Ubiquidade de microorganismos. Introdução. Materiais Necessários

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1 dução Os microorganismos (fungos, bactérias e vírus) são chamados assim por terem um tamanho bastante reduzido. Eles são tão pequenos que não conseguimos enxergá-los a olho nu, mas apenas utilizando microscópio óptico ou eletrônico. No entanto, colônias ou aglomerados de microorganismos podem ser visualizados sem o auxílio de microscópios ou lupas. A seguir apresentamos passo a passo um experimento que pode ser utilizado para pesquisar a presença de microorganismos nos diversos ambientes. Cadastrada por Raquel Silva Material - onde encontrar em supermercados e farmácias Material - quanto custa entre e 25 reais Tempo de apresentação mais de um dia Dificuldade intermediário Segurança requer cuidados básicos Colônia de Fungos Materiais Necessários * placas de Petri esterilizadas * liquidificador * Fita indicadora de ph ou solução de azul de bromotimol * peneira * colher, espátulas * 1 frasco de vidro grande (volume de cerca de 250 ml) * Um frasco de vidro médio (volume de cerca de 50 ml) * 4 Frascos de vidro médio (volume de cerca de 50ml) * 3 Conta gotas (descartáveis podem ser comprados em farmácias) * Algodão hidrofóbico * Papel craft * Fita crepe * 30 ml de água filtrada * 2% (4 gramas) de agar comercial * Duas cenouras médias * Nota de dinheiro * Panela de pressão ou autoclave para esterilizar os materiais * Alça de vidro, ou algum material para espalhar líquido no meio que possa ser passado no fogo

2 dução Os microorganismos (fungos, bactérias e vírus) são chamados assim por terem um tamanho bastante reduzido. Eles são tão pequenos que não conseguimos enxergá-los a olho nu, mas apenas utilizando microscópio óptico ou eletrônico. No entanto, colônias ou aglomerados de microorganismos podem ser visualizados sem o auxílio de microscópios ou lupas. A seguir apresentamos passo a passo um experimento que pode ser utilizado para pesquisar a presença de microorganismos nos diversos ambientes. Cadastrada por Raquel Silva Material - onde encontrar em supermercados e farmácias Material - quanto custa entre e 25 reais Tempo de apresentação mais de um dia Dificuldade intermediário Segurança requer cuidados básicos Colônia de Fungos Materiais Necessários Fita indicadora de ph Alça de vidro

3 Passo 1 Preparação do meio de cultura agar-cenoura Cozinhe duas cenouras e bata no liquidificador com 0 ml de água. Passe a mistura na peneira para separar a parte líquida.

4 Passo 2 Filtre a mistura com um papel de filtro ou uma gaze dobrada. Adicione 4 gramas de agar comercial e misture.

5 Passo 3 Complete o volume para 200 ml com água e meça o ph (você pode usar uma fita indicadora ou uma solução de azul de bromotimol). Ele deve estar em torno de 7,0. Caso não esteja, ajuste o ph utilizando gotas de limão (solução ácida) ou solução de bicarbonato de sódio (solução básica). Tampe o frasco com uma rolha de algodão hidrofóbico e coloque um pedaço de papel craft por cima.

6 Passo 4 Preparo do material A partir desse passo, os materiais (placas de Petri e meio de cultura, frascos de vidro, espátulas, contagotas) devem estar livres de microorganismos, ou seja, estéreis. Veja como esterilizar o material nos experimentos: Esterilizando com uma panela de pressão e Como funciona uma autoclave Embrulhe as placas de Petri, as espátulas, palitos de picolé, conta-gotas, frascos de vidro com papel craft. Autoclave também um dos frascos com aproximadamente 30 ml de água e tampe-o com papel craft. Autoclave todo o material e o meio de cultura durante minutos (Para aprender a autoclavar, consulte o experimento Esterilizando com uma panela de pressão ). IMPORTANTE: Ao utilizar uma autoclave pela primeira vez, peça a alguém que já tenha experiência com esse aparelho para lhe acompanhar.

7 Passo 5 Coleta dos materiais a serem testados Neste experimento, você pesquisará a presença de microorganimos em amostras de terra, de água de lago, de água de torneira, em dinheiro e no ar. Dissolva a terra (aproximadamente uma colher de chá) na água autoclavada

8 Passo 6 Coletamos as duas amostras de água diretamente nos frascos autoclavados.

9 Passo 7 Escolha os ambientes e materiais a serem testados, colete as amostras e mãos a obra! Limpe e prepare o local onde será feito o procedimento. Identifique as placas com as respectivas amostras e adicione, ainda, uma placa fechada, como controle. Mantenha uma chama acesa sobre a mesa, no local de trabalho (pode ser uma lamparina, ou bico de bunsen), para evitar contaminação do meio de cultura com fungos e bactérias do ar. Distribua o meio de cultura nas placas de Petri. Se o meio de cultura estiver sólido, utilize banho-maria ou microondas para fluidificá-lo. Coloque aproximadamente 20 ml de meio de cultura dentro de cada placa de Petri. Deixe as placas próximas ao fogo, até que o meio se solidifique.

10 Passo 8 Com o conta-gotas, coloque em cada placa duas ou três gotas das amostras líquidas a serem testadas. Flambe a alça de vidro no fogo e a esfrie, encostando-a no canto da placa. Utilize a alça para espalhar o líquido sobre o meio e feche imediatamente a placa. Flambar a alça de vidro Espalhar com alça

11 Passo 9 Se você for pesquisar a presença de microorganismos em algum objeto, passe-o com cuidado sobre o meio de cultura, como fizemos neste experimento com o dinheiro. Cuidado para que seus dedos não encostem no meio de cultura. Para pesquisar a presença de microorganismos no ar ambiente, basta deixar a placa aberta durante aproximadamente 5 minutos. A placa identificada como controle não receberá qualquer amostra e nem mesmo deverá ser aberta.

12 Passo Todas as placas devidamente identificadas devem ser deixadas viradas para baixo a temperatura ambiente.

13 Passo Resultados - Observação com 24 horas Placa água de torneira Placa água de lago Placa terra Placa dinheiro Placa ar Placa controle

14 Passo Observação com 48 horas Placa água de torneira 48 horas Placa água de lago 48 horas Placa terra 48 horas Placa dinheiro 48 horas Placa ar 48 horas Placa controle 48 horas

15 Passo Observe a diferença entre colônias cremosas e filamentosas As colônias de aspecto cremoso e brilhante são colônias de bactérias. Já as colônias filamentosas apresentam aspecto aveludado e são colônias de fungos. Elas são constituídas fundamentalmente por elementos multicelulares denominados hifas. Colônia cremosa Colônias filamentosas

16 Passo Observações com 5 dias Placa água de torneira 5 dias Placa água de lago 5 dias Placa terra 5 dias Placa terra 5 dias

17 Passo Placa dinheiro 5 dias Placa dinheiro 5 dias Placa ar 5 dias Colônias cremosas (bacterianas) e filamentosas (fúngicas)

18 Passo O que acontece Os microorganismos estão presentes na água (mares, rios, lagos e água subterrânea) no solo, no ar, nos animais (pele, mucosas, tubo digestório), nas plantas e até em ambientes pobres em nutrientes, tais como a água destilada e também em alguns alimentos que consumimos. Em todos esses ambientes os microorganismos têm papel fundamental na manutenção do equilíbrio biológico. Felizmente, a maioria dos microorganismos não faz mal ao homem, porém existem aqueles que são considerados potencialmente patogênicos, que podem causar danos aos hospedeiros. A ubiqüidade dos microorganismos, ou seja, a capacidade de habitar uma gama enorme de ambientes se deve basicamente a três fatores: o tamanho reduzido, que possibilita a dispersão; a variação e flexibilização metabólica, existente no grupo que permite se adaptar rapidamente às condições ambientais; e a sua grande capacidade de transferência horizontal de genes. Transferência gênica horizontal é uma maneira que os microrganismos têm de trocar material gênico. A transferência vertical é a que acontece entre o indivíduo e sua prole (seus filhos ). Já na transferência horizontal, o organismo recebe um fragmento de DNA ou RNA de outro organismo que não é seu antecedente. Esse processo é importante, pois a aquisição de material gênico aumenta as chances de adaptação do microorganismo a diferentes condições ambientais. Por exemplo, no fragmento de DNA recebido podem existir genes que conferem resistência a algum antibiótico ou a altas temperaturas. Por todos esses motivos é possível observar crescimento de colônias bacterianas e fúngicas em placas inoculadas com amostras de diferentes ambientes.

19 Passo Para saber mais Um pouco de história... Em 74 o holandês Antony van Leeuwenhoek (32-23) criou o primeiro protótipo de microscópio. Foi ele quem observou pela primeira vez organismos móveis, não vistos a olho nu, em gotas de água, fezes, material removido dos dentes os micróbios! Em 1857 o químico francês Louis Pasteur ( ) mostrou que a presença de organismos microscópicos do ar atmosférico era a fonte da contaminação dos meios de cultivo em contato com o ar. Os frascos que não estavam expostos ao ar permaneciam estéreis, enquanto que os expostos, após algum tempo, entravam em putrefação. Ele também desenvolveu o processo de pasteurização para a eliminação de microorganismos. Ao contrário de muitos cientistas do século XIX, o médico alemão Robert Koch ( ), acreditava que algumas doenças pudessem ser causadas por microorganismos. Depois de vários estudos, Koch descobriu que o agente causador do carbúnculo (doença que estava dizimando o gado na Europa), era uma bactéria em forma de bastão. Em 1882, ele descobriu o bacilo da tuberculose, denominado de bacilo de Koch. Finalmente, em 1928, é descoberto o primeiro antibiótico, a penicilina, pelo escocês Alexander Fleming ( ). Ele observou que, em algumas placas contaminadas com bolor (fungo), as bactérias não cresciam. É que o fungo ali presente (Penicillium notatum) produzia a penicilina, substância capaz de inibir crescimento de outros microorganismos. Desde então, muitas descobertas foram feitas sobre os microorganismos. Hoje em dia nós sabemos que eles são importantes em vários campos da biotecnologia, incluindo a produção de alimentos, o uso de transgênicos na agricultura, e até no controle agroecológico de pragas e doenças

20 Passo Veja também O senhor microscópio