multiplicação in vitro do abacaxi ornamental Ananas erectifolius também foi avaliado utilizando-se diferentes volumes de meio de cultura MS líquido: 10, 20 e 30 ml. Foram utilizadas cinco repetições por tratamento, com

9 10 Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado quatro plantas por repetição. Os explantes foram cultivados em Magentas com capacidade de ± 320 ml. O meio de cultura o MS, com 30 g L -1 de sacarose, 2 mg L -1 de vitamina, gelificado com ágar a 7 g L -1, ph ajustado para 5,8 e autoclavado por 15 minutos a 120 C. Logo após, em câmara de fluxo laminar, o meio líquido foi distribuído nos recipientes, previamente autoclavados, de acordo com o volume de cada tratamento. Em ambos os experimentos, a taxa de multiplicação e o número total de brotos por subcultura, foram avaliados por três subcultivos, com intervalos de 45 dias, quando o meio de cultura foi renovado. A manipulação dos explantes ocorreu em câmara de fluxo laminar em condições assépticas Resultados e Discussão Os resultados apresentados na Tabela 1 mostram que os tratamentos para multiplicação exerceram influência significativa na proliferação de brotos in vitro em explantes de Ananas erectifolius. Observou-se que a taxa de multiplicação variou entre os tratamentos e em cada tratamento nas três subculturas avaliadas. No primeiro subcultivo o meio de cultura líquido suplementado com BAP isolado ou combinado com ANA foram superiores aos demais tratamentos (Tabela 1). O meio líquido exerceu influência positiva na multiplicação inicial quando comparado ao meio gelificado em iguais concentrações de reguladores de crescimento. Este fato foi observado no segundo subcultivo onde os valores de taxa de multiplicação média obtidos em meio gelificado suplementado com BAP ou BAP + ANA foram 4, 19 e 4,06, respectivamente.

10 Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado 11 Tabela 1 Taxa de multiplicação do abacaxi ornamental, Ananas comosus var. erectifolius submetido a diferentes tratamentos para proliferação de brotos in vitro. Tratamentos Subcultivos ML-s/regulador de 1,25 C 1,00 D 1,00 C crescimento MG-s/regulador de 1,06 C 1,44 CD 1,00 C crescimento ML + BAP mg L -1 2,19 A 3,06 AB 2,00 B MG + BAP 2 mg L -1 1,00 C 4,19 A 4,12 A ML + BAP 2 mg L ,81 AB 2,56 BC 2,75 B ANA 2 mg L -1 MG + BAP 2 mg L ,37 BC 4,06 A 4,81 A ANA 2 mg L -1 ML + CIN 5 mg L -1 1,25 C 2,31 BC 2,94 B MG + CIN 5 mg L -1 1,00 C 2,06 BCD 4,25 A CV % 23,38 33,09 25,14 Médias seguidas pela mesma letra, na coluna, não diferem entre si (Duncan, p < 0,05). Na segunda subcultura, embora a taxa de multiplicação média observada no meio líquido com BAP seja estatisticamente igual à obtida em igual concentração desse regulador de crescimento em meio gelificado, observa-se um efeito depressivo na proliferação de brotos, tornando-se mais acentuado no terceiro subcultivo (Tabela 1 e Figuras 1 e 2). O cultivo in vitro em meio líquido permite maior absorção dos componentes do meio devido ao fato de possibilitar contato de toda superfície externa do explante com o meio de cultura. No entanto, asfixia e oxidação do material cultivado tem sido relatados em vários trabalhos publicados. Neste trabalho foi observada a oxidação dos explantes em todos os tratamentos quando se utilizou meio de cultura líquido, o que pode ter contribuído para a redução nas taxas de multiplicação no segundo e terceiro subcultivo quando se utilizou essa condição de cultivo (Tabela 1 e Figuras 1 e 2). Segundo Santos et al. (2005) o melhor tratamento para multiplicação in vitro, bem como para o desenvolvimento das plantas (comprimento das partes aéreas) foi o constituído pelo meio MS gelificado, suplementado com 2 mg L -1 de BAP

11 12 Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado seguido das concentrações 1,0 e 0,5 mg L -1. Os autores sugerem uma fase inicial de resistência das plantas de curauá em assimilar este regulador de crescimento novas condições in vitro, o que corrobora com os resultados obtidos neste trabalho onde maior taxa de multiplicação foi obtida no segundo subcultivo em meio gelificado. O meio líquido contribuiu para melhoria na eficiência dos explantes em assimilar os reguladores de crescimento na fase inicial de cultivo. Em todos os tratamentos utilizando a citocinina BAP isolada ou combinada com ANA, independente da natureza física do meio, o abacaxizeiro Ananas comosus var. erectifolius mostrou maior número teórico de brotos ao final de três subculturas (Tabela 2). Os abacaxizeiros cv. Smooth Cayenne e o genótipo PE x SC-52 apresentam diferentes taxas de multiplicação como resposta a um mesmo protocolo (BARBOZA et al., 2006). Segundo os autores o híbrido PE x SC-52 apresentou maior proliferação de brotos por explante por subcultura e maior número teórico de mudas após cinco subculturas quando comparado a cv. Smooth Cayenne. Tabela 2 Número total de explantes de abacaxi ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, que seriam produzidos ao final de cada subcultivo, em diferentes tratamentos, multiplicando-se a taxa de multiplicação pelo número de explantes na subcultura anterior. Tratamentos Subcultivos ML-s/regulador de 1,25 C 1,25 D 1,25 C crescimento MG-s/regulador de 1,06 C 1,53 D 1,53 C crescimento ML + BAP mg L -1 2,19 A 6,86 A 14,07ABC MG + BAP 2 mg L -1 1,00 C 4,198 ABC 17,01 AB ML + BAP 2 mg L ,81 AB 5,17 ABC 16,98 AB ANA 2 mg L -1 MG + BAP 2 mg L ,37 BC 5,59 AB 26,83 A ANA 2 mg L -1 ML + CIN 5 mg L -1 1,25 C 3,03 BCD 9,99 BC MG + CIN 5 mg L -1 1,00 C 2,06 CD 8,78 BC CV % 23,38 55,60 70,84 Médias seguidas pela mesma letra, na coluna, não diferem entre si (Duncan, p < 0,05).

12 Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado 13 As taxas de multiplicação obtidas neste trabalho, quando se utilizou a citocinina cinetina foram baixas até a segundo subcultivo, tanto em meio liquido quanto em gelificado. No entanto, observa-se que no terceiro subcultivo a taxa de multiplicação foi estatisticamente igual à obtida na presença de BAP isolado ou combinado com ANA em meio gelificado (Tabela 1). Mesmo com elevação da taxa de multiplicação no último subcultivo avaliado, o número total brotos obtidos na presença de CIN, ao final do terceiro subcultivo, foi significativamente inferior aos valores observados nos tratamentos com BAP ou BAP+ ANA em igual período de cultivo (Tabela 2). Esses resultados mostram a importância da taxa de multiplicação inicial na eficiência de um protocolo de micropropagação. Quando se trabalhou com BAP + ANA em meio gelificado, ocorreu maior aumento na massa dos explantes com proliferação de gemas, em relação ao meio líquido, o que estimulou a produção de brotações axilares e/ou adventícias com aumento da taxa de multiplicação no segundo e terceiro subcultivos e, conseqüentemente, elevação o número total de brotos ao final do terceiro subcultivo (Tabela 2 e Figuras 1 e 2). Figura 1- Taxa de multiplicação por subcultura de brotos de abacaxi ornamental / subcultivo, obtida em diferentes tratamentos em meio gelificado.

13 14 Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado Nos tratamentos usando apenas BAP ou cinetina observou-se a formação de brotos mais definidos, sendo a cinetina menos eficiente na fase inicial de cultivo, o que influenciou significativamente no total de brotos produzidos nos tratamentos com este regulador de crescimento. Figura 2- Taxa de multiplicação, por subcultura, de brotos de abacaxi ornamental / subcultivo, obtida em diferentes tratamentos em meio líquido. Quando se comparou a taxa de multiplicação e o número de brotos de Ananas comosus var. erectifolius em diferentes volumes de meio MS líquido, a presença de 2,0 mg L -1 de BAP foi verificado que o volume de 20 ml proporcionou melhores resultados nos três subcultivos avaliados, com valores estatisticamente iguais (Figuras 3 e 4). Em 30 ml de meio de cultura, a taxa de multiplicação foi crescente do primeiro ao terceiro subcultivo e, em 10 ml obteve-se menor proliferação de brotos com taxa de multiplicação menor que dois.

14 Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado 15 Figura 3 - Taxa de multiplicação, por subcultivo, de abacaxizeiro Ananas comosus var. erectifolius, em diferentes volumes de meio MS líquido. Figura 4 Número total de brotos por subcultivo de Ananas comosus var. erectifolius, obtidos em diferentes volumes de meio MS líquido.

15 16 Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado Ao comparar a multiplicação in vitro de Ananas comosus var. erectifolius meio de cultura líquido e gelificado Oliveira et al. (2007), verificaram que o meio líquido foi superior. A interação genótipo versus natureza física do meio de cultura foi demonstrada para a cultivar de abacaxi Pérolera, que em meio líquido apresentou taxa de regeneração 37% superior àquela em meio de cultivo gelificado. Na cultivar Primavera a taxa regenerativa em meio líquido foi 17% superior em relação ao meio contendo gelificante. Os autores usaram concentrações de 2,7 mm e 5,4 mm de ANA, combinadas com diferentes concentrações de BAP (4,4 mm; 8,9 mm e 13,3 mm), em meio líquido e gelificado. A média para meio líquido foi 30,5% superior em relação à observada em meio gelificado. CONCLUSÕES O abacaxizeiro ornamental, Ananas comosus var. erectifolius apresenta diferentes taxas de multiplicação entre os subcultivos como resposta a um mesmo protocolo; Em meio MS gelificado o abacaxizeiro Ananas comosus var. erectifolius expressa maior potencial de multiplicação quando comparado ao meio MS líquido; Maiores taxas de multiplicação e número total de brotos de Ananas comosus var. erectifolius, ao final do terceiro subcultivo, são obtidas em meio MS gelificado contendo 2,0 mg L -1 de BAP + 2,0 mg L -1 ANA.

16 Multiplicação in vitro do Abacaxizeiro Ornamental, Ananas comosus var. erectifolius, em Meio Líquido e Gelificado 17 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BARBOZA, S. B. S. C.; CALDAS, L. S. Estiolamento e regeneração na multiplicação in vitro do abacaxizeiro híbrido PE x SC Pesquisa Agropecuária Brasileira, v. 36, n. 3, p , BARBOZA, S. B. S. C.; GRACIANO-RIBEIRO, D.; TEIXEIRA, J. B.; PORTES, T. A.; SOUZA, L. A. C. Anatomia foliar de plantas micropropagadas de abacaxi. Pesquisa Agropecuária Brasileira, v. 41, n. 2, p , fev BONFIM, G. V. do. Efeitos de lâminas e freqüências de irrigação e de tipos e volumes de substrato na aclimatização de mudas micropropagadas de abacaxizeiro ornamental. Dissertação de mestrado. Universidade Federal do Ceará, p. CARVALHO, A. C. P. P. de. Produção in vitro de mudas de abacaxi ornamental. Embrapa Agroindústria Tropical. Disponível em: < Acesso em: 2 jan FUJIHASHI, G de A.; BARBOSA, W. L. R. Ananas erectifolius (Curauá): Padronização dos extratos, frações e do material vegetal. Ananas erectifolius (curauá): Revista Científica da Universidade Federal do Pará, v. 2, n. 1, p , MOREIRA, M. A.; PASQUAL, M.; CARVALHO, J. G.; FRÁGUAS, C. B. Estiolamento na micropropagação do Abacaxizeiro cv. Pérola. Ciência e Agrotecnologia, v. 27, n. 5, p , MURASHIGE, T.; SKOOG, F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiologia Plantarum, v.15, p , OLIVEIRA, M. K. T. de; NETO, F. B.; CÂMARA, F. A. A.; NUNES, G. H. de S.; OLIVEIRA, F. de A. de. Propagação in vitro da cultura do abacaxizeiro ornamental (Ananas lucidus Miller). Revista Caatinga, v. 20, n. 3, p ,

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