INSTRUÇÕES DE USO. Padrões Moleculares Helix Elite USO PRETENDIDO RESUMO E EXPLICAÇÃO PRINCÍPIOS COMPOSIÇÃO

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1 INSTRUÇÕES DE USO Padrões Moleculares Helix Elite USO PRETENDIDO Os Padrões Moleculares sintéticos Helix Elite devem ser utilizados como material de controle positivo em aplicações moleculares. RESUMO E EXPLICAÇÃO Testes de diagnóstico molecular oferecem informações rápidas e específicas sobre a presença e quantidade de um micro-organismo (por ex., bactéria, parasita, vírus, etc.). O desenvolvimento e a interpretação adequada do teste de diagnóstico molecular requer o uso de um controle positivo. Um controle positivo confirma o desempenho adequado da análise e do operador molecular. Os Padrões Moleculares sintéticos Helix Elite são ácidos nucleicos criados para serem usados como substitutos de controle positivo para vários micro-organismos e vírus onde o material genômico alvo pode ser difícil ou perigoso de se obter. PRINCÍPIOS Cada Padrão Molecular sintético Helix Elite contém DNA ou RNA que corresponde às regiões no genoma do organismo que são tipicamente visadas em análises de diagnóstico molecular. Somente as sequências iniciadoras e de procura que hibridizam às sequências de ácido nucleicos do Padrão Molecular Helix Elite produzirão uma reação positiva. Os Padrões Moleculares sintéticos Helix Elite são secos com um conservante estabilizador proprietário que é compatível à Reação em Cadeia de Polimerase (PCR, Polymerase Chain Reaction). Água Padrão Molecular Helix Elite é fornecida para reidratação e diluições de forma a garantir a estabilidade e pureza do padrão. COMPOSIÇÃO Os Padrões Moleculares sintéticos Helix Elite consistem em: DNA ou RNA sintético Estabilizados com Biomatrica RNAstable ou DNAstable conforme o caso Água Padrão Molecular Página 1 de JUNE.16

2 ADVERTÊNCIAS E PRECAUÇÕES Apenas para uso diagnóstico in vitro. Apenas para uso profissional. Não abra a bolsa de alumínio até pronta para reidratar e armazenar/utilizar. Possível irritante de olhos e pele. Consulte a Ficha de Dados de Segurança de Material (SDS) para obter informações mais detalhadas. A SDS pode ser localizada no nosso site em ou contatando a assistência técnica em ou ligando grátis nos EUA para Os Padrões Moleculares sintéticos Helix Elite não contêm substâncias perigosas enumeradas na diretiva 67/548/EEC ou incluídas na diretiva 1272/2008/EC. Os Padrões Moleculares sintéticos Helix Elite não são feitos com látex de borracha natural. Use sempre o jaleco de laboratório, óculos de segurança e luvas descartáveis quando utilizar os Padrões Moleculares sintéticos Helix Elite. Os Padrões Moleculares sintéticos Helix Elite são adequados para o controle positivo quando iniciadores e procuradores hibridizam o suficientemente ao padrão. Para informações sobre alvo genético, consulte o Certificado de Análise. MATERIAIS NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS Tubos de microcentrífuga de 1,5 ml Pipetadores capazes de suportar volumes de 0, µl Pontas de pipetadores com barreira de aerossol sem nuclease Microcentrífuga com rotor para tubos de 1,5 ml INSTRUÇÕES DE USO A. Reidratação As instruções a seguir descrevem como manusear os Padrões Moleculares para alcançar cerca de 100 reações com controle positivo. O material final nestas instruções está concentrado em tubos de estoque que estão armazenados até serem diluídos para o uso como controle positivo em análises moleculares. 1. Abra a bolsa de alumínio e então centrifugue o tubo de Padrão Molecular Helix Elite sintético antes de abrir o tubo de forma a evitar a perda do material seco. 2. Adicione 55 µl de água padrão molecular Helix Elite ao tudo de Padrão Molecular Helix Elite. 3. Incube o tubo de Padrão Molecular Helix Elite em 2 C a 8 C por 15 minutos e deixe reidratar por completo. 4. Misture o Padrão Molecular Helix Elite hidratado pipetando suavemente várias vezes para cima e para baixo. Não use o vórtice, pois isto pode danificar os ácidos nucleicos. 5. Centrifugue por breves instantes para assegurar que todo o líquido esteja no fundo do tubo. 6. Faça a alíquota de 10 μl do Padrão Molecular sintético reidratado Helix Elite em 5 tubos de microcentrífuga novos e rotulados. Armazene as alíquotas a temperatura de -20 C ou inferior. Estes tubos são tubos de estoque concentrados que devem voltar a ser diluídos para o uso em análises moleculares. B. Diluição e uso As instruções a seguir descrevem como voltar a diluir os padrão molecular para uso como controle positivo em análises moleculares. 1. Obtenha uma alíquota do Padrão Molecular Helix Elite reidratado. Se necessário, descongele a alíquota em 2 C a 8 C por 15 minutos e centrifugue por breves instantes. 2. Adicione 90 µl de água padrão molecular Helix Elite no tubo contendo 10 µl de Padrão Molecular Helix Elite reidratado. Misture suavemente pipetando para cima e para baixo várias vezes. 3. Utilize 5 µl do Padrão Molecular Helix Elite diluído para cada reação de controle positivo e teste de acordo com o protocolo adequado para a análise molecular sendo usada. Página 2 de 6

3 4. O restante 95 µl de Padrão Molecular Helix Elite diluído deve ser ainda mais aliquotado em volumes de uso único para evitar congelamento-descongelamento do material. Armazene todos os tubos das alíquotas do Padrão Molecular Helix Elite diluídos a temperatura de -20 C ou inferior. Estes tubos estão totalmente diluídos e prontos a serem usados em análises moleculares. C. Cálculos 1. Para calcular a concentração final de cada reação PCR, utilize a seguinte equação, considerando 5 µl do padrão molecular sendo usado na reação PCR: Número da cópia por reação = Número de Cópia do Padrão Molecular Helix Elite volume de rehidratação 55 µl x fator de diluição 10 5 µl por reação 2. Para determinar a concentração do padrão molecular necessário para obter um número específico de cópia por reação PCR, utilize a seguinte equação: Concentração (Número de cópia/µl) = Número da cópia por reação Volume do Modelo (µl por reação) ARMAZENAMENTO E VALIDADE Os Padrões Moleculares Helix Elite sintéticos devem ser armazenados a 2 C a 25 C na embalagem original até a data de validade indicada. Após abertura da bolsa de alumínio, reidrate, aliquote e use/ armazene imediatamente. Após a reidratação, os Padrões Moleculares Helix Elite sintéticos devem ser armazenados a temperatura de -20 C ou inferior. Recomenda-se armazenar o Padrão Moleculare Helix Elite sintético hidratado em altas concentrações e em temperaturas ultra baixas (< -70 C) para uma estabilidade ótima. Os Padrões Moleculares Helix Elite sintéticos não devem ser utilizados se: Forem armazenados de forma inadequada Houver indícios de exposição excessiva ao calor ou umidade Estiverem fora da data de validade LIMITAÇÕES Este produto não é adequado para o uso em todos os kits e procedimentos. ESTABILIDADE Material genético, em especial RNA, pode degradar facilmente. Sempre faça uso de práticas laboratoriais adequadas para evitar contaminação ou perda de material genético. Use somente tubos e pontas livres de pirogênio. Página 3 de 6

4 VALORES ESPERADOS A informação do número específico da cópia do lote é fornecido em um Certificado de Análise para cada Padrão Molecular Helix Elite sintético. A diluição do Padrão Molecular Helix Elite de acordo com estas instruções fornecerá material suficiente para 100 reações PCR. Para PCR em tempo real, os valores Ct observados para o Padrão Molecular Helix Elite sintético devem variar de 25 a 30, dependendo da diluição, desempenho da análise e instrumento. ESTADO MICROBIOLÓGICO Os ácidos nucleicos no Padrão Molecular Helix Elite sintético não derivam do micro-organismo alvo. Não há material viável presente. GUIA DE SÍMBOLOS Representante autorizado na Comunidade Europeia Código do lote (Lote) Número do catálogo Advertência - consulte os documentos anexados: Atenção - veja as instruções de uso Marca CE Contagem Perigo de saúde Dispositivo médico in vitro Fabricante Consulte as instruções de uso Telefone Limitação de temperatura Usar até GARANTIA DO PRODUTO Estes produtos têm garantia de conformidade com as especificações e desempenho impressos e ilustrados nos respectivos folhetos informativos, instruções e literatura de apoio. A garantia, expressa ou implícita, é limitada quando: Os procedimentos utilizados no laboratório são contrários às orientações impressas e ilustradas e às instruções Os produtos são utilizados para aplicações além do uso pretendido citado nos folhetos informativos, instruções e literatura de apoio Página 4 de 6

5 AVISO AOS COMPRADORES A aquisição deste produto permite ao comprador utilizá-lo para o uso de diagnóstico in vitro, pesquisa e controle de qualidade. Não é permitida nenhuma patente geral ou outra licença de qualquer tipo além do direito específico de uso da aquisição. Outros direitos não são expressamente transmitidos, por implicação ou preclusão a qualquer outra patente. Mais ainda, os direitos de revenda não são conferidos ao comprador deste produto. Compradores não devem tentar alterar ou reverter a engenharia (ou de outra forma determinar a estrutura ou sequência química) do produto. Este padrão molecular quantificado foi desenhado para ser usado como controle positivo em análises PCR ou transcrições PCR reversas onde as sequências iniciadoras e/ou de procura são suficientes para hibridizar o padrão. A quantificação do padrão pode variar por análise ou plataforma de instrumento. Usuários devem reconhecer que este produto é ácido nucleico purificado quando considerarem seu uso como controle de extração. O logo da Microbiologics e Helix Elite são marcas comerciais registradas da Microbiologics, Inc. O processo PCR é protegido pelas patentes pertencentes à Roche Molecular Systems, Inc. e F. Hoffmann-La Roche, Ltd. Uma licença é exigida para a prática do processo PCR patenteado. Todas as outras marcas comerciais são de propriedade exclusiva de seus respectivos proprietários. SITE Visite o nosso site, para informações técnicas atualizadas e disponibilidade do produto. RECONHECIMENTOS Microbiologics, Inc. 200 Cooper Avenue North St. Cloud, MN USA Atendimento ao cliente Tel Ligação grátis nos EUA BUGS (2847) info@microbiologics.com Medimark Europe 11, rue Emile Zola B.P Grenoble Cedex 2, France Tel. 33 (0) Fax. 33 (0) info@medimark-europe.com Assistência técnica Tel Ligação grátis nos EUA: techsupport@microbiologics.com Página 5 de 6

6 INSTRUÇÕES ILUSTRADAS Padrões Moleculares Helix Elite sintéticos incluem: 1 frasco de DNA ou RNA sintético, 1 frasco de água padrão molecular e um certificado de autenticidade 1 Reidratação 2 3 Abra a bolsa de alumínio e então centrifugue o tubo de Padrão Molecular Helix Elite sintético antes de abrir o tubo de forma a evitar a perda do material seco. Adicione 55 μl de água padrão molecular Helix Elite ao tubo de Padrão Molecular Helix Elite. Incube o tubo de Padrão Molecular Helix Elite a 2 C a 8 C por 15 minutos para a reidratação total. 4 6 Misture o Padrão Molecular Helix Elite hidratado pipetando suavemente para cima e para baixo diversas vezes. Faça a alíquota de 10 μl do Padrão Molecular Helix Elite sintético reidratado em 5 tubos de microcentrífuga novos e rotulados. Não use o vórtice, pois isto pode danificar os ácidos nucleicos Adicione 90 μl de água padrão molecular Helix Elite no tubo contendo 10 μl de Padrão Molecular Helix Elite reidratado. Misture suavemente pipetando para cima e para baixo diversas vezes. Armazene as alíquotas a temperatura de -20 C ou inferior. Estes tubos são tubos concentrados de estoque que devem ser diluídos novamente para uso em análises moleculares. Use 5 μl do Padrão Molecular Helix Elite diluído para cada reação com controle positivo e teste de acordo com o protocolo adequado para a análise molecular sendo utilizada. Centrifugue por breves instantes para assegurar que todo o líquido esteja no fundo do tubo. Diluição e uso Obtenha uma alíquota do Padrão Molecular Helix Elite reidratado. Se necessário, descongele a alíquota a 2 C a 8 C por 15 minutos e centrifugue por breves instantes. Do restante 95 ml do Padrão Molecular Helix Elite TM diluído devem ser feitas mais alíquotas em volumes de uso único para evitar o congelamento-descongelamento do material. Armazene todos os tubos de alíquotas de Padrão Molecular Helix Elite diluídos a temperatura de -20 C ou inferior. Estes tubos estão totalmente diluídos e prontos a serem utilizados em análises moleculares. Página 6 de 6