Transcrição e Processamento

Transcrição

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2 transcrição do DNA maturação do RNA AAAA AAAA AAAA tradução em proteína NÚCLEO CITOPLASMA Transcrição e Processamento

3 RNAs adotam estruturas terciárias complexas

4 RNA carregado RNA transportador aminoácido Braço o D Braço aceptor Braço TΨC Braço o do anticódon anticódon códon

5 RNA transportador Braço aceptor Braço o D (Dehidrouridina) Braço TΨC Alça a variável vel (Pseudouridina) Braço o do anticódon TTT códon

6 Tipos de RNA nuclear heterogêneo/ mensageiro transportador (carrega aminoácidos p/a síntese de proteínas) ribossomal (estrutura para a tradução) SNuRPs (auxiliadores de transcrição e no splicing ) pequenos RNA (controle de expressão)

7 rrna

8 rrna + proteínas = ribossomos

9 RNA de interferência ncia

10 O RNA mensageiro transmite a informação genética armazenada no DNA Replicação DNA Transcrição RNA Tradução Proteína

11 RNA ribose fita simples AUGC Veja, sem oxigênio desoxiribose Grupo fosfato Açúcar (ribose) RIBONUCLEOTÍDEO

12 Pareamento DNA: RNA ACGT UGCA

13 mrna Template= = fita molde Matriz= fita codificadora

14 5 ATGGCATGCAATAGCTCATCG TACCGTACGTTATCGAGTAGC AUGGCAUGCAAUAGCUC transcrito 5 Direçã ção o de síntese s da RNA polimerase

15 COMPONENTES NECESSÁRIOS PARA OCORRER A TRANSCRIÇÃO RNA polimerase promotor PROTEÍNAS ESPECÍFICAS (FATORES DE TRANSCRIÇÃO) SE LIGAM À REGIÕES ESPECÍFICAS DO DNA REGULANDO A TRANSCRIÇÃO DE MODO QUE SOMENTE PROTEÍNAS NECESSÁRIAS VENHAM A SER PRODUZIDAS.

16 Início de transcriçã ção o em procariotos σ

17 Promotores mais comuns em eucariotos TATA box (posiçã ção 25) sinal para iniciar a síntese s de RNAm TATAAAA TATAAAT CAAT box (posiçã ção 40 ->110) promotor auxiliar GGNCAATCT GC box (posiçã ção 40 ->110) promotor auxiliar genes sempre expressos (constitutivos) GGGCGG

18 fatores de transcriçã ção o + RNA polimerase ^^^^^^^CAAT^^^^^^^GC^^^^^^^^^^^^TATA^^^^^^^^^^ sítio de iniciaçã ção

19 VAMOS AMPLIAR A REGIÃO QUE NOS INTERESSA!!! RNA polimerase promotor

20 PRIMEIRO TEMOS QUE ABRIR A BOLHA DE TRANSCRIÇÃO NO DNA DUPLA FITA

21 Bolha de transcrição ADIANTE E ATRÁS DA BOLHA OCORRE A ATIVIDADE DA TOPOISOMERASE

22 RIBONUCLEOTÍDEOS SÃO ADICIONADOS A PARTIR DE UM SÍTIO ESPECÍFICO (iniciação) ribonucleotídeo sítio ativo da enzima

23 Bolha de transcrição tem 10 a 12 nucleotídeos da cada vez TRANSLOCAÇÃO da RNAP

24 LIGAÇÕES FOSFODIÉSTER IGUAIS ÀS DO DNA SÃO FEITAS PARA UNIR OS RIBONUCLEOTÍDEOS NO RNA Ligação fosfodiéster

25 Após s a translocaçã ção de 6 a 10 nucleotídeos háh a liberaçã ção o de σ

26 RNA polimerase em procariotos (apenas 1) Holoenzima α2ββ σ α - estrutural β e β - unidade catalítica σ reconhece promotores identificam o início da transcrição RNA polimerase II em eucariotos β e β = RBP1 e 2 em eucariotos RPB1 tem um domínio C terminal(ctd) = PTSPSYS, que repetido muitas vezes exerce controle de transcriçã ção o por fosforilaçã ção

27 3 tipos de RNA polimerase em células de eucariotos I se encontra no nucléolo, síntese s de subunidades dos ribossomos II se encontra no núcleo, n síntese s de RNAhn / pré- RNAm, SNRPs III se encontra no núcleo, n síntese s de RNAt e RNAr 5S

28 CAP Em eucariotos logo após s o início da síntese de hnrna ocorre colocaçã ção o de CAP na ponta 5 5 pela guanilil-transferase estabilidade metilaçã ção pos.7.7-cap0 metilaçã ção cap1 metilaçã ção cap2

29 Etapas de preparo de um RNA mensageiro OK 1. síntese do hnrna OK 2. estabilização pela adição de guanina em posição inversa na ponta 5 (Cap) OK 3. metilação de cap 4. poliadenilação (sinal é AAUAA) = tempo de vida do RNA 5. splicing 6. passagem para o citoplasma

30 Término da transcriçã ção o em procariotos dependente da proteína ρ (rho), uma helicase dependente de sequências de terminação no próprio DNA alça ou grampo Vários U

31 Término da transcriçã ção o em eucariotos sinal de clivagem adiçã ção o em torno de 100 a 200 A pela polia polimerase

32 Etapas de preparo de um RNA mensageiro OK 1. síntese do hnrna OK 2. estabilização pela adição de guanina em posição inversa na ponta 5 (Cap) OK 3. metilação de cap OK 4. poliadenilação (sinal é AAUAA) = tempo de vida do RNA 5. splicing 6. passagem para o citoplasma

33 GENES DE EUCARIOTOS SÃO MAIS COMPLEXOS QUE OS DE PROCARIOTOS exon intron DNA Pré-mRNA AAAAA mrna maduro AAAAA O RNA MENSAGEIRO MADURO É MENOR QUE O DNA QUE DEU ORIGEM A ELE

34 O SPLICING OCORRE DENTRO DO NÚCLEO DNA Pré-mRNA AAAAA sequência consenso GU Pyr... A AG

35 Sítio de ramificaçã ção Cap AAAAA GU Pyr... A AG sequência consenso - splicing Regra GU-AG O " splicing" " ocorre com auxílio dos snurps (U1 - U6)

36 O " splicing" " ocorre com auxílio dos snurps (U1 - U6)

37 Formaçã ção o do "lariat" lariat" " (laço)

38 Pré-RNAm sítio de processamento 5 sítio de processamento 3 Formação do spliceossomo Forma de Lariat (exon 5 é clivado) spliceossomo o exon 3 é clivado e se liga ao exon 5 spliceossomo Tradução o intron será degradado

39 SPLICING ALTERNATIVO produz isoformas do mesmo gene

40 SPLICING ALTERNATIVO exemplo alfa-tropomiosina músculo estriado músculo estriado* mioblasto músculo liso fibroblasto hepatoma cérebro após o splicing => RNA diferentes =>proteínas diferentes

41 sítio 3' normal do intron A troca de uma única base modifica o sítio de splicing e causa a doença chamada Talassemia

42 Etapas de preparo de um RNA mensageiro OK 1. síntese do hnrna OK 2. estabilização pela adição de guanina em posição inversa na ponta 5 (Cap) OK 3. metilação de cap OK 4. poliadenilação (sinal é AAUAA) = tempo de vida do RNA OK 5. splicing 6. passagem para o citoplasma

43 O RNA mensageiro pronto passa pelos poros nucleares e alcança o citoplasma O RNA mensageiro é acoplado ao ribossomo com auxílio de diversas proteínas...

44 próxima aula OK OK OK OK