Natural Resources, Aquidabã, v.2, Fev 2012.

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1 LESÕES MACROSCÓPICAS E HISTOPATOLÓGICAS DA INFECÇÃO POR HELMINTOS DA FAMÍLIA SPIRORCHIIDAE EM Eretmochelys imbricata Linnaeus 1758 (Testudines, Chelonidae): RELATO DE UM CASO NO LITORAL BRASILEIRO RESUMO Este relato descreve as lesões macroscópicas e histopatológicas de um exemplar de tartaruga marinha da espécie Eretmochelys imbricata, encontrada após encalhe de praia no litoral do Estado de São Paulo - Brasil. Os achados macroscópicos apresentavam a ocorrência de nódulos de coloração enegrecida na superfície serosa do intestino delgado (duodeno) com 1-2 mm de diâmetro que ao corte evidenciavam a presença de ovos de helmintos da Família Spirorchiidae. Histologicamente foram observadas lesão crônicas decorrentes da presença dos ovos em serosa do intestino delgado, pulmão, coração e fígado. A análise parasitológica revelou apenas a ocorrência de um exemplar da espécie Amphiorchis caborojoensis encontrada no coração. Embora, neste caso, não foi possível determinar se a parasitose foi a causa do óbito do hospedeiro, é muito provável que as lesões tenham contribuído com a piora do quadro clínico do animal e consequentemente o seu encalhe na praia. PALAVRAS-CHAVE: Brasil; Eretmochelys imbricata; Spirorchiidae; Tartarugas marinhas. GROSS AND HISTOPATHOLOGICAL LESIONS OF Spirorchiids (Spirorchiidae) in Eretmochelys imbricata Linnaeus 1758 (Testudines, Chelonidae): CASE REPORT ON THE BRAZILIAN COAST ABSTRACT This paper reports the gross and histopathological analysis of a specimen of the sea turtle Eretmochelys imbricata found stranded on the beach on the coast of the state of São Paulo, Brazil. The macroscopic findings revealed blackish nodules in the duodenal serous membrane measuring 1-2 mm in diameter. The cut revealed the presence of eggs from the family Spirorchiidae. The histological analysis revealed lesions stemming from the presence of eggs in the serous membrane of the intestine, lungs, heart and liver. Only one specimen of the species Amphiorchis caborojoensis was found in the heart. Although in this case it was not possible to determinate whether the parasite was the cause of the host death, it is likely that injures have contributed to a worsening of the animal clinical state and consequently its stranding on the beach. Natural Resources, Aquidabã, v.2, n.1, Set, Out, Nov, Dez 2011, Jan, Fev ISSN SEÇÃO: Notas Científicas TEMA: Recursos Naturais DOI: /ESS Gustavo Henrique Pereira Dutra Aquário Municipal de Santos, Brasil dutra@kingnet.com.br André Nicolai Elias da Silva Fundação Parque Zoológico de São Paulo, Brasil anesilva@sp.gov.br Cristiane Lassalvia Nascimento Aquário Municipal de Santos, Brasil cristianelassalvia@hotmail.com Max Rondon Werneck Módulo Centro Universitário, Brasil maxrwerneck@gmail.com Recebido: 19/01/2012 Aprovado: 29/02/2012 Avaliado anonimamente em processo de pares cegas. KEYWORDS: Brazil; Eretmochelys imbricata; Spirorchiidae; Sea turtles. Referenciar assim: DUTRA, G. H. P.; SILVA, A. N. E.; NASCIMENTO, C. L.; WERNECK, M. R.. Lesões macroscópicas e histopatológicas da infecção por helmintos da Família Spirorchiidae em Eretmochelys imbricata Linnaeus 1758 (Testudines, Chelonidae): relato de um caso no litoral brasileiro. Natural Resources, Aquidabã, v.2, n.1, p.83 89, Natural Resources (ISSN ) é uma publicação fruto de uma parceria entre a Escola Superior de Sustentabilidade (ESS) e a Fundação Mamíferos Aquáticos (FMA) Rua Dr. José Rollemberg Leite, 120, Bairro Bugio, CEP , Aquidabã, Sergipe, Brasil Site: Contato: contato@arvore.org.br Telefone (79)

2 DUTRA, G. H. P.; SILVA, A. N. E.; NASCIMENTO, C. L.; WERNECK, M. R. INTRODUÇÃO As tartarugas marinhas da espécie Eretmochelys imbricata Linnaeus 1758, possuem distribuição mundial e utilizam as águas costeiras tropicais e subtropicais, como área de alimentação e desova (SPOTILA, 2004). No Brasil são frequentemente observadas nos Estados da Bahia, Sergipe e Rio Grande do Norte, onde utilizam as praias como área de desova (MARCOVALDI et al., 2007), também podem ser observadas em áreas de alimentação na região do litoral norte do Estado de São Paulo e no Estado do Ceará (GALLO et al., 2006). Atualmente encontram-se inseridas na lista brasileira de espécies ameaçadas de extinção do Ministério do Meio Ambiente (BRASIL, 2003), sendo protegida por leis federais. A Família Spirorchiidae corresponde a um grupo de trematódeos habitantes do sistema circulatório de quelônios terrestres e aquáticos, são conhecidas aproximadamente 100 espécies, distribuídas em 19 gêneros, dos quais dez são exclusivos de tartarugas marinhas (PLATT, 2002), Lesões decorrentes do parasitismo por membros desta família em tartarugas marinhas são extremamente danosas, podendo inclusive causar o óbito dos hospedeiros em algumas situações. Estas associações já foram relatadas em exemplares de Chelonia mydas Linnaeus 1758 (GREINER et al., 1980, GLAZEBROOK et al., 1981, GLAZEBROOK et al.,, 1989, GORDON et al., 1998 e SANTORO et al., 2007, ), E. imbricata (GLAZEBROOK et al., 1989), Caretta caretta Linnaeus 1758 (WOLKE, et al., 1982, STACY et al., 2010; CHEN et al., 2012) e Lepidochelys olivacea Eschscholtz, 1829 (SANTORO e MORALES, 2007). Esta nota apresenta as lesões por ovos de parasitas da Família Spirorchiidae em um exemplar juvenil da espécie E. imbricata encontrada no Município de Praia Grande no Estado de São Paulo, Brasil. RELATO Em 30 de maio de 2009, uma tartaruga juvenil da espécie E. imbricata foi encontrada encalhada viva em praia do municio de Praia Grande (24º01 49 S 46º28 32 W) no Estado de São Paulo, e encaminhada ao Aquário Municipal de Santos para reabilitação e após 30 dias em tratamento veio a óbito. A biometria constatou que o animal apresentava 34 cm de comprimento curvilíneo de carapaça com 4,0 kg de peso corpóreo. Achados de necropsia Na necropsia observou-se que a tartaruga apresentava caquexia e intensa congestão de vasos mesentéricos. Presença de granulomas miliares lineares de coloração enegrecida em serosa duodenal com 1-2 mm de diâmetro. Natural Resources v.2 n.1 Set, Out, Nov, Dez 2011, Jan, Fev 2012 Página 84

3 Lesões macroscópicas e histopatológicas da infecção por helmintos da Família Spirorchiidae em Eretmochelys imbricata Linnaeus... Fecalomas contendo pequenos bivalves foram encontrados no trajeto entre o duodeno e o ceco. O fígado apresentava-se com bordos arredondados, aspecto marmorizado e pigmentação melânica sob a cápsula de Glisson. Ao corte, as trabeculações sinusoidais estavam evidentes. A análise parasitológica revelou a ocorrência de apenas um helminto, encontrado durante a inspeção do coração, este foi fixado em solução de AFA (álcool 70%, Ácido acético e formol), corado com carmim clorídrico, clarificado com creosoto, analisado em microscópio óptico e identificado como sendo da espécie Amphiorchis caborojoensis Fischthal & Acholonu O exemplar foi depositado na Coleção Helmintológica do Instituto de Biociências da Universidade Estadual Paulista, Botucatu-SP (CHIBB, N.º 6211). A coleta do parasita foi autorizada pelas licenças federais para atividades com finalidade científica (SISBIO nº e nº ). As amostras de tecido do trato gastrintestinal, pulmão, baço, coração e fígado, foram coletadas e fixadas em formalina a 10%, processadas histologicamente com cortes de 5 mµ e coradas por hematoxilina e eosina. Lesões histopatológica A análise histopatológica, revelou uma severa duodenite mononuclear com necrose de vilosidades associada à presença de ovos de trematódeos contendo miracídeos sob infiltração mononuclear (linfoplasmocitária) em submucosa, com discreta infiltração heterofílica. Ao redor da submucosa havia acentuada fibroplasia com fibras orientadas de forma desorganizada. O pulmão apresentava pneumonia intersticial parasitária podendo ser caracterizada três áreas: i) com infiltração heterofílica e ovos contendo miracídeos. ii) com infiltração mononuclear com grande número de ovos íntegros contendo miracídeos. iii) área com clara formação mononuclear epitelióide e de gigantócitos. Nas áreas de maior inflamação, observou-se a presença de hemossiderina no interior de macrófagos. O baço apresentava rarefação linfocitária de centros germinativos, intensa hemossiderose e moderada congestão, especialmente na região medular. O coração apresentava intensa miocardite mononuclear, com baixo número de ovos contendo miracídeo. O fígado apresentava moderada hepatite mononuclear mediozonal e periportal com baixo número de ovos de tremátodos associados à intensa hemossiderose e melanomacrófagos. Foram observados também cordões de hepatócitos apresentando células em degeneração microvacuolar e hidrópica e em região mediozonal, com hepatite crônica em início de formação de célula gigante, tipo corpo estranho contíguo a ovos degenerados. Todos os ovos observados nas lesões apresentavam coloração amarelo escuro com aspecto alongado, apresentando dois processos laterais, sendo classificados como do Tipo I, segundo proposto por Wolke et al. (1982). Natural Resources v.2 n.1 Set, Out, Nov, Dez 2011, Jan, Fev 2012 Página 85

4 DUTRA, G. H. P.; SILVA, A. N. E.; NASCIMENTO, C. L.; WERNECK, M. R. DISCUSSÕES E CONSIDERAÇÕES FINAIS A infecção de tartarugas marinhas por membros da Família Spirorchiidae tem ganho destaque nas últimas décadas, uma vez que muitos trabalhos tem identificado sua ocorrência em diferentes partes do mundo. O diagnóstico, na maioria das vezes, somente é alcançado por meio de necropsia, revelando alta prevalência nos animais analisados. Em alguns lugares a infecção parece ser muito comum, acometendo exemplares de C. mydas, C. caretta, E. imbricata (WOLKE et al., 1982; RAND e WILES, 1985; GORDON et al. 1998; CORDEIRO-TAPIA et al., 2004; INOHUYE-RIVERA et al., 2004; WORK et al., 2005; SANTORO et al. 2007; STACY et al. 2010; CHEN et al., 2012). Além disso, a análise de anticorpos evidenciou também alta prevalência desta parasitose em exemplares no Hawaii (GRACZYK et al., 1995). As lesões em sua maioria são determinadas pela presença de ovos que induzem uma resposta inflamatória, causando lesões granulomatosas nos tecidos dos hospedeiros acometidos, (WOLKE et al., 1982; GLAZEBROOK et al. 1989; GORDON et al. 1998; STACY et al. 2010; CHEN et al., 2012). O indivíduo analisado apresentava uma marcada diminuição da musculatura do pescoço, regiões axilares e inguinais, além de regiões do plastrão com aspecto aprofundado, caracterizado como quadro de emaciação e caquexia. Estes mesmos sinais embora inespecíficos já haviam sido constatado em outros relatos de animais acometidos por esta parasitose em exemplares de C. mydas (GLAZEBROOK et al., 1981, GLAZEBROOK et al., 1989, GORDON et al., 1998) E. imbricata (GLAZEBROOK et al., 1989,) e C. caretta (WOLKE et al., 1982; STACY et al., 2010). Em nossa amostra, podemos observar a presença de congestão de vasos mesentéricos, fato este possivelmente relacionado com as lesões na musculatura cardíaca (i.e. miocardide) induzindo congestão passiva crônica, achados também compartilhados por Wolke et al. (1982) e com Rand e Wiles (1985). A histopatologia do fígado revelou lesões similares aos trabalhos de Wolke et al. (1982) e Rand e Wiles (1985), em que a presença de melanomacrófagos associados à hepatite parasitária mononuclear foi observada, adicionado a presença de hemossiderose, indicando a tendência crônica das lesões. Todas as lesões histologicamente encontradas neste relato coincidem com as encontradas por outros autores (GLAZEBROOK et al., 1989; GORDON et al., 1998; CHEN et al., 2012), e refletem o caráter crônico das lesões. Os ovos encontrados nos granulomas coincidiram com os ovos do tipo I descritos por Wolke et al. (1982). Segundo estes autores três gêneros compartilham o mesmo formato de ovo (i.e. Learedius Price 1934, Monticellius Mehra, 1939 e Hapalotrema Looss 1899). No presente relato apenas ovos deste tipo foram encontrados nas lesões, estes supostamente são da espécie Natural Resources v.2 n.1 Set, Out, Nov, Dez 2011, Jan, Fev 2012 Página 86

5 Lesões macroscópicas e histopatológicas da infecção por helmintos da Família Spirorchiidae em Eretmochelys imbricata Linnaeus... A. caborojoensis, assim como relataram Werneck et al. (2008). A ocorrência de somente um tipo de ovo nos tecidos analisados reforça a possibilidade de infecção por somente este helminto. Segundo Smith (1997) apenas sete espécies, distribuídas entre os gêneros Amphiorchis, Hapalotrema e Learedius, são relatados em exemplares da espécie E. imbricata. Mais recentemente Werneck et al. (2008) ampliaram esta lista relatando o gênero Carettacola Manter e Larson, 1950 em um hospedeiro encontrado no litoral brasileiro. Em nossa amostra apenas um indivíduos da espécie A. caborojoensis foi encontrado no coração. A análise somente deste órgão pode ter influenciado o baixo número de helmintos encontrados neste relato, provavelmente a inspeção de outros órgãos poderia revelar um número maior de parasitas e/ou a ocorrência de outras espécies. Amphiorchis caborojoensis foi descrito apenas em tartarugas marinhas da espécie E. imbricata. Foi originalmente descrito por Fischtal e Acholonu (1976) com base em 11 exemplares encontrados em vasos sanguíneos pulmonares de um hospedeiro procedente de Porto Rico. Posteriormente Dyer et al. (1995) analisando dois animais do mesmo local encontraram apenas um exemplar deste parasito em vaso sanguíneo pulmonar, mais recentemente Werneck et al. (2008) analisando um hospedeiro, proveniente do Litoral do Estado de São Paulo, Brasil, relataram a ocorrência deste helminto em intestino delgado (n=2) e fígado (n=3). A presente nota representa a quarta ocorrência deste parasita no mundo e a segunda em animais procedentes da costa brasileira. Segundo Dyer et al. (1995) aproximadamente 50 espécies de trematódeos são relatado em E. imbricata. Contudo, poucos exemplares deste hospedeiro foram analisados na região brasileira, sendo apenas as espécies Cricocephalus albus (Kuhl e van Hasselt, 1822) Looss, 1899 (TRAVASSOS et al. 1969), A. caborojoensis e Carettacola stunkardi Martin e Bamberger 1952 (WERNECK et al, 2008) relatados até o presente momento nesta região. Embora pouco estudada na região brasileira, a determinação da causa mortis em tartarugas marinhas devem ser encarados como importante ponto de apoio para medidas de conservação destas espécies. Neste sentido, mais estudos devem ser conduzidos para diagnosticar as possíveis causas de encalhe e morte, incluindo as parasitoses, além de identificar o seu real impacto nas tartarugas marinhas encontradas na costa brasileira. REFERÊNCIAS BRASIL. Lista de espécies da fauna brasileira ameaçada de extinção. Brasília: MMA, CHEN, H. C. R-J.; CHANG, T.-C.;HUS, C.-K.; BRAYS, R. A.; CHENG, I.-J.. Flukes Spirorchiidaes) infections in sea turtles stranded on Taiwan: Prevalence and Pathology. Journal of Parasitology, v.98, n.2, p , CORDEIRO-TAPIA, A. A.; GARDENER, S. C.; ARELLANO-BLANCO, J.; INOHUYE-RIVERA, R. B.. Learedius learedi infection in black turtles (Chelonia mydas agassizii), Baja California Sur, Mexico. Journal of parasitology, v.90, n.3, p , Natural Resources v.2 n.1 Set, Out, Nov, Dez 2011, Jan, Fev 2012 Página 87

6 DUTRA, G. H. P.; SILVA, A. N. E.; NASCIMENTO, C. L.; WERNECK, M. R. DYER, W. G.; WILLIAMS, E. H. J.; BUNKLEY-WILLIAMS, L.; MOORE, D.. Some digeneans (Trematoda) of the hawksbill turtle, Eretmochelys imbricata imbricata (Testudines: Cheloniidae) from Puerto Rico. Journal of the Helminthological society of Washington, v.62, n.1, p.13-17, FISCHTHAL, J. H.; ACHOLONU, A. D.. Some digenetic trematodes from Atlantic Hawksbill turtle Eretmochelys imbricata imbricata (L.) from Puerto Rico. Journal of Helminthology Society of Washington. Washington, v.43, n.2, p , GALLO, B. M. G.; MACEDO, S.; GIFFONI, B. B.; BECKER, J. H.; BARATA, P. C. R.. Sea turtle conservation in Ubatuba, Southeastern Brazil, a feeding area with incidental capture in coastal fisheries. Chelonian conservation and biology, v.5, n.1, p , GLAZEBROOK, J. S.; CAMPBELL, R. S.; BLAIR, D.. Pathological changes associated with cardiovascular trematodes (Digenea:Spirorchiidae) in green sea turtle Chelonia mydas (L.). Journal of comparative Pathology, v.9, n.3, p , GLAZEBROOK, J. S.; CAMPBELL, R. S.; BLAIR, D.. Studies on cardiovascular flukes (Digenea: Spirorchiidae) infections in sea turtles from the Great Barrier Reef, Quensland, Australia. Journal of comparative Pathology, v.101, n.3, p , GORDON, A. N.; KELLY, W. R.; CRIBB, T.H.. Lesions Caused by Cardiovascular Flukes (Digenea: Spirorchidae) in Stranded Green Turtles (Chelonia mydas). Veterinary Pathology, v.35, n.1, p.21-30, GRACZYK, T. K.; AGUIRRE, A. A.; BALAZS, G. H.. Detection by ELISA of circulating anti-blood flukes (Carettacola, Hapalotrema, and Learedius) immunoglobulins in Hawaiian green turtles (Chelonia mydas). Journal of parasitology, v.81, n.3, p , GREINER, E. C.; FORRESTER, D. J.; JACOBSON, E. R.. Helminths of mariculture-reared Green turtles (Chelonia mydas) from Gram Cayman, British West Indies. Helminthological Society of Washington, v.47, n.1, p , INOHUYE-RIVERA, R. B.; CORDEIRO-TAPIA, A.; ARELLANO-BLANCO, J.; GARDNER, S. C.. Learedius learedi Price, 1934 (Trematoda: Spirorchiidae), in black turtle (Chelonia mydas agassizii) Hearts from Magdalena Bay, Baja California Sur, Mexico. Comparative Parasitology, v.71, n.1, p.37-41, MARCOVALDI, M. A.; LOPEZ, G. G.; SOARES, L. S.; SANTOS, A. J. B.; BELLINI, C.; BARATA, P. C. R.. Fifteen years of hawksbill sea turtle (Eretmochelys imbricata) nesting in Northern Brazil. Chelonian conservation, v.6, n.1, p , PLATT, T. R.. Family Spirorchiidae Stunkard. In: GIBSON D. I.; JONES, A.;BRAY R. A.. Keys to the Trematoda. London: CABI Publishing, London, p RAND, T.G.; WILES, M.. Histopathology of Infections by Learedius learedi Price, 1934 and Neospirorchis schistosomatoides Price, 1934 (Digenea: Spirorchiidae) in Wild Green Turtles, Chelonia mydas L., from Bermuda. Journal of Wildlife Diseases, v.21, n.4, p , SANTORO, M.; MORALES, J. A.. Some digenetic trematodes of the olive ridley sea turtle, Lepidochelys olivacea (Testudines, Chelonidae) in Costa Rica. Helminthologia, v.44, n.1, p.25-28, SANTORO, M.; MORALES, J. A.; RODRIGUES-ORTIZ, B.. Spirorchiidiosis (Digenea: Spirorchiidae) and Lesions asociated with parasites in caribbean Green turtles (Chelonia mydas). The Veterinary record, v.161, n.14, p , SMITH, J. W.. The blood flukes of cold-blood vertebrates. Helminthological Abstracts, v.66, p , SPOTILA, J. R..Hawksbill. The sponge eaters. In: SPOTILA, JR. Sea turtles - A complete guide to their biology, behavior and conservation. Baltimore: The Johns Hopkins University Press, p STACY, B. A.; FOLEY, A. M.; GREINER, E.; HERBST, L. H.; BOLTEN, A.; KLEIN, P.; MANIRE, C. A.; JACOBSON, E. R.. Spirorchiidiasis in stranded loggerhead Caretta caretta and green turtles Chelonia Natural Resources v.2 n.1 Set, Out, Nov, Dez 2011, Jan, Fev 2012 Página 88

7 Lesões macroscópicas e histopatológicas da infecção por helmintos da Família Spirorchiidae em Eretmochelys imbricata Linnaeus... mydas in Florida (USA): host pathology and significance. Disease of Aquatic Organisms, v.89, n.12, p , TRAVASSOS, L.; FREITAS, L.; KOHN, A.. Trematódeos do Brasil. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, v.67, n.1, p.1-886, WERNECK, M. R.; GALLO, B.; SILVA, R. J.. Spirorchiids (Digenea: Spirorchiidae) infecting a Hawksbill sea turtle Eretmochelys imbricata (Linnaeus 1758) from Brazil. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v.60, n.3, p , WOLKE, R. E,; BROOKS, R.; GEORGE, A.. Spirorchidiasis in loggerhead sea turtles (Caretta caretta): pathology. Journal of Wildlife Diseases, v.18, n.2, p WORK, T. M.; BALAZS, G. H.; SCHUMACHER, J. L.; MARIE, A.. Epizootiology of spirorchiid infection in green turtles (Chelonia mydas) in Hawaii. Journal of Parasitology, v.91, n.4, p , Natural Resources v.2 n.1 Set, Out, Nov, Dez 2011, Jan, Fev 2012 Página 89