Sistema LC/MS Agilent 6490 Triplo Quadrupolo com tecnologia ifunnel. Desempenho quantitativo ultra sensível PTBR-hi 1 27/01/11 15.

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1 Sistema LC/MS Agilent 6490 Triplo Quadrupolo com tecnologia ifunnel Desempenho quantitativo ultra sensível PTBR-hi 1 27/01/

2 Desempenho quantitativo sem comparações para as análises mais exigentes Sistema LC/MS Agilent 6490 Triplo Quadrupolo incorpora a tecnologia ifunnel, dando novos níveis de sensibilidade às analises quantitativas mais exigentes em aplicações farmacêuticas, clínicas, ambientais e de segurança alimentar. O poder quantitativo do 6490 é aprimorado por uma variação dinâmica linear estendida. O 6490 Triplo Quadrupolo permite: Aumento de 10 X na sensibilidade Até seis ordens variação dinâmica linear O novo sistema LC/MS 6490 triplo quadrupolo com tecnologia ifunnel desempenho quantitativo sem comparação Alto desempenho e sólida operação Sensibilidade de zeptomol para as aplicações mais exigentes O 6490 triplo quadrupolo tem um design compacto de bancada, alcançado através do uso de cela de colisão curva. A cela recentemente projetada também ajuda na identificação de ruído de fundo, melhorando o valor geral sinal-ruído do sistema. A eletrônica de alta frequência permite taxas de varredura mais velozes para janelas mais estreitas de isolamento de massas. O sistema ifunnel Figura 1. Componentes da tecnologia ifunnel da Agilent: Agilent Jet Stream, capilar de amostragem de seis furos e funil de íons de estágio duplo PTBR-hi 2 27/01/

3 Tecnologia avançada ifunnel O LC/MS 6490 Triplo Quadrupolo alcança sua sensibilidade usando a tecnologia ifunnel, uma combinação de três inovações fundamentais: Tecnologia Jet Stream da Agilent: um pulverizador micro usinado rodeia as gotículas do ESI com um recobrimento de gás super aquecido, para dessolvatar e concentrar íons perto da entrada MS, e assim obter amostras mais eficazes Capilar de amostragem de seis furos: 6 furos independentes, e paralelos, permitem que uma fração muito maior de íons formados na pena da pulverização de ESI ingresse na óptica de íons do espectrômetro de massa A tecnologia ifunnel com vaso capilar de seis furos recolhe seis vezes mais gás carregado de íons que um vaso capilar de furo individual, e o tempo de residência mais curto dos íons no vaso capilar de seis furos permite ganhos ainda maiores na intensidade do sinal. Ao comparar o 6490 Triplo Quadrupolo com o 6460 Triplo Quadrupolo (Figura 2), o 6490 Triplo Quadrupolo com tecnologia ifunnel demonstra um ganho de sete vezes na intensidade do sinal para massas de até 900 m/z e um ganho de até cinco vezes para massas maiores. Os aumentos na intensidade do sinal são ainda mais pronunciados para íons negativos como se mostra na Figura 3. O ganho médio na intensidade do sinal foi de 10 vezes ao longo de toda a variação de massas do 6490 Triplo Quadrupolo. Exclusivo funil de íons de estágio duplo: remoção eficiente de grandes volumes de gás e transferência de íons à óptica Q1. Um diagrama desta tecnologia se mostra na Figura x 7x x 7x 5x 5x 14x 10x 7x 10x m/z Figura 2. Intensidades de sinal para padrões de calibragem em modo ESI positivo do 6490 (acima, verde) e 6460 (abaixo, preto) m/z Figura 3. Intensidades de íons para íons de calibragem negativo do 6490 (acima, verde) e o 6460 (preto, abaixo) PTBR-hi 3 27/01/

4 Sensibilidade de zeptomol e variação dinâmica linear sem comparações O 6490 Triplo Quadrupolo com tecnologia ifunnel apresenta uma sensibilidade pioneira. O primeiro exemplo de sensibilidade de subatomol se mostra na Figura 4 para uma injeção de 200 zepto-4,5 mols de verapamil em coluna. O 6490 Triplo Quadrupolo apresenta novos níveis de sensibilidade e também uma variação dinâmica linear sem comparações. É o primeiro sistema LC/MS triplo quadrupolo a oferecer seis ordens de variação dinâmica linear como se mostra na Figura 5. O excelente fator de correlação (valor R2 = 0,997) descreve a ampla variação de resposta linear. Resposta Response x10 1 4, , , , , , , , , , Tempo Acquisition de aquisição Time (min) (minutos) Figura 4. Cromatograma de íons de verapamil (transição MRM ) para 100 atogramas (200 zeptomoles) injetados em coluna usando um 6490 Triplo Quadrupolo SRM (azul). O sinal vermelho mostra uma injeção em branco. x Ajuste Linear linear fit R 22 = Response Resposta Concentration Concentração (ng/ml) (ng/ml) Figura 5. Resposta linear de verapamil a partir de 100 atogramas até 100 picogramas injetadas em-coluna PTBR-hi 4 27/01/

5 Melhoras significativas de desempenho para a determinação de drogas em plasma O rendimento do 6490 Triplo Quadrupolo para a determinação de drogas em plasma mostra melhoras significativas do desempenho. A Figura 6 mostra fluticasona, um esteróide sintético da família de drogas dos glicocorticóides, usados para o tratamento de condições alérgicas. Quando usada como inalador nasal ou spray, a medicação vai diretamente para o revestimento epitelial do nariz, e muito pouco é absorvido no resto do organismo. Devido a seus níveis sistêmicos baixos, um ensaio LC/MS de alta sensibilidade é necessário para determinar as concentrações de fluticasona no plasma humano. Tipicamente, são usados procedimentos de extração de fase sólida (SPE), e de extração líquido-líquido, para concentrar o elemento analisado e para eliminar os efeitos de matriz. A extrema sensibilidade do 6490 elimina a necessidade do SPE e LLE, permitindo a análise direta do plasma pulverizado após uma diluição de 4 vezes em água. O método de diluir-disparar utilizando o instrumento 6490 possui uma sensibilidade mais do que adequada para o nível de calibragem mais baixo a 5 pg/ml, como se mostra na Figura 6. Isto representa somente 2,5 fentogramas injetados em-coluna, com um limite inferior de detecção de só 1 fentograma. x10 1 5, , , Abundância Abundance 4, , , , , , , , , ,2 1, ,6 1, , ,4 2.4 Tempo Acquisition de aquisição Time [min] [min] Figura 6. Cromatograma de íons de propionato de fluticasona (transição MRM ) de 2.5 fentogramas injetados em-coluna usando o instrumento PTBR-hi 5 27/01/

6 Extraordinária solidez de ensaios de amostras em matrizes biológicas complexas A sensibilidade é importante a robustez é crítica. A Figura 7 mostra a robustez do 6490 para 3000 injeções de verapamil (20 fentogramas) em plasma de proteína precipitada para mais se seis dias de operação contínua. Os dados mostram uma resposta pico coerente com um desvio padrão relativo para a área pico de menos de 6%. Normalmente, a estabilidade da área pico em plasma se mostra para quantidades de picogramas injetadas em-coluna, porém o exemplo é em níveis que são cem vezes menores ou mais Área RSD < 5.9% Resposta ,000 1,500 2,000 2,500 3,000 # Injeções Figura 7. A resposta pico do 6490 Triplo Quadrupolo para 3000 injeções consecutivas de verapamil em plasma (20 fentogramas injetados em-coluna) PTBR-hi 6 27/01/

7 Quantificação de peptídeos superior com a tecnologia ifunnel A quantificação de peptídeos também se beneficia do impacto da tecnologia ifunnel. Por exemplo, um peptídeo de nove resíduos (IEDIVTSEK) mostra uma linearidade excelente na Figura 8 para o padrão de nível mais baixo. O volume injetado numa coluna i.d. de 2 mm padrão na Figura 8 foi somente 28 atomoles. A forte intensidade do sinal e baixo ruído permitiu um limite de detecção notável de aproximadamente 1 atomol numa coluna padrão de 2 mm. A resposta foi linear durante a variação da calibragem no estudo de 28 até 2,830 atomoles e o coeficiente de correlação de 0,997 confirmou um bom ajuste linear. Colunas padrão oferecem uma precisão maior de método e rendimento total comparado com os sistemas nanolc. Os métodos de LC convencionais são preferíveis quando milhares de amostras de plasma devem ser analisadas em estudos rigorosos de validação do biomarcador. Para obter resultados ultra sensíveis a partir de amostras limitadas, o HPLC-Chip/MS com 6490 Triplo Quadrupolo oferece uma alternativa forte ao LC/MS de nanofluxo para a quantificação de peptídeos. O novo espectrômetro de massas 6490 Triplo Quadrupolo com tecnologia ifunnel redefine a sensibilidade, solidez e variação dinâmica para as aplicações quantitativas mais exigentes. A eficiência aprimorada de amostragem de íons é alcançada com a combinação do Agilent Jet Stream, vaso capilar de seis furos e o funil de íons de estágio duplo. 28 amol em-coluna Abundância Quantificador 476, , , , , , Tempo de aquisição (minutos) Figura 8. Cromatograma de íons extraído usando a transição de para m/z para 28 atomoles de peptídeo injetados em-coluna com um sistema convencional LC/MS a 400 µl/min PTBR-hi 7 27/01/

8 Para obter mais informações Saiba mais: Encontre uma central de atendimento Agilent no seu país: EUA e Canadá Europa Ásia Pacífico Brasil Para uso de investigação somente. As informações, descrições e especificações nesta publicação estão sujeitas a mudanças sem aviso prévio. Agilent Technologies não será responsável pelos erros contidos neste documento ou por danos incidentais ou consequenciais em relação com o fornecimento, desempenho ou uso deste material. Agilent Technologies, Inc Publicado nos EUA, em PTBR PTBR-hi 8 27/01/

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