DESEMPENHO COMPARATIVO DO KIT DE TESTE RÁPIDO ASSURE DENGUE IGA COM O KIT DE TESTE RÁPIDO DENGUE IGM/IGG NA DETECÇAO AGUDA DA DENGUE.
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1 DESEMPENHO COMPARATIVO DO KIT DE TESTE RÁPIDO ASSURE DENGUE IGA COM O KIT DE TESTE RÁPIDO DENGUE IGM/IGG NA DETECÇAO AGUDA DA DENGUE. Bijon Kumar Sil 1, Yun Ying Tan 1, Firoz Ahmed 2, Huzzatul Mursalin 2 and Anowar Hosain 2 1. Research and Development, MP Biomedicals Asia Pacific Pte. Ltd, Singapore. 2. Laboratory Science Division, International Centre for Diarrhoel Disease Research (ICDDR), Bangladesh. Resumo O teste rápido (RT) ASSURE Dengue IgA da MP Diagnostics é um ensaio imunocromatográfico baseado em fluxo reverso destinado a rápida detecção de anticorpos anti-dengue IgA em soro, plasma ou sangue total. O objetivo deste estudo foi comparar o desempenho do Teste Rápido Dengue IgA com o Teste Rápido IgM/IgG usando amostras de soro de dengue agudos prospectivamente coletados de hospitais e do Centro de Diagnósticos em Bangladesh. Todas as amostras foram caracterizadas usando o teste de referencia de dengue ELISAs NS1 Ag Platelia (Bio-Rad, França) e do Dengue IgM e IgG ELISA Captura (PanBio Diagnóstico Inc, Austrália). Dos 150 soros com dengue pareados de pacientes hospitalizados (Painel A), 122 amostras foram positivas e 28 foram negativas para ELISA de referencia na fase aguda, enquanto que 125 amostras foram positivas e 25 foram negativo em testes ELISA de referencia na fase de convalescença. Com base em soros coletados na fase aguda, o desempenho do teste ASSURE Dengue IgA [ sensibilidade 86.07% (105/122); e especificidade 89.29% (25/28) ] foi comparável com o teste de Dengue IgM/IgG [ sensibilidade 87.70% (107/122); e especificidade 96.43% (27/28) ]. No entanto, o componente IgM do teste Dengue IgM/IgG detectou apenas 82.08% (87/106) das amostras IgM ELISA CAP positivas enquanto que o componente IgG detectou 88.57% (62/70) dos casos de infecções secundárias. O Painel B consistindo de 106 soros coletados de pacientes suspeitos de Dengue a partir do Centro de Diagnóstico, nas quais 62 amostras foram positivas com os ELISAS referencias para Dengue. O teste ASSURE Dengue IgA RT detectou 82.26% (51/62) enquanto o Dengue IgM/IgG RT detectou 50% (31/62) como positivos. A especificidade do ASSURE Dengue IgA RT e Dengue IgM/IgG RT foram de (34/44) e 81.82% (36/44), respectivamente. A detecção de níveis do ASSURE Dengue IgA RT foi comparável com Dengue IgM/IgG RT para amostras hospitalares no entanto, mostrou melhor desempenho com soros coletados a partir do centro de diagnóstico. As maiorias dos casos de dengue febril precoce do centro de diagnóstico produziram anti-dengue IgA e continham níveis insuficientes de anti-dengue IgM/IgG, enquanto pacientem hospitalizados admitidos em estágios tardios da infecção produziram níveis insuficientes de anti-dengue IgM/IgG para detecção no IgM/IgG. O desempenho do ASSURE Dengue IgA RT em ambos os painéis foi consistente, sugerindo sua aplicabilidade para diagnóstico da Dengue aguda e tardia.
2 Resultados Caracterização das amostras de soro utilizando ELISA de referencia para Dengue: Todas as amostras foram caracterizadas com a seguinte ELISA de referencia e os resultados são apresentados na Tabela 1. (i) Bio-Rad Dengue NS1 Ag Platelia ELISA (NS1 Ag ELISA) para detecção do antígeno NS1 da Dengue. (ii) PanBio Dengue IgM Captura ELISA (IgM-Cap ELISA) para detecção de anti-dengue IgM. (iii) PanBio Dengue IgG e ELISA CAPTURA (IgG-Cap ELISA) para a detecção de IgG anti-dengue. Tabela1. Resultados da caracterização do Painel A (hospital) e Painel B (centro de diagnóstico) usando ELISA dengue de referencia: Fonte das Amostras Tipo de Amostras NS1 Ag ELISA IgM-Cap ELISA IgG-Cap ELISA TOTAL Centro de Diagnóstico Aguda 43.39% (46/106) 36.79% (39/106) 16.03% (17/106) 58.49% (62/106) Hospital Aguda 54.00% (81/150) 70.67% (106/150) 46.67% (70/150) 81.33% (122/150) Convalescente Não testado 81.33% (122/150) 59.33% (89/150) 83.33% (125/150) Desempenho dos de Dengue: O desempenho diagnóstico dos testes rápidos de Dengue (IgA, IgM e IgG) utilizando 184 amostras de dengue positivas e 72 amostras negativas foram apresentadas na Tabela 2. A sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo contra o Teste Rápido foram calculados pela tabela 2x2: Tabela2. Desempenho diagnóstico dos RT de Dengue (IgA, IgG e IgM): de Dengue Sensibilidade (95% CL) Especificidade (95% CL) PPV (95% CL) PPV (95% CL) Den-IgA RT 87.78% (156/184) ( ) 81.94% (59/72) ( ) 92.31% ( ) 67.82% ( ) Den-IgM RT 66.30% (122/184) ( ) 88.89% (64/72) ( ) 93.85% ( ) 50.79% ( ) Den-IgG RT 34.78% (64/184) ( ) 97.22% (70/72) ( ) 96.67% ( ) 36.84% ( ) Den-IgG/IgM RT 75.00% (138/184) ( ) 87.50% (63/72) ( ) 93.88% ( ) 57.80% ( )
3 Figura1. A área sob a curva (AUC) dos três e as comparações de seus pares de matrizes são apresentados na Tabela 3 e na Tabela 4. De acordo com as diferenças entre as AUC, o desempenho do Den-IgA RT foi significativamente melhor que o Den-IgG RT (P<0.001), e compatível com Den-IgM RT (P=0.060). Figura1. Comparativo geral de curvas ROC para Den-IgA RT, Den-IgM RT e Den-IgG RT para infecção aguda de Dengue (Positivos: 184, Negativos: 72). Tabela3. Comparativo geral de AUC dos testes rápidos de Dengue (Painel A + Painel B): Den-IgA RT Den-IgM RT Den-IgG RT Tabela4. Relação de pares global dos RT de Dengue (Painel A + Painel B): Den-IgA RT Den-IgM RT P = Den-IgA RT Den-IgG RT P < Den-IgM RT Den-IgG RT P < 0.001
4 Figura2. Com base nos quadros 5 e 6, o desempenho de Den-IgA RT e Den-IgM RT é comparável (P = 0.598), ao mesmo tempo em que diferiram significativamente com Den-IgG RT (P = 0.003). Figura2. Comparativo geral de curvas ROC para Den-IgA RT, Den-IgM RT e Den-IgG RT para amostras agudas de Dengue coletadas em hospitais (Positivos: 122, Negativos: 28). Tabela5. Relação AUC dos testes rápidos de Dengue (Painel A): Den-IgA RT Den-IgM RT Den-IgG RT Tabela6. Comparativo das AUCs de de Dengue (Painel A): Den-IgA RT Den-IgM RT P = Den-IgA RT Den-IgG RT P = Den-IgM RT Den-IgG RT P = 0.008
5 Figura4. Na detecção de infecção primária, a diferença de desempenho para Den-IgA RT e Den-IgM RT é insignificante (P=0.224). Figura4. Comparativo geral de curvas ROC para Den-IgA RT, Den-IgM RT e Den-IgG RT para infecção primária aguda de Dengue (Positivos: 97, Negativos: 72). Tabela9. Comparativo de AUC de Dengue para infecção primária aguda: Den-IgA RT Den-IgM RT Tabela10. Comparativo de pares de Dengue para infecção primária aguda: Den-IgA RT Den-IgM RT P = 0.224
6 Figura5. O teste Dengue IgA RT apresentou maior sensibilidade na detecção de infecção secundária em comparação com o Den-IgM RT e Den-IgG RT (AUC na Tabela 11), com uma diferença significativa com o Den-IgM RT (P = 0.040) ( Tabela 12). Figura5. Comparativo geral de curvas ROC para Den-IgA RT, Den-IgM RT e Den-IgG RT para infecção secundária aguda de Dengue (Positivos: 87, Negativos: 72). Tabela11. Comparativo AUCs de Dengue para infecção secundária: Den-IgA RT Den-IgM RT Den-IgG RT Tabela12. Comparativo de pares de Dengue para infecção aguda secundária: Den-IgA RT Den-IgM RT P = Den-IgA RT Den-IgG RT P = Den-IgM RT Den-IgG RT P = 0.140
7 Conclusão Com base nos dois painéis de soros suspeitos de Dengue coletados no hospital e no centro de diagnósticos, a sensibilidade global do ASSURE Dengue IgA RT foi determinada como melhor que o Dengue IgM/IgG RT. O nível de detecção do ASSURE Dengue IgA RT foi comparável com Dengue IgM/IgG RT para amostras hospitalares, no entanto, um desempenho significativamente melhor com soros coletados no centro de diagnóstico (P = 0.003). A maioria dos primeiros casos de dengue febril do centro de diagnósticos produziu anti-dengue IgA e continham níveis insuficientes de anti-dengue IgM/IgM, enquanto pacientes hospitalizados admitidos na fase posterior da infecção produziram níveis suficientes de anti-dengue IgM/IgG, que são detectáveis no Dengue IgM/IgG RT. Estudos prévios conduzidos com o uso de amostras de sangue suspeitos de Dengue em fase aguda usando Dengue IgM/IgG RT mostraram achados similares (6,7). O teste ASSURE Dengue IgA RT mostrou uma sensibilidade compatível para a detecção de infecções primárias com Den-IgM RT (P = 0,224), entretanto, verificou-se ser mais sensível em detecção de infecção secundária em comparação com Den-IgM RT (P = 0,04). Além disso, uma das amostras de soro-conversão do hospital foi detectada na fase aguda somente pelo teste ASSURE Dengue IgA RT, que indicou a utilidade do ASSURE Dengue IgA RT para o diagnóstico precoce da dengue. Em conclusão, o desempenho do teste ASSURE Dengue IgA RT em ambos os painéis foi consistente, sugerindo sua aplicabilidade em fases agudas iniciais de convalescença da infecção. Referência: 1. Gupta E, Dar L, Kapoor G, Broor S. The changing epidemiology of dengue in Delhi, India. Virol J 2006;3: Bharaj P, Chahar HS, Pandey A, Diddi K, Dar L, Guleria R, et al. Concurrent infections by all four dengue virus serotypes during an outbreak of dengue in 2006 in Delhi, India. Virol J 2008;5:1. 3. Gubler DJ. Dengue and dengue hemorrhagic fever. Clin Microbiol Rev 1998;11: Monath TP. Dengue: The risk to developed and developing countries. Proc Nat l Acad Sci USA 1994; 91: Med Calc statistical software (Version 11). 6. Blacksell et al, The comparative Accuracy of 8 Commercial Rapid Immunochromatographic Assays for the Diagnosis of Acute Dengue Virus Infection. CID 2006;42: Blacksell et al, Prospective Study to Determine Accuracy of Rapid Serological assays for the Diagnosis of Acute Dengue Virus Infection in Laos. Clin. Vaccine Immunol, 2007,11:
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