03/07/2012. DIAGNÓSTICO Avanços DIAGNÓSTICO. Avanços no Diagnóstico da Tuberculose. Encontro Nacional de Infecções Respiratórias e Tuberculose
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- Cecília Caldas de Escobar
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1 Avanços no Diagnóstico da Tuberculose Encontro Nacional de Infecções Respiratórias e Tuberculose Fernanda C Q Mello Instituto de Doenças do Tórax Faculdade de Medicina - UFRJ fcqmello@hucff.ufrj.br Reduzir tempo de execução Avanços Atingir distintas populações: adultos, crianças, suspeitos de resistência Aumentar acurácia: sensibilidade e especificidade Reduzir custos: diretos e indiretos Permitir o acesso aos resultados para tomada de decisão Quem? Tuberculose Pulmonar Tosse Febre Sudorese noturna Emagrecimento Com ou sem fatores de risco associados: HIV, silicose, transplante, insuf. renal crônica, infecção recente, seqüela radiológica sem tto, perda de peso (>15%), diabetes mellitus, uso de inibidores de TNF-alfa 1
2 Cavitação com 2 cm 10 9 bacilos/ml Ba Baciloscopia positiva 10 4 bacilos/ml Cultura positiva 10 a 10 2 bacilos/ml BACILOSCOPIA BAAR LED microscopia fluorescente Tempo de execução 4x menor X rendimento maior Lancet Infect Dis 2006; 6:
3 LED Rockembach et al, 2011 submetido Current scenario a Scenario 1 Scenario 2 Scenario 3 ZN LED ZN LED ZN LED ZN LED Total cost 3, , , , , , , , Correct diagnosis rate Cost per correct diagnosis Current scenario: TB Prevalence of 38.4%; ZN sensitivity of 87.5%; LED sensitivity of 91.1%. Scenario 1: TB Prevalence of 10%. Scenario 2: TB Prevalence of 50%. Scenario 3: ZN sensitivity of 65.1%; LED sensitivity of 72.3%. CULTURA Löwestein Jensen (LJ) Sensibilidade 70% a 96% Especificidade 98% Int J TubercLungDis 2008; 12: Bactec 960 (MGIT) (validado cultura e TS SIRE) Bactec 9000 * (validado cultura - sangue) 3-8 sem LJ x 1-3 sem MGIT Drobniewski et al. Lancet Infect Dis 2003; 3: TESTE DE IDENTIFICAÇÃO Sondas Genéticas Capilia TB Rapid Diagnostic Test A partir de cultura em meio sólido ou líquido, detecta antígeno específico de M tb (MPB 64) Quem? 3
4 TESTES DE SENSIBILIDADE LJ Quem? MGIT kit SIRE rapidez! (semanas) Sens Esp Estreptomicina 100 % (88,9%) Isoniazida 100 % (97,1%) Rifampicina 100% (100%) Etambutol 98,5 % (81,8%) TortoliE et al J Clinical Microbiol2002; 40: TESTES SOROLÓGICOS Sensibilidade e especificidade ainda inadequadas para uso rotineiro IntJ Tuberc Lung Dis 2008; 12: Métodos Diagnósticos de Biologia Molecular Detecção Identificação das espécies Detecção de resistência
5 PCR Amplificação de DNA in vitro sequencia alvo desnaturação do DNA a 94 0 C extensão do anelamento a 72 0 C anelamento a 68 0 C ANN (PCR) Sensibilidade Especificidade escarro BAAR+ 95% 95% escarro BAAR % 95% E-MTD PCR Sensibilidade BAAR - 83,3% Especificidade 99,1% J Clin Microbiol. 37: , INTERPRETAÇÃO CDC 2000 BAAR AAN CONCLUSÃO + + TB + - MNT - + Provável TB - - TB? AAN: amplificação de ácidos nucléicos; MNT: micobactéria não tuberculosa 5
6 Gene Xpert (Cepheid, Sunnyvale, CA) Detecção e Resistência Real-time PCR para detecção de M. tuberculosis + avaliação da resistência à Rifampicina Lise bacteriana por ultrassom Cartucho único com compartimentos para lavagem, purificação, concentração de DNA e reação de PCR para detecção Tempo total para resultados: 1:45h Gene Xpert MTB/Rif End of hands on work 3 Concentrates bacilli & removes inhibitors Sample is Ultrasonic lysis of filter- automatically 4 captured organisms to filtered & washed release DNA 5 DNA molecules are mixed with dry PCR reagents Transfer of 2 ml after 15 min 2 GeneXpert Time-to-result: 1 h 45 min 6 Semi-nested real-time amplification & detection in integrated reaction tube 7 Sputum liquefaction & inactivation with 2:1 SR 1 Printable test result Gene Xpert MTB/Rif Sensitivity In S+C+ 99.5%* [98.4% %] 99.4%** [98.6% %] 98.2%*** [96.8% %] Sensitivity In S-C+ 90.0%* [84.6% %] 85.0%** [79.7% %] 72.5%*** [65.4% %] * three samples, ** two samples, *** one sample Specificity in Non-TB 97.9%* [96.4% %] 98.6%** [97.5% %] 99.2%*** [98.1% %] Boehme C, et al. 2010, N EnglJ Med. 363(11): ,
7 Resistência Rifampicina Sensibilidade 95% Especificidade 98% LiPA - Line Probe Assay - hidridação reversa / amplificação por PCR de um segmento do gen rpob Resistência Reprodutibilidade Laboratório (Bélgica) N= 411 LiPA X Bactec Sensíveis (n=145) 100% Resist. RIF (n= 266) 98,5% Traore H et al. Int J Tuberc Lung Dise 2000; 4 (5): 481 Resistência Geno Type MTBDR plus test Isolados de cultura / escarro positivo para BAAR Detecta resistência à RH em poucas horas R identificação de mutações no gene rpob H identificação de mutações nos genes katg e inha Validado em
8 GenoType Mycobacterium CM/AS Espécie Tuberculose Extrapulmonar Gene Xpert MTB/Rif Com preparo prévio dos espécimes Sensibilidade de 85,7 % ( IC 95% : 57%-98%) Especificidade de 97,3% (IC 95% : 90%-99%) Int J TubercLung Dis2011; 15: Não validado para uso em espécimes extrapulmonares. 8
9 TB Extrapulmonar Gene Xpert J Cinical Microbiol 2011, 49(7): TB Extrapulmonar Gene Xpert J Cinical Microbiol 2011, 49(7): OMS 2011 Xpert MTB RIF Teste inicial em suspeito de TB resistente e para TB/HIV co-infectados (fortemente recomendado) Teste a ser solicitado após baciloscopia negativa em suspeito de TB sem as condições acima (recomendação condicional) Evidências sugerem extensão das indicações para crianças Utilização em escarro espontâneo Baciloscopia e cultura para acompanhamento 9
10 Obrigada pela atenção! 10
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