TRIAGEM METABÓLICA POR PKS E NRPS EM ACTINOBACTÉRIAS ENDOFÍTICAS DE Citrus reticulata

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1 Quim. Nova, Vol. XY, No. 00, S1-S5, 200_ TRIAGEM METABÓLICA POR PKS E NRPS EM ACTINOBACTÉRIAS ENDOFÍTICAS DE Citrus reticulata Pedro L. R. da Cruz a, Leila R. Giarola b, Suellen da Silva Moraes a, Déborah Ellen S. G. Da Silva a, Joelma Marcon c, João L. Azevedo c, Welington L. Araújo d e Luciana G. de Oliveira c, * a Departamento de Química Orgânica, Instituto de Química, Universidade Estadual de Campinas, Campinas SP, Brasil b Faculdade de Farmácia, Universidade Estadual de Campinas, Campinas SP, Brasil c Departamento de Genética, Escola de Agricultura Luiz de Queiroz, Universidade de São Paulo, Piracicaba SP, Brasil d Departamento de Microbiologia, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo SP, Brasil Tabela 1S. Actinobactérias utilizadas no estudos de desreplicação metabólica. Os números entre parênteses indicam as posições nos experimentos de PCR (Figuras 1S, 2Se 3S) Linhagem A1 (1) A13 (2) A19 (3) A30 (4) (5) B1 (6) A21 (7) A10 (8) A18 (9) Identificação Streptomyces bicolor Streptomyces cyaneus Streptomyces wadayamensis Streptomyces cyaneus Tabela 2S. Identificação dos clones que apresentaram sequências significativas para análise de genes pks Clone B11 B12 B43 C12 E2 E5 Micro-organismo A30 A19 A19 Material Suplementar Figura 1S. Visualização do gel de agarose (2%) contendo amostras dos experimentos de PCR para amplificação dos domínios de cetossintases utilizando-se os primers KS-BE F/R (marcador l/fx). Os fragmentos amplificados possuem entre pb. Apesar de observadas inespecificidades, pode-se observar que os experimentos utilizando-se 5 e 2 ml de DNA genômico apresentaram resultados positivos para todas as templates utilizadas Figura 2S. Visualização do gel de agarose (1,5%) contendo amostras dos experimentos de PCR para amplificação dos domínios de cetossintase-metilmalonila transferase utilizando-se os primers K1F/M6R (marcador l/fx). Os fragmentos amplificados possuem entre pb. Pode-se observar que o experimento utilizando-se 1 ml de DNA genômico apresentou melhores resultados para a triagem *

2 S2 da Cruz et al. Quim. Nova Figura 3S. A. Visualização do gel de agarose (1,5%) contendo amostras dos experimentoe de PCR para amplificação dos domínios de adenilação (A) utilizando- -se os primers A3F/A7R (marcador l/fx). Os fragmentos amplificados possuem por volta de 700 pb. B. Amplificação simultânea das sequencias referentes aos domínios A e KS-AT em um experimento do tipo multiplex. Para ambos os experimentos pode-se observar que a utilização de 5 ml de DNA genômico como template apresentou melhores resultados para a triagem Figura 4S. Avaliação qualitativa da atividade antibiótica: na direção vertical da placa é inoculada a linhagem de actinobactéria e perpendicularmente, as linhagens patogênicas Figura 5S. Árvore de taxonomia metabólica gerada a partir do alinhamento de sequências de cetossintase-metilmalonila transferase dos clones E2 e E5 amplificados de Streptomyces bicolor A19

3 Vol. XY, No. 00 Triagem metabólica por PKS e NRPS em actinobactérias endofíticas de Citrus reticulata S3 Figura 6S. Árvore de taxonomia metabólica gerada a partir do alinhamento de sequências de cetossintase-metilmalonila transferase do clone C12 contendo fragmento amplificado de Streptomyces cyaneus A30 Figura 7S. Árvore de taxonomia metabólica para os fragmentos clonados (B11, B12 e B43) contendo domínios de cetossintase-metilmalonila transferase amplificados de Streptomyces wadayamensis

4 S4 da Cruz et al. Quim. Nova Figura 8S. Árvore de taxonomia metabólica para o fragmento clonado B1-17 contendo domínio de adenilação amplificado de Streptomyces sp B1 Figura 9S. Árvore de taxonomia metabólica para o fragmento clonado -1 contendo domínio de adenilação amplificado de Streptomyces wadayamensis

5 Vol. XY, No. 00 Triagem metabólica por PKS e NRPS em actinobactérias endofíticas de Citrus reticulata S5 Figura 10S. Relação de distância entre as sequencias amplificadas a partir do DNA genômico de Streptomyces wadayamensis demonstra tendências na reação de PCR

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