Proposta de um sistema integrado de identificação e investigação de micro-organismos no Controle de Qualidade em Indústrias Farmacêuticas

Transcrição

1 Proposta de um sistema integrado de identificação e investigação de micro-organismos no Controle de Qualidade em Indústrias Farmacêuticas

2 Introdução

3 Objetivo Propor um sistema integrado de identificação de micro-organismos e de investigação de fontes de contaminação que consiga atender as necessidades particulares do Controle de Qualidade de cada Unidade de Produção. BD Coleção Métodos Identificação e investigação de micro-organismos

4 Metodologia Elaboração Fluxograma (esquema) Memória: Coleção de culturas (CCMA) e Banco de dados Fotos Identificação: BBL Crystal e Sistema proposto (MALDI- TOF/Morfologia)Fotos Não identificados: MICROSEQ e Construção de BD no MALDI-TOF Fotos Investigação: CCMA, BD e PFGE

5 Resultados: Investigação Recuperação, a partir da CCMA, de isolados envolvidos no Evento do Desvio P A A1 A B A B B C A A2 B P

6 Resultados: Identificação (Comparação entre métodos) N=225 Redução no número de isolados não identificados Outras vantagens: Independe de Gram MALDI-TOF 2. Identificação de isolados fúngicos 60 BBL Crystal Nao ID ID

7 Resultados: Identificação (Comparação entre métodos) Custo por identificação Tempo de identificação Custo (R$) Tempo resultado (min) BBL Crystal 30 MALDI-TOF 5 0 BBL Crystal MALDI-TOF MALDI-TOF prox ano

8 Resultados: Identificação por sequenciamento N=36 (MicroSEQ) Todas as 36 bactérias foram identificadas pelo MicroSEQ e tiveram seus perfis proteômicos inseridos no BD do MALDI-TOF 10 isolados: identificação errada pelo BBL Crystal

9 Resultados: Construção de BD Oito cepas foram identificadas como Micrococcus, sendo quatro M. luteus. Estes últimos foram utilizados para a construção de um espectro de referência em MALDI-TOF, que foi introduzido no BD in house As culturas (assim como as lâminas de Gram) dos isolados foram fotografadas, tiveram seu perfil bioquímico determinado (VITEK 2) e foram introduzidas na CCMA

10 Conclusões O espectro de referência criado a partir de cepas autóctones de M. luteus permitiu a ampliação do BD do MALDI-TOF com sucesso e outras cepas não identificadas estão sendo introduzidas, seguindo o mesmo procedimento; A CCMA foi útil na recuperação de cepas envolvidas em desvios da qualidade e permitiu a investigação de sua origem de contaminação pela técnica de PFGE; O sistema proposto se mostrou viável, reduziu custos e apresentou melhorias na identificação de cepas e na investigação de fontes de contaminação.

11 Agradecimentos Tecendo a Manhã Um galo sozinho não tece uma manhã. Ele precisará sempre de outros galos ( )

12 Agradecimentos Orientadores Bio-Manguinhos, INCQS, IOC e UMinho CNPq Programa Ciências sem Fronteiras FIOTEC Carta-compromisso com INCQS Gestores anteriores e atuais

13 Agradecimentos Equipe de Identificação SEPIN (Adriana Frazao, Cristhiane Falavina e Fernanda Ventura) Erica Louro da Fonseca, Luciane Gomes, Lygia Braga e Silvia Ferreira

14 MUITO OBRIGADA!

15 Metodologia Identificação Identificação pelo Sistema: Isolamento Morfologia celular (Gram) Morfologia da Colônia Coleção de Culturas de Micro-organismos Autóctones (CCMA) Banco de Dados da CCMA Perfil proteômico (MALDI-TOF) Comparação dos genomas por PFGE Identificação por Sequenciamento de gene conservado Caracterização do isolado: Perfil bioquímico Fotodocumentação (Morfologia celular e de colônia) Investigação Construção de espectro de referência (MALDI-TOF) Metodologia

16 Introdução Problema

17 Cepas da CCMA Metodologi

18 MALDI-TOF/ BBL Crystal Metodologi a

19 Sequenciamento e Construção BD MALDI-TOF Metodologia