Procedimento padronizado de operação do sistema cromatográfico LaChrom

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1 Sumário (sctc / pcs / jlsc / mjf - May2001) (A) Inicializar o sistema LaChrom (B) Mudar ou criar aplicação (1) na operação de rotina, ou seja, quando a aplicação tiver sido criada, para mudar a aplicação (2) para criar uma nova aplicação (3) Cadastrar a coluna de separação (C) Habilitar o método (1) quando existir o método operacional (2) caso o método operacional não tenha sido criado (D) Procedimento simplificado no desenvolvimento do método, ou seja, alterar um métodobase existente (E) Procedimento 'passo a passo' no desenvolvimento do método (ou desenvolvimento do método inicial) (F) Editar o método de operação (1) na primeira linha de ícones - definição dos parâmetros operacionais dos módulos (2) na segunda linha de ícones - definição dos parâmetros relativos à análise (G) Editar a tabela de amostra(s) (sample table) de trabalho (H) Aquisição de dados (I) Reprocessando a análise (J) Desligar o sistema LaChrom (A) Inicializar o sistema LaChrom (1) ligar, sem seqüência específica, os módulos do sistema cromatográfico hplc solvent degasser L-7612, interface D-7000, column oven L-7300 / L-7351 / L-7360 pump L-7100, autosampler L-7200 / L7250, detector UV/VIS L-7400, L-7420 ou DAD L-7455 differential refractometer RI-71 ou L-7490, ou conductivity detector L-7470, ou amperometric detector L-3500 A (2) ligar o computador (cpu e monitor e impressora) (3) verificar a indicação das seguintes inscrições ou eventos nos respectivos módulos: módulos L-7100, L-7200, L D-line system is not ready forno L E5 forno L-7351 / L OFF diode array detector L led (verde) de operação da lâmpada de deutério (4) verificar se a aplicação de trabalho já existe e se a coluna de separação já está cadastrada seguindo o passo B) Globallab group 1

2 (5) Abrir o programa Multi-HSM Manager, escolher sistema 1 ou 2, clicar no ícone do 'System Status' (i) e na opção INICIALIZE para inicializar os periféricos, assim liberando o painel de controle; após a habilitação (idle) dos módulos do hardware, clicar 'OK' (6) fazer o ambiente no sistema, por período mínimo que permita alcançar o equilíbrio, na configuração e componentes selecionados: eluente, coluna e parâmetros operacionais (6a) Definir os canais a serem utilizados na bomba (A = FM, B = ACN C = MeOH e D = H2O) e solução do wash do autosampler = FM s/ tampão (6b) certificar-se de que o reservatório de descarte (geral e autosampler) está vazio (6c) instalar a coluna situada no forno L-7300, lado direito do instrumento (6d) purgar todos os canais da bomba c/ no mínimo 3 minutos para o canal da FM. Para efetuar a purga, abrir a válvula de purga (sentido anti-horário), pressione MANUAL SET e entre até o fim da linha com as respectivas concentraçãos (100% p/ o canal desejado e 0% p/ o restante), fluxo de trabalho, pressão máxima e mínima e depois pressione PUMP ON/OFF e PURGE. Neste momento o fluxo irá para 9.99ml/min., mude os canais a serem purgados pressionando diretamente as letras respectivas no painel A, B C ou D. Após o término deste processo, desligue a purga pressionando novamente PURGE e PUMP ON/OFF. Feche a válvula de purga (sentido horário) e ligue a bomba PUMP ON/OFF para condicionar a coluna e o sistema com o fluxo e solvente de trabalho. observação: a rinsagem da coluna emprega usualmente vezes o volume 'void' da coluna (0,78 ml na coluna 125 x 4 mm e 1,57 ml na coluna 250 x 4 mm) (6e) purgar o autosampler L-7200 pressionando a tecla WASH 3x (6f) entre com a temperatura de trabalho no forno L-7300 pressionando SET MONIT e depois com as setas ajuste o valor de no mínimo 5ºC acima do ambiente. (7) configurar a impressora, clicando 'print setup' no file, selecionar o 'tamanho de papel': A4 (210 x 297 mmm), selecionar no ícone propriedades a qualidade requerida para a impressão (p.ex. 'econofast') e clicar 'OK' (B) Mudar (no 'change aplication') ou criar aplicação (no 'HSM administrator') (1) na operação de rotina, ou seja, quando a aplicação estiver criada, para mudar a aplicação: (1a) selecionar sistema 1 ou 2 e clicar no ícone - 'change aplication' (ícone das gavetas) (1b) escolher a aplicação pretendida e clicar SELECT (2) para criar uma nova aplicação: (2a) fechar a tela do Multi-HSM Manager (2b) clicar no ícone HSM Administration para abrir o aplicativo (2c) selecionar sistema 1 ou 2 e clicar no ícone - 'aplication setup' (ícone das gavetas) (2d) no campo 'application name' criar nova aplicação, nominando a aplicação pretendida (2e) no campo 'new subdirectory' criar subdiretório específico, mantendo se possível (por racionalidade), o mesmo nome para a análise ou série pretendida (2f) clicar o ícone 'CREATE' (2g) clicar o ícone 'CLOSE' (3) Adicione a coluna de separação no banco de colunas (3a) selecionar sistema 1 ou 2, clicar no ícone Single Instrument Setup e no botão ADD (3b) digite o nome da coluna e o número de série nos respectivos campos Model Name e Serial Number (3c) clicar em OK, OK e feche o aplicativo HSM Administration Globallab group 2

3 (C) Para habilitar o método, clicar no ícone method setup (ícone da seqüência de folhas) (1) verificar se o método existe (se método e aplicação pretendidas aparecem marcados nos campos 'method name' e 'application', clicar 'cancel' (2) caso não existir método operacional criado selecionar no campo application a aplicação desejada, nisto se apresentarão duas possibilidades: (2a) os métodos desenvolvidos estão dispostos no campo 'method name' (2b) caso não existir método desenvolvido na aplicação pretendida o campo 'method name' estará vazio (3) assim, a criação de método pode seguir dois procedimentos: (3a) procedimento simplificado, seguir para o ítem (D) (3b) procedimento 'passo a passo' (ou desenvolvimento do método inicial), nesta hipótese seguir diretamente para o ítem (E) (D) Procedimento simplificado, ou seja, alterar um método-base existente (que apresente características próximas ao método pretendido)? (1) na tela 'open file' selecionar o método pretendido e clicar 'OK'? (1) no ícone 'file' na tela 'open file' selecionar no campo 'application' a aplicação pretendida e os métodos desenvolvidos nesta aplicação se apresentarão no campo 'method name' (2) selecionar o método pretendido, clicar 'OK' e se abrirá a tela do método selecionado, a ser modificado (3) clicar na opção 'File' e selecionar salvar como 'Save Method As', nisto se apresentará a subtela 'save as', na qual se farão: (3a) no campo 'name': nominar o novo método em desenvolvimento (3b) no campo 'application': selecionar a aplicação pretendida (3c) caso necessário, preencher o campo 'comment' (3d) clicar 'OK', nesta operação a tela do método selecionado mostra sua nova denominação (E) Procedimento 'passo a passo' (ou desenvolvimento do método inicial) (1) no ícone 'FILE' clicar 'NEW', nisto se apresentará a tela 'novo' e nela selecionar 'METHOD' e clicar 'OK' (2) assim, se apresentará a tela do método referencial do sistema (F) Editar o método de operação (1) na primeira linha de ícones - definição dos parâmetros operacionais dos módulos (1a) no ícone method configuration (ícone computador conectado aos módulos), definir a configuração a ser aplicada na análise: interface D-7000 detector ch1 L-7400 ou L-7455 forno L-7300 autosampler L-7200 bomba A L-7100 gradiente mode low para quando for utilizar mais de um canal selecionar a coluna Globallab group 3

4 e (1b) no ícone method information (ícone com i) no campo 'description' descrever características do método em desenvolvimento preencher o campo 'developed by' nos campos 'solvent names' denominar os eluentes A, B, C, D (1c) no ícone pump setup (ícone da bomba) no campo 'pressure limit', definir os valores min e max da pressão operacional prevista editar o modo operacional em regime isocrático ou gradiente, com os respectivos solventes e vazões observação: em função da notação das unidades adotadas, os valores introduzidos no delineamento do método, para o tempo (10,0 min) e vazão (0,8 ml / min), são expressos em valores decimais, separados por vírgula (ou ponto) (1d) no icone autosampler não é necessário alterar nehuma opção (1e) no ícone column oven setut (ícone com termômetro - forno) definir os limites de temperatura de operação com valores max e 'nominal' (em C) (1f) no ícone channel 1 detector setup (ícone do olho) definir os parâmetros do primeiro detector para os campos: stop time spectra, wavelength, absorbance, time, autozero e Response Time = 0,5s (1g) no ícone event signal setup definir eventuais necessidades (1h) no ícone time summary verificar o perfil evolutivo do regime de operação desenhado para o sistema de bombeamento (2) na segunda linha de ícones - definição dos parâmetros relativos à análise (2a) nos ícones dos canais (1 e 2) se apresentará definido o canal em uso (2b) no ícone calculation method (ícone da calculadora) definir os parâmetros nos campos: quantitation, identification (time absolute), data options e 'calibration' (2c) no ícone component table (ícone da frasco) definir os parâmetros nos campos: retention time (RT), window, 'name' e func1 (2d) no ícone concentration table (ícone do frasco) escolher a unidade de concentração, entrar c/ os respectivos valores Std1 a Std20 para todoso os componentes a serem quantificados (2e) no ícone integration table (ícone do solstício) definir inicialmente os valores referenciais: noise: 10 smoothing: OFF sensitivity: 20 N-Method: 0 após definir as quatro primeiras funções indicadas, rever outros atributos mascarados, clicando na quinta linha e definir os parâmetros necessários, com seus respectivos início e término ('on' e 'off'), em função da integração pretendida (2f) no ícone DAD data processing definir as opções ofertadas: como peak purity check, peak-top spectrum integration e no campo chromatograms to create, definir o sistema apropriado de detecção (2g) no ícone Chromatogram display format definir as escalas dos eixos de coordenadas: vertical axis scale e horizontal axis scale definir sempre as opções: auto zero e full scale e peak labels (2h) no ícone DAD display format Globallab group 4

5 compatibilizar com os dados do detector setup com os indicados no campo display format no campo 'display format' selecionar valor apropriado na 'absorbance scale' (2i) no icone Confidence Report abilitar o System Suitability Test e escolher as funções e tolerâncias desejadas abilitar o Module Performance Test e as opções Print Pressure/Temperature profile e programar os critérios de alarme Criteria for Warning (2j) no ícone Channel 1 report format remover a opção print primary, escolher a opção identified only, escolher a unidade concentração CONC1 ou other para ter acesso aos campos de nome, scale factor e divide by sample amount. Em column header defina a seguinte sequência: PK NUM, RT, AREA, CONC1 e NAME. Escolha em Export Repor CBM31REC.EXE p/ reprocess. Escolha o formato do relatório em repot layout edit primary OK FILE LOAD ROTINA SIM OK CLOSE. (2k) fechar o método desenvolvido, clicando no (x) e aparecerá a subtela HSM: com a questão: 'salvar alterações? ' (2l) confirmar as alterações, e aparecerá a nova subtela 'save', onde poderão ser introduzidos comentários no campo 'comment', clicar 'OK' (2m) ao concluir estas operações, o método desenvolvido estará habilitado no sistema (G) Editar a tabela de amostra(s) (sample table) de trabalho (1) no ícone Sampler Setup (icone da bandeja verde) (1a) no campo 'sample table name' dentre as tabelas desenvolvidas, selecionar a tabela pretendida e clicar 'OK', nisto aparecerá a janela contendo a tabela selecionada (1b) alterar os campos: 'vial', 'volume', 'inj per vial', 'type', 'sample name' e se necessário o 'method name'. Utilizar os comandos clear to table e append to table para refazer a sequência. (1c) clicar em campos das linhas inferiores da tabela (em campos distintos do definido) para salvar os elementos digitados (1d) fechar a tabela e salvar (2) caso não existir a tabela de amostra(s) (2a) File New - Sampler Table - OK (2b) defina as característica da bandeja em rack parameters STD ou L OK (2c) defina todos os campos pertinentes a esta sequência e pressione append to table (2d) alterne para a tela edit table e redefina os parâmetros necessários tais como sample name, sample amount, vial, method, etc. (2e) fechar a tabela e salvar OBS.: Para facilitar o preparo da bandeja, após a rpogramação da sequência de injeção, o usuário poderá imprimi-la: No sample table na tela Edit Table, clicar em File e Print (H) Aquisição de dados (1)abrir o ícone Acquire Data, e aparecerão as tabelas desenvolvidas (1a) selecionar o sample table onde serão armazenados os dados da análise e clicar OK antes de iniciar a operação via start run ou start series, ligar o módulo L-7100 pump, pressionando o botão 'pump on / off' (se necessário) aguardar o condicionamento do sistema nas condições especificadas no método desenvolvido; p.ex. ambiente na coluna, clicar start run / series, para iniciar a análise cromatográfica, nisto se apresentará a tela baseline test. Durante um minuto o sistema avaliará o valor do noise, e se este estiver abaixo do valor especificado no sample table, a sequência prosseguirá 'para o status waiting for injetion'. Ao término da(s) análise(s), relacionada(s) na 'sample table', aparecerá a tela 'Idle' e a opção Monitor clicar o úlitmo ícone (x) do 'data acquisition monitor - para fechar a tela, Globallab group 5

6 clicar o último ícone (x) do sample table name para fechar e salvar a tabela da aquisição de dados. OBS.: Após o inicio de uma sequência, a opção Sleep / Wakup estará disponível para ser habilitada! Está opção permite ao usuário que programe o sistema para se Auto-desligar e Auto-ligar. (I) Reprocessando a análise (1)abrir o ícone Reprocess Data, e aparecerão os números das corridas efetuadas Selecione uma delas, visualize através do display, defina os parâmentros necessários e pressione recalculate p/ recalcular. Utilize o modify report para visualizar o resultado. Caso seje necessário alterar alguma informação na tabela de injeção, pressione edit, efetue as alterações e depois pressione save e recalculate. (J) Desligar o sistema LaChrom (1)Feche o Multi-HSM Manager ou efetue a desconexão através do botão (i) e depois Disconnect. Desligar, sem seqüência específica, os módulos do sistema cromatográfico hplc solvent degasser L-7612, interface D-7000, column oven L-7300, e pump L-7100, diode array detector L-7455, ou differential refractometer RI-71 ou L-7490, ou conductivity detector L-7470, ou amperometric detector L-3500A (2) clicar o último ícone (x) da tela do Multi-HSM Manager (3) desligar o computador via 'shut down' (4) aguardar a indicação de desligar o computador e desligar o monitor OBS.: Ao religar a máquina, o usuário deve sempre purgar a linha A com H2O antes de iniciar um novo trabalho! Globallab group 6

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