DETERMINAÇÃO DA FRAÇÃO CICATRIZANTE DE FUMAÇA DE Artemisia vulgaris EM MODELO DE ÚLCERA POR PRESSÃO EM CAMUNDONGOS

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1 DETERMINAÇÃO DA FRAÇÃO CICATRIZANTE DE FUMAÇA DE Artemisia vulgaris EM MODELO DE ÚLCERA POR PRESSÃO EM CAMUNDONGOS Ricardo de oliveira Lima Emile Costa Barros Edilberto Rocha Silveira Nayara Coriolano de Aquino Tamara Gonçalves Araújo Mariana Lima Vale

2 Introdução Prevalência 10% a 18% hospitalização de curta permanência; 2,3% a 28% hospitalização de longa duração e 0% a 29% no atendimento domiciliar. Dorner B, et al. Adv Skin Wound Care 2009, 22(5): ,99 bilhões de dólares no tratamento hospitalar. Entre 1990 e 2001, dos 27 milhões de óbitos nos Estados Unidos, (0,4%) foram induzidos por úlceras de pressão Catania, K. et al. Am J Nurs 2007, 107(4):44-52; Reed, K, et al. Health Grades, Denver, 2011.

3 Artemisia vulgaris - Abad MJ, et al. Molecules (17): ; Suresh J, et al. Int J Curr Pharm Res (1): Medicina tradicional chinesa - Morant, G.S. Acupuntura. Medica Panamericana. 1990; CAO D, et al. Inter. J. of Pharm : Justificativa

4 OBJETIVOS GERAIS Investigar a fração do condensado da fumaça de Artemisia vulgaris responsável pela ação cicatrizante em modelo de úlcera por pressão em camundongos.

5 OBJETIVOS ESPECÍFICOS Separar o extrato da fumaça de moxa de Artemisia vulgaris em frações obtidas no fracionamento cromatográfico; Fazer hidrogel de cada frações do extrato da fumaça de Artemisia vulgaris. Avaliar o efeito da aplicação tópica do hidrogel de cada fração da fumaça de Artemísia vulgaris sobre a cicatrização de úlceras por pressão em camundongos: Avaliando parâmetros macroscópicos de cicatrização por meio da Escala - Experimental Wound Assessment Tool (EWAT) e percentual de contração da área da úlcera; Investigando a colagênese em cortes histológicos corados com Tricrômio de Mallory; Avaliando o potencial antioxidante.

6 Camundongos Swiss, peso25-30g Fornecidos pelo Biotério Central da Universidade Federal do Ceará UFC 12/12ciclo claro/escuro a 25 C, com alimentos e água ad libitum Comitê de Ética em Pesquisa animal (CEPA) nº 89/2011

7 Pentano (P) Pentano/diclorometano (PD) Diclorometano (D) Acetato de etila (A) Metano (M) Fracionamento cromatográfico (coluna gel de silica) P1 P2 P3 PD4 PD5 D6 D7 A8 M9 0,48% P1 0,27% P2-3 1,37% PD4 0,53% PD5 0,60% D6 0,29% D7 2,36% A8 1,94% M9

8 1.Naïve (4 animais) 2.Controle (7 animais) 3.Veículo (7 animais) 4.Fração P1 (5 animais) 5.Fração P2-3 (5 animais) 6.Fração P4 (5 animais) 7.Fração PD5 (5 animais) 8.Fração PD6 (5 animais) 9.Fração PD7 (5 animais) 10.Fração A8 (5 animais) 11.Fração M9 (5 animais) Total de 58 animais Sobrenadante para o teste MDA 14ºdia Centrifugado Freezer -80º Formol 10% tamponado Parafinizado IHQ HE T. Mallory

9 Análise estatística Resultados foram expressos como média EPM Análise de Variância (ANOVA) seguido de Bonferroni ou Teste t para dados paramétricos Kruskal-Wallis seguido de Dunn s ou Teste de Mann Whitney para dados não-paramétricos Nível de significância estatística, p < 0,05 GraphPad Prism 5 for Windows (GraphPad software, INC., USA, 2007)

10 CONTRAÇÃO DA ÁREA (%) CONTRAÇÃO DA ÁREA (%) CONTRAÇÃO DA ÁREA (%) Efeito sobre a reepitelização 100 Todas as frações Fração P1 Fração M9 COMPARAÇÃO ENTRE TODOS OS GRUPOS A COMPARAÇÃO ENTRE O GRUPO CONTROLE E P * B COMPARAÇÃO ENTRE O GRUPO CONTROLE E M9 *** C * C V P1 P2-3 P4 PD5 PD6 PD7 A8 M C P C M DIAS DIAS DIAS Efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris sobre percentual de contração da ferida

11 Efeito sobre a cicatrização Grupo Dia 5 Dia 7 Dia 14 Controle 18(15-20) 17 (0 21) 9,5 (0-18) Veículo 18 (13-22) 16,5 (13-21) 11 (0-16) P1 16,50 (15-20) 14,5 (0-18) 5 (0-13) P2/3 20,5 (18 22) 18 (15-20) 1 (0-18) P4 21 (21 22) 19 (18-20) 16 (0-16) PD5 18 (15-19) 14,5 (12-17) 0 (0-16) D6 18 (15-19) 16,5 (14-19) 6 (0-19) D7 18,5 (15-19) 14,5 (6-19) 10,5 (0-16) A8 17,5 (14 22) 18,5 (17-21) 0 (0-16) M9 20,5 (16 22) 16 (0-17) 0 (0-8) ab Efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris sobre Escores EWAT

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13 espessura da derme ( m) Efeito sobre a colagênese ## * N C V P1 P2-3 P4 PD5 PD6 PD7 A8 M9 14º dia Efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris sobre a camada de colágeno na derme da ferida

14 MDA (ppm) Efeito Antioxidante ** ** *** 0.00 N C V P1 P2-3 PD4 PD5 D6 D7 A8 M9 Avaliação do efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris na dosagem de MDA no leito da ferida.

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16 percentagem de pixels (%) percentagem de pixels (%) Efeito anti-inflamatória, antioxidante e antinitrosante inos Nitrotirosina N C V P1 P2-3 PD4 PD5 D6 D7 A8 M9 # * *** *** *** ** ** *** N C V P1 P2-3 PD4 PD5 D6 D7 A8 M9 Efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris sobre imunoexpressão de NOSi e nitrotirosina no leito da ferida ou na cicatriz

17 Controle Veículo Naïve PD5 D6 P1 D7 P2-3 A8 PD4 M9

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19 Análise dos espectros de Ressonância Magnética Nuclear Protônica (RMN¹H) Extrato etanólico Extrato etanólico das folhas das folhas de Artemisia vulgaris de Artemisia vulgaris Extrato etanólico dos palitos de moxa Fumaça de Artemisia vulgaris Fração P1 Fração M9

20 CONCLUSÕES A formulação de hidrogel com a fração M9 utilizada foi a que mais acelerou o processo de cicatrização, mostrando: Menores escores na escala EWAT Maiores percentuais de contração da área das úlceras Os resultados podem ser atribuídos por: A diminuição dos marcadores de estresse nitrosativo, relacionado a diminuição da expressão de NOSi Diminuição nos níveis de radicais livres de oxigênio e de nitrogênio pode esta envolvida em sua atividade cicatrizante

21 A formulação de hidrogel com a fração P1 também teve uma ação cicatrizante evidenciada por: Aumento da contração da área de ulcera no 7º dia Estimulação da colagênese Os resultados podem ser atribuídos por: Atividade sequestradora de radicais livres de nitrogênio, evidenciado pela diminuição da marcação para nitrotirosina A moxa palito e a fumaça de moxa apresentaram um espectro semelhante ao extrato etanólico das folhas Artemísia vulgaris.