Bactérias. Características gerais. Docente: José Belasque Jr. Departamento de Fitopatologia e Nematologia (ESALQ/USP)

Transcrição

1 Bactérias Características gerais Docente: José Belasque Jr. Departamento de Fitopatologia e Nematologia (ESALQ/USP) 2016

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5 Morfologias celulares de procariotos Morfologia

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8 Estruturas externas a parede celular Glicocálice Flagelos Fímbrias Pili

9 Estruturas externas a parede celular Glicocálice conjunto substâncias envolvem célula também chamado de cápsula ou camada viscosa associadas a virulência, fagocitose, biofilmes polissacarídeos ou polipeptídeos

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11 Estruturas externas a parede celular Flagelos apêndices filamentosos compostos por três partes taxia Gram-negativas vs. Gram-positivas células atríqueas, peritríqueas e polares (monotríquea, lofotríquea e anfitríquea)

12 Estruturas externas a parede celular

13 Estruturas externas a parede celular

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17 Estruturas externas a parede celular

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19 Taxias (movimentação celular) resposta a fatores ambientais atraentes e repelentes quimiotaxia fototaxia aerotaxia (O 2 ) osmotaxia

20 Estruturas externas a parede celular Fímbrias e pili Gram-negativas fímbrias: envolvimento em adesão, virulência e biofilmes pili (singular: pilus): mais longos e em menor número (transferência de DNA ou motilidade)

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24 estrutura complexa Parede celular semi-rígida confere formato a célula externa a membrana plasmática previne rupturas ponto ancoragem flagelos papel virulência alvo alguns antibióticos

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27 Parede celular

28 Periplasma enzimas de degradação e de transporte Membrana externa carregada negativamente barreira química porinas lipídeo A (endotoxina) polissacarídeo O (antígeno) Copyright 2010 Pearson Education, Inc.

29 Parede celular

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31 Paredes celulares atípicas Micoplasmas Não possuem parede celular Membrana plasmática com esteróis Archaea Sem parede celular ou Paredes com pseudomureína Danos a parede celular A enzima Lisozima digere dissacarídeos no peptideoglicano Penicilina inibe formação pontes no peptideoglicano Gram-positivas são sensíveis a penicilina Copyright 2010 Pearson Education, Inc.

32 Estruturas internas a parede celular Membrana plasmática Citoplasma Nucleoide Ribossomos Inclusões Endosporos

33 Estruturas internas a parede celular Membrana plasmática localização constituída principalmente fosfolipídeos e proteínas dupla camada (mosaico fluido) funções: barreira seletiva, digestão nutrientes e produção de energia sítio de ação de vírus, toxinas, desinfestantes e antibióticos

34 Membrana plasmática

35 Membrana plasmática

36 Microbiologia de Brock - Michael T. Madigan, John M. Martinko, Paul V. Dunlap e David P. Clark

37 Estruturas internas a parede celular Citoplasma água proteínas, carboidratos, lipídeos, íons inorgânicos e moléculas baixo peso molecular ribossomos, DNA e depósitos de reserva

38 Estruturas internas a parede celular Nucleoide geralmente: molécula única de DNA circular (cromossomo bacteriano) DNA fixado a membrana plasmática plasmídeos (material genético extracromossômico)

39 Estruturas internas a parede celular Ribossomos síntese protéica procariotos vs. eucariotos rrna

40 Estruturas internas a parede celular Inclusões são depósitos de reserva grânulos metacromáticos (fosfatos) grânulos polissacarídicos (glicogênio e amido) inclusões lipídicas grânulos de enxofre carboxissomos (Rubisco) vacúolos de gás magnetossomos

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43 Estruturas internas a parede celular Endosporos Gram-positivas células modificadas resistência química, temperatura, radiação e dessecação esporulação e germinação

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46 Microbiologia de Brock - Michael T. Madigan, John M. Martinko, Paul V. Dunlap e David P. Clark

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48 Usadas para distinção de bactérias Coloração de Gram Coloração álcool-ácido resistente Colorações diferencias Coloração de Gram: Classifica as bactérias em Grampositivas ou Gram-negativas Gram-positivas tendem a ser mortas por penicilina e detergentes Gram-negativas são mais resistentes a antibióticos Atenção: há bactérias Gram-variáveis Copyright 2010 Pearson Education, Inc.

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50 Classificação de bactérias Análise do ácido nucléico: sequência do DNA do rrna (conservado entre espécies) Análise de propriedades bioquímicas e metabólicas Características morfológicas (forma, flagelos, parede celular...)

51 Classificação de bactérias Testes bioquímicos e fisiológicos Gram Motilidade Produção de ácidos a partir de carboidratos Oxidação/fermentação de glicose Asparagina como única fonte de carbono e nitrogênio Produção de pigmento verde-fluorescente Teste de oxidase Produção de 3-cetolactose Produção de inclusões de poli-β-hidroxibutirato

52 Direta ou positiva - A bactéria fica colorida Simples Gram (ou diferencial) Corantes: Safranina ou Fucsina Indireta ou negativa - A lâmina fica colorida Corantes: Nankin ou Nigrosina Coloração de Bactérias

53 Coloração direta 1. Esfregaço 2. Fixação 3. Coloração (1 min) 4. Lavagem 5. Secagem 6. Observação

54 Coloração indireta 1. Esfregaço 2. Fixação

55 3. Coloração Coloração indireta

56 Coloração indireta 4. Secagem 5.Observação Secar no calor ou no ar Bacillus subtilis

57 Coloração de Gram sequência de corantes Após fixação do esfregaço: 1. Cristal violeta (1 min) 2. Lavar com água 3. Solução lugol (1 min) 4. Lavar com álcool absoluto por 30 seg 5. Lavar com água 6. Safranina (30 seg) 7. Lavar com água 8. Secar 9. Observar (até aumento 1000x c/ óleo imersão) Professor Hans Christian Gram Bacteriologista Dinamarquês Desenvolveu o método de coloração em Berlin, 1884

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60 O resultado da coloração de Gram depende do tipo de parede celular

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62 A parede celular e a inserção do flagelo

63 Motilidade de bactérias técnica da gota pendente focalizar a margem da gota para observar bactérias em movimento use aumentos 100x e 400x

64 Focalização ao microscópio de luz 1. Iniciar sempre com a objetiva de menor aumento 2. Objeto no centro da mesa e sob incidência da luz 3. Ajustar a iluminação (maior quantidade de luz através do objeto) 4. Elevar a mesa até a altura máxima utilizando o macrométrico 4. Iniciar o processo de focalização, abaixando vagarosamente a mesa com o macrométrico 5. Fazer a focalização fina com micrométrico 6. Mudar para objetivas de maiores aumentos gradativamente 7. Na mudança da objetiva de 40x para 100x utilizar apenas o micrométrico para focalização final (objetiva de 100x somente para bactérias, sempre com óleo de imersão) 8. Acertar a quantidade de luz para melhor observação e conforto visual 9. Condensador deve permanecer sempre em posição elevada (ou aberta)