16/8/2007 ??? Antes de 1939: Dois relatos importantes para a descoberta do. Sistema Rh. Segundo sistema em importância transfusional
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1 Sistema Rh Histórico Antes de 1939:??? reação transfusional apesar de compatibilidade ABO Dois relatos importantes para a descoberta do sistema Rh: Levine e Stetson: reação transfusional de uma mulher que recebeu sangue do marido. Landsteiner e Wiener: observou anticorpo (anti-rhesus) que reagia com 85% das hemácias humanas. Sistema Rh Sistema Rh Segundo sistema em importância transfusional Ags são muito imunogênicos Ag D altamente imunogênico 1 a 10ml 80% Reações transfusionais graves Reação Transfusional extra-vascular Ag D: 80% problemas com DHPN Outros Ag? Cerca de 49 antígenos D,C,c,E,e: envolvidos com 99% dos problemas relacionados ao sistema Rh Ags Rh são encontrados exclusivamente em hemácias 10 semanas-iu Lipoproteínas Estrutura dos Antígenos Rh Partes integrantes da membrana atravessando-a 12 vezes RH1 D RH9 C X RH17 Hr o RH2 C RH10 V RH18 Hr obs. RH26 c-like RH33 Har RH3 E RH11 E W RH19 hr S RH27 ce RH4 c RH12 G RH20 VS RH34 RH35 RH36 Hr B Be a RH41 RH42 RH43 Crawf ord RH49 STEM RH50 FPTT Antígenos do Sistema Rh RH51 MAR RH5 e RH6 f RH7 Ce RH8 C W obs. obs. obs. obs. RH21 C G RH22 CE RH28 RH29 RH30 hr H Go a RH44 Nou RH52 BARC RH37 Evans RH45 Riv RH53 JAHK RH23 D W RH31 hr B obs. RH39 RH46 Sec RH54 DAK RH47 Dav RH55 LOCR obs. RH32 R N RH40 Tar RH48 JAL 1
2 Funções das Proteínas Rh Transporte (cátions) Integridade da membrana eritrocitária Polimorfismo Rh e susceptibilidade à malária Transporte de CO 2 Genética do Sistema Rh PROTEÍNAS Rh Cromossomo 1p34-p36 2 Genes codominantes proteína D Ag D RHCE (RhCe, RhCE. RHcE, Rhce) Ags CE, Ce, ce, ce proteína CE FENOTIPO Rh D (Rho) Positivo D (Rho) Negativo PROTEÍNAS PRESENTES PESO MOLECULAR NÚMERO DE AMINOÁCIDO S Proteína D 32 kd 417 Proteína CcEe Proteína CcEe 34 kd kd 417 P N Gene Gene RHCE SMP Rhesus box (1558 NT) (1558 NT) RNAm RHCE RNAm Proteína (417 AA) Proteína RHCE (417 AA) Genes e RHCE : 1p
3 Polipeptídeo RhD Polipeptídeo RhC/E Diferenças estruturais entre (C, c) e (E, e) POSIÇÃO DO AMINOÁCIDO C c E e 16 Cisteína Triptofano Isoleucina Leucina Serina Ac. Aspártico Serina Prolina Prolina Alanina Diferenças Estruturais entre os Antígenos Cw, C, c ANTÍGENOS POSIÇÃO AMINOÁCIDO C - c 41 Glicina Cw 41 Arginina 3
4 Anti-CDE Recomendável para Rh- Soro poliespecífico: Anti-D+Anti-E+Anti-C (mono ou policlonal) Finalidade: Identificar a presença dos Ag E e C em indivíduos RhD NEG (maioria E e C NEG) Importância: Evitar a imunização de indivíduos RhD NEG pelos Ags C e E (especialmente, mulheres em idade gestacional e pacientes candidatos a politransfusão) RHCE D+/D+ Fenótipos # Genótipos Africanos RhD- Genótipo D+ Fenótipo D Fenótipo RhNEG em caucasianos: Ocorre por Deleção do gene D+/D D-/D- Gene híbrido CED S Codifica a produção de um antígeno C anormal, além de não codificar a produção do antígeno D. Pseudogene ψ :inserção de 37 bp no intron 3/exon 4 gera stop codon Caucasianos Complexidades do Sistema Rh RHCE Expressão dos Antígenos Rh Relacionada à glicoproteína RHAG: proteína de interação do Complexo Rh na membrana Africanos ψ Rh box SMP Gene RHAG: homólogo(semelhante) a e RHCE localizado no cromossomo 6p11-21; Rh Rh box box SMP1 Gene RHAG alterado glicoproteína RhAG alterada Rh null, Rh mod Genes híbridos 4
5 Moléculas associadas com o complexo Rh RHCE RH50 Genes mrnas (A) n (A) n (A) n? RhD? RhCE Rh50 GPB Lipídios C/c 103 E/e 226 Y Proteína Periférica? Proteínas A expressão fenotípica do Antígeno D Pode variar qualitativamente e quantitativamente D parcial D Normal D Fraco Antígenos Rh Epítopos ep Os epítopos que formam o Antígeno são diferentes a sítios/hemácia 1 6 ep 5
6 Epítopos diferentes Rh(D) Normal Rh(D) Fraco Rh(D) parcial Rh(D) parcial fraco Normal Normal Variante Variante Normal Reduzido Normal Reduzido Legenda: Epítopo Antígeno D fraco Antigamente designado por Du D fraco (polimorfismo quantitativo) D Fraco çã çã ã ç. ã á çã çã é ó. Número reduzido de antígenos RhD por hemácia sem aparente perda de epítopos Mutações de ponto missenses no gene (substituições de aa nas regiões transmembranares ou intracelulares da proteína) 30 tipos de RhD fraco já determinados molecularmente D FRACO D parciais D parcial (polimorfismo qualitativo) DF3:S3C DF6:R10Q DF18:R7W DF17: R114W DF5: A149D DF16: W220R DF2: G385A DF4:T201R DF7: G339E F223V DF1: V270G DF8:G307R DF10:W393R DF4.1: W16C DF9:A294P DF22:W408C T201R DF11: M295I F223V DF14: S182T DF12:G277E K198N DF13:A276P T201R DF15:G282D DF21:P313L Antígenos RhD alterados que diferem suficientemente do antígeno RhD normal para permitirem a produção de anti-d ou não reagirem com alguns anti-d monoclonais Mutações de ponto missenses no gene ( substituições de aa nas alças extracelulares e dispersas na proteína) Rearranjos gênicos entre RHCE e (alelos híbridos) 6
7 D Parcial çã í ç é. Doadores : Significado do D fraco: Sempre classificar como Rh+; Receptores: Sempre classificar como Rh+ Controvérsia quanto à conduta transfusional. Recomendações Transfusionais CATEGORIAS Categorias de Antígenos D parciais 30 epítopos EPITOPOS PRESENTES Pacientes que apresentam sorologia D fraco***** Transfundir sangue RhD Negativo Pacientes D Parcial Transfusão de sangue RhDnegativo independentemente do tipo ou categoria de RhD parcial II III a III c IV a (Go a ) IV b V a (D w ) VI VII (Tar) DFR D parciais - 30 epítopos POSITIVOS NEGATIVOS CAT. D PARCIAIS 25 5 II 30 0 III a - IIIc D Parcial Mutações de ponto missenses III b IV a IV b 22 8 V a 6 24 VI 27 3 VII DMH: L54P D VII (TAR): L110P DHR: R229K D+G-: S103P D HMi : T2831 DAU: T379M D II : A354D DNU: G353R DNB:G355S Avent & Reid,
8 16/8/2007 Teorias Genéticas e Nomenclaturas do Sistema Rh Tippett FisherFisher-Race Primeiro Segundo Locus Locus Gene Wiener ISBT Antígenos Gene Fenótipo Incidência (%) Brancos Negros RHce Dce D,c,e R0 R0 RH 1,1,-2,2,-3,4, RHCe DCe D,C,e R1 R1 RH 1,2,1,2,-3,3,-4, RHcE DcE D,c,E R2 2 R2 RH 1,1,-2,3,4,2,3,4, Z RHCE DCE D,C,E R RZ RH 1,2,3,1,2,3,-4,4, RHce dce d,c,e r r RH -1,1,-2,2,-3,4, RHCe dce d,c,e r r RH -1,2,1,2,-3,3,-4, RHcE dce d,c,e r r RH -1,1,-2,3,4,2,3,4, RHCE dce d,c,e ry ry RH -1,2,3,1,2,3,-4,4, ANTICORPOS Rh Anti-D : uma vez formado persiste por muitos ANTICORPOS Rh Clinicamente significativos anos, pois o antígeno D é altamente Envolvidos em reações transfusionais hemolíticas, imunogênico. anemias hemolíticas auto-imunes, Anti D formado por indivíduos D parciais : aparente aloanticorpo anti-d, contra os epítopos diferentes dos originais. doença hemolítica perinatal. quase todos resultam de aloimunização por transfusão ou gravidez, pertencendo geralmente à classe IgG. 8
9 ANTICORPOS Rh Normalmente não fixam complemento Os mais frequentes são os anticorpos anti-d, -E, -c, -C, -e. Reagem otimamente a 37 o C e fase de AGH Reatividade exacerbada por enzimas proteolíticas Auto-anticorpos também poderão ser formados, geralmente de especificidade anti-e, seguido de anti-rh17(d--), anti- O que são soros Monoclonais? E policlonais? é Qual é o melhor? Rh29 (só não reage com Rhnull) Tipos de Anti-D Critérios de seleção de reagentes anti-d Policlonal - humano (IgM e/ou IgG) Monoclonal contra alguns epítopos ou mistura de monoclonais contra a maioria dos epítopos (IgM e/ou IgG) Blend (mistura Acs IgM+IgG, e/ou mono+policlonais) Reagentes policlonais anti-d potentes reagem com D VI e com antígenos D fraco de alguns indivíduos Reagentes Monoclonais que reagem com hemácias Dfraco e podem não com reagir com alguns antígenos parciais, como ex. D VI Critérios de seleção de reagentes anti-d D Fraco e graus de aglutinação Uma recomendação importante: é a utilização de reagente anti-d que pode ser um policlonal potente ou mistura de monoclonais e/ou policlonais (blend) que detectam os D fracos e a maioria dos D parciais / Associado à Antiglobulina Humana /ou enzima Tipos de D Fraco DF1 DF2 DF3 DF3 DF4 DF4 DF5 Grau de aglutinação Reatividade 2+/3+ TA/AGH 1+/2+ TA/AGH 2+ TA 3+ AGH 1+ TA 4+ AGH 1+ AGH Castilho L.M. in: 9
10 Porque Anti-D e AGH? Estratégias de seleção de reagentes anti-d Amostras 3 DF1 2 DF2 2 DF3 4 DF4 3 DF1,4 2 DVI 1 DAR 3 DHMi 1 DF1/DHMi Anti-D IgM TA 2+/3+ 0/1+ 2+/3+ 2+/3+ 2+/ /1+ Anti-D IgG AGH /4+ 3+/4+ 3+/ /2+ 1+/3+ Castilho L.M. in: Doadores Antisoros policlonais (?) Antisoros monoclonais que não detectem D VI / repetição com poli ou blend (?) em tubo ou gel Antisoro monoclonal blend (associado a AGH que detecte todas as categorias) Estratégias de seleção de reagentes anti-d Pacientes Antisoros monoclonais blend que detectem categoria D VI Painel de anti-soros monoclonais (?) Antisoros monoclonais que não detectem D VI Antisoros monoclonais que não detectem D VI / repetição com policlonal ou blend(?) 10
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