Eletroforese. Para que uma partícula se mova é necessário que possua carga elétrica livre, isto é, excesso ou diferença de elétrons.

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Luiz Gustavo Custódio Peralta
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1 Eletroforese 1

2 Eletroforese É um processo que consste na separação dos componentes de um sstema através da aplcação de um campo elétrco. É usado para separar e analsar bomoléculas. Prncípo: Substâncas em solução que possuem carga elétrca lvre, deslocam-se quando submetdas a um campo elétrco de sentdo nvarável. Para que uma partícula se mova é necessáro que possua carga elétrca lvre, sto é, excesso ou dferença de elétrons. Portanto: - para o ânodo (+) drgem-se os ânons - para o cátodo (-) drgem-se os cátons 2

Prncípo: Substâncas em solução que possuem carga elétrca lvre, deslocam-se quando submetdas a um campo elétrco de sentdo

3 E N E N = = N N E = P E Eletroforese As moléculas são separadas umas das outras conforme o tamanho, a carga elétrca e a forma. Separa-se partículas de mesma carga, porém com quantdades dferente de carga. 3

4 Moléculas grandes mgram lentamente, enquanto moléculas pequenas movem-se rapdamente. 4

5 5

6 E N E N = = N N E = P E Eletroforese Suportes: Meo sóldo: - Papel - Acetato de celulose Meo sem-sóldo: - Gel de amdo - Gel de agarose - Gel de polacrlamda 6

7 N E 2 2 N c 2 m E = N N E P E 2 2 PV N Amu N A m N / 3 3= A A = = = c = N average knetc energy molecule 2 3 ( ) Eletroforese Marcadores de peso molecular são usados para estmar o tamanho das moléculas das amostras. 7

8 Eletroforese: a concentração do gel A concentração do gel defnrá o tamanho dos poros a serem atravessados pelas moléculas em mgração. Ges muto concentrados oferecerão maor resstênca à mgração das moléculas. 8

9 Eletroforese LpoProteínas undade de transporte lpídco - Ultracentrfugação - Separação por eletroforese Identfcação de 4 faxas lpoprotecas - Qulomcrons - Lpoproteína Beta - Lpoproteína Pré-beta - Lpoproteína Alfa 9

Identfcação de 4 faxas lpoprotecas - Qulomcrons -

10 Eletroforese Hemoglobna - Hemoglobna anormas - Carga elétrca - Ponto soelétrco - Hemoglobna S - Hemoglobna C - Talassema Beta 10

11 Eletroforese Hemoglobna S - Hemoglobnopata estrutural * substtução do ácdo glutâmco pela valna - Indvíduos homozgotos (SS) - Anema hemolítca congênta ( anema falcforme) - Indvíduos heterozgotos (AS) - Traço sclêmco - Geralmente assntomátcos 11

homozgotos (SS) - Anema hemolítca congênta ( anema

12 Eletroforese Proteínas: - amnoácdos como eletróltos Proteínas sércas: - Albumna - Globulnas (α1, α2, β, δ) 12

13 Eletroforese: métodos de letura Denstometra 13

14 Espectrofotometra 14

15 Aplcações da espectroscopa energa frequênca de nfra- vsível ultra- raos-x raos-γ radante rádo vermelho voleta Técnca NMR Absorção Absorção Absroção Absorção Técncas rado- Analítca Mcroondas Fluorescênca Dfração métrcas Fosforescênca Fotometra de chama Espectroscopa de emssão Interação desntegração vbração e exctação eletrônca dos elétrons desntegração com a Rotação do rotação das átomos de uma moléculs nternos são do núcleo matéra núcleo moléculas deslocados 15

Fotometra de chama Espectroscopa de emssão Interação desntegração vbração e exctação eletrônca dos elétrons

16 A regão do espectro do ultravoleta é na faxa de 200 a 400 nm e a da luz vsível é entre 400 e 800 nm. 16

17 Interação da radação com a matéra O que faz com que alguns raos nterajam e outros passem através das cosas? Dos requermentos devem ser observados para que uma determnada radação possa ser absorvda por uma molécula: 1 - A radação ncdente deve ser de frequênca equvalente aquela rotaconal ou vbraconal, eletrônca ou nuclear da molécula, 2 - A molécula deve ter um dpolo permanente ou um dpolo nduzdo, ou seja, deve haver algum trabalho que a energa absorvda possa fazer. 17

radação ncdente deve ser de frequênca equvalente aquela rotaconal ou vbraconal, eletrônca ou nuclear da molécula, 2 -

18 Les de absorção Io I1 Io = 100 I1 = 50 Io = 100 I1 = 50 I2 = 25 18

19 Esquema dos prncpas componentes de um espectrofotômetro A amostra deve estar em um recpente (cubeta) de quartzo quando a radação for na regão espectral do ultravoleta. Quando for na regão da luz vsível usa-se os de vdro por ter uma melhor dspersão. Os detectores devem ser altamente sensíves. Os dados obtdos pelo detector são envados para um dspostvo de processamento de dados. 19

Quando for na regão da luz vsível usa-se os de vdro por ter uma melhor dspersão.

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