O everolimus no cancro oral: uma abordagem terapêutica dependente do tipo celular

Transcrição

1 O everolimus no cancro oral: uma abordagem terapêutica dependente do tipo celular Cátia Domingues 1,2,*, Paulo Matafome 3,4,5, Sílvia Neves 1,2, Mafalda Laranjo 2,5,6, Raquel Seiça 5, Maria Filomena Botelho 2,5,6, Ana Bela Sarmento 1,2,5,7, Marília Dourado 1,2,8,9 1-Laboratório de Oncobiologia e Hematologia, Faculdade Medicina da Universidade de Coimbra, Coimbra 2-Centro de Investigação em Meio Ambiente, Genética e Oncobiologia (CIMAGO), Faculdade Medicina da Universidade de Coimbra, Coimbra 3-Coimbra Health School, Instituto Politécnico de Coimbra, Coimbra 4-Laboratório de Fisiologia, Faculdade Medicina da Universidade de Coimbra, Coimbra 5-Centro de Neurociências e Biologia Celular (CNC)-Instituto de Imagem Biomédica e Ciências da Vida (IBILI) 6-Unidade de Biofísica, Faculdade Medicina da Universidade de Coimbra, Coimbra 7-Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra, Coimbra 8-Fisiopatologia Medicina Dentária, Faculdade Medicina da Universidade de Coimbra, Coimbra 9-Unidade de Cuidados Paliativos e Terapêutica da Dor, Faculdade Medicina da Universidade de Coimbra, Coimbra

2 INTRODUÇÃO Cancro Oral no mundo Os cancros da cabeça e pescoço (CCP) são o sexto tipo de cancro mais comum no mundo O cancro oral corresponde a 48% dos CCP 90 % dos CO são do tipo espino-celular Apesar do fácil acesso visual continua a ser diagnosticado tardiamente Apresenta taxas de sobrevivência aos 5 anos na ordem dos 50%

3 INTRODUÇÃO Cancro Oral em Portugal 2 : 1 Responsável por 4% das mortes nos homens, sendo nestes a 5ª causa de morte por doença oncológica A taxa de sobrevivência aos 5 anos permanece em cerca de 55%, podendo variar entre 30% nas lesões posteriores com diagnóstico tardio e mais de 80% para o cancro do lábio GUIA PARA PROFISSIONAIS DE SAÚDE INTERVENÇÃO PRECOCE NO CANCRO ORAL, 2014

4 INTRODUÇÃO Carcinogénese oral César Rivera, Int J Clin Exp Pathol. 2015; 8(9):

5 INTRODUÇÃO Carcinogénese oral PI3K/AKT/mTOR Isabella S. Guimarães et al., Targeting the PI3K/AKT/mTOR Pathway in Cancer Cells, Updates on Cancer Treatment, 2015

6 OBJETIVO Avaliar, in vitro, os mecanismos moleculares e celulares do efeito do Everolimus, como nova abordagem terapêutica no CO

7 MATERIAL & MÉTODOS Cultura linhas celulares Células BICR-10 CO espino-celular in situ Células HSC-3 CO espino-celular metastático

8 MATERIAL & MÉTODOS Avaliação proliferação/viabilidade celular: Ensaio metabólico resazurina Avaliação mecanismos morte celular: Microscopia ótica Citometria de fluxo (AV/IP) Avaliação ciclo celular: CF PIRNase Avaliação da expressão de AKT e p70s6k total e fosforilada por western blot Avaliação da migração celular: Ensaio scratch Avaliação da invasão celular: Ensaio de Zimografia para avaliação da atividade enzimática de Metaloproteinases (MMP)-2 e -9 Análise estatística: Two-way ANOVA, estatisticamente significativo p< 0.05.

9 RESULTADOS Everolimus reduz a atividade metabólica das células de COEC BICR-10 HSC-3 O Everolimus induz efeito antiproliferativo e citotóxico de forma dependente da dose, do tempo e da linha celular. A linha celular HSC-3 mostrou-se mais sensível ao Everolimus do que as células BICR-10, tendo-se obtido o IC-50 às 48 h para uma dose próxima dos 35 µm.

10 X 400 RESULTADOS Everolimus reduz a proliferação/viabilidade celular BICR-10 HSC-3 Controlo DMSO 0.5 % EVE 25µM EVE 35µM X 200

11 RESULTADOS Everolimus induz morte celular dependente da linha celular BICR-10 HSC-3 Morte celular células HSC-3 por apoptose tardia/necrose

12 RESULTADOS Everolimus induz morte celular com aumento da razão BAX/BCL-2 e Caspases BICR-10 BAX/BCL-2 Caspases HSC-3 SO

13 HSC-3 BICR-10 RESULTADOS Everolimus induz paragem do ciclo celular

14 RESULTADOS Everolimus e ciclina D1 HSC-3 Igor Tsaur et al., J Cell Mol Med Aug; 19(8):

15 RESULTADOS Everolimus reduz a expressão de AKT fosforilada e de p70s6k HSC-3

16 RESULTADOS Migração Celular 100 BICR -10 HSC-3 % Área Livre 50 * *** Tempo (horas) ***

17 RESULTADOS Everolimus reduz a migração celular dependente do tipo celular BICR-10 HSC-3 Controlo DM SO 0.5 % EVE 25 µm EVE 35 µm Controlo DM SO 0.5 % EVE 25 µm EVE 35 µm % Área Livre % Área Livre $ $$$ ** **** ** Tempo (horas) Tempo (horas) EVE 35µM EVE 35µM

18 RESULTADOS Everolimus reduz a atividade de MMP-2

19 RESULTADOS Everolimus reduz a expressão de Integrina β 1 e aumenta a expressão de E-caderina HSC-3

20 CONCLUSÃO HSC-3 Fosfo-AKT mtor Everolimus BAX/BCL-2 Caspases ROS Fosfo-p70S6K Proliferação celular Ciclo celular Morte celular MMP-2 Integrina β1 Migração Invasão

21 CONCLUSÃO Os nossos resultados sugerem que o Everolimus, não tendo tido efeitos significativos na linha celular de CO in situ, poderá constituir uma abordagem terapêutica promissora para o CO metastático,

22 Obrigada pela vossa atenção! Agradecimentos: (*) Núcleo Regional do Centro da Liga Portuguesa Contra o Cancro (NRC-LPCC)/CIMAGO. CIMAGO; Programa estratégico: CNC.IBILI (FCT: UID/NEU/04539/2013). PhD Bruno Neves pela ajuda na otimização do protocolo de Zimografia.