Análise Cromatográfica em Camada Delgada

Transcrição

1 Seminário de Orgânica Experimental I Análise Cromatográfica em Camada Delgada - Rafael Antonino Joaquim Ingino - Tathiana Mayumi Arakaki

2 Adsorventes Para realizarmos uma cromatografia em camada delgada, é necessário utilizarmos uma substância adsorvente na superfície da placa de vidro Essa substância é utilizada para reter as substâncias presentes na amostra, para posteriormente podermos analisar as manchas formadas pelos constituintes da amostra

3 Alumina Aplicação: A atividade depende dos átomos O e Al : Ácida- (ph = 4) Pigmentos sintéticos e naturais, aminoácidos, ácidos carboxílicos. Neutra- (ph = 6,9-7,1)- Aldeidos, cetonas, substâncias instáveis em meio alcalino. Alcalina- (ph = 9,5-10,5)- Hidrocarbonetos aromáticos e insaturados, corantes sintéticos, alcalóides. Preparação: 30g + 60 ml de H 2 O. Ativação: 105ºC, 10 min.

4 Sílica Gel Tipos: Sílica Gel G- 13 % CaSO 4. Sílica Gel H- Sem aglutinante. Sílica Gel P- Uso Preparativo. Sílica Gel F Com indicador de fluorescência. Sílica Gel R- Extra pura. Aplicação: Utilizada para separação de compostos hidrofílicos (açúcares, aminoácidos, íons inorgânicos, ácidos nucléicos). Preparação: 20g de sílica ml de H 2 O. Rendimento: 5 placas 20 x 20 cm, 300 um. Ativação: 105ºC- 110ºC, 30 min.

5 Preparação das placas cromatográficas: 1) Figura mostra como espalhar solução do adsorvente sobre a placa de vidro

6 Preparação da cuba cromatográfica: Deve-se colocar primeiro a fase móvel, até uma altura de 1,5 cm aproximadamente. Posteriormente, deve-se inserir a placa dentro da cuba.

7 Teoria dos Reveladores Reveladores devem ser utilizados quando as substâncias a serem analisadas não produzirem manchas coloridas. Reveladores são substâncias que reagem química, biológica, ou fisicamente com as substâncias a serem analisadas, tornandoas visíveis.

8 Teoria dos Reveladores 1) Procedimentos FísicosF sicos: Luz ultravioleta (usada em aromáticos ou dupla ligação conjugada). 2) Radioatividade: Marcadores radioativos ( 13 C). 3) Procedimentos Biológicos e Enzimáticos ticos: Antibióticos, Enzimas e Substratos. 4) Procedimentos Químicos micos: Aplicação de um reativo químico para formar um derivado colorido ou fluorescente.

9 Parâmetros Utilizados na Cromatografia Planar Fartor de Retenção (R( f ): R f = d r / d m Resolução (R s ): R s = 2(d r1 d r2 ) / (W s1 + W s2 ) Eficiência: n = 16 (d r W s ) 2

10 Análise Cromatográfica em Camada Delgada Determinação dos Rf dos padrões: Solução de 1,2 dicloroetano/ácido acético 12:1 1 Transferir a solução para uma cuba cromatográfica até atingir 1,5 cm de altura 2 Colocar na cuba uma folha de papel de filtro (dimensões de 5x20 cm), deixar saturar até que toda a folha esteja umedecida com a fase móvel Soluções dos padrões: cafeína, ácido acetilsalicílico e acetominofen. (em 3 béquers, um para cada padrão) 3 Dissolver 0,1 g de cada padrão em 5 ml de mistura de etanol/diclorometano 1:1 4 Aquecer rapidamente em banho-maria, se necessário, evitando evaporar a mistura de solventes 5 Pipetar 1 ml de cada solução dos padrões para um tubo de ensaio 6 Agitar bem para homogeneizar, assim obtendo a mistura de referência Placa de sílica (preparada com solução de sílica) 7 Riscar a placa dividindo-a em cinco colunas para aplicação das soluções padrão e da mistura de referência 8 Ativar a placa em estufa a 110º por 10 minutos 9 Aplicar com um capilar cada solução, inclusive a mistura de referência, no centro de cada coluna, a cerca de 2 cm da base da placa 10 Colocar dentro da cuba cromatográfica, e esperar até a fase móvel atingir o limite (2 cm da borda superior). 11 Aguardar a evaporação do solvente (dentro da capela) 12 Com o auxílio da luz ultra-violeta, marcar as manchas com riscador. Posteriormente exposição à vapores de iodo, 13 Medir as distâncias dos centros de massas das manchas e do deslocamento do solvente até a origem para a realização dos cálculos de Rf

11 Análise de Analgésicos: Soluções dos analgésicos: 3 analgésicos disconhecidos (em 3 béquers de 10 ml) 14 Triturar 1 comprimido de cada analgésico e colocar cada um em um becker 15 Adicionar 5 ml de solução de etanol/diclorometano a cada béquer 16 Aquecer rapidamente em banho-maria, evitando evaporar a mistura de solventes. Placa de sílica (preparada com solução de sílica) 17 Riscar a placa dividindo-a em quatro colunas para aplicação das soluções obtidas dos comprimidos e da mistura de referência 18 Ativar a placa em estufa a 110º por 10 minutos 19 Aplicar com um capilar as soluções dos comprimidos e a mistura de referência, no centro de cada coluna, a cerca de 2 cm da base da placa 20 Colocar dentro da cuba cromatográfica, e esperar até a fase móvel atingir o limite predeterminado 21 Aguardar a evaporação do solvente (dentro da capela) 22 Com o auxílio da luz ultra-violeta marcar as manchas com riscador. Posteriormente submeter exposição de vapores de iodo 23 Medir as distâncias dos centros de massas das manchas e do deslocamento do solvente até a origem, para a realização dos cálculos de Rf 24 Determinar a composição de cada analgésico. Método B- discutir