Desenvolvimento in vitro de Ocimum selloi

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1 Desenvolvimento in vitro de Ocimum selloi em diferentes variações do meio de cultivo MS Lucila Elizabeth Fragoso Monfort 1 ; Ivan Caldeira Almeida Alvarenga 1 ; Carolina Mariane Moreira 1 ; José Eduardo Brasil Pereira Pinto 1 ; Suzan Kelly Vilela Bertolucci 1 ; Helena Botelho De Andrade 1 1 Universidade Federal de Lavras. Cx. Postal 37, Lavras, MG, CEP , RESUMO Ocimum selloi é uma planta medicinal usada popularmente como antidiarreico, antiespasmódico e anti-inflamatório. A realização deste trabalho teve como objetivo avaliar variações do meio MS no desenvolvimento in vitro de O. selloi. Os meios utilizados foram 2MS, MS, 1/2MS, MS na ausência de vitaminas, mioinositol e glicina e plantas estabelecidas por três meses em ½MS. Aos 30 dias foi avaliado o número, altura e biomassa seca das brotações; número, comprimento e biomassa seca de raiz. Os resultados indicam que a utilização da metade da concentração dos sais do MS tem mostrado efeito benéfico ao desenvolvimento in vitro de plântulas de O. selloi assim como a utilização de vitaminas, mioinositol e glicina. Palavras-chave: Ocimum selloi, atroveran, meio de cultura, Lamiaceae. ABSTRACT In vitro development of Ocimum selloi in different variations of MS medium Ocimum selloi is a herb medicinal traditionally used as antidiarrhea, antispasmodic and anti-inflammatory. The purpose of this study was evaluated changes in MS medium on in vitro development of O.selloi. The media used were 2MS, MS, 1/2MS, MS without vitamins, myo-inositol and glycine and plantlets for three months in ½ MS. After 30 days was evaluated number, height and dry biomass of shoots, number, length and root dry biomass. The results indicate that half concentration of MS salts has shown beneficial effects in vitro development of plantlets of O. selloi well as the use of vitamins, myo-inositol and glycine. Keywords: Ocimum selloi, atroveran, culture medium, Lamiaceae. Ocimum selloi Benth, conhecida popularmente como atroveran, é uma planta medicinal, herbácea nativa do Brasil, pertence à família Lamiaceae. Tem largo uso popular, como antidiarreico, antiespasmódico e anti-inflamatório (Lorenzi & Matos, 2002). Diversas formulações de meios básicos têm sido utilizadas no cultivo in vitro. Não há uma formulação padrão, mas o meio MS (Murashige & Skoog, 1962), com suas modificações e diluições, tem sido utilizado com sucesso para diversas espécies. Durante o cultivo in vitro, as S4692

2 soluções de sais e açúcares que compõem os meios de cultura não exercem efeito puramente nutritivo, mas também influenciam o crescimento celular e a morfogênese, por meio de propriedades osmóticas (George et al., 2008). O meio de cultura deve suprir tecidos e órgãos com nutrientes necessários ao crescimento e, basicamente, fornecem macro e micronutrientes, e um carboidrato para substituir o carbono que a planta fixa da atmosfera, pela fotossíntese. Para promover maior crescimento, normalmente, incluem-se certos componentes orgânicos, como vitaminas, aminoácidos e reguladores de crescimento (Pasqual, 2001). Trabalho de Villa et al. (2005) com amoreira-preta (Rubus sp.) cultivar Ébano, mostrou que o número de brotos foi estimulado pelo aumento da concentração de sais do MS e maior número de brotos foi observado em meio MS com 150% dos sais. Com base no exposto, a realização deste trabalho teve como objetivo avaliar variações do meio MS no desenvolvimento in vitro de O. selloi. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado no Laboratório de Cultura de Tecidos e Plantas Medicinais da Universidade Federal de Lavras (UFLA), em Lavras, MG. A exsicata da espécie está depositada no herbário ESAL, do Departamento de Biologia da UFLA, sob o registro nº Os tratamentos utilizados foram 1) o dobro das concentrações dos sais do MS (2MS), 2) MS na sua formulação original (MS), 3) metade da concentração dos sais do MS (½MS), 4) MS com ausência de vitaminas, mioinositol e glicina (MS sem V. M. e G.) e 5) plântulas estabelecidas por três meses em ½MS (3 meses ½ MS). O experimento foi em delineamento inteiramente casualizado com 5 repetições, sendo 5 tubos por repetição, com um segmento nodal por tubo. O meio de cultura foi solidificado com 0,6% de ágar, o ph foi ajustado para 5,7+0,1 e, em seguida, autoclavado a 120ºC e 1 atm, por 20 minutos. Após a inoculação, os tubos foram fechados com tampas plásticas e vedados com parafilme. Os tubos foram mantidos em sala de crescimento com fotoperíodo de 16 horas luz/8 horas escuro, sob intensidade luminosa de 25 µmol m -2 s -1, à temperatura de 26+0,1ºC. Aos 30 dias foram avaliados o número, altura (cm) e biomassa seca das brotações (mg); número, comprimento (cm) e biomassa seca de raiz (mg). A altura da brotação e o comprimento de raiz foram determinados com o auxílio de uma régua. Para a altura, a medição foi feita da base da brotação até a gema apical. Para a determinação da biomassa seca, as brotações e as raízes foram colocadas em sacos de papel kraft e acondicionadas em estufa de circulação forçada de ar, a 60ºC, por 5 dias. Após esse período, o material vegetal foi mensurado em balança de precisão. S4693

3 Os dados obtidos foram submetidos à ANOVA pelo teste F (p<0,05) e as médias dos tratamentos foram comparadas pelo teste de Scott-Knott (p<0,05), utilizando-se o software Sisvar, versão 5.0 (Ferreira, 2007). RESULTADOS E DISCUSSÃO Os meios nutritivos e a sua composição induz a conversão do explante em plântulas e das plântulas em mudas. São muitos os fatores que estão envolvidos na eficiência de regeneração como o tipo de meio, regulador de crescimento, concentração de sacarose, irradiação, explante, etc. Se o meio nutritivo falhar, ou não for adequado, a obtenção da plântula falha. Através da figura 1 observa-se uma diferença na estrutura morfológica das plântulas obtida nos diferentes meios nutritivos utilizados. Onde a metade da concentração de sais proporcionou um melhor desenvolvimento do explante para a conversão em plântula. Analisando a concentração dos sais no crescimento do explante observa-se que a concentração de sais suplementados duas vezes a concentração normal do MS foi tóxico (Tabela 1). O meio MS é um meio com 14 sais e por si só, já é altamente concentrado, duplicar o fornecimento dos seus nutrientes causou toxicidade na plântula. Os efeitos negativos causados por concentrações maiores do meio MS, provavelmente, devem-se a uma elevação ainda maior do que a normalmente presente na composição original, tornando-se inadequada ao processo morfogênico (Pasqual et al., 2002). Para o número de brotações, os demais tratamentos não apresentaram diferença. Já para altura e biomassa seca das brotações, a maior média foi observada em plantas com 3 meses de idade no meio ½ MS. Deve-se a isso o fato de que essa plântula estava sendo cultivada a mais tempo do que as demais, mostrando que mesmo com metade do fornecimento dos sais, a plântula não teve o seu desenvolvimento comprometido. Os outros tratamentos não se diferenciaram entre si. Pessoa et al. (2004), verificou que em cultivares de samambaia (Nephrolepis exaltata), não houve diferença quanto ao número de brotações sob diferentes concentrações de sais do meio MS (25%, 50% e 100%). Os resultados do presente trabalho corrobora com Paiva et al. (1997) que utilizaram 50% dos sais do meio MS, obtendo um bom desenvolvimento in vitro de gloxínia. Já Naves (2001) obteve um aumento no tamanho dos brotos de bromélia-imperial (Alcantarea imperialis) na concentração de 100% dos sais do meio MS. Os efeitos negativos causadas pelas altas concentrações do 2MS impossibilitaram a formação de raízes nesse tratamento (Tabela 2). Aos 3 meses de cultivo no meio ½ MS foi observado as maiores médias de número, comprimento e biomassa seca de raízes, seguido do ½ MS. Mesmo sem a presença de vitaminas, mioinositol e glicina, houve a formação de raízes. Dantas et al. (2000) demonstrou que concentrações de sais no meio MS, reduzidas a 1/2, 1/3 ou 1/4, possibilitaram melhor enraizamento in vitro de amoreira-preta, cultivar Caiguangue. S4694

4 Pasqual e Lopes (1991) afirmam que o meio de cultura MS possui uma concentração de sais (macro e micronutrientes) considerada elevada, tornando-se, inclusive, prejudicial ao enraizamento de brotos em algumas espécies. Os resultados evidenciam que a utilização da metade da concentração dos sais do MS tem mostrado efeito benéfico no desenvolvimento in vitro do explante em plântulas de O. selloi assim como a utilização de vitaminas, mioinositol e glicina. AGRADECIMENTOS Os autores agradecem a CAPES, CNPq e FAPEMIG pelo apoio de bolsas (de estudo, produtividade e apoio técnico) e suporte financeiro. REFERÊNCIAS DANTAS, MCA; CERETTA, M; COUTINHO, FE; FORTES, GR de L Enraizamento in vitro da amoreira-preta (Rubus sp.), cultivar Caigangue. Agropecuária de Clima Temperado 3: FERREIRA, DF SISVAR: sistema de análise de variância, Versão 5.0. DEX/UFLA. GEORGE, EF; HALL, MA; KLERK,GJ de Plant propagation by tissue culture. 3. ed. Dordrech: Background, 501 p. LORENZI, H; MATOS, FJA Plantas medicinais no Brasil: nativas e exóticas. Nova Odessa: Instituto Plantarum, 254p. MURASHIGE, T; SKOOG, F A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiologia Plantarum 15: NAVES VC Propagação in vitro da bromélia imperial [Alcantarea imperialis (Carriére) Harms]. Lavras. Universidade Federal de Lavras. 64p (Tese mestrado). PAIVA, P. D. O.; MAYER, MBD; CAMPOS, RJC; RODRIGUES, VA; PASQUAL, M Propagação in vitro de gloxínia. Revista Brasileira de Horticultura Ornamental 3: PASQUAL, M Meios de cultura. In: PASQUAL, M. Cultura de tecidos vegetais. Lavras: UFLA/FAEPE, 74 p. PASQUAL, M; LOPES, PA Influência de diversos fatores sobre o enraizamento do portaenxerto de pereira (Pyrus calleryana) in vitro. Pesquisa Agropecuária Brasileira 26: PESSOA, CC; SILVA, ALL da; FRANCO, ETH; BISOGNIN, DA Propagação in vitro de Nephrolepis exaltata (L.) Schott. Caderno de Pesquisa Série Biologia 16: VILLA, F; ARAÚJO, AG de; PIO, LAS; PAQUAL, M Multiplicação in vitro da amoreirapreta Ébano em diferentes concentrações de meio MS e BAP. Ciência e Agrotecnologia 29: S4695

5 Figura 1. Plântulas de O. selloi em diferentes variações do meio de cultura MS. Seedlings of O. selloi in different variations of MS medium. A: 2 MS; B: MS; C: ½ MS; D: 3 meses ½ MS; E: MS sem V. M. e G. UFLA, Lavras, MG, Tabela 1. Média do número, altura (cm) e biomassa seca das brotações (BSB) (mg). Average of number, height (cm) and shoots dry biomass (SDB) (mg). UFLA, Lavras, MG, Variação do MS Número de Brotações Altura de Brotações BSB (mg) 2 MS 1 b 0,37 c 2,20 c MS 2 a 4,50 b 13,27 b ½ MS 2 a 5,00 b 10,93 b 3 meses ½ MS 2 a 9,07 a 22,47 a MS sem V. M. e G. 2 a 4,90 b 10,13 b Médias seguidas da mesma letra não diferem significativamente entre si, pelo teste de Scott-Knott (p<0,05). Tabela 2. Média do número, comprimento (cm) e biomassa seca de raiz (BSR) (mg). Average of number, length (cm) and roots dry biomass (RDB) (mg). UFLA, Lavras, MG, Variação do MS Número de Raízes Comprimento de Raízes BSR (mg) 2 MS 0 d 0 d 0 d MS 4 c 3,03 c 0,53 c ½ MS 6 b 4,50 b 1,73 b 3 meses ½ MS 9 a 7,67 a 3,73 a MS sem V. M. e G. 4 c 2,50 c 0,20 c S4696

6 Médias seguidas da mesma letra não diferem significativamente entre si, pelo teste de Scott-Knott (p<0,05). S4697

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