Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Clone 22C3. Referência M3653. Finalidade

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1 Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Clone 22C3 Referência M3653 Finalidade Sinónimos de antigénio Resumo e explicação Para utilização em diagnóstico in vitro. O Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, destina-se à utilização em imuno-histoquímica. Este anticorpo marca a PD-L1 em tecido normal e neoplásico. A interpretação clínica de qualquer coloração ou da sua ausência deve ser complementada com estudos morfológicos utilizando controlos adequados e deve ser avaliada dentro do contexto do historial clínico do doente e através de outros testes de diagnóstico por um patologista certificado. Este anticorpo destina-se a ser utilizado após ter sido realizado o diagnóstico primário de tumor pela análise histopatológica convencional, utilizando colorações histoquímicas não-imunológicas. Ligando de morte programado 1 (1). A ligação dos ligandos da PD-1, da PD-L1 e da PD-L2 ao recetor da PD-1 encontrado nas células T inibe a proliferação de células T e a produção de citoquina (2). A regulação superior dos ligandos da PD-1 ocorre em alguns tumores e a sinalização através desta via pode contribuir para a inibição da vigilância a células T imunes ativas em tumores. O bloqueio da interação da PD-1 com a PD-L1 e a PD-L2 promove a inibição mediada pela via da PD-1 da resposta imune, incluindo a resposta imune antitumoral (4). Consulte as General Instructions for Immunohistochemical Staining (Instruções gerais para coloração imuno-histoquímica) da Dako ou as instruções do sistema de deteção para instruções quanto aos procedimentos de IHC. Reagente fornecido Imunogénio Especificidade Precauções Anticorpo monoclonal de ratinho fornecido na forma líquida em 0,05 mol/l de Tris-HCl, 0,015 mol/l de azida de sódio, 1% de albumina de soro bovino, ph 7,2. Clone: 22C3 (5). Isotipo: IgG1. Concentração de IgG de ratinho em mg/l: Consultar a etiqueta no frasco. A concentração de proteína pode variar entre lotes sem influenciar a diluição ideal. O título de cada lote individual é comparado e ajustado face a um lote de referência visando garantir um desempenho da coloração imuno-histoquímica consistente entre lotes. Domínio extracelular humano da PD-L1 (Phe19-Thr239) fundido num fragmento de IgG1 humana (Catálogo de sistemas de I&D n.º 156-B7-100) (5). Em análises Western blotting de proteína PD-L1 humana recombinante, o Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3 marca uma banda correspondente a ~40 kda (5). 1. Para utilizadores profissionais. 2. Este produto contém azida de sódio (NaN 3), uma substância química altamente tóxica na forma pura. Em situações de concentração do produto, embora não sendo classificada como perigosa, a azida de sódio pode reagir com as canalizações de chumbo e de cobre, formando acumulações de azidas metálicas altamente explosivas. Ao eliminar o produto, adicionar água abundante para evitar a acumulação de azida metálica na canalização. 3. Tal como com qualquer produto de origem biológica, deverão utilizar-se procedimentos de manuseamento adequados. 4. Usar equipamento de proteção pessoal adequado para evitar o contacto com a pele e os olhos. 5. A solução não utilizada deverá ser eliminada em conformidade com as regulamentações locais, nacionais e comunitárias. Conservação Preparação das amostras Conservar entre 2-8 C. Não utilizar após o fim do prazo de validade impresso no frasco. Se os reagentes forem conservados em condições diferentes das especificadas, o utilizador deverá verificar essas mesmas condições. Não existem sinais óbvios que indiquem a instabilidade deste produto. Por isso, devem processar-se controlos positivos e negativos simultaneamente com as amostras do doente. Caso se observe uma coloração inesperada que não possa ser explicada pela variação nos procedimentos laboratoriais e se suspeite da existência de um problema com o anticorpo, contactar a Assistência técnica Dako. Cortes de parafina: O anticorpo pode ser utilizado para marcar secções de tecido impregnadas em parafina, fixadas em formol. As amostras de tecido devem ser cortadas em secções de aproximadamente 4 µm. Pré-tratamento: Consultar a EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (referência K8005) para obter instruções sobre como realizar o pré-tratamento de lâminas. ( ) P04435PT_01/M3653/ p. 1/5

2 Procedimento de coloração Estas indicações servem apenas de orientação. As condições ideais poderão variar dependendo do tipo de amostras e do método de preparação, devendo ser validadas individualmente por cada laboratório. O desempenho deste anticorpo deve ser estabelecido pelo utilizador durante a utilização com outros sistemas de coloração manuais ou plataformas automatizadas. Diluição: A diluição recomendada de Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, referência M3653, é de 1:50. Diluir o anticorpo em Dako Antibody Diluent with Background-Reducing Components (referência S3022). Incubar as secções de tecido pré-tratadas durante 30 minutos à temperatura ambiente. Controlo negativo: O reagente de controlo negativo recomendado é o Dako Negative Control, Mouse IgG1 (referência X0931), diluído na mesma concentração de IgG1 que o anticorpo primário. A não ser que a estabilidade do anticorpo diluído e do controlo negativo tenha sido estabelecida no procedimento de coloração efetivo, diluir estes reagentes imediatamente antes da utilização. Os controlos positivos e negativos devem processar-se simultaneamente com as amostras do doente. Visualização: O sistema de visualização recomendado é o EnVision FLEX HRP com uma incubação de 30 minutos à temperatura ambiente. O período de incubação do EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) (referências K8021/K8022) é de 30 minutos à temperatura ambiente. Seguir o procedimento fornecido no(s) sistema(s) de visualização selecionado(s). Nota: Utilizar a EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (referência K8005) para HIER. O período de incubação do DAB Enhancer (S ) é de 5 minutos à temperatura ambiente. Contrastação: O contraste recomendado é o EnVision FLEX Hematoxylin (referências K8008/K8018). Para obter resultados ótimos, é recomendado um meio de montagem não aquoso e permanente. Controlos: Os controlos tecidulares positivos e negativos devem processar-se simultaneamente com o mesmo protocolo das amostras do doente. O tecido de controlo positivo deve incluir as amígdalas e as células/estruturas devem apresentar padrões de reação conforme os descritos para este tecido na secção "Características de desempenho". Interpretação da coloração Características de desempenho O padrão de coloração celular é membranoso. Tecidos normais: Foi observada a presença de coloração da membrana de plasma em células imunes e em células de origem epitelial. Foi notada coloração citoplasmática em alguns tipos de células, não tendo sido registada como coloração positiva. A tabela 1 resume a imunorreatividade da PD-L1 no painel recomendado de tecidos normais. Todos os tecidos foram fixados em formol e impregnados em parafina e corados com Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 de acordo com as instruções deste folheto informativo. Não foram observados resultados inesperados nos tipos de células ou tipos de tecidos testados. A coloração observada era consistente com a literatura reportada para a expressão da PD-L1 por IHC em tecidos normais (1, 2). Tabela 1: Resumo da reatividade de Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 em tecido normal Tipo de tecido Elementos de tecido Tipo de tecido Elementos de tecido (n.º testados) positivos (n.º testados) positivos Amígdalas 3/3 Epitélio da cripta Mama Baço Células mesoteliais (2) 2/3 macrófagos Medula óssea 3/3 Megacariócitos 2/3 Macrófagos 0/2 Cerebelo Músculo, cardíaco Músculo, esquelético Nervos, periféricos Cérebro Ovário Colo do útero 1/3 células epiteliais Pâncreas Cólon 1/3 Linfócitos Paratiroide 1/3 Epitélio glandular 1/3 Macrófagos Pele Esófago Próstata (2) 2/2 epitélio Estômago 2/3 Linfócitos Pulmão 3/3 Macrófagos 1/3 glândulas gástricas Rim 1/3 Epitélio tubular Fígado 1/3 Macrófagos Suprarrenal Glândula salivar 1/3 Hepatócitos Testículos Timo 3/3 Medula ( ) P04435PT_01/M3653/ p. 2/5

3 Hipófise 1/3 Hipófise anterior Tiroide Intestino delgado 1/3 Hipófise posterior Útero Tecidos anormais: Foi observada a presença de coloração da membrana de plasma em células imunes e em células de origem epitelial. Foi notada coloração citoplasmática em alguns tipos de células, não tendo sido registada como coloração positiva. A tabela 2 resume a imunorreatividade da PD-L1 num painel de tecidos neoplásicos. Todos os tecidos foram fixados em formol e impregnados em parafina e corados com Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 de acordo com as instruções deste folheto informativo. Não foram observados resultados inesperados nas amostras tumorais testadas. A coloração observada era consistente com a literatura reportada para a expressão da PD-L1 por IHC em tecidos neoplásicos (1-4). Tabela 2: Resumo da reatividade de Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 em tecido neoplásico Tipo de tumor Adenocarcinoma Localização Apêndice Cabeça e pescoço, palato duro Colo do útero, tipo endocervical Cólon 0/5 Cólon, metastático para o fígado Cólon, mucinoso Esófago Estômago 0/6 Estômago, mucinoso Glândula salivar/parótida 0/2 Intestino delgado 0/2 Mama, DCIS 0/2 Mama, ductal invasivo 0/7 Mama, metastático ductal invasivo para nódulo linfático Positivo a PD-L1/total N=159 Ovário Ovário, endometrioide Ovário, mucinoso Ovário, seroso Pâncreas 0/2 Pâncreas, ductal Próstata 0/5 Pulmão 1/4 Reto 0/4 Tiroide, folicular Tiroide, folicular-papilar Tiroide, papilar Útero, célula clara Útero, endométrio Vesícula biliar 1/5 Vesícula biliar, metastático para o pulmão Astrocitoma Cérebro Carcinoma Nasofaríngeo, NPC Carcinoma adrenocortical Suprarrenal Carcinoma das células em anel de sinete Carcinoma das células em anel de sinete metastático para o ovário Cólon ( ) P04435PT_01/M3653/ p. 3/5

4 Carcinoma das células escamosas Carcinoma das células renais Cabeça e pescoço 0/2 Carcinoma das células escamosas esofágicas metastático para o nódulo linfático Colo do útero 2/5 Esófago 0/7 Pele 0/2 Pulmão 1/2 Útero Célula clara Rim 0/6 Papilar Rim Carcinoma de célula basal Pele Carcinoma de célula pequena Pulmão Carcinoma de células de transição Bexiga 0/6 Rim Carcinoma embrionário Testículos Carcinoma hepatocelular Fígado 0/5 Carcinoma medular Tiroide Condrossarcoma Osso Cordoma Cavidade pélvica Ependimoma Encéfalo Espermatocitoma Testículos 0/2 Feocromocitoma Suprarrenal Glioblastoma Encéfalo Hepatoblastoma Fígado Intersticialoma Leiomiossarcoma Linfoma Cólon Intestino delgado Reto Bexiga Tecido mole, parede torácica Célula B difusa Nódulo linfático 0/4 Célula grande anaplásica Nódulo linfático Hodgkin Nódulo linfático 2/2 Não-Hodgkin Nódulo linfático 1/1 Meduloblastoma Encéfalo Melanoma Cavidade nasal Reto Meningioma Encéfalo 0/2 Mesotelioma Peritoneu Neuroblastoma Retroperitoneu Neurofibroma Tecido mole, região lombar Osteossarcoma Osso 0/2 Rabdomiossarcoma Próstata Retroperitoneu Tecido mole, embrionário Sarcoma sinovial Cavidade pélvica Seminoma Testículos 0/2 Timoma Mediastino 1/1 Tumor neuroectodérmico primitivo (PNET) Retroperitoneu Tumores das células das ilhotas Pâncreas ( ) P04435PT_01/M3653/ p. 4/5

5 Referências 1. Okazaki T, Honjo T. PD-1 and PD-1 ligands: from discovery to clinical application. International Immunol 2007(19); 7: Brown JA, Dorfman DM, Ma F-R, Sullivan EL, Munoz O, Wood CR, et al. Blockade of Programmed Death-1 Ligands on Dendritic Cells Enhances T Cell Activation and Cytokine Production. J Immunol 2003;170: Cooper WA, Tran T, Vilain RE, Madore J, Seliger CI, Kohonen-Cornish M, et al. PD-L1 expression is a favorable prognostic factor in early stage non-small cell carcinoma. Lung Cancer 2015; 89: Chen B, Chapuy B, Ouyang J et al. PD-L1 Expression Is Characteristic of a Subset of Aggressive B-cell Lymphomas and Virus-Associated Malignancies. Clin Cancer Res 2013; 19: Ellison AR. Technical Report: Characterization of monoclonal mouse anti-pd-l1 antibody clone 22C3. D29539/rev01/C22282, Edição 03/16 ( ) P04435PT_01/M3653/ p. 5/5