Universidade de São Paulo Instituto de Física de São Carlos Bacharelado em Ciências Físicas e Biomoleculares Microbiologia 2016

Tamanho: px

Começar a partir da página:

Download "Universidade de São Paulo Instituto de Física de São Carlos Bacharelado em Ciências Físicas e Biomoleculares Microbiologia 2016"

Jerónimo Franca Fontes
7 Há anos
Visualizações:

1 Universidade de São Paulo Instituto de Física de São Carlos Bacharelado em Ciências Físicas e Biomoleculares Microbiologia 2016 Aula Prática 08: METABOLISMO BACTERIANO AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ENZIMÁTICA A. Teste de oxidação/fermentação Os tubos de A a H contém meio O/F (oxidação/fermentação), em cuja composição há o indicador de ph azul de bromotimol que, apresenta uma coloração amarelada em valores de ph abaixo de 6,0, azulada acima de 7,6 e esverdeada no intervalo entre esses valores. 1) Nos tubos A e B, inocule o microrganismo da placa 1 com auxílio da agulha de transferência. Realize a inoculação com a agulha em picada única central. Adicione 3 ml de vaselina líquida estéril no tubo B. 2) Nos tubos C e D, inocule o microrganismo da placa 2. Adicione 3 ml de vaselina no tubo D. 3) Nos tubos E e F, inocule o microrganismo da placa 3. Adicione 3 ml de vaselina no tubo F. 4) Não inocule nenhum microrganismo nos tubos G e H, pois os mesmos serão os controles negativos (da ausência de alteração do meio de cultura). Do mesmo modo, adicione 3 ml de vaselina no tubo H. 5) Deixe semi-abertas as tampas dos tubos sem vaselina, e feche bem as tampas dos tubos com vaselina. 6) Incube os tubos a 37 o C por 24 h. 7) Descreva e justifique os resultados. B. Teste de hidrólise do amido 1) Com uma caneta, divida o fundo da placa de meio ágar amido em duas regiões. 2) Com a alça de transferência, semeie por estriamento o microrganismo da placa 1 em uma das regiões. 3) Semeie o microrganismo da placa 4 na outra região. 4) Identifique as regiões da placa e incube-a a 37 o C por 48 h. 5) Cubra a placa com uma solução de iodo para revelação da prova bioquímica. 6) Descreva o resultado e interprete-o baseando-se reação do iodo com o amido, que produz uma coloração azulviolácea. C. Teste da catalase 1) Adicione 2 gotas de solução de peróxido de hidrogênio a 3% sobre uma lâmina. 2) Com o auxílio da alça de transferência, colete um pouco do crescimento de uma das seguintes placas: 1, 2, 4 ou 5 e espalhe levemente sobre a gota de peróxido de hidrogênio. 3) Descreva e justifique o resultado. D. Identificação presuntiva de enterobactérias com o kit para enterobactérias (NewProv) Sobre a bancada, há 5 tubos com os seguintes meios: Tubo 1: Meio EPM (ágar inclinado verde) Tubo 2: Caldo Lisina (caldo púrpura) Tubo 3: Meio de MIO (meio semi-sólido púrpura) Tubo 4: Ágar citrato de Simmons (ágar inclinado verde) Tubo 5: Caldo Rhamnose (caldo verde-claro) 1

2 1) Com o auxílio de uma agulha de inoculação, colete a metade da colônia da placa 1 (Grupos 1 a 5) ou da placa 5 (Grupos 6 a 10) e inocule-a, através de picada central única, no tubo 1 (sem tocar no fundo do mesmo). Depois, estrie a superfície do meio. Deixe a tampa do tubo frouxa. 2) Sem flambar a agulha, semeie o tubo 2 por dissolução. Adicione 1 ml de vaselina estéril e feche bem a tampa. 3) Sem flambar a agulha, semeie o tubo 3 através de picada central única. Deixe a tampa frouxa. 4) Recolha a outra metade da colônia da placa e semeie o tubo 5 por dissolução. Adicione 1 ml de vaselina estéril e feche bem a tampa. 5) Sem flambar a agulha, estrie a superfície do tubo 4. Deixe a tampa frouxa. 6) Inocule, por estriamento, outra colônia em meio MacConkey para testar a fermentação da lactose. 7) Incube os tubos e a placa a 37 C por 18 a 24 h. 8) Após a incubação, pingue 1 gota do reativo de Kovacs no tubo 3 (Meio de MIO) e observe a coloração. 9) Analise e descreva os resultados de acordo com a bula do kit (em anexo). 10) Consulte a tabela disponibilizada no laboratório e verifique se é possível identificar o gênero da bactéria. F. Questões 1) Teste de oxidação/fermentação Por que podemos empregar um indicador de ph para o teste de O/F? 2) Teste da hidrólise do amido Fungos e bactérias são as principais fontes das amilases industriais. Dê exemplos das aplicações dessas enzimas na indústria. 3) Teste da catalase a) Quais as vias de produção de peróxido de hidrogênio presentes em algumas bactérias? c) Quais os principais danos ocasionados quando há acúmulo de peróxido de hidrogênio na célula? 4) Teste para enterobactérias O teste foi conclusivo para identificação de algum gênero? 2

3 3

4 4

5 Interpretação dos resultados com o Kit para enterobactérias (NewProv) Anote na tabela abaixo, os resultados (+ ou -) para a bactéria testada pelo grupo, e também para as bactérias 6 e 7. 1 Meio de EPM Tubo Prova Resultado positivo Local LTD (Desaminação do L-triptofano) Verde-garrafa Ápice Glicose Amarelo Base Gás Bolha ou ruptura do meio Base Gás sulfídrico Preto Base Metade do tubo Bactéria do grupo Bactéria 6 Bactéria 7 2 Caldo Lisina Descarboxilação da L-lisina Diferente de amarelo Tubo inteiro 3 Meio de MIO Turvação do meio Descarboxilação da ornitina Diferente de amarelo Tubo inteiro Produção de indol Anel vermelho Superfície do meio 4 Ágar citrato Consumo de citrato Azul Tubo inteiro 5 Caldo rhamnose Fermentação da rhamnose Amarelo Tubo inteiro 6 Placa MacConkey Fermentação da lactose Halo amarelo Ao redor da colônia 5

6 Tabela para análise dos resultados com o Kit para enterobactérias (NewProv) Para a identificação da bactéria utilizada, as provas positivas devem ser consideradas numericamente. Para provas negativas, o valor sempre será zero. Os valores atribuídos a cada prova positiva encontram-se na tabela à esquerda (Tabela de exemplo). Siga o exemplo e preencha a tabela da direita com os resultados obtidos em aula, some os valores e utilize o manual do kit (disponível no laboratório) para identificar a bactéria. Observação: A identificação dos organismos nem sempre é tão precisa e simples, alguns requerem provas complementares. Neste caso, o catálogo sugere quais provas são mais adequadas. Tabela de exemplo positivo LTD 6 9 Lactose 2 Gás sulfídrico 1 Glicose 6 9 Gás 2 Lisina 1 Indol 6 9 Ornitina 2 1 Citrato 2 3 Rhamnose 1 Soma = 9993 No manual para identificação, esse número corresponde a Escherichia coli, com 100% de certeza. LTD Lactose Gás sulfídrico Glicose Gás Lisina Indol Ornitina Citrato Rhamnose Bactéria do grupo Soma = Bactéria = % de certeza = Bactéria 6 Bactéria 7 LTD Lactose Gás sulfídrico Glicose Gás Lisina Indol Ornitina Citrato Rhamnose Soma = Bactéria = % de certeza = LTD Lactose Gás sulfídrico Glicose Gás Lisina Indol Ornitina Citrato Rhamnose Soma = Bactéria = % de certeza = 6

Documentos relacionados

TREINO DE PRÁTICAS E HABILIDADES Identificação das bactérias gram negativas NÃO fermentadoras PROFA Alessandra Barone

TREINO DE PRÁTICAS E HABILIDADES Identificação das bactérias gram negativas NÃO fermentadoras PROFA Alessandra Barone Ao entrar no laboratório, certifique-se de estar de cabelo preso, jaleco fechado, sapato