Relatório de Actividade Profissional

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1 Relatório de Actividade Profissional Mestrado em Análises Clínicas, 2007/2009 Faculdade de Farmácia da Universidade do Porto O rientador do Mestrado: Professor Doutor Francklim Marques O rientador do Estágio Profissional: Doutora G raça Salcedo Realizado por: Sónia Maria Freitas Socorro da Costa

2 Agradecimentos G o s t a r i a d e a g r a d e c e r e m p a r t i c u l a r à D o u t o r a G r a ç a S a l c e d o p o r p e r m i t i r q u e f a ç a p a r t e d e u m a E q u i p a d e P r o f i s s i o n a i s c o m o a q u e e x i s t e n o L a b o r a t ó r i o C l í n i c o - E n d o c l a b. A o l o n g o d o s a n o s, c o m e s t a e q u i p a e u a p r e n d i, c r e s c i e e v o l u i. T a m b é m q u e r o a g r a d e c e r c o m c a r i n h o a t o d a s a s m i n h a s c o l e g a s, e s p e c i a l m e n t e d o G r u p o T é c n i c o, q u e m e r e c e b e r a m e e n s i n a r a m m u i t o d o q u e s e i h o j e. E s p e r o p o d e r c o n t r i b u i r a i n d a m a i s c o m aqui l o q u e d e n o v o a p r e n d i. P o r ú l t i m o, m a s n ã o m e n o s i m p o r t a n t e, q u e r i a a g r a d e c e r a o p o r t u n i d a d e q u e a F a c u l d a d e d e F a r m á c i a d a U n i v e r s i d a d e d o P o r t o m e d e u e m p a t i c i p a r n e s t e c u r s o d e M e s t r a d o e m A n á l i s e s C l í n i c a s, n o m e a d a m e n t e a o P r o f e s s o r F r a n c k i m, e a t odo o grupo de docentes e c o n v i d a d o s q u e p a r t i l h a r a m c o n n o s c o o s s e u s c o n h e c i m e n t o s e t r a b a l h o s. B e m c o m o a o s m e u s c o l e g a s d e c u r s o, c u j a e x p e r i ê n c i a p r o f i s s i o n a l t a m b é m c o n t r i b u i u p a r a u m a n o v a a b o r d a g e m d e d i f e r e n t e s t e m a s. P o r f i m q u e r i a s ó r e f e r i r a i m p o r t â n c i a q u e e s t e M e s t r a d o t e v e p a r a m i m p e r m i t i n d o e x p a n d i r o s m e u s c o n h e c i m e n t o n a á r e a d a s a n á l i s e s c l í n i c a s, p a r a m e l h o r c o n t r i b u i r p a r a a e f i c i ê n c i a d e u m a e q u i p a d e p r o f i s s i o n a i s n o s d i a s d e h o j e. 2

3 ÍNDICE 1 INTRODUÇÃO 8 2 MÉTODOS Quimioluminescência Autoanalisador: IMMUITE 2000 Siemens Systems Princípio De Funcionamento Calibração Ensaios Imunométricos Ensaios Competitivos Radioimunoensaio Contador de Raios G amma LKB Wallace Princípio De Funcionamento Calibração RIA I RMA ELFA Autoanalisador: VIDAS Principio de Funcionamento Calibração CONTROLO DE QUALIDADE INTERNO 17 4 CONTROLO DE QUALIDADE EXTERNO 18 5 TRANSMISSÃO E VALIDAÇÃO DE RESULTADOS 19 6 TIRÓIDE Introdução Interesse Clínico dos Testes à Função da Tiróide Hormona Estimulante da Tiróide Tiroxina T4 Livre Triiodotironina T3 Livre Tiroglobulina Anticorpos Anti - Tiroideus A n t i c o r p o s A n t i - M i c r o s s o m a i s A n t i c o r p o s A n t i - T i r o g l o b u l i n a Anticorpos Anti-receptores de TSH 23 7 SUPRA RENAL Introdução Interesse Clínico dos Testes à Função das Supra-Renais Cortisol (ou Hidrocortisona) Hormona Adrenocorticotrófica Aldosterona Renina Hidroxiprogesterona 26 3

4 8 SISTEMA REPRODUTOR Introdução Interesse Clínico das Horm onas Envolvidas no Sistema Reprodutor Hormona Luteínica Hormona Folículo Estimulante Estradiol Progesterona Testosterona Testosterona Livre G lobulina de Ligação às Hormonas Sexuais androstenediona Dehidroepiandrosterona Sulfato Prolactina e Macroprolactina P r o l a c t i n a M a c r o p r o l a c t i n a G onadotropina Coriónica Humana 33 9 DISTÚRBIOS METABÓLICOS Anemias Ferritina Vitamina B12 (Cianocobalamina) Ácido Fólico (Vitamina B9) Diabetes I nsulina Péptido C Metabolismo do Cálcio Paratormona Anomalias no Crescimento Hormona do Crescimento I GF MARCADORES TUMORAIS Introdução Screening e Detecção Precoce do Cancro Diagnóstico Prognóstico Avaliação da Resposta ao Tratamento Detecção da Rec orrência do Cancro Interesse Clínico de MT Alfa-Fetoproteína βeta-2-microglobulina G onadotropina Coriónica Humana 43 4

5 CA C A C A C A Calcitonina Antigénio Carcinoembrionário Antigénio Específico Da Próstata PSA Livre Tiroglobulina IMUNOALERGOLOGIA Introdução IgE Total: Imunoglobulina E IgE s específicas Atopia a Alergénios Inalantes e Alimentares SEROLOGIA INFECCIOSA Hepatite B HbsAg Anti-HBs Anti-HBc IgM Anti-HBc Total HbeAg Anti-Hbe Rubéola RUB IgG RUB IgM Toxoplasmose Toxo IgM Toxo IgG Avidez das IgG Citomegalovírus CMV IgM CMV IgG Avidez das IgG RASTREIO PRÉ-NATAL Rastreio do 1º Tr imestre PAPP-A hcg Livre Rastreio do 2º Trimestre Alfafetoproteína Estriol Não-Conjugado hcg Controlo de Qualidade 61 MONOGRAFIA 6 2 5

6 Lista de Abreviaturas Ac Ac* ACE ACTH ADN AEQ AFP AFP-LA Ag Ag* AND ATA ATG - HCG B2M Ca 2+ Anticorpo Anticorpo marcado Enzima Conversora da Angiotensina Hormona Adrenocorticotró pica, Corticotropina Ácido desoxirrib o nucléico Avaliação Externa da Qualidade Alfafetoproteína Alfafetoproteína no líquido amniótico Antigénio Antigénio marcado 4-androstenediona Anticorpos Anti - m icrossomais, Anti - peroxidase Anticorpos Anti-tiroglobulina G onadotropina Coriónica Humana - 2-Microglobulina Cálcio iónico G licoproteínas mucinas Antigénio Carcinoembrionário Citomegalovírus Cortisol, Hidrocortisona Cancro da Próstata Contage m por segundo Controlo de Qualidade Interna Factor de Libertação de Corti cotropina Coficiente de Variação Dehidroepiandrosterona Dehidroepiandrosterona Sulfato Dihidrotestosterona Defeitos do Tubo Neural Enzyme Linked Fluorescent Assay 17 -estradiol, Estradiol Ferritina Antigénio Específico Da Próstata, fracção livre Hormona Folículo Estimulante Hormona do crescimento, Somatotrofina Hormona de Libertação do GH Hormona de Libertação das Gonadotropinas Hiperplasia Benigna da Próstata Antigénio do core do HBV Antigénio do envelope do HBV Antigénio de superfície do HBV Vírus da Hepatite B Hepatite B Hipertensão Arterial I nterferon I m unoglobulina E CA CEA CMV COR CP CPS CQI CRF CV DHEA DHEA-s DHT DTN ELFA E2 FER f PSA FSH GH G HRH G nrh HBP HBcAg HBeAg HBsAg HBV HpB HTA I FN- I ge IGF-1 I nsulin-like Growth factor 1 I G FBP-4 Proteína de Ligação - 4 da IGF 6

7 I gm I m unoglobulina M I gg I m unoglobulina G IL I nsulina I M M 2000 Autoanalisador Immulite 2000 I NS I nsulina I PQ I nstituto Portug uês da Qualidade I RC I nsufuciência Renal Crónica I RMA Ensaio Imunoradiométrico K Potássio LA Líquido Amniótico LIS Laboratory of Intelligent Systems LH Hormona Luteínica MT M arcadores Tumorais Na Sódio PAPP-A Pregnancy-Associated Plasma Protein A PEG Polietileno glicol Pep-C Péptido C PO Procedimento Operativo PRG Progesterona PRL Prolactina PSA Antigénio Específico Da Próstata PTH Paratormona RAS Sistema Renina - Angiotensina-Aldosterona RFV Relative Fluorescence V alue RIA Radioimunoensaio RUB Rubéola SD Desvio Padrão SHBG G lobulina de Ligação às Hormonas Sexuais SLO Síndrome Smith - Lemli-Opitz SPR Solid Phase Receptacle TBG G lobulina de Ligação às Hormonas da Tiróide TG Tiroglobulina TN Translucência da Nuca TNF- Factor de Necrose Tumoral TRAb Anticorpos Anti - r eceptores de TSH TRH Hormona de Libertação de TSH TSH Hormona Estimulante da Tiróide T3L Triiodotironina, fracção livre T4L Tiroxina, fracção livre T3 Triiodotironina T4 Tiroxina T 18 Trissomia 18 T 21 Trissomia 21 ue3 Estriol não conjugado VB12 Vitamina B12 1ºT 1º Trimestre de Gravidez 2ºT 2º Trimestre de Gravidez 17-OHP 17-Hidroxiprogesterona [ X] Concentração de X 7

8 1 INTRODUÇÃO O E n d o c l a b - Labora t ó r i o d e E n d o c r i n o l o g i a e P a t o l o g i a C l í n i c a, D o u t o r I. S a l c e d o, S A., é u m L a b o r a t ó r i o M é d i c o, f u n d a d o p e l o D o u tor Ignácio de Salcedo em A D i r e c ç ã o a c t u a l e n c o n t r a - s e a c a r g o d a D r a G r a ç a S a l c e d o, M é d i c a E s p e c i a l i s t a e m P a t o l o g i a C l í n i c a. O E n d o c l a b dá apoio a o u t r o s L a b o r a t ó r i o s, p ú b l i c o s e p r i v a d o s, b e m c o m o M é d i c o s, S e r v i ç o s H o s p i t a l a r e s e à I n d ú s t r i a F a r m a c ê u t i c a, e m t r a b a l h o s c l í n i c o s d e i n v e s t i g a ç ã o. O E n d o c l a b t e m t o d o o i n t e r e s s e e m c o l a b o r a r e m p r o t o c o l o s d e i n v e s t i g a ç ã o p r i m á r i a o u a p l i c a d a n o â m b i t o d e m e s t r a d o s, d o u t o r a m e n t o s o u e s t u d o s e p i d e m i o l ó g i c o s, a s s i m c o m o e m c a m p a n h a s d e d i v u l g a ç ã o e p r o m o ç ã o n o â m b i t o d a S a ú d e P ú b l i c a. N a h i s t ó r i a d o E n d o c l a b é d e r e f e r i r q u e f o i o p r i m e i r o l a b o r a t ó r i o c l í n i c o a s e r A c r e d i t a d o p e l o I n s t i t u t o P o r t u g u ê s d a Q u a l i d a d e ( I P Q ), e m F e v e r e i r o d e ( N P E N ). A a c r e d i t a ç ã o é a a v a l i a ç ã o, p o r u m a e n t i d a d e e x t e r n a c o m p e t e n t e, d a c o n f o r m i d a d e c o m a n o r m a a d o p t a d a p e l o l a b o r a t ó r i o, q u e l h e p e r m i t e o r e c o n h e c i m e n t o d a s u a c o m p e t ê n c i a. A c t u a l m e n t e o Enc o c l a b e n c o n t r a - s e A c r e d i t a d o p e l a N o r m a E N I S O / , e s p e c í f i c a p a r a l a b o r a t ó r i o s c l í n i c o s. A A c r e d i t a ç ã o s e g u n d o a N o r m a N P E N I S O / p e r m i t e o r e c o n h e c i m e n t o f o r m a l d a i m p l e m e n t a ç ã o d e u m S i s t e m a d e G a r a n t i a d a Q u a l i d a d e n o l a b o r a t ó r i o q u e i n c l u i a g e s t ã o d e t o p o, r e c u r s o s h u m a n o s c o m p e t e n t e s, i n f r a - e s t r u t u r a s e e q u i p a m e n t o s a d e q u a d o s, e a m e l h o r i a c o n t í n u a, b e m c o m o o r e c o n h e c i m e n t o d a s u a c o m p e t ê n c i a t é c n i c a. Q u a l i d a d e n ã o é n a d a m a i s, n a d a m e n o s d o q u e g a r a n t i r a c o n f o r m i d a d e d o p r o d u t o o u s e r v i ç o c o n s e g u i n d o a t o t a l s a t i s f a ç ã o d o c l i e n t e. O S i s t e m a d a Q u a l i d a d e é t o d a a e s t r u t u r a o r g a n i z a c i o n a l, p r o c e d i m e n t o s e r e c u r s o s n e c e s s á r i o s à i m p l e m e n t a ç ã o d a G e s t ã o d a Q u a l i d a d e. A G e s t ã o d a Q u a l i d a d e é o c o n j u n t o d e a c t i v i d a d e s n e c e s s á r i a s a o c o n t r o l o, g a r a n t i a e m e l h o r i a da qualidade assumida. O p r o c e s s o a n a l í t i c o p o d e s e r r e s u m i d o e m 3 f a s e s d i s t i n t a s, e c a d a u m a d e l a s e s t á s u j eita a erros de natureza d i v e r s a que pode afectar o r e s u l t a d o f i n a l, d a í a n e c e s s i d a d e d e i m p l a n t a r u m S i s t e m a d e G a r a n t i a d a Q u a l i d a d e. Fase P ré- a n a l í t i c a : a g r u p a t o d o s o s p r o c e s s o s e n v o l v i d o s d e s d e q u e o u t e n t e c h e g a a o l a b o r a t ó r i o até a o m o m e n t o d a r e a l i z a ç ã o d a a n á l i s e ( a t e n d i m e n t o e i n s c r i ç ã o do utente, r e q u i s i t o s d a c o l h e i t a, o b t e n ç ã o e c o n s e r v a ç ã o d o p r o d u t o biológico, a r m a z e n a m e n t o d o p r o d u t o a t é s e r e x e c u t a d a a a m o s t r a, e t c. ) Realizado por Sónia Costa 8

9 F ase A n a lítica: c o r r e s p o n d e à f a s e d e r e a l i z a ç ã o d a a n á l i s e, s e n d o i m p o r t a n t e r e f e r i r o s p a s s o s d e m a n u t e n ç ã o e a r r a n q u e do equipamento; calibração da análise; controlo rigoroso da qualidade inclui n d o C Q I e A E Q : p r e p a r a ç ã o d a s a m o s t r a s a a n a l i s a r ; e p o r f i m, a v a l i d a ç ã o t é c n i c a d o s r e s u l t a d o s ( o n d e c o m p e t ê n c i a e f o r m a ç ã o t é c n i c a s ã o f u n d a m e n t a i s ) Fase P ós- a n a l í t i c a : a v a l i a ç ã o f i n a l d e t o d o s o s r e s u l t a d o s, i s t o é, t r a n s f o r m a ç ã o d e u m a i n s c r i ç ã o c o m v a l i d a ç ã o biopatológica, emissão e entrega do boletim analítico. C o n s e r v a ç ã o d a a m o s t r a e e l i m i n a ç ã o d e p r o d u t o s. A G a r a n t i a d a Q u a l i d a d e p e r m i t e t e r d o m í n i o n a o r g a n i z a ç ã o d e t o d a s a q u e l a s t a r e f a s i n c l u i n d o t a m b é m p r o c e d i m e n t o s d e c o n t r o l o t a i s c o m o C Q I e A E Q. U m d o s r e q u i s i t o s d a G e s t ã o d a Q ualidade é a i m p l e m e n t a ç ã o d a s a c ç õ e s n e c e s s á r i a s a u m a M e l h o r i a C ontínua: A c ç õ e s c o r r e c t i v a s e p r e v e n t i v a s. A p r i m e i r a d i z r e s p e i t o à a c ç ã o a d o p t a d a p a r a e l i m i n a r a c a u s a d e u m a n ã o c o n f o r m i d a d e, e n q u a n t o q u e u m a a c ç ã o p r e v e n t i v a p r e t e n d e e l i m i n a r a c a u s a d e u m a p o t e n c i a l n ã o c o n f o r m i d a d e o u d e u m a p o t e n c i a l s i t u a ç ã o i n d e s e j á v e l. O E n d o c l a b t e m à d i s p o s i ç ã o o s s e g u i n t e s s e r v i ç o s : A n á l ises d e  m b i t o G e r a l ; H e m a t o l o g i a e C o a g u l a ç ã o ; B i o q u í m i c a ; M i c r o b i o l o g i a ; S e r o l o g i a I n f e c c i o s a ; E n d o c r i n o l o gia; T o x i c o l o g i a e F á r m a c o s ; I m u n o l o g i a h u m o r a l ; I m u n o l o g i a c e l u l a r ; M a r c a d o r e s t u m o r a i s ; I m u n o a l e r g o l o g i a. E ainda o R a s t r e i o P r é - N a t a l d e m a l f o r m a ç õ e s f e t a i s n o 1 º e 2 º T r i m e s t r e d a g r a v i d e z ; R a s t r e i o P r é - N a t a l S t r e p t o c o c o s t i p o B ; C i t o g e n é t i c a L a b o r a t o r i a l ; B i o l o g i a M o l e c u l a r L a b o r a t o r i a l. A o r g a n i z a ç ã o d o E n d o c l a b s e g u e u m a g e s t ã o d e t o p o, onde a h i e r a r q u i a t e m d e s e r r e s p e i t a d a. O l a b o r a t ó r i o t é c n i c o e n c o n t r a - s e o r g a n i z a d o p o r á r e a s. E m c a d a u m a d e l a s t e m o s o r e s p o n s á v e l e o s t é c n i c o s n e c e s s á r i o s a o d e s e m penho da rot i n a. O s R e s p o n s á v e i s d e Á r e a r e s p o n d e m s e m p r e q u e n e c e s s á r i o a o R e s p o n s á v e l d o g r u p o T é c n i c o, e e s t e a o D i r e c t o r C l í n i c o. S ó a s s i m é p o s s í v e l m a n t e r u m a c a d e i a d e a c o n t e c i m e n t o s s o b c o n t r o l o e d e c o n h e c i m e n t o g e r a l, p a r a q u e o r e s u l t a d o f i n a l s e j a o d e s e j a d o. A á r e a à q u a l e u p e r t e n ç o e s o u R e s p o n s á v e l de Á r e a é a da L u m i n e s c ê n c i a, i n c l u i n d o a q u i t o d a s a s a n á l i s e s r e a l i z a d a s p o r e s t e m é t o d o de leitura. E m s e g u i d a, s ã o i d e n t i f i c a d o s o s m é t o d o s e r e f e r i d a s a s a n á l i s e s r e a l i z a d a s n e s t a á r e a e u m p e q u e n o r e s u m o q u a n t o à s u a i m p o r t â n c i a a n í v e l d e u m l a b o r a t ó r i o c l í n i c o. Realizado por Sónia Costa 9

10 2 MÉTODOS 2.1 Quimioluminescência Autoanalisador : IMMULITE 2000 Siemens Systems E s t e a u t o a n a l i s a d o r e f e c t u a i m u n o e n s a i o s d e q u i m i o l u m i n e s c ê n c i a, c o m i n t e r f a c e L I S, q u e p e r m i t e a u t o - p r o g r a m a r a s a n á l i s e s p o r i n s c r i ç ã o e e n v i a r o s r e s p e c t i v o s r e s u l t a d o s p a r a o c o m p u t a d o r c e n t r a l. R e a l i z a a n á l i s e s v a r i a d a s d o â m b i t o da e n d o c r i n o l o g i a, i m u n o s e r o l o g i a, s e r o l o g i a i n f e c c i o s a, a l e r g o l o g i a, m a r c a d o r e s t u m o r a i s, r a s t r e i o p r é - natal, entre outros Princípio De Fu ncionamento E s t e s i s t e m a u s a c o m o f a s e s ó l i d a e s f e r a s d e p o l i e s t i r e n o r e v e s t i d a s c o m a n t i c o r p o s e s p e c í f i c o s. A e s f e r a r e v e s t i d a é d i s p e n s a d a n u m tubo de reacção próprio (e por ensaio) que servirá de reci p i e n t e p a r a q u e o c o r r a a r e a c ç ã o i m u n o l ó g i c a d u r a n t e u m p e r í o d o d e i n c u b a ç ã o, d e l a v a g e m e e m i s s ã o d o s i n a l. A p ó s i n c u b a ç ã o c o m a e s f e r a, a a m o s t r a s o f r e u m a s e g u n d a incubação com o reagente d e f o s f a t a s e a l c a l i n a. E n t r e i n c u b a ç õ e s, o tubo de reacção passa por lavagens sucessivas num espaço de s e g u n d o s q u e o c o r r e m p o r u m s i s t e m a d e c e n t r i f u g a ç ã o, q ue p e r m i t e r e m o v e r e x c e s s o s d e r e a g e n t e s. N o f i n a l d e s t e p r o c e s s o, a e s f e r a e n c o n t ra- s e t o t a l m e n t e d e s p r o v i d a d e m o l é c u l a s n ã o l i g a d a s. A c a m a d a l i g a d a à e s f e r a é, então, q u a n t i f i c a d a u s a n d o u m s u b s t r a t o q u i m i o l u m inescente próprio. A reacção quimioluminescente consiste a s s i m n a r e a c ç ã o d o d i o x e t a n o ( o s u b s t r a t o ) c o m a e n z i m a f o s f a t a s e a l c a l i n a. E s t a e n z i m a, q u e s e e n c o n t r a a s s o c i a d a a o c o m p l e x o f o r m a d o n a e s f e r a, d e s f o s f o r i l a o d i o x e t a n o n u m i n t e r m e d i á r i o a n i ó n i c o i n s t á v e l q u e e m i t e u m f o t ã o a q u a n d o d a s u a d e c o m p o s i ç ã o. A q u a n t i d a d e d e l u z e m i t i d a s e r á d e t e c t a d a p e l o f o t o m u l t i p l i c a d o r e quantificada. Nos ensaios u l t r a - s e n s í v e i s a s c o n t a g e n s c h e g a m a a t i n g i r v á r i a s c e n t e n a s d e m i l h õ e s d e c p s. P a r a q u e a s c o n t a g e n s s e j a m o m a i s p r e c i s a s p o s s í v e l, e x i s t e u m a t e n u a d o r f r e n t e a o f o t o m u l t i p l i c a d o r. A quantidade de luz emitida será directamente proporcional à quantidade de fosfatase alcalina ligada, nos imunoensaios do tipo s a n d w i s h, o u i n v e r s a m e n t e p r o p o r c i o n a l n o c a s o d o s e n s a i o s c o m p e t i t i v o s. P a r a d e t e r m i n a r a s c o n c e n t r a ç õ e s c o r r e s p o n d e n t e s a o s i n a l m e d i d o, o s o f t w a r e c o n s u l t a n a b a s e d e d a d o s o s p a r â m e t r o s d a C u r v a d e C a l i b r a ç ã o que s ã o e s p e c í f i c o s p a r a c a d a a n a l i t o e o s e u l o t e d e k i t. Realizado por Sónia Costa 10

11 2.1.3 Calibração O m é t o d o d e c a l i b r a ç ã o d e s t e a u t o a n a l i s a d o r, c o m o j á f o i r e f e r i d o, c o n s i s t e n u m a C u r v a d e C a l i b r a ç ã o d e f á b r i c a q u e é r e a l i z a d a p a r a c a d a r e a g e n t e ( l o t e d e k i t ), n u m ú n i c o a p a r e l h o, u s a n d o u m c o n j u n t o d e p a d r õ e s d o s e a d o c a d a u m d e l e s v á r i a s v e z e s. O n ú m e r o d e padrõ e s u s a d o é v a r i á v e l d e a c o r d o c o m o a n a l i t o e m q u e s t ã o, d e s d e s e i s a t é q u i n z e c o m o é o c a s o d o T S H. N e s t e e n s a i o d e c a l i b r a ç ã o s ã o i n c l u í d a s r é p l i c a s d e a j u s t e b a i x o e a l t o. D e s t a f o r m a s e c o n s t r ó i a c u r v a d e c a l i b r a ç ã o d e f á b r i c a, que é a r m a z e n a d a n a b a s e d e d a d o s s o b a f o r m a d e e q u a ç ã o. O s i s t e m a I m m u l i t e u s a d u a s f o r m a s d e e q u a ç ã o d a c u r v a, u m a p a r a o s e n s a i o s c o m p e t i t i v o s e o u t r a p a r a o s i m u n o m é t r i c o s d o t i p o s a n d w i c h. U m a v e z q u e s e t r a t a d e u m s i s t e m a m u i t o e s t á v e l ( r e a g e n t e e s t á v e l p o r l o n g o s p e r í o d o s, t e m p e r a t u r a s c o n t r o l a d a s, r e p r o d u t i b i l i d a d e d a s pipetagens, e t c. ) t o r n a - s e d e s n e c e s s á r i a a e x e c u ç ã o d e u m c u r v a d e c a l i b r a ç ã o a c a d a s é r i e d e t r a b a l h o. A c a l i b r a ç ã o p o r e s t e m é t o d o é u m a j u s t e a d o i s p o n t o s. C a d a l o t e d e k i t c o n t é m d o i s a j u s t e s, d e c o n c e n t r a ç õ e s b a i x a e a l t a ( c u j a s c o n c e n t r a ç õ e s / s i n a l s ã o d e t e r m i n a d a s n a c u r v a c a l i b r a ç ã o de f á b r i c a ), que n o l a b o r a t ó r i o d e v e r i a m d a r o m e s m o s i n a l q u e n o autoana l i s a d o r d e f á b r i c a. M a s n o entanto nenhum fotomultipicador p r o v o c a e x a c t a m e n t e o s m e s m o s c p s p a r a a m e s m a e n t r a d a d e fotão, p o r i s s o o s i n a l d e v e s e r a j u s t a d o p a r a i g u a l a r o s i n a l d e f á b r i c a. V i s t o q u e a r e l a ç ã o d o s s i n a i s o b t i d o s p o r a m b o s o s auto a n a l i s a d o r e s ( f á b r i c a e l a b o r a t ó r i o ) se t r a d u z n u m a l i n h a r e c t a ( r e c t a d e c o r r e l a ç ã o ), s ã o a p e n a s n e c e s s á r i o s 2 p o n t o s p a r a a d e f i n i r, p o n t o s e s s e s q u e c o r r e s p o n d e m a o s s i n a i s d e a m b o s o s a j u s t e s a l t o e b a i x o. A s s i m s e n d o, t r a ç a - s e a r e c t a d e c o r r e l a ç ã o e n t r e o s i n a l o b t i d o n o a u t o a n a l i s a d o r d e f á b r i c a c o m o d o labo r a t ó r i o. A e q u a ç ã o d e r e c t a o b t i d a é u s a d a p a r a t r a n s f o r m a r o s i n a l o b t i d o n o s i n a l q u e e v e n t u a l m e n t e s e o b t e r i a n o a u t o a n a l i s a d o r d e f á b r i c a : E q u a ç ã o : c p s c u r v a f á b r i c a = c p s a m o s t r a x D e c l i v e + I n t e r c e p ç ã o P o r f i m, o s i n a l c o n v e r t i d o é u s a d o p a r a c a l c u l a r a c o n c e n t r a ç ã o d i r e c t a m e n t e a p a r t i r d a c u r v a d e c a l i b r a ç ã o. A o l o n g o d o u s o d e u m k i t, a a c t i v i d a d e d a s e n z i m a s d o s r e a g e n t e s p o d e m s o f r e r a l t e r a ç õ e s e p a r a a s c o m p e n s a r d e v e r ã o s e r f e i t o s r e a j u s t e s. O s a j u s t e s e r e a j u s t e s d e v e r ã o s e r a v a l i a d o s, o q u e s i g n i f i c a q u e n ã o é s u f i c i e n t e q u e o s c o n t r o l o s d e q u a l i d a d e e s t e j a m d e n t r o d o s l i m i t e s p e r m i t i d o s. P a r a c a d a a p a r e l h o s ã o r e g i s t a d o s t o d o s o s v a l o r e s d e d e c l i v e o b t i d o s p a r a t o d o s o s a j u s t e s f e i t o s e p a r a c a d a p a r â m e t r o, c a l c u l a - s e a m é d i a e 2 0 % d e s s e v a l o r é o l i m i t e a c e i t á v e l. Realizado por Sónia Costa 11

12 Uma i n t e r c e p ç ã o a c e i t á v e l d e v e r á s e r i n f e r i o r a 3 0 % d o v a l o r d o c p s do a j u s t e b a i x o, i s t o p o r q u e u m a v a r i a ç ã o d e 3 0 % a c a r r e t a u m i m p a c t o m í n i m o n a s r e s p o s t a s d o s r e s u l t a d o s c o m c p s m a i s b a i x o s. E s t a s p e r c e n t a g e n s d e f i n i d a s c o m o c r i t é r i o s d e a c e i t a ç ã o f o r a m d e t e r m i n a d a s a t r a v é s d e e s t u d o s d e v a l o r e s c u m u l a t i v o s d e c o n t r o l o de qualidade interno Ensaios Imunométricos P a r a o s i m u n o e n s a i o s q u i m i o l u m i n e s c e n t e s o s i s t e m a u s a a s e s f e r a s r e v e s t i d a s p o r u m a c a m a d a d e a n t i c o r p o s ( o A c é e s p e c í f i c o p a r a o A g q u e s e p r e t e n d e q u a n t i f i c a r ) o n d e s e v a i l i g a r, a p ó s i n c u b a ç ã o, a o A g d a a m o s t r a ( d e s c o n h e c i d a o u c o n h e c i d a n o c a s o d o s c o n t r o l o s e a j u s t e s ) f o r m a n d o c o m p l e x o s e s t á v e i s. P o s t e r i o r m e n t e, à e s f e r a v a i - se l i g a r u m 2 º A c m a r c a d o c o m f o s f a t a s e a l c a l i n a, f o r m a n d o - s e c o m p l e x o s t i p o s a n d w i c h. A p ó s a d i ç ã o d o s u b s t r a t o q u i m i o l u m i n e s c e n t e, é o b t i d o o s i n a l e d e p o i s quantificado. A r e l a ç ã o e n t r e [ A g ] d a s a m o s t r a s e o s i n a l o b t i d o é d i r e c t a Ensaios Competitivos O p r i n c í p i o b á s i c o d e f u n c i o n a m e n t o d o i m u n o e n s a i o q u i m i o l u m i n e s c e n t e c o m p e t i t i v o c o n s i s t e n u m a f a s e s ó l i d a. D e n t r o do tubo de reacção é adicionado a esfera, a amostra e o reagente f o r m a d o p o r u m A g m a r c a d o c o m u m l i g a n d o. E s t e c o m p l e x o c o m p e t e c o m o A g d a a m o s t r a p e l o s l u g a r e s d e l i g a ç ã o à e s f e r a. R e m o v e - s e os e x c e s s o n ã o r e a c t i v o, e é a d i c i o n a d o o 2 º r e a g e n t e c o m a n t i - ligando associado à f o s f a t a s e a l c a l i n a. E s t e l i g a - s e a o c o m p l e x o A g - Ligando f o r m a ndo u m c o m p l e x o c o m o A c d a e s f e r a. É, p o r f i m, a d i c i o n a d o o s u b s t r a t o q u i m i o l u m i n e s c e n t e p a r a a q u a n t i f i c a ç ã o d o s i n a l. O s i n a l o b t i d o s e r á i n v e r s a m e n t e p r o p o r c i o n a l à c o n c e n t r a ç ã o d o analito. 2.2 Radioimunoensaio P o r e s t e m étodo s ã o e f e c t u a das a n á l i s e s d o â m b i t o d a e n d o c r i n o l o g i a. A v a n t a g e m d o u s o d e s t e m é t o d o e s t á n a s u a e l e v a d a s e n s i b i l i d a d e, p e r m i t i n d o q u a n t i f i c a r c o n c e n t r a ç õ e s b a i x a s q u e p o r o u t r o s m é t o d o s n ã o s e r i a p o s s í v e l. O s n o v o s m a r c a d o r e s b i o q u í m i c o s ( c o m o p o r e x e m p l o u s a d o s n o e s t u d o d a o b e s i d a d e ) s ã o h a b i t u a l m e n t e p r o d u z i d o s p r i m e i r o p a r a r a d i o i m u n o e n s a i o p r e c i s a m e n t e p e l o s e u m e n o r c u s t o e m a i o r e s t a b i l i d a d e d o s e n s a i o s. Realizado por Sónia Costa 12

13 2.2.1 Contador de Raios G amma LKB Wallace E s t e i n s t r u m e n t o d e t e c t a e q u a n t i f i c a o s r a i o s g a m m a e m i t i d o s p e l o s r a d i o i s ó t o p o s. T e m a s s o c i a d o u m s o f t w a r e q u e r e g i s t a a s c u r v a s d e c a l i b r a ç ã o e d á o v a l o r d a c o n c e n t r a ç ã o o b t i d a e m f u n ç ã o d o s i n a l Princípio De Funcionamento O m é t o d o d e R I A com b i n a a e l e v a d a e s p e c i f i c i d a d e ( i n e r e n t e á s r e a c ç õ e s i m u n o l ó g i c a s ) c o m a e l e v a d a s e n s i b i l i d a d e d a d e t e c ç ã o c o m r a d i o i s ó t o p o s ( u s a n d o a n t i c o r p o s d e a l t a a f i n i d a d e ). S e n d o a s s i m, e s t e m é t o d o é a i n d a m u i t o ú t i l p a r a a d e t e c ç ã o d e pequenas quantidades de analitos (na ordem dos nano e p i c o g r a m a s ), b e m c o m o n a m o n i t o r i z a ç ã o d e d o e n ç a s m e t a b ó l i c a s e n e o p l a s i a s d e v i d o à s u a b o a r e p r o d u t i b i l i d a d e. E s t e m étodo usa r a d i o i s ó t o p o s, q u e p o d e m s e r o I odo 125 ou 131, C obalto 57 ou T r í c i o, c o m o m a r c a d o r p a r a a d e t e c ç ã o d e s i n a l. O s d e t e c t o r e s d e r a i o s G a m m a s ã o c o n s t i t u í d o s b a s i c a m e n t e p o r d u a s p a r t e s : C i n t i l a d o r : t e m a p r o p r i e d a d e d e e m i t i r f o t õ e s q u a n d o o s s e u s á t o m o s s ão e x c i t a d o s. A r a d i a ç ã o i n c i d e n o c r i s t a l q u e o c o n s t i t u i e, e s t e p o r s u a v e z, e m i t e f o t õ e s q u e v ã o a t i n g i r o f o t o c á d o d o f o t o m u l t i p l i c a d o r F o t o m u l t i p l i c a d o r : o i m p a c t o d a l u z n o f o t o c á d o o r i g i n a f o t o e l e c t r õ e s d e b a i x a e n e r g i a, i s t o é, f o r m a - s e u m a c o r r e n t e e l é c t r i c a. A q u i o s f o t o e l e c t r õ e s s ã o a m p l i f i c a d o s n u m i m p u l s o e l é c t r i c o q u e é m e d i d o. C o n s i d e r a - s e o f o t o m u l i t p l i c a d o r u m a c é l u l a f o t o e l é c t r i c a c o m s i s t e m a d e a m p l i f i c a ç ã o. N o e n t a n t o, h á q u e r e f e r i r a l g u m a s d e s v a n t a g e n s n o m e a d a m e n t e o c u s t o p o r a n á l i s e, a v a l i d a d e r e l a t i v a m e n t e c u r t a d o s r e a g e n t e s q u e e s t á m u i t o d e p e n d e n t e d o d e c a i m e n t o d a r a d i o a c t i v i d a d e d o m a r c a d o r e, t a m b é m, o f a c t o d e a p r e s e n t a r a l g u m r i s c o o p e r a c i o n a l j á q u e s e t r a t a d e m a t e r i a l r a d i o a c t i v o Calibração T o d o s o s e n s a i o s o b r i g a m à r e a l i z a ç ã o d e u m a c u r v a d e c a l i b r a ç ã o u s a n d o c o m o c a l i b r a d o r e s p a d r õ e s d e c o n c e n t r a ç ã o c o n h e c i d a f o r n e c i d a e m c a d a k it, n a q u a l s e d e t e r m i n a o v a l o r d a c o n c e n t r a ç ã o d a a m o s t r a e m f u n ç ã o d a a c t i v i d a d e q u a n t i f i c a d a. A c o n c e n t r a ç ã o p o d e s e r d i r e c t a o u i n d i r e c t a m e n t e p r o p o r c i o n a l à a c t i v i d a d e c o n s o a n t e s e t r a t a d e u m e n s a i o t i p o s a n d w i c h o u c o m p e t i t i v o. A v a l i d a ç ã o d e u m a c u r v a d e c a l i b r a ç ã o s e g u e a l g u n s c r i t é r i o s d e a c e i t a ç ã o q u e d e v e m s e r a v a l i a d o s e m c a d a e n s a i o : Realizado por Sónia Costa 13

14 Total: t u b o c o n t e n d o e x c l u s i v a m e n t e o m a r c a d o r, q u e p e r m i t e d e t e r m i n a r a a c t i v i d a d e m á x i m a d o r a d i o i s ó t o p o e m u s o. NSB: t u b o r e v e s t i d o a o q u a l s e a d i c i o n a a p e n a s o m a r c a d o r ( s e m a m o s t r a ) c o m a f i n a l i d a d e d e s e a v a l i a r a e x i s t ê n c i a d e ligações inespecíficas. ED: d o s e e s t i m a d a a o s 2 0 %, 5 0 % e 8 0 % d a c u r v a d e c a l i b r a ç ã o, o que permite avaliar a r e p r o d u c t i b i l i d a d e d o s e n s a i o s. C Q I : c o n t r o l o d e q u a l i d a d e i n t e r n a RIA I m u n o e n s a i o c o m p e t i t i v o. N e s t e e n s a i o o a n t i g é n i o é m a r c a d o c o m o r a d i o i s ó t o p o ( *Ag) q u e c o m p e t e c o m o a n t i g é n i o n ã o c o n j u g a d o ( A g ) da am o s t r a, n a l i g a ç ã o c o m o a n t i c o r p o e s p e c í f i c o. A s c o n d i ç õ e s d e e n s a i o s ã o t a i s q u e a [ A c ] e [ *Ag] s ã o f i x a s, enquanto que a [Ag] varia (sendo conhecida para os calibradores e c o n t r o l o s e d e s c o n h e c i d a p a r a a s a m o s t r a s ) A m b o s antigénios c o m p e t e m p e l a s p o s i ç õ e s d e l i g a ç ã o a o a n t i c o r p o. * A g + A g + A c [Ag- A c ] [ A c - * A g ] Q u a n d o a r e a c ç ã o a t i n g e o e q u i l í b r i o, s ã o r e m o v i d o s o s c o n j u g a d o s n ã o r e a c t i v o s. C o m o e m t o d o s o s t u b o s d e e n s a i o e x i s t e a m e s m a quantidade de *Ag e Ac, a razão [Ac- *Ag ] / [ * A g ] d i m i n u i à m e d i d a q u e a u m e n t a a [ A g ] l i v r e. P o r i s s o a q u a n t i a d e d e * A g l i g a d a a o A c é i n v e r s a m e n t e p r o p o r c i o n a l à [ A g ] p r e s e n t e n a a m o s t r a. A [ A g ] n a a m o s t r a d e s c o n h e c i d a é o b t i d a p o r i n t r a p o l a ç ã o d o v a l o r obtido na curva padrão (c o n s t r u í d a a p a r t i r d o s p a d r õ e s d e c o n c e n t r a ç ã o c o n h e c i d a ). A a f i n i d a d e d o m é t o d o v a i d e p e n d e r d a a f i n i d a d e d o A c p a r a o A g e m e s t u d o. Q u a n t o m a i o r e s s a a f i n i d a d e m a i o r a e n e r g i a d a l i g a ç ã o A c - A g, r e s u l t a n d o n u m a c o n s t a n t e d e equilíbrio m a i o r, l o g o m a i s e s t á v e l é a r e a c ç ã o I RMA E n s a i o I m u n o r a d i o m é t r i c o que a o c o n t r á r i o d o r a d i o i m u n o e n s a i o c o m p e t i t i v o, u s a o a n t i c o r p o m a r c a d o c o m o r a d i o i s ó t o p o ( * A c ). Dá- s e u m a r e a c ç ã o d o t i p o s a n d w i c h, u s a n d o d o i s A c e s p e c í f i c o s p a r a o A g a d o s e a r. Ag + A c Ag- A c + * A c A c - Ag- *Ac Realizado por Sónia Costa 14

15 R e g r a g e r a l, o A c e n c o n t r a - se a s s o c i a d o a u m a f a s e s ó l i d a ( em e s f e r a s o u r e v e s t i n d o o s t u b o s d e r e a c ç ã o ), f o r m a n d o c o m p l e x o c o m o A g. O * A c é a d i c i o n a d o p o s t e r i o r m e n t e p a r a r e a g i r c o m o c o m p l e x o Ag- A c. A p ó s a t i n g i r o e q u i l í b r i o d a r e a c ç ã o s ã o r e m o v i d o s o s e x c e s s o s q u e n ã o r e a g i r a m, e q u a n t i f i c a d a a a c t i v i d a d e. A s c o n c e n t r a ç õ e s d o A c e * A c s ã o c o n s t a n t e s, l o g o a [ A g ] v a r i a na r a z ã o d i r e c t a d o c o m p l e x o Ac- Ag- * A c 2.3 ELFA Autoanalisador : VIDAS É u m s i s t e m a m u l t i p a r a m é t r i c o d e i m u n o e n s a i o s. F u n c i o n a p o r s e c ç õ e s, p o s s u i n d o 5 n o t o t a l, e c a d a u m a c o m 6 p o s i ç õ e s p a r a t e s t e s. I s t o p e r m i t e r e a l i z a r p a r â m e t r o s d i f e r e n t e s ( e m s e c ç õ e s d i f e r e n t e s ) a o m e s m o t e m p o. E s t e s i s t e m a t a m b é m p o d e t r a b a l h a r c o m L I S. E x e c u t a a n á l i s e s d e i m u n o s e r o l o g i a i n f e c c i o s a Princípio de Funcionamento O m é t o d o E L F A c o m b i n a u m i m u n o e n s a i o e n z i m á t i c o c o m u m a d e t e c ç ã o f i n a l d e f l u o r e s c ê n c i a. A f a s e s ó l i d a c o r r e s p o n d e a o s S P R ( S o l i d P h a s e R e c e p t a c l e ) o u, c o m o l h e s c h a m a m o s, o s c o n e s, q u e c o n t ê m o A c o u A g a s s o c i a d o e, t a m b é m, f u n c i o n a c o m o u m a p i p e t a. O s r e a g e n t e s v ê m p r o n t o s a u s a r c o m o v o l u m e n e c e s s á r i o d e n t r o d e p o ç o s i n c o r p o r a d o s n u m a b a r r e t e ( b a r r e t e d e r e a g e n t e s ) o n d e s e pipeta apenas o volume adequado de a m o s t r a a s e r a n a l i s a d a ( c a l i b r a d o r e s, c o n t r o l o s e d o e n t e ). T o d o s o s p a s s o s s ã o r e a l i z a d o s p e l o a u t o a n a l i s a d o r. R e s u m i d a m e n t e o que acontece é que os reagentes e amostra são pipetados para dentro do cone ( f a s e s ó l i d a ), e s t e m e i o d e r e a c ç ã o e n t r a e s a i, c i c l i c a m e n t e, d o i n t e r i o r d o c o n e. D u r a n t e e s t e p e r í o d o d e t e m p o o A g / A c d a a m o s t r a l i g a - s e s i m u l t a n e a m e n t e a o A c / A g r e s p e c t i v a m e nte, e s p e c í f i c o d o c o n e. U m 2 º A c e s p e c í f i c o a s s o c i a d o a u m a B i o t i n a e n t r a n a r e a c ç ã o e a s s o c i a - s e a o c o m p l e x o i m u n e f o r m a d o. O s r e a g e n t e s e m e x c e s s o, i s t o é, q u e n ã o r e a g i r a m s ã o r e m o v i d o s n u m a f a s e d e l a v a g e m. A p r e s e n ç a d e b i o t i n a é d e t e c t a d a p e l a i n c u b a ç ã o c o m s t r e p t a v i d i n c o n j u g a d a c o m f o s f a t a s e a l c a l i n a. N o p a s s o f i n a l d a d e t e c ç ã o d o s i n a l, o c o n e i n c o r p o r a o s u b s t r a t o 4 - m e t h y l - u m b e l l i f e r y l p h o s p h a t e que é hidrolisado pelo conjugado enzimático obtendo- s e u m p r o d u t o f l u o r e s c e nte, o 4 - M e t h l - u m b e l l i f e r o n e, c u j a f l u o r e s c ê n c i a é m e d i d a a n m. O s r e s u l t a d o s s ã o c a l c u l a d o s a u t o m a t i c a m e n t e p e l o a p a r e l h o. Realizado por Sónia Costa 15

16 2.3.3 Calibração O s r e a g e n t e s d o V I D A S e s t ã o, t a l c o m o p a r a o I M M , p r é - c a l i b r a d a s d e f á b r i c a. O s d a d o s d a c u r v a d e c a l i b r a ç ã o ( c u r v a d e c a l i b r a ç ã o de fábrica) para cada parâmetro e lote, v ê m i n s e r i d o s n u m c a r t ã o e d e v e m s e r i n t r o d u z i d o s n a b a s e d e d a d o s d o a p a r e l h o p o r l e i t u r a d e c ó d i g o d e b a r r a s. N o l a b o r a t ó r i o a c a l i b r a ç ã o é r e a l i z a d a c o m o u s o d e d o i s c a l i b r a d o r e s d e c o n c e n t r a ç õ e s c o n h e c i d a s e a n a l i s a d o s e m d u p l i c a d o. O s v a l o r e s o b t i d o s d e v e r ã o e s t a r d e n t r o d o R F V ( R e l a t i v e F l u o r e s c e n c e V a l u e ) e o v a l o r d o C V % p a r a c a d a d u p l i c a d o d e v e r á e s t a r a b a i x o d o v a l o r i n d i c a d o n a i n f o r m a ç ã o f o r n e c i d a n o l o t e ( v a l o r d e v a r i a ç ã o m á x i m o p e r m i t i d o ). E s t a s c a l i b r a ç õ e s e r e c a l i b r a ç õ e s r e a l i z a d a s a o l o n g o d o u s o d o K i t t ê m c o m o o b j e c t i v o c o m p e n s a r a s v a r i a ç õ e s d o s i n a l d o e n s a i o, q u e p o d e m s u r g i r p o r d e g r a d a ç ã o d o k i t, p o r e x e m p l o. Realizado por Sónia Costa 16

17 3 CONTROLO DE QUALIDADE INTERNO O c o n t r o l o d e q u a l i d a d e i n t e r n o c o n s i s t e n o c o n j u n t o d e p r o c e d i m e n t o s q u e n a p r á t i c a p e r m i t e m c o n t r o l a r a q u a l i d a d e d o s r e s u l t a d o s d a s a n á l i s e s e x e c u t a d a s n a r o t i n a. É i n d i s p e n s á v e l p a r a a d e t e c ç ã o e a v a l i a ç ã o d e e r r o s, e a s u a i m e d i a t a c o r r e c ç ã o. U m c o n t r o l o d e v e s e r u m m a t e r i a l o m a i s p a r e c i d o p o s s í v e l c o m a s a m o s t r a s q u e s e a n a l i s a n o l a b o r a t ó r i o C l í n i c o, d e b o a e s t a b i l i d a d e e d e f á c i l u s o n a r o t i n a ( p r e p a r a ç ã o e c o n s e r v a ç ã o ). O s v a l o r e s d o s analitos devem ser ade q u a d o s a o s v a l o r e s d e d e c i s ã o c l í n i c a, n ã o e s q u e c e r t a m b é m a r e l a ç ã o qualidade- p r e ç o. O C Q I p e r m i t e - nos d e t e r m i n a r a p r e c i s ã o, m e d i d a C V %, e i d e n t i f i c a r e r r o s. O l a b o r a t ó r i o u s a, s e m p r e q u e p o s s í v e l a m o s t r a s c o n t r o l o e x t e r i o r e s a o f a b r i c a n t e d o s k i t s e m u s o, c o m o o b j e c t i v o d e d e t e c t a r v a r i a ç õ e s i n t e r - l o t e. Muitas das v e z e s e s s a s f l u t u a ç õ e s s ã o a j u s t a d a s a n o v o s targets p a r a o c o n t r o l o d a m e s m a c a s a e d e s t a f o r m a s ã o m a s c a r a d a s, i s t o é, n ã o s ã o d e t e c t a d a s, o q u e n ã o q u e r d i z e r q u e n ã o s e j a m s i g n i f i c a t i v a s. N o l a b o r a t ó r i o o C o n t r o l o I n t e r n o a b r a n g e t o d a s a s a n á l i s e s d a á r e a. N o c a s o d o s p a r â m e t r o s a n a l i s a d o s n o I M M , o p r ó p r i o autoanalisador possui um programa C Q I o n d e s e p r o g r a m am o s interv a l o s d o s c o n t r o l o s, p e r m i t i n d o f a z e r u m a a v a l i a ç ã o e m t e m p o r e a l. N o e n t a n t o, é n o p r o g r a m a M u l t i Q C q u e s ã o i n t r o d u z i d o s ou t r a n s m i t i d o s a u t o m a t i c a m e n t e ( p a r a a l g u n s a u t o a n a l i s a d o r e s ) t o d o s o s r e s u l t a d o s d e c o n t r o l o s r e a l i z a d o s, b e m c o m o i n f o r m a ç õ e s r e l e v a n t e s c o m o a j u s t e s e r e a j u s t e s e f e c t u a d o s, c a l i b r a ç õ e s, m u d a n ç a s d e l o t e s / r e a g e n t e s, e t c. O s c r i t é r i o s d e a c e i t a ç ã o p a r a o s d i v e r s o s p a r â m e t r o s s ã o d e f i n i d o s s e g u n d o o E r r o T otal B i o l ó g i c o, q u a n d o e x i s t e m dados de V a r i a b i l i d a d e B i o l ó g i c a, o u a p e n a s s e g u n d o o E r r o T otal A d m i s s í v e l ( a v a l i a ç ã o a p e n a s analítica d o d e s e m p e n h o d o m é t o d o ). D o i s t i p o s d e e r r o s s ã o v e r i f i c a d o s n a r o t i n a, o s e r r o s f o r t u i t os d e t e c t a d o s p e l o c o n t r o l o i n t e r n o e o s e r r o s s i s t e m á t i c o s q u e v ã o e v i d e n c i a n d o a o l o n g o d o t e m p o a t e n d ê n c i a d o d e s v i o. N a p r i m e i r a s i t u a ç ã o, n o r m a l m e n t e o u s o d e u m n o v o c o n t r o l o ( n o v a a l i q u o t a, n o v o l o t e ) e l i m i n a o e r r o. N o s e g u n d o c a s o, o e r r o t em u m o u t r o s i g n i f i c a d o, p o i s r e g r a g e r a l é i n d i c a t i v o d e d e g r a d a ç ã o d e r e a g e n t e s o u d e t e r i o r a ç ã o de algum componente do aparelho. Uma n o v a c a l i b r a ç ã o i r á d i m i n u i r o u a t é m e s m o c o r r i g i r o e r r o s i s t e m á t i c o. S e t a l n ã o a c o n t e c e, o u o k i t e s t á d e t a l f o r m a d e t e r i o r ado q u e o b r i g a a a b e r t u r a d e n o v o r e a g e n t e, ou p o d e s e r u m p r o b l e m a d o i n s t r u m e n t o q u e o b r i g a a u m a i n t e r v e n ç ã o t é c n i c a, o u então o controlo usado, principalmente se s ã o u s a d a s aliquotas, pode também estar a degradar- s e a o l o n g o d o t e m p o e i s s o t a m b é m s e t r a d u z d e f o r m a s i s t e m á t i c a q u e s e o b s e r v a n o p r o g r a m a. Realizado por Sónia Costa 17

18 4 CONTROLO DE QUALIDADE EXTERNO O C o n t r o l o E x t e r n o c o n s i s t e n a a v a l i a ç ã o, p o r u m o r g a n i s m o e x t e r i o r, d a q u a l i d a d e d o s r e s u l t a d o s f o r n e c i d o s p e l o l a b o r a t ó r i o. T a l é f e i t o p e l a a n á l i s e d e u m a a m o s t r a c o n t r o l o c e g a f o r n e c i d a pela entidade externa. A A E Q p e r m i t e - n o s a v a l i a r a e x a c t i d ã o, e i d e n t i f i c a r e r r o s s i s t e m á t i c o s o u t e n d ê n c i a s. N o â m b i t o d a AEQ s ã o a d o p t a d o s v á r i o s p r o g r a m a s : I N S A - I n s t i t u t o D r. R i c a r d o J o r g e ( P o r t u g a l ) S e r o l o g i a v í r i c a ( C M V, R U B e H B V ) ; T o x o p l a s m o s e R I Q A S - R a n d o x ( I r l a n d a ) A n á l i s e s d a T i r ó i d e ( c o m e x c e p ç ã o d o s a u t o - a n t i c o r p o s ) d e P S A t o t a l e f r a c ç ã o l i v r e CAP - C o l l e g e o f A m e r i c a n P a t o l o g i s t s H o r m o n a s d o s i s t e m a r e p r o d u t o r ; h o r m o n a s d a s u p r a - r e n a l ; I n s u l i n a e P é pti d o C ; H o r m o n a s d o c r e s c i m e n t o ( G H e I G F - 1 ) ; F e r r i t i n a, V B 1 2 e F o l a t o ; M a r c a d o r e s T u m o r a i s ; P a r a t o r m o n a U K N E Q A S - N a t i o n a l E x t e r n a l Q u a l i t y A s s e s s m e n t S c h e m e ( R e i n o U n i d o ) E s p e c í f i c a p a r a a s a n á l i s e s d o R a s t r e i o P r é - N a t a l d o 1 º e 2 º T r i m e s t r e e e s t u d o s d o l í q u i d o a m n i ó t i c o. A a v a l i a ç ã o d e u m a A E Q p a r a u m a d a d a a n á l i s e faz- s e n o m í n i m o u m a v e z p o r a n o, dependendo do programa. As amostras recebidas s ã o a n a l i s a d a s c o m o s e d e u m d o e n t e s e t r a t a s s e e o s r e s u l t a d o s o b t i d o s s ã o e n v i d a d o s à e n t i d a d e r e s p e c t i v a. O t r a t a m e n t o d e d a d o s e s t á a c a r g o d a e n t i d a d e e x t e r n a, q u e e n v i a o s r e s u l t a d o s d e t o d o s o s p a r t i c i p a n t e s s o b r e a f o r m a d e u m r e l a t ó r i o. D e a c o r d o c o m o n o s s o r e s u l t a d o p o d e s e r n e c e s s á r i o o u n ã o t o m a r m e d i d a s c o r r e c t i v a s o u p r e v e n t i v a s. D e f o r m a r e s u m i d a, u m r e s u l t a d o f o r a d o s c r i t é r i o s d e a c e i t a b i l i d a d e ( p a r a a m a i o r i a d o s p r o g r a m a s o c r i t é r i o d e a c e i t a ç ã o d o v a l o r o b t i d o é a r e g r a d o s 3 ou 2 SD) d e v e s e r r e a n a l i s a d o ( a s a m o s t r a s d e A E Q s s ã o a l i q u o t a d a s e a r m a z e n a d a s s e g u n d o a s i n d i c a ç õ e s d o f a b r i c a n t e ). S e o r e s u l t a d o s e m a n t é m i n a l t e r a d o, d e v e - s e p r o c e d e r à v e r i f i c a ç ã o d o e r r o, r e g r a g e r a l, u m a c a l i b r a ç ã o d a a n á l i s e c o r r i g e o e r r o. E m s e g u i d a t o d o s o s r e s u l t a d o s o b t i d o s c o m a c a l i b r a ç ã o a n t e r i o r d e v e m s e r r e a v a l i a d o s. R e s u l t a d o s q u e r e c l a s s i f i c a m c l i n i c a m e n t e s ã o r e p o r t a d o s a o D i r e c t o r C l í n i c o q u e a v a l i a r á a i m p o r t â n c i a c l í n i c a d a a l t e r a ç ã o e, s e n e c e s s á r i o, r e c o n v o c a r o d o e n t e p a r a n o v a a n á l i s e. Realizado por Sónia Costa 18

19 5 TRANSMISSÃO E VALIDAÇÃO DE RESULTADOS A t r a n s m i s s ã o d e r e s u l t a d o s é a u t o m á t i c a p a r a o s p a r â m e t r o s r e a l i z a d o s n o s i s t e m a I m m D I E. O s p e d i d o s d e c a d a i n s c r i ç ã o a o s e r e m r e g i s t a d o s n o p r o g r a m a l a b o r a t o r i a l A p p o l o, s ã o de i m e d i a t o t r a n s m i t i d o a o a p a r e l h o q u e, a s s i m q u e i d e n t i f i c a a a m o s t r a, i r á p r o c e d e r à r e a l i z a ç ã o d e t o d a s a s a n á l i s e s p e d i d a s. Os r e s p e c t i v o s r e s u l t a d o s s ã o d e i g u a l f o r m a t r a n s m i t i d os a u m c o m p u t a d o r c e n t r a l e q u e a t r a v é s d o p r o g r a m a D I E, p o d e m s e r a v a l i a d o s s e g u n d o a s r e g r a s d e a c e i t a ç ã o p a r a c a d a p a r â m e t r o. R e g r a s e s s a s q u e s ã o p r o g r a m a d a s p e l o l a b o r a t ó r i o, p o r e x e m p l o d a r o r d e m d e r e p e t i ç ã o d e u m r e s u l t a d o s e e s s e s e e n c o n t r a f o r a d o s I n t erv a l o d e R e f e r ê n c i a, o u s i m p l e s m e n t e f a z e r o d elta- c h e c k c o m r e s u l t a d o s a n t e r i o r e s. A v a l i d a ç ã o f i n a l d o s r e s u l t a d o s é f e i t a d e a c o r d o c o m o P O e s p e c í f i c o p a r a c a d a p a r â m e t r o, o n d e s e e s t a b e lecem o s c r i t é r i o s d e a c e i t a ç ã o e d e c o n f i r m a ç ã o e s t a n d o, n o e n t a n t o, s e m p r e dependentes da avaliação final do D i r e c t o r C l í n i c o. Realizado por Sónia Costa 19

20 6 TIRÓIDE 6.1 Introdução A p r i n c i p a l f u n ç ã o d a t i r ó i d e é c a p t a r i o d o, c o n v e r t ê - l o n a s h o r m o n a s T3 e T4 ( t r i i o d o t i r o n i n a e t i r o x i n a, r e s p e c t i v a m e n t e ), e a r m a z e n á - las. E s t a s h o r m o n a s s ão libertadas na corrente sanguínea e t r a n s p o r t a d a s a o l o n g o d o c o r p o o n d e v ã o c o n t r o l a r o m e t a b o l i s m o ( c o n v e r s ã o d e o x i g é n i o e c a l o r i a s e m e n e r g i a ). T o d a s a s c é l u l a s n o n o s s o o r g a n i s m o d e p e n d e m d a s h o r m o n a s d a t i r ó i d e n a r e g u l a ç ã o d o s e u m e t a b o l i s m o ( a s c é l u l a s d a t i r ó i d e s ã o a s ú n i c a s q u e p o s s u e m a c a p a c i d a d e d e c a p t a r o i o d o ). E s t a s h o r m o n a s c o n t r o l a m a v e l o c i d a d e c o m q u e o c o r r e m a s d i v e r s a s f u n ç õ e s q u í m i c a s d o o r g a n i s m o, p o r o u t r a s p a l a v r a s, r e g u l a m a T a x a M e t a b ó l i c a a t r a v é s d a e s t i m u l a ç ã o d a p r o d u ç ã o p r o t e i c a e m q u a s e t o d o s o s t e c i d o s d o o r g a n i s m o e a t r a v é s d o c o n s u m o d e o x i g é n i o p e l a s c é l u l a s. P a r a que a t i r ó i d e c u m p r a a s u a f u n ç ã o, v á r i o s f a c t o r e s t ê m d e a c t u a r c o n j u n t a m e n t e e d e f o r m a adequada: E i x o H i p o t á l a m o - H i p ó f i s e - T i r ó i d e A g l â n d u l a d a t i r ó i d e e s t á s o b r e o c o n t r o l o d a g l â n d u l a da h i p ó f i s e, v i a T S H q u e e s t i m u l a a t i r ó i d e a p r o d u z i r m a i s h o r m o n a s e s e c r e t á - l a s n a c o r r e n t e s a n g u í n e a. A s s i m q u e o s n í v e i s d e T 3 e T 4 a u m e n t a m, a h i p ó f i s e d e t e c t a e s t e a u m e n t o s i g n i f i c a t i v o, e d i m i n u i a p r o d u ç ã o d e T S H ( r e g u l a ç ã o p o r f e e d b a c k n e g a t i v o ). P o r s e u l a d o, a h i p ó f i s e t a m b é m é r e g u l a d a d e s t a v e z p e l a T R H que é produzida pelo h i p o t á l a m o. A s s i m n a a v a l i a ç ã o d a s u a f u n ç ã o e x i s t e m v á r i o s p a r â m e t r o s que p o d e m s e r u s a d o s, e que permitem diferenciar qual a origem da d o e n ç a t i r o i d e i a : H i p o t á l a m o : T R F H i p ó f i s e : T S H P r o t e í n a s d e l i g a ç ã o à s h o r m o n a s d a t i r ó i d e : T B G, TG C o n v e r s ã o d e T 4 e T 3 : T 3, T 4, T3L, T4L 6.2 Interesse Clínico dos Testes Hormona Estimulante da Tiróide Trata- s e d e u m e n s a i o d e 3 ª G e r a ç ã o q u e p e r m i t e d e t e r m i n a r c o m p r e c i s ã o v a l o r e s b a i x o s, q u e s ã o u m a f e r r a m e n t a f u n d a m e n t a l n o d i a g n ó s t i c o e s e g u i m e n t o d a d o e n ç a. O i n t e r e s s e c l í n i c o d o s e u d o s e a m e n t o a d v é m d o f a c t o d e s e r u s a d o no diagnóstico precoce de disfunções da t i r ó i d e, s e n d o m u i t o i m p o r t a n t e t a m b é m n a m o n i t o r i z a ç ã o d e t e r a p ê u t i c a d e s u b s t i t u i ç ã o h o r m o n a l. Realizado por Sónia Costa 20