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1 TIMO CB, 2017

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3 Célula tronco Progenitor mielóide Progenitor linfóide Célula tronco Linfócito B Linfócito T Célula NK CFU-E CFU-Meg CFU-Bas CFU-Eos CFU-GM eritrócitos plaquetas basófilo eosinófilo neutrófilo monócito

4 Célula tronco Progenitor mielóide Progenitor linfóide Célula tronco Linfócito B Linfócito T Célula NK CFU-E CFU-Meg CFU-Bas CFU-Eos CFU-GM eritrócitos plaquetas basófilo eosinófilo neutrófilo monócito

5 Desenvolvimento de Linfócitos

6 Progenitor linfóide Linfoblasto Pró-linfócito Linfócito maduro T, B ou NK

7 Maturação dos Linfócitos Células B totalmente na medula óssea Células T inicia-se na medula óssea e se completa no TIMO Linfócitos maduros Migram para órgãos linfóides secundários Plasmócito Linfócito ativado

8 Timo órgão linfóide primário Local de maturação de linfócitos T Órgão bilobado, situado no mediastino anterior Cada lobo: múltiplos lóbulos, parcialmente delimitados por septos fibrosos

9 Tecido Linfóide Concentração anatômica de linfócitos

10 Tecidos Linfóides Órgãos geradores, ou primários onde linfócitos são gerados e amadurecem (medula óssea e timo) Órgãos periféricos, ou secundários onde linfócitos são ativados pelo antígeno (linfonodo, baço e tecido linfóide difuso)

11 Desenvolvimento do Timo Embrião: epitélio endodérmico cresce em direção ao mediastino Rudimento epitelial invadido por linfócitos: ocupam espaços entre células epiteliais Células epiteliais permanecem unidas por prolongamentos citoplasmáticos (estrelar) Células retículo-epiteliais: estrutura de sustentação dos linfócitos tímicos Órgão grande até a puberdade passa a ser substituído por tecido adiposo tamanho e aparência variam com a idade

12 Precursor comum de células retículo-epiteliais tímicas (queratinas 5 e 18) Foxn1 (fator de transcrição) Célula retículo-epitelial da córtex do timo (queratina 18) Célula retículo-epitelial da medular do timo (queratina 5) Aire (fator de transcrição) Seleção de linfócitos T imunocompetentes FUNÇÃO Deleção de linfócitos T auto-reativos

13 Organização Celular do Timo Humano córtex medula cápsula trabécula epitélio subcapsular junção córticomedular corpúsculo de Hassal célula epitelial cortical Timócito (origem: MO) célula epitelial medular célula dendrítica (origem: MO) Macrófago (origem: MO)

14 As células epiteliais do timo formam uma rede que sustenta os timócitos Microscopia Eletrônica de varredura, W van Ewjik

15 Célula retículoepitelial cortical Célula retículoepitelial medular Timócito

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17 velho Timo jovem

18 Timo Estrutura Geral Cápsula Trabéculas Córtex Medular

19 Cortex do Timo Grande concentração de linfócitos pequenos, ricos em heterocromatina, intensamente basofílicos Macrófagos: fagocitam linfócitos em degeneração

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23 Medular do Timo Linfócitos com núcleo menos corado Maior proporção de células retículoepiteliais Corpúsculos de Hassal

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29 Timo Maturação de Linfócitos T Linfócitos T imaturos medula óssea circulação cortex do timo Maturação inicia-se na cortex Linfócitos maduros migram para a medular

30 Um modelo simplificado da diferenciação intratímica simples positiva CD4 + Linfócito TCD4 + auxiliar duplo negativa duplo positiva CD4 + CD8 + Linfócito TCD8 + citotóxico simples positiva CD8 + Córtex Medular

31 Estágios de desenvolvimento de linfócitos T Estágio de maturação Célula tronco Pró-T Pré-T Duplo positiva Simples positiva (célula T imatura) Célula T madura (naïve) Expressão do TCR ausente ausente Cadeia β /pré α TCR α/β na membrana TCR α/β na membrana TCR α/β na membrana Marcadores de superfície C-kit+ CD44+ CD25- C-kit+ CD44+ CD25+ C-kit+ CD44- CD25+ CD4+ CD8+ TCR/CD3lo CD4+CD8- CD4-CD8+ TCR/CD3hi CD4+CD8- CD4-CD8+ TCR/CD3hi Localização anatômica Medula óssea Timo Periferia

32 Seio subcapsular CD25+CD44low Cortex externa CD25+CD44+ Cortex interna Junção córticomedular Medula CD25-CD44+ DN= CD4 - CD8 - DP= CD4 + CD8 + SP=CD4 + CD8 - SP=CD4 - CD8 +

33 Migração de timócitos num lóbulo do timo Timócitos interagem com células do microambiente tímico

34 Compartimentalização do desenvolvimento de células T no timo Anderson. G.

35 Compartimentalização do desenvolvimento de células T no timo Zona subcapsular Cortex Medula Anderson. G.

36 Migração de células T em desenvolvimento da córtex para a medula tímica Anderson. G.

37 vênula Células retículoepiteliais de suporte

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39 Precursor comum de células retículo-epiteliais tímicas (queratinas 5 e 18) Foxn1 (fator de transcrição) Célula retículo-epitelial da córtex do timo (queratina 18) Célula retículo-epitelial da medular do timo (queratina 5) Aire (fator de transcrição) Seleção de linfócitos T imunocompetentes FUNÇÃO Deleção de linfócitos T auto-reativos

40 AutoImmune Regulator = AIRE Mutações no gene aire causam APECED no homem, que é a destruição autoimune de órgãos endócrinos (Nature Genet :393). Primeira doença autoimune sistêmica que é causada por defeito num único gene.. AIRE é expresso no epitélio medular tímico e regula a expressão de antígenos específicos de diversos tecidos. Anderson. G.

41 Diversos tecidos são representados pela expressão gênica promíscua que ocorre nas células retículo epiteliais do timo

42 Agrupamentos de cromatina Necrose MECANISMOS Mecanismo de morte DE MORTE celular no CELULAR timo: APOPTOSE Apoptose Compactação e segregação da cromatina Fragmentação nuclear Bolhas Corpos apoptóticos Desintegração Liberação do conteúdo intracelular Fagocitose Corpo apoptótico Célula fagocítica Inflamação

43 Células T em desenvolvimento no timo que sofrem apoptose são ingeridas por macrófagos Células apoptóticas: em vermelho Macrófagos: em azul Imunohistoquímica, microscopia de luz Sprenter & Surh

44 Macrófagos na córtex tímica: detecção de CD68

45 Ligação de timócitos apoptóticos a macrófago Timócitos apoptóticos fagocitados por macrófago

46 Um macrófago humano ingerindo múltiplos corpos apóptóticos

47 Seleção de células T: divisão de trabalho entre os microambientes tímicos Córtex tímica: screening para reatividade com MHC Morte por ter sido preterido Medula: screening para auto-reatividade Seleção positiva: reconhecimento de MHC no epitélio cortical Célula T autotolerante Seleção negativa

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49 FIM

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