ALIMENTAÇÃO ARTIFICIAL POR MEIO DE TUBOS CAPILARES DE FÊMEAS PARCIALMENTE INGURGITADAS DO CARRAPATO Dermacentor (Anocentor) nitens*

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1 ALIMENTAÇÃO ARTIFICIAL POR MEIO DE TUBOS CAPILARES DE FÊMEAS PARCIALMENTE INGURGITADAS DO CARRAPATO Dermcentor (Anocentor) nitens* CHARLES P. RANGEL 1 ; NATHALIE C. DA CUNHA 1 ; JANIA DE REZENDE 1 ; FÁBIO J. M. DA SILVA 1 ; FABÍOLA DO N. CORRÊA 1 ; RAFAELLA C. TEIXEIRA 1 ; JENEVALDO B. DA SILVA 2 ; BRUNA DE A. BAÊTA 2 ; ADIVALDO H. DA FONSECA 3 ABSTRACT:- RANGEL, C.P.; CUNHA, N.C.; REZENDE, J.; SILVA, F.J.M.; CORRÊA, F.N.; TEIXEIRA, R.C.; SILVA, J.B.; BAÊTA, B.A.; FONSECA, A.H. [Artificil feeding through cpillries tubes of engorged prtilly femles of the tick Dermcentor (Anocentor) nitens]. Alimentção rtificil por meio de tubos cpilres de fêmes prcilmente ingurgitds do crrpto Dermcentor (Anocentor) nitens. Revist Brsileir de Prsitologi Veterinári, v. 17, supl. 1, p , Curso de Pós-Grdução em Ciêncis Veterináris, Instituto de Veterinári, Universidde Federl Rurl do Rio de Jneiro, UFRRJ, IV, DPA, Lbortório de Doençs Prsitáris, Km 07 d BR 465, Seropédic, RJ , Brsil. E-mil: divldo@ufrrj.br Artificil feeding is n importnt toll for studying ticks feeding mechnism nd trnsmission of pthogenic gents in the bsence of vertebrte host. The objective ws to feed rtificilly of engorged prtilly femles of Dermcentor (Anocentor) nitens, proceeding of infested nturlly equines nd evlute the influence of this technique on biologicl prmeters of species. Engorged prtilly femles were collected, weighted nd seprte by weight in two rnge of 40 to 60 milligrms nd 61 to 100 milligrms. Ech rnge ws further sorted in four groups with homogeneous weight which were fed for 6, 12, 24 nd 36 hours through cpillries tubes contining citrted bovine blood. It ws observed tht rtificil feeding promoted increse weight of femles in both rnge nd definitive times. The Ticks fed rtificilly for periods more drwn out, hd presented prmeters of the non-prsitic phse next to the observed ones in conditions to lbortory for this species. Femles of D. (A.) nitens prtilly engorged ingested gret volume of blood when submitted to rtificil feeding through cpillries tubes, without ny effect in their biologicl prmeters. KEY WORDS: Ixodideo, Anocentor nitens, feeding in vitro. RESUMO Alimentção rtificil é um importnte ferrment pr estudr o mecnismo de limentção de crrptos e trnsmissão de gentes ptogênicos n usênci de hospedeiros vertebrdos. O objetivo foi limentr rtificilmente fêmes prcilmente ingurgitds de Dermcentor (Anocentor) nitens, provenientes de equinos nturlmente infestdos e verificr influênci dess técnic sobre os prâmetros biológicos d espécie. Fêmes prcilmente ingurgitds form coletds, 1 Curso de Pós-Grdução em Ciêncis Veterináris, Instituto de Veterinári (IV), Universidde Federl Rurl do Rio de jneiro (UFRRJ), Km 7 d BR 465, Seropédic, RJ , Brsil 2 Curso de grdução em Medicin Veterinári, IV, UFRRJ. Seropédic, RJ. 3 Deprtmento de Epidemiologi e Súde Públic, IV, UFRRJ, Cx. Postl 74548, Seropédic, RJ , Brsil. E-mil: divldo@ufrrj.br pesds e seprds em fixs de peso de miligrms e miligrms. Pr cd fix form formdos qutro grupos de peso homogêneo, limentdos nos períodos de 6, 12, 24 e 36 hors por meio de tubos cpilres contendo sngue bovino citrtdo. Observou-se que limentção rtificil promoveu gnho do peso crescente em mbs s fixs e em todos os tempos determindos. Os crrptos limentdos rtificilmente por períodos mis prolongdos presentrm prâmetros d fse não-prsitári próximos os observdos em condições de lbortório pr ess espécie. Fêmes de D. (A.) nitens prcilmente ingurgitds form cpzes de ingerir grnde volume de sngue, qundo submetids à limentção rtificil por meio de tubos cpilres, sem cusr influênci nos prâmetros biológicos. PALAVRAS-CHAVE: Ixodídeo, Anocentor nitens, limentção in vitro.

2 36 Rngel et l. INTRODUÇÃO A primeir descrição do método de limentção rtificil por meio de tubos cpilres foi relizd por Chbud (1950). Desde então, ess técnic vem sendo empregd n limentção de crrptos vetores (DE LA VEGA et l., 2000; ABEL, 2004) e n trnsmissão de gentes ptogênicos n usênci de hospedeiros (BURGDORFER, 1957; KOCAN et l., 2005). A limentção rtificil pode ind ser empregd em testes de cricids sistêmicos e vcins, n elucidção de spectos relciondos à fisiologi d limentção e componentes d sliv dos crrptos (DE LA VEGA et l., 2000; KRÖBER; GUERIN, 2007). Dermcentor (Anocentor) nitens é um espécie de crrpto de grnde importânci no Brsil, encontrd nturlmente prsitndo equídeos, porém outros vertebrdos podem servir de hospedeiros (LABRUNA et l., 2001). Est espécie tem predileção pels regiões d orelh, divertículo nsl, períneo e crin de seus hospedeiros, crretndo prejuízos, como qued d produtividde devido o estresse dos nimis durnte espolição snguíne (BORGES et l., 2000). O estbelecimento de colônis de D. (A.) nitens em lbortório enfrent dificulddes no que diz respeito à dptção do crrpto os hospedeiros lterntivos e à mnutenção de nimis pr su limentção. Além disto, comunidde científic, preocupd com questões relcionds à étic, vem estimulndo cd vez mis diminuição do uso de nimis n experimentção científic (MARQUE FONTES, 1995). Nesse contexto, limentção rtificil é um ferrment importnte por possibilitr nálise dos prâmetros biológicos, vlição d eficiênci do vetor, lém de tornr possível redução do número de nimis de lbortório necessários pr pesquiss que envolvm trnsmissão de biogentes (HOKAMA et l., 1987; KRÖBER; GUERIN, 2007). Os objetivos do presente trblho form limentr rtificilmente, por meio de tubos cpilres, fêmes prcilmente ingurgitds de D. (A.) nitens, provenientes de infestção nturl de equinos, e verificr influênci d técnic sobre os prâmetros biológicos d espécie. MATERIAL E MÉTODOS O estudo foi conduzido no Lbortório de Doençs Prsitáris do Deprtmento de Epidemiologi e Súde Públic, Instituto de Veterinári d Universidde Federl Rurl do Rio de Jneiro (UFRRJ). Form utilizds fêmes prcilmente ingurgitds de D. (A.) nitens, provenientes de equinos nturlmente infestdos, pertencentes o Setor de Mtrizes d Fzend do Instituto de Zootecni d UFRRJ. Após colet mnul, os crrptos form trnsportdos pr o lbortório, lvdos com águ destild, secos, exmindos qunto à integridde do prelho bucl com uxílio de lup estereoscópic e pesdos em blnç nlític. O experimento foi dividido em dus etps; n primeir, form utilizds 40 fêmes com peso entre 40 e 60 mg e, n segund, 40 fêmes pesndo de mg. Em cd etp, os crrptos form seprdos em qutro grupos de peso homogêneo pr serem submetidos à limentção rtificil por meio de tubos cpilres, nos períodos de 6, 12, 24 e 36 hors. O sistem de limentção por meio de tubos cpilres foi conduzido conforme descrito por Abel (2004), com modificções. Foi utilizdo sngue coletdo ssepticmente d vei jugulr de um bovino sdio em tubo contendo citrto de sódio como nticogulnte. O sngue foi conservdo sob refrigerção 4 ºC, e quecido em bnho-mri 37 ºC ntes do preenchimento dos cpilres. Os crrptos form fixdos em bndejs de isopor com fce ventrl voltd pr cim, com uxílio de fit dupl fce. Em seguid, microcpilres sem nticogulnte, utilizdos n determinção de hemtócrito (75mm x 1,0mm x 1,5mm), repletos de sngue, form dispostos sobre s peçs bucis dos crrptos. Durnte o período de limentção rtificil, os microcpilres form trocdos cd intervlo de 60 minutos, e os grupos mntidos em estuf pr Demnd Biológic de Oxigênio (B.O.D.), à tempertur de 27 ± 1 C e umidde reltiv superior 80%. Ao término dos referidos tempos de exposição, s fêmes form pesds pr verificção d ingestão de sngue e fixds em plcs de Petri pr nálise dos prâmetros biológicos. Posteriormente, form mntids em estuf tipo B.O.D. sob s mesms condições controlds de tempertur e umidde cim referids. Form vlidos prâmetros biológicos d fse não-prsitári referentes período de pré-postur, período de postur, peso d mss de ovos, índice de eficiênci nutricionl e índice de eficiênci reprodutiv, clculdos segundo Bennett (1974). Pr nálise esttístic dos resultdos, form utilizdos ANOVA e o teste de Tukey com nível de significânci de 5%, pr comprção ds médis. RESULTADOS E DISCUSSÃO A pesgem dos crrptos ntes e pós exposição os cpilres foi um mneir simples e eficiente pr determinção do gnho de peso dos grupos ns dus fixs de peso, ssim como observdo por Abel (2004) e De l Veg (2000). Método mis sofisticdo foi relizdo por Kocn et l. (2005), que, o estudrem interção entre D. vribilis e Anplsm mrginle prtir de sistem de limentção por meio de tubos cpilres, observrm ingestão de sngue pelos crrptos trvés de micro-esfers fluorescentes e pel diminuição do volume de sngue nos tubos. Dess form, foi detectd presenç ds micro-esfers n hemolinf, fezes e intestino dos crrptos. N Tbel 1, estão presentdos os resultdos referentes o peso ds fêmes de D. (A.) nitens, ntes e pós limentção rtificil, por meio de tubos cpilres em todos os períodos nlisdos. O gnho de peso dos crrptos foi crescente à medid que se umentou o tempo de exposição os cpilres, sendo observd diferenç esttístic prtir de 24 hors de limentção ns dus fixs de peso estudds. Dess form sugere-

3 Alimentção rtificil por meio de tubos cpilres de fêmes prcilmente ingurgitds do crrpto Dermcentor (Anocentor) nitens 37 Tbel 1. Avlição do gnho de peso médio em fêmes de Dermcentor (Anocentor) nitens, ns fixs de peso entre mg e mg, submetids à limentção rtificil por meio de tubos cpilres, nos períodos de 6, 12, 24 e 36 hors. Períodos de Peso médio dos grupos limentdos rtificilmente limentção mg mg Antes Depois Gnho de peso Antes Depois Gnho de pes médi±dp médi±dp médi±dp médi±dp médi±dp médi±dp 6 hors 48,16±5,84 64,01±24,32 15,85±13,64,A 76,03±10,43 d 113,90±12,49 c 37,87±13,35 c,b (40,30-58,80) (44,90-93,30) (61,40-93,80) (88,90-123,40) 12 hors 47,50±6,08 78,44±24,32 30,94±22,55,A 75,74±10,30 d 130,90±20,93 c 55,17±19,91 c,a (40,20-58,40) (46,70-115,90) (62,20-93,60) (86,00-153,40) 24 hors 47,56±5,19 128,03±45,49 b 80,47±45,71 b,a 75,97±10,80 d 206,62±28,42 d 130,63±28,44 d,b (40,80-55,30) (44,40-177,40) (63,00-96,70) (159,50-239,10) 36 hors 47,76±5,12 170,24±27,13 c 122,48±25,61 c,a 76,1±10,62 d 222,09±36,63 d 146,00±35,17 d,a (41,60-57,20) (123,40-222,80) (63,60-92,60) (155,90-268,60) A Ns linhs, médis com letrs miúsculs comuns são equivlentes (P<0,05). Ns coluns, médis com pelo menos um letr minúscul comum são equivlentes (P<0,05). se que este período sej suficiente pr um ingestão significtiv de sngue. Abel (2004) reltou um grnde volume de sngue ingerido por fêmes de Amblyomm cjennense prcilmente ingurgitds prtir de seis hors de exposição os cpilres. Esses resultdos corroborm os encontrdos por Cunh et l. (2006), que, o limentrem rtificilmente fêmes prcilmente ingurgitds de Rhipicephlus snguineus, por meio de tubos cpilres, determinrm que o gnho de peso estv relciondo com o período de exposição dos crrptos os cpilres. Os grupos de crrptos com peso de mg presentrm mior gnho de peso em todos os períodos de limentção rtificil em relção os grupos pesndo entre 40 e 60 mg. No entnto, somente foi observd diferenç esttístic entre os grupos seis e 24 hors, qundo comprds mbs s fixs de peso. Tis resultdos sugerem que determinção do peso inicil ds fêmes submetids à limentção rtificil por meio de tubos cpilres influencie no peso finl dos crrptos. Estudos nteriores obtiverm sucesso n limentção rtificil com o uso de tubos cpilres em ixodídeos previmente limentdos em nimis de lbortório (ABEL, 2004; KOCAN et l., 2005; CUNHA et l., 2006). No presente trblho, foi possível verificr um gnho de peso significtivo, prtir d limentção de D. (A.) nitens provenientes de infestção nturl de equinos, contribuindo pr diminuir o uso de nimis em experimentções. A troc dos cpilres cd 60 minutos permitiu que os crrptos recebessem sngue fresco regulrmente. Ess é um grnde vntgem d técnic, que, pesr de lborios, não torn necessári dição de conservntes (STONE et l., 1983), ssim como o rmzenmento de sngue, o que poderi levr à produção de toxins (OSBORNE; MELLOR, 1986). Ns Tbels 2 e 3, estão expostos os vlores médios referentes os prâmetros biológicos ds fêmes de D. (A.) nitens limentds rtificilmente. Esses resultdos form equivlentes os observdos por Bstos et l. (1996) e Snvri; Tbel 2. Prâmetros biológicos referentes à fse não-prsitári de fêmes prcilmente ingurgitds de Dermcentor (Anocentor) nitens, pesndo entre 40 e 60 miligrms, submetids à limentção rtificil por meio de tubos cpilres, durnte 6, 12, 24 e 36 hors. Prâmetros Períodos de limentção rtificil por meio de tubos cpilres biológicos 6 hors 12 hors 24 hors 36 hors médi±dp médi±dp médi±dp médi±dp Peso ds fêmes 64,01±17,20 78,44±24,32 128,03±45,49 b 170,24±27,13 c limentds (mg) (44,90-93,30) (46,70-115,90) (44,40-177,40) (123,40-222,80) Período de Pré- 6,30±1,25 4,50±0,97 b 4,90±1,61,b 4,30±0,48 b Postur (dis) (5,00-8,00) (4,00-7,00) (4,00-9,00) (4,00-5,00) Período de 5,30±1,16 6,50±1,43 8,56±2,56 b 9,30±0,95 b Postur (dis) (3,00-7,00) (4,00-9,00) (2,00-10,00) (8,00-11,00) Peso mss 17,15±12,17 30,47±17,39 60,14±28,82 b 80,85±12,46 b de ovos (mg) (4,50-38,30) (9,00-60,40) (0,80-87,20) (58,90-94,90) Índice de Eficiênci 42,81±16,26 64,40±14,34 b 60,14±24,85,b 70,10±9,23 b Nutricionl (%) (24,09-69,51) (41,67-89,21) (3,74-76,22) (47,55-80,37) Índice de Eficiênci 24,01±11,78 35,82±11,87,b 41,06±17,81 b 48,07±7,43 b Reprodutiv (%) (9,43-41,05) (19,27-52,11) (1,80-55,02) (32,26-55,58) Ns linhs, médis com pelo menos um letr minúscul comum são equivlentes (P<0,05).

4 38 Rngel et l. Tbel 3. Prâmetros biológicos referentes à fse não-prsitári de fêmes prcilmente ingurgitds de Dermcentor (Anocentor) nitens, pesndo entre 61 e 100 miligrms, submetids à limentção rtificil por meio de tubos cpilres, durnte 6, 12, 24 e 36 hors. Prâmetros Períodos de limentção rtificil por meio de tubos cpilres biológicos 6 hors 12 hors 24 hors 36 hors médi±dp médi±dp médi±dp médi±dp Peso ds fêmes 113,90±12,49 130,90±20,93 206,62±28,42 222,09±36,63 b limentds (mg) (88,90-123,40) (86,00-153,40) b (159,50-239,10) (155,90-268,60) Período de Pré- 4,70±0,48 4,20±0,63 4,20±0,42 2,90±0,32 b Postur (dis) (4,00-5,00) (4,00-6,00) (4,00-5,00) (2,00-3,00) Período de 8,10±0,57 8,00±1,25 10,50±1,40 b 11,30±1,16 b Postur (dis) (7,00-9,00) (5,00-10,00) (7,00-12,00) (10,00-13,00) Peso mss 53,20±8,58 67,11±17,40 116,60±24,31 b 124,23±32,95 b de ovos (mg) (40,00-69,80) (30,30-85,90) (75,80-146,80) (56,90-171,00) Índice de Eficiênci 70,52±4,84 76,29±4,70,b 77,70±6,64 b 78,95±4,63 b Nutricionl (%) (63,79-77,90) (65,58-81,82) (67,02-85,40) (69,83-83,09) Índice de Eficiênci 46,50±2,80 50,37±6,54,b 56,06±5,92 b 55,21±8,56 b Reprodutiv (%) (42,66-51,70) (35,23-56,00) (45,01-62,28) (36,50-63,66) Ns linhs, médis com pelo menos um letr minúscul comum são equivlentes (P<0,05). Prt (1996), os quis trblhrm com fêmes ingurgitds provenientes de infestção de D. (A.) nitens em equinos. A limentção rtificil não interferiu n biologi dos crrptos, fto observdo por Rechv et l. (1999) pr A. mericnum, De L Veg et l. (2000) pr Rhipicephlus (Boophilus) microplus e Abel (2004) pr A. cjennense. Nos resultdos observdos pr o período de pré-postur dos crrptos, com peso de mg, não houve diferenç significtiv prtir de 12 hors de limentção rtificil (Tbel 2). Esse prâmetro sofreu redução conforme o umento do tempo de exposição dos crrptos os cpilres. N fix de peso de mg, os crrptos limentdos por 36 hors inicirm postur ntes dos demis grupos, diferindo esttisticmente (Tbel 3). Nos prâmetros período de postur e peso d mss de ovos, foi encontrd diferenç significtiv entre os grupos prtir de 24 hors de limentção, ns dus fixs de peso (Tbels 2 e 3). Esse fto pode ser explicdo em decorrênci d mior ingestão de sngue pelos crrptos desses grupos. Hooker et l. (1912), trblhndo com fêmes de D. (A.) nitens nturlmente limentds e provenientes de bovinos, observrm um lt correlção entre o peso ds teleógins e o número de ovos produzidos. Nos índices de eficiênci nutricionl e reprodutiv, foi observd diferenç esttístic, prtir de 24 hors, ns dus fixs de peso estudds. Com exceção do índice de eficiênci nutricionl dos crrptos de peso entre 40 e 60mg limentdos por 12 hors. Em relção à fertilidde dos ovos, verificou-se eclosão ds lrvs em 92% dos crrptos dos grupos com peso entre 40 e 60 mg; e 100% pr os grupos pesndo de mg. Os resultdos indicm ind, que ns fixs de peso estudds, s fêmes limentds rtificilmente por períodos mis prolongdos, presentrm prâmetros d fse não-prsitári próximos os observdos em condições de lbortório pr ess espécie (BASTOS et l., 1996; SANAVRIA; PRATA, 1996). CONCLUSÕES Crrptos D. (A.) nitens prcilmente ingurgitdos, provenientes de infestção nturl em equinos, form cpzes de ingerir grnde volume de sngue qundo submetidos à técnic de limentção rtificil por meio de tubos cpilres. A determinção do peso inicil ds fêmes submetids à limentção rtificil por meio de tubos cpilres influenciou no peso finl dos crrptos. A limentção rtificil de fêmes prcilmente ingurgitds de D. (A.) nitens não influenciou nos prâmetros biológicos dest espécie. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ABEL, I. Alimentção rtificil de fêmes de Amblyomm cjennense (Fbricius, 1787) (Acri: Ixodode) trvés de tubos cpilres f. Tese (Doutordo) - Universidde Federl Rurl do Rio de Jneiro, Seropédic, BASTOS, K. M. S.; DAEMON, E.; FACCINI, J. L. H.; DA CUNHA, D. W. Efeitos de diferentes temperturs sobre fse não prsitári de Dermcentor (Anocentor) nitens (Neumnn, 1897) (Acri: Ixodide) em condições de lbortório. Revist Brsileir de Prsitologi Veterinári, v. 5, n. 1, p , BENNETT, G.F. Oviposition of Boophilus microplus (Cnestrini, 1887) (Acrin: Ixodide). I. Influence of tick size on egg production. Acrologi, v.16, n.1, p , BORGES, L. M. F.; OLIVEIRA, P. R.; RIBEIRO, M. F. B. Sesonl dynmics of Anocentor nitens on horses in Brzil. Veterinry Prsitology, v. 89, n. 1, p , BURGDORFER, W. Artificil feeding of ixodid ticks for studies on the trnsmission of disese gents. Journl of Infectious Diseses, v. 100, n. 3, p CHABAUD, A. G. Sur l nutrición rtificielle des tiques. Annles de Prsitologie, v. 25, n. 1-2, p

5 Alimentção rtificil por meio de tubos cpilres de fêmes prcilmente ingurgitds do crrpto Dermcentor (Anocentor) nitens 39 CUNHA, N. C.; RANGEL, C. P.; PIRANDA, E. M.; REZEN- DE, J.; TEIXEIRA, R. C.; FONSECA, A. H. Avlição do gnho de peso em fêmes de Rhipicephlus snguineus (cri: Ixodide) limentds rtificilmente por meio de tubos microcpilres. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 14 E SIMPÓSIO LATINO-AMERICANO DE RICKETTSIOSES, 2, 2006, Ribeirão Preto. Anis... Jboticbl: CBPV, p DE LA VEGA, R.; DIAZ, G.; FINLAY, L. Artificil feeding of Boophilus microplus (Acri: Ixodide) through micropipettes. Annls of the New York Acdemy of Sciences, v. 916, n. 1, p , HOKAMA, Y.; LANE, R. S.; HOWARTH, J. A. Mintennce of dult nd nymphl Ornithodoros coriceus (Acri: Argside) by rtificil feeding through prfilm membrne. Journl of Medicl Entomology, v. 24, n. 3, p , HOOKER, W.A.; BISHOPP, F.C.; WOOD, H.P. The life history nd bionomics of some North Americn ticks. Wshington: United Sttes Bureu of Entomology Bulletin, n. 106, p. KOCAN, K. M.; YOSHIKA, J.; SONENSHINE, D. E.; FUENTE, J.; CERAUL, S. M.; BLOUIN, E. F.; ALMAZÁN, C. Cpillry tube feeding system for studying tick-pthogen intertions of Dermcentor vribilis (Acri:Iodide) nd Anplsm mrginle (Rickettsiles: Anplsmtcee). Journl of Medicl Entomology, v. 42, n. 5, p , KRÖBER, T.; GUERIN, P. M. In vitro feeding ssys for hrd ticks. Trends in Prsitology, v. 23, n. 9, p , LABRUNA, M. B.; KERBER, C. E.; FERREIRA, F.; FACCINI, J. L. H.; DE WAAL, D. T.; GENNARI, S. M. Risk fctors to tick infesttions nd their occurrence on horses in the Stte of São Pulo, Brzil. Veterinry Prsitology, v. 97, n. 1, p. 1 14, MARQUE FONTES, E. Aplicção de métodos lterntivos à experimentção niml em estudos frmcológicos e toxicológicos. Revist Portugues de Ciêncis Veterináris, v. 514, n. 1, p , OSBORNE, R. W.; MELLOR, P. S. Development nd mortlity of Ornithodoros moubt fter feeding through n rtificil membrne. Tropicl Animl Helth nd Production, v. 18, n. 1, p , RECHAV, Y.; ZYZAK, M.; FIELDEN, L. J.; CHILDS, J. E. Comprison of methods for introducing nd producing rtificil infection of ixodid ticks (Acri: Ixodide) with Ehrlichi chffeensis. Journl of Medicl Entomology, v. 36, n. 4, p , SANAVRIA, A.; PRATA, M. C. A. Ensio metodológico pr estudo do ciclo biológico do Anocentor nitens (Neumnn, 1897) (Acri: Ixodide) em eqüinos experimentlmente infestdos. Revist Brsileir de Prsitologi Veterinári, v. 5, n. 2, p , STONE, B. F.; COMMINS, M. A.; KEMP, D. H. Artificil feeding of the Austrlin prlysis tick, Ixodes holocyclus nd collection of prlysing toxin. Interntionl Journl of Prsitology, v. 13, n. 5, p , Recebido em 30 de bril de Aceito pr publicção em 14 de setembro de 2008.