REUMALATEX. 01 Português - Ref.: 114. Ref.:114 MS Instruções de Uso. Fator Reumatóide. Finalidade. Material auxiliar. Princípio.

Transcrição

1 REUMALATEX Instruções de Uso Ref.:114 MS Fator Reumatóide Finalidade. Sistema para a determinação qualitativa e semiquantitativa, em lâmina do Fator Reumatóide (FR). [Somente para uso diagnóstico in vitro.] Princípio. Partículas de látex estabilizadas e sensibilizadas com gamaglobulina humana purificada são aglutinadas macroscopicamente quando o fator reumatóide está presente na amostra em concentrações iguais ou maiores que 30 UI/mL. Características do sistema. O sistema Reumalatex da Labtest tem sensibilidade para detectar concentrações de FR de no mínimo 30 UI/mL, utilizando partículas de poliestireno, sensibilizadas com gamaglobulina humana e estabilizadas em tampão ph 8, A sensibilidade de 30 UI/mL está estabelecida com a Preparação Internacional de Referência da Organização Mundial da Saúde. O teste é simples e rápido sem diluição prévia da amostra e apresenta reações adequadas que não são sensíveis ao efeito prozona até valores iguais a 800 UI/mL. Metodologia. Reagentes 1 - P. CONTROL + - N. CONTROL - Aglutinação do látex. Látex FR - Armazenar o frasco bem tampado na posição vertical entre 2-8 ºC. Não congelar. Contém Tampão 100 mmol/l, partículas de poliestireno sensibilizadas com gamaglobulina humana e azida sódica 14,6 mmol/l. Misturar bem o látex a fim de garantir a homogeneidade da suspensão. Esvaziar o conta-gotas antes de usar. Homogeneizar a suspensão de látex com várias aspirações usando o conta-gotas. Controle Positivo - Armazenar entre 2-8 ºC. Contém Fator reumatóide 30 UI/mL, cloreto de sódio 150 mmol/l, albumina bovina 0,5% e azida sódica 14,6 mmol/l. Após o manuseio sugere-se armazenar bem vedado para evitar evaporação. Controle Negativo - Armazenar entre 2-8 ºC. Contém Fator reumatóide <1 UI/mL, cloreto de sódio 150 mmol/l, albumina bovina 0,5% e azida sódica 14,6 mmol/l. Após o manuseio sugere-se armazenar bem vedado para evitar evaporação. Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições indicadas, são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo. Durante o manuseio, os reagentes estão sujeitos a contaminações de natureza química e microbiana que podem provocar redução do tempo de estabilidade. Material auxiliar Lâmina e bastões misturadores. Os controles positivo e negativo e os materiais auxiliares fazem parte somente do produto Reumalatex Ref O produto de referência 114K-60 contém somente o reagente Látex FR. Precauções e cuidados especiais Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na manipulação dos reagentes e das amostras de pacientes. Sugere-se utilizar técnicas adequadas de laboratório no manuseio dos reagentes para evitar contaminação microbiana. A utilização de ponteiras contaminadas pode comprometer o desempenho do teste e a estabilidade do Látex FR. O Látex FR e os Controles Positivo e Negativo contêm derivados de sangue humano e foram testados para a presença de HBsAg e anticorpos HCV e HIV utilizando testes aprovados e apresentaram resultados negativos. Como nenhum teste conhecido pode assegurar que produtos derivados de sangue humano não transmitem doenças infecciosas, recomenda-se manuseá-los como sendo potencialmente infectantes seguindo as normas de biossegurança. Todos os reagentes contêm azida sódica como preservativo. Entretanto, todos os cuidados devem ser tomados para se evitar contaminação microbiana. Recomenda-se utilizar somente os conta-gotas dos frascos. A azida sódica é tóxica. Deve-se tomar cuidados para evitar a ingestão e no caso de contato com os olhos, lavar imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio médico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulações de chumbo ou cobre. Utilizar grandes volumes de água para descartar os reagentes. Lavar exaustivamente a lâmina de teste com água deionizada e secar a temperatura ambiente. O uso de material contaminado com traços de detergente fornece resultados incorretos e deteriora os reagentes. O sistema está padronizado para se obter a sensibilidade proposta e o desempenho adequado em função dos volumes indicados na metodologia. Modificações nos volumes recomendados e a introdução de ponteiras contaminadas podem comprometer o desempenho do teste e a estabilidade do Látex FR. 01 Português - Ref.: 114

2 Para descartar os reagentes e o material biológico sugerimos aplicar as normas locais, estaduais ou federais de proteção ambiental. Material necessário e não fornecido Pipetas para medir as amostras e realizar diluições. NaCl 150 mmol/l (0,85%). Cronômetro. Deve ser criado um Procedimento Operacional Padrão (POP) que estabeleça procedimentos adequados para colheita, preparação e armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros devidos à amostra podem ser muito maiores que os erros ocorridos no procedimento analítico. Utilizar soro sem hemólise. Não usar plasma para realizar o teste. As amostras de soro podem ser armazenadas por 7 dias entre 2 e 8 ºC. Pode-se congelar as amostras em temperatura inferior a 20 ºC negativos durante um mês, desde que o congelamento seja realizado até 24 horas após a colheita. As amostras devem ser congeladas e descongeladas uma só vez. Repetir esse procedimento pode fornecer resultados inconsistentes. Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue não transmitem infecções, todas elas devem ser consideradas como potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las, deve-se seguir as normas estabelecidas para biossegurança. Concentrações de hemoglobina até 1000 mg/dl, bilirrubina até 20 mg/dl e lipemia até 1000 mg/dl não produzem interferências significativas. Amostras de soro fortemente lipêmicas podem produzir resultados falsamente positivos por aglutinação inespecífica. Soros turvos podem ser clarificados por centrifugação a g durante 30 minutos e descarte da camada superior de lípides. A contaminação do reagente Látex FR e da lâmina com detergentes modifica a estrutura coloidal do reagente levando à deterioração irreversível e resultados inconsistentes. Ver observações. Reagentes e amostras devem estar à temperatura ambiente no momento da realização do teste. Em uma área da lâmina colocar 0,05 ml da amostra de soro e uma gota de cada controle em outras áreas. Amostra Interferências Método qualitativo Colocar 1 gota (0,05 ml) do Látex FR, previamente homogeneizado, ao lado da amostra e dos controles. Misturar em forma de círculo com o auxilio do bastão. 4. Inclinar a lâmina para frente e para trás, fazendo movimentos oscilatórios em vários planos durante 2 minutos e, imediatamente, verificar a presença ou não de aglutinação macroscópica, comparando o resultado da amostra com os padrões obtidos com os controles. Leituras após o tempo recomendado podem fornecer resultados falso positivos. Interpretação Não reagente. suspensão homogênea semelhante ao padrão obtido com o controle negativo, indicando níveis de fator reumatóide menores que 30 UI/mL. Reagente. aglutinação macroscópica que varia desde a formação de grumos finos até grumos grosseiros, caracterizando uma amostra com concentração de fator reumatóide igual ou maior que 30 UI/mL. A intensidade da aglutinação não é um indicativo da concentração de fator reumatóide. Para estimar a concentração da amostra deve-se utilizar o método semiquantitativo. A sensibilidade analítica é igual a 30 UI/mL. Entretanto, devido ao forte efeito matriz da amostra na aglutinação do Látex FR, a sensibilidade será igual a 8 UI/mL quando a amostra for diluída com solução salina. Quando concentrações acima de 800 UI/mL são esperadas, a amostra a ser testada deverá ser diluída. Ver observações. Tomar 4 tubos 12 x 75 e adicionar 0,2 ml de NaCI 150 mmol/l (0,85%) em cada tubo. Transferir para o 1º tubo 0,2 ml da amostra que apresentou teste qualitativo positivo. Misturar, transferir 0,2 ml do 1º para o 2º tubo, misturar, transferir 0,2 ml do 2º para o 3º tubo e assim sucessivamente até o 4º tubo. Obtêm-se diluições 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, respectivamente. Em cada área da lâmina colocar 0,05 ml das diluições e ao lado das mesmas, 1 gota (0,05 ml) do Látex FR (previamente homogeneizado). Misturar em forma de círculo com o auxilio do bastão. Inclinar a lâmina para frente e para trás, fazendo movimentos oscilatórios em vários planos durante dois minutos e, imediatamente, verificar a presença ou não de aglutinação macroscópica, comparando o resultado da amostra com os padrões obtidos com os controles. 4. Método semiquantitativo Será considerado como título a maior diluição da amostra que apresentar aglutinação macroscópica. Se a aglutinação estiver presente até 1/16, continuar as diluições a partir do 4º tubo e prosseguir com o teste. Sensibilidade. No sistema Reumalatex a sensibilidade é 30 UI/mL. Ao comparar métodos para a determinação do FR, levar em consideração a sensibilidade dos mesmos. Resultados obtidos com produtos que apresentam sensibilidades diferentes somente são comparáveis se expressos em UI/mL. 02 Português - Ref.: 114

3 Resultados Amostra não reagente. Expressar o resultado como menor que 30 UI/mL. Amostra reagente. Expressar o resultado em UI/mL. UI/mL = sensibilidade x recíproca do título encontrado no método semiquantitativo. Exemplo. Título encontrado 1/4. UI/mL = 8 x 4 = 32 UI/mL Valor de referência. Recomenda-se que cada laboratório estabeleça, na população atendida, sua própria faixa de valores de referência. Controle interno da qualidade. O laboratório deve manter um programa de controle interno da qualidade que defina claramente os objetivos, procedimentos, normas, critérios para limites de tolerância, ações corretivas e registro das atividades. Ao mesmo tempo deve-se monitorar a variabilidade analítica que ocorre em todo o sistema de medição. Portanto, a utilização dos controles negativo e positivo em todas as corridas analíticas é fundamental para verificação do desempenho do teste. Deve-se, também, registrar os resultados obtidos em sistemas de registro permanentes e de fácil localização. 7 Características do desempenho. A calibração do reagente e o limite de detecção de 8 UI/mL foram verificados usando um calibrador aferido com a Preparação Internacional de Referência da Organização Mundial da Saúde. Eficiência diagnóstica. Cento e vinte e três (123) amostras de soro, com valores menores e maiores que 8 UI/mL, foram ensaiadas utilizando Reumalatex e um produto que utiliza o princípio da turbidimetria como método comparativo. Método Comparativo Positivos Negativos A análise estatística mostrou os seguintes resultados: Sensibilidade. 100% Especificidade. 98,9% Eficiência. 99,4% Valor Preditivo do Teste Positivo. 97,2% Valor Preditivo do Teste Negativo. 100 % Estudos de diluição. Reumalatex Positivos Negativos Os estudos foram realizados por diluição de um calibrador protéico contendo 800 UI/mL. Diluição 1/2 1/4 1/8 1/16 1/64 1/128 1/256 Os resultados obtidos são representativos para demonstrar que as diluições da amostra produzem recuperações adequadas dos resultados esperados. Repetitividade (imprecisão intra-ensaio). A imprecisão intra-ensaio foi verificada pela avaliação de 20 replicatas de quatro amostras com as concentrações iguais a 4, 8 e 20 UI/mL, usando também os controles negativo e positivo desenvolvidos para o produto. Os resultados negativos e positivos encontrados mostraram uma perfeita concordância com os resultados esperados. Reprodutibilidade (imprecisão total). A imprecisão interensaio foi verificada em 20 avaliações independentes usando três amostras com as concentrações iguais a 4, 8 e 20 UI/mL, usando também os controles negativo e positivo desenvolvidos para o produto. Os resultados negativos e positivos encontrados mostraram uma perfeita concordância com os resultados esperados. Efeito prozona. Uma amostra de soro com concentração igual a 800 UI/mL foi testada com Reumalatex encontrando-se resultados repetidamente positivos, confirmando que até a concentração avaliada não ocorre efeito prozona. Quando concentrações acima de 800 UI/mL são esperadas, a amostra a ser testada deverá ser diluída com solução de NaCl 150 mmol/l (0,85%). Significado clínico. Calibrador (UI/mL) ,5 6,25 3,125 Resultado Reagente Reagente Negativo Valores do FR maiores que 400 UI/mL são mais comumente encontrados na Artrite Reumatóide (AR), porém sua presença não estabelece o diagnóstico, assim como, sua ausência não o afasta. A pesquisa do FR é útil para classificar as artropatias. Este enfoque é de importância relevante pois agrupa várias artropatias como a síndrome de Reiter, espondilite anquilosante, artrite psoriática, artropatias enteropáticas (ileite regional, retrocolite ulcerativa) e outras como seronegativas. Aproximadamente 30% dos pacientes que preenchem os critérios da Associação Americana de Reumatismo (ARA) para o diagnóstico da AR não possuem pesquisa de FR positiva. A maioria destes pacientes seronegativos tem uma forma leve ou moderada de AR com pequeno acometimento articular. A titulação do FR tem importância diagnóstica e prognóstica. Indivíduos que não são portadores de AR e que apresentam resultado positivo para o fator reumatóide têm, na maioria das vezes, valores menores que 400 UI/mL. Pacientes com AR definida podem ter valores baixos ou mesmo resultado negativo. Valores elevados do FR são evidência de AR em casos duvidosos ou em pacientes com artrite de início recente. 03 Português - Ref.: 114

4 Valores elevados do FR estão, na maioria das vezes, associados com a presença de nódulos subcutâneos, erosões ósseas e mau prognóstico. Manifestações extra-articulares são mais comumente encontradas nestes pacientes e incluem vasculite, envolvimento pulmonar e pericardite. Valores de FR maiores que 20 UI/mL são encontrados freqüentemente na Síndrome de Sjögren, Artrite Reumatóide, Doença Mista do Tecido Conectivo, Lupus Eritematoso Sistêmico, Esclerose Sistêmica, Púrpura Hiperglobulinêmica e ocasionalmente na Artrite Reumatóide juvenil, Poliarterite Nodosa, Polimiosite, Sarcoidose, Tuberculose, Calazar, Hanseniase, Endocardite Bacteriana Subaguda, Sífilis, Rubéola, Mononucleose, Macroglobulinemia de Waldenstrom, Neoplasias, Asbestose, hepatopatias crônicas, transfusões de sangue, transplante renal, parentes de pacientes com AR e indivíduos idosos. Observações A limpeza e secagem adequadas do material utilizado são fatores fundamentais para a obtenção de resultados corretos. A contaminação do Látex FR com detergentes modifica a estrutura coloidal do reagente levando à deterioração irreversível. O laboratório clínico tem como objetivo fornecer resultados exatos e precisos. A utilização de água de qualidade inadequada é uma causa potencial de erros analíticos. A água deionizada ou destilada utilizada no laboratório deve ter a qualidade adequada a cada aplicação. Assim, para preparar reagentes, usar nas medições e para uso no enxágüe final da vidraria, deve ter resistividade 1 megaohm.cm ou condutividade 1 microsiemens/cm e concentração de silicatos <0,1 mg/l. Quando a coluna deionizadora está com sua capacidade saturada ocorre produção de água alcalina com liberação de vários íons, silicatos e substâncias com grande poder de oxidação ou redução que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisível. Assim, é fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da água. Ao comparar métodos para a determinação do FR levar em consideração a sensibilidade dos mesmos. Resultados obtidos com produtos que apresentam sensibilidades diferentes somente são comparáveis se expressos em UI/mL. 4. O sistema está padronizado para se obter a sensibilidade proposta e o desempenho adequado em função dos volumes indicados na metodologia. Modificações nos volumes recomendados e a introdução de ponteiras contaminadas podem comprometer o desempenho do teste e a estabilidade do Látex FR. 5. Singer JM, Plotz CM. JAMA 1958;168: Guder WC, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. Samples:From the Patient to the Laboratory, Git Verlag GMBH ed, Darmstadt, Labtest: Dados de arquivo. Apresentação Produto Reumalatex Algumas apresentações podem ser disponibilizadas somente mediante consulta. Informações ao consumidor [Termos e Condições de Garantia] A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto dentro das especificações até a data de expiração indicada nos rótulos desde que os cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e nestas instruções sejam seguidos corretamente. Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Serviço de Apoio ao Cliente (Ligação Gratuita) sac@labtest.com.br Revisão: Agosto, 2009 Ref.: Referência K-60 Conteúdo 1 CONTROL + CONTROL Lâmina de teste Bastões misturadores 1 1 X 2,5 ml 1 X 0,5 ml 1 X 0,5 ml 1 un 60 un 1 X 2,5 ml Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reprodução sob prévia autorização Referências Anderson SG, Bentzon MW, Houba V, Krag P. Bull Wld Hlt Org 1970;42:31 Jones WL, Wiggins GL. Am J Clin Path 1973;60:70 Singer JM. Bull Rheum Dis 1973;24:6. 4. Singer JM, Plotz CM. Am J Med 1956;21: Português - Ref.: 114

5 05 Português - Ref.: 114

6 06 Português - Ref.: 114