SOROLOGIA PARA Borrelia burgdorferi EM EQUINOS DA ILHA DE MARAJÓ E MUNICÍPIO DE CASTANHAL, PARÁ, BRASIL

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1 9 SOROLOGIA PARA Borrelia burgdorferi EM EQUINOS DA ILHA DE MARAJÓ E MUNICÍPIO DE CASTANHAL, PARÁ, BRASIL RENATA CUNHA MADUREIRA 1 CHARLES PASSOS RANGEL 2 JOSÉ DIOMEDES BARBOSA NETO 3 ADIVALDO HENRIQUE DA FONSECA 4 1- Médica Veterinária. PhD. Fiscal Federal Agropecuário - SIPAG/SFA/MS; 2- Aluno do Curso de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ); 3- Professor Titular da Universidade Federal do Pará; 4- Professor Titular, Dep. Epidemiologia e Saúde Pública UFRRJ. Cx. Postal 74548, Seropédica - RJ, Brasil, ; ( r 28) RESUMO: MADUREIRA, R. C.; RANGEL, C. P.; BARBOSA NETO, J. D.; FONSECA, A. H. Sorologia para Borrelia burgdorferi em equinos da Ilha de Marajó e Município de Castanhal, Pará, Brasil. Revista de Ciências da Vida, Seropédica, RJ: EDUR, v. 29, n. 1, jan. - jun., p , O objetivo do presente trabalho foi observar a frequência de anticorpos da classe IgG contra Borrelia burgdorferi em cavalos na Ilha de Marajó e da cidade de Castanhal, Brasil. A coleta de 208 amostras de soro foi procedida em cavalos, 105 escolhidos de forma aleatória da Ilha de Marajó e 103 escolhidos de forma aleatória do continente, na cidade de Castanhal, os quais foram analisados pelo (ELISA). Um questionário foi usado para registrar espécie, sexo e presença ou não de carrapatos. Foi observado que 15(7,2%) animais reagiram indiretamente ao ELISA, sendo 10(9,5%) da Ilha de Marajó e 5(4,9%) animais positivos da cidade de Castanhal. Diferença significante não foi observada entre equinos soropositivos na ilha e no continente, nem em relação ao sexo e espécie dos animais. A presença de anticorpos reagentes contra Borrelia burgdorferi em cavalos na Ilha de Marajó e da cidade de Castanhal indica a presença de Borrelia sp. Ao invés de baixa frequência de soro positivo o que é necessária atenção para a ocorrência de borreliosis humana nas áreas estudadas considerando a importância desta doença como zoonoses emergentes. Palavras chave: Borrlia burdorgeri, Spirochaetae, cavelos, sorologia. ASTRACT: MADUREIRA, R. C.; RANGEL, C. P.; BARBOSA NETO, J. D.; FONSECA, A. H. Sorology for Borrelia burgdorferi in Equines in the Island of Marajó and Castanhal municipalitie, Pará, Brazil. Revista de Ciências da Vida, Seropédica, RJ: EDUR, v. 29, n. 1, jan. - jun., p , 2009.The aim of the present work was to observe the frequency of antibodies of the class IgG against Borrelia burgdorferi in horses in the Marajó Island and Castanhal County, Pará, Brazil. The collection of 208 serum was proceeded in horses, 105 sample from de Island of Marajó and 103 sample from the continent, in the Castanhal county, Pará, which were analyzed by the immune enzymatic assay indirect (ELISA). A questionnaire was used to register breed, sex and presence or absence of ticks. It was observed that 15 (7,2%) animals reagents to indirect ELISA, being 10 (9,5%) from horses of the Marajó Island and five (4,9%) positives animals of Castanhal county. Significant difference was not observed among equines seropositive in the island and the continent, nor in relation to the sex and breed of the animals. The presence of reactive antibodies against B. burgdorferi in the horses in the Marajó Island and Castanhal is indicative of the presence of Borrelia sp. and in spite of the low frequency of positive serum it is necessary attention for occurrence of human borreliosis in the studied areas considering the importance of that illness as emergent zoonoses. Key words: Borrelia burgdorferi Spirochaetae horses - serology.

2 10 Sorologia para Borrelia burgdorferi... INTRODUÇÃO O complexo Borrelia burgdorferi sensu lato é responsável por causar a enfermidade conhecida como borreliose de Lyme nos Estados Unidos da América (EUA), Europa e Ásia. Esses espiroquetídeos são transmitidos por carrapatos do gênero Ixodes aos animais silvestres, caracterizados como reservatórios naturais (ANDERSON, 1988) e aos animais domésticos, conhecidos como importantes reservatórios de Borrelia spp. no ambiente domiciliar, favorecendo ao carrapato veicular o patógeno até o homem e outros animais (MATHER et al., 1994). Inquéritos sorológicos para B. burgdorferi em equinos nos EUA demonstraram até 60% de animais soropositivos em áreas endêmicas, alguns animais apresentavam dermatite nos membros e edema transitório das patas e poliartrites, sugerindo importantes implicações para a indústria equina no futuro (COHEN et al., 1988). Trabalhos desenvolvidos na Europa consideram controversa a associação entre sorologia positiva e sinais clínicos em equinos (CARTER et al., 1994; EGENVALL et al., 2001; MULLER et al., 2002; SCHÖNERT et al., 2002); porém, isso não descarta a importância dos levantamentos soroepidemiológicos para observação do agente na região. No Brasil, a primeira publicação alertando a comunidade médica para a possibilidade da ocorrência de borreliose de Lyme nesse território foi em Posteriormente vários registros de borreliose de Lyme simile foram feitos por todo o país: Rio de Janeiro (AZULAY et al., 1991; BRIGGS et al., 1993), São Paulo (YOSHINARI et al., 1993; 2003), Mato Grosso do Sul (COSTA et al., 1996), Amazonas (TALHARI et al., 1992; MELO et al., 2003). Em artigo de revisão, Fonseca et al. (2005) destacaram a importância da borreliose Lyme simile para a dermatologia no Brasil, reforçando a importância do isolamento do agente etiológico, que até hoje não foi possível. Os vetores ainda não foram estabelecidos; porém, um estudo com carrapatos de pequenos mamíferos do estado de São Paulo sugeriu o Ixodes sp. como um potencial vetor para o agente da borreliose de Lyme-simile, sendo responsável pela manutenção da espiroqueta no ambiente silvestre e o carrapato do cavalo Amblyomma cajennense responsável pela transmissão ao homem (ABEL et al., 2000). Outra espiroqueta que infecta equinos é B. theileri que tem como principal vetor o carrapato Boophilus microplus (CALLOW, 1967). Rogers et al. (1999) alertaram para a probabilidade de comprometimento de estudos soroepidemiológicos devido a reações cruzadas entre B. bugdorferi sensu lato e B. theileri em regiões onde os agentes coexistem. Portanto, no mesmo estudo, avaliaram a especificidade do teste ELISA com soro bovino, não observando reação cruzada. A Ilha de Marajó é a maior ilha flúviomarinha do mundo, apresentando características fisiográficas peculiares (MARQUES et al., 2001). No lado oriental da ilha onde predominam terras baixas e campos naturais, ocorreram cruzamentos entre várias raças de equinos, resultando na raça Marajoara, comum nessa região e adaptada ao meio e ao trabalho no campo (MARQUES et al., 2001). O objetivo do presente trabalho foi verificar a frequência de anticorpos da classe IgG anti-b. burgdorferi em equídeos da Ilha de Marajó e do município de Castanhal, Pará, Brasil. MATERIAL E MÉTODOS Procedeu-se à coleta de 208 soros de eqüídeos, onde 105 amostras foram provenientes dos municípios de Soure e Cachoeira do Arari, na Ilha de Marajó, e 103 amostras foram provenientes do município de Castanhal, mesorregião metropolitana de Belém, parte continental do Pará. As amostras de soro foram colhidas por conveniência de equídeos jovens e adultos, aparentemente sadios, de diferentes raças, no mês de novembro de Coletou-se assepticamente o sangue desses animais, através da venopunção jugular. Os soros obtidos foram armazenados em tubos tipo eppendorf a -20 C até o momento da análi-

3 11 se sorológica. Por meio de um questionário foram registrados dados como raça, sexo e presença ou ausência de carrapatos. Realizou-se o ELISA indireto para detectar anticorpos da classe IgG homólogos contra B. burgdorferi sensu lato, padronizado por Salles et al. (2002), com antígeno de extrato de célula total sonicado de B. burgdorferi sensu stricto cepa americana G39/40. Foram utilizados doze soros controles negativos e um controle positivo. A linha de corte do ensaio foi estabelecida pela fórmula: X + SD t 1 + (1/ n) onde é a média dos controles negativos, SD é o desvio padrão, n é o número de controles negativos utilizados (n=12) e t é o nível de confiança (FREY et al, 1998). Para observação de possíveis diferenças entre as frequências encontradas nos grupos de animais de diferentes raças e sexos, assim como entre as freqüências das regiões analisadas, utilizaram-se os testes não paramétricos Qui-quadrado e Fisher, por meio do programa computacional INSTAT, a 5% de probabilidade. RESULTADOS A análise soroepidemiológica das 208 amostras de soros revelou que 15 (7,2%) animais foram reagentes positivos ao ELISA indireto, com anticorpos da classe IgG contra B. burgdorferi, enquanto 193 (92,8%) amostras foram negativas. Na Ilha de Marajó, 10 (9,5%) animais apresentaram-se positivos, enquanto em Castanhal cinco (4,9%) animais foram reagentes ao ELISA indireto. Não houve diferença significativa (P= 0,2839) de positividade entre os animais na Ilha de Marajó e em Castanhal, no continente do Estado do Pará (Tabela 1). Tabela 1. Frequência sorológica de anticorpos anti-borrelia burgdorferi em equídeos na Ilha de Marajó e em Castanhal, Pará, Brasil. Freqüência (nº de animais positivos/ nº de animais testados) Ilha de Marajó Castanhal Total 9,5% (10/105) 4,8% (5/103) 7,2% (15/208) Não houve diferença significativa (P>0,05). Os dados obtidos a partir do questionário revelaram a presença de 90 animais da raça Marajoara, 91 Mangalarga e 27 de outras raças, sendo um da raça Árabe, dois da Quarto de Milha, doze da raça Puruca, três mestiços e nove burros. Desses animais, 118 eram machos e 90 eram fêmeas. Todos os animais estavam infestados por carrapatos Anocentor nitens. A análise segundo as diferentes raças revelou que 10% dos animais da raça Marajoara, 3,3% da raça Mangalarga e 11,1% dos animais de outras raças eram soropositivos para anticorpos da classe IgG contra B. burgdorferi (Tabela 2). A análise estatística não revelou diferença significativa (P= 0,1953) entre as frequências de animais positivos nas diferentes raças.

4 12 Sorologia para Borrelia burgdorferi... Tabela 2. Frequência sorológica de anticorpos anti-borrelia burgdorferi em eqüídeos de diversas raças no estado do Pará, Brasil. Freqüência Raça Marajoara Raça Mangalarga Outras Raças Relativa Absoluta Relativa Absoluta Relativa Absoluta 10% 4,3% 3,3% 1,4% 11,1% 1,4% (9/90) (9/208) (3/91) (3/208) (3/27) (3/208) Não houve diferença significativa (P>0,05). A análise segundo o sexo revelou que 6,8% dos machos e 7,8% das fêmeas eram positivos (Tabela 3) não apresentando diferença significativa (P= 0,7931). Freqüência Macho Fêmea Relativa Absoluta Relativa Absoluta 6,8% 3,8% 7,8% 3,4% (8/118) (8/208) (7/90) (7/208) Não houve diferença significativa (P>0,05). DISCUSSÃO Neste trabalho, 7,2% (15/208) dos animais apresentaram-se soropositivos para B. burgdorferi, semelhante aos resultados de outros inquéritos sorológicos realizados em equinos no Brasil (MADUREIRA et al., 2007; GALO et al., 2009). Em levantamento sorológico no município do Rio de Janeiro, em equinos mantidos sob diferentes tipos de controle de ectoparasitas, foi possível observar em animais com alta infestação de carrapatos, 42,9% de positividade para B. burgdorferi no ELISA indireto, em contraste com 17,5% de animais soropositivos que viviam sob manejo regular e 0,9% sob controle rigoroso de ectoparasitas (SALLES et al., 2002), evidenciando a correlação entre presença de anticorpos contra B. burgdorferi e infestação por carrapatos. O carrapato citado por transmitir Borrelia sp. a humanos e animais domésticos

5 13 no Brasil é o A. cajennense (ABEL et al., 2000). Embora esse fato não tenha sido comprovado experimentalmente, pode justificar a baixa frequência de animais soropositivos no presente estudo, uma vez que os equinos analisados estavam infestados por carrapatos da espécie A. nitens. A borreliose de Lyme em equinos está bem definida nos EUA, apresentando positividade de 10 a 68% em áreas endêmicas (COHEN et al., 1988; 1996). Marcus et al. (1985) observaram 24% de equinos soropositivos para B. burgdorferi em área endêmica para borreliose de Lyme e apenas 2% de soropositivos em áreas não endêmicas nos EUA, não observando diferença significativa entre sexo e raças, assim como observado no presente estudo. O diagnóstico sorológico é de grande importância no auxílio clínico e em estudos epidemiológicos, contudo este deve ser interpretado em conjunto com dados clínicos e histórico dos animais, assim como das propriedades. A presença de anticorpos contra B. burgdorferi em equinos na ilha de Marajó e em Castanhal, ambos no Pará, é indicativo da presença de Borrelia sp. e apesar da baixa frequência de animais soropositivos é necessário atenção para ocorrência de borreliose humana nas regiões estudadas considerando a importância dessa enfermidade como zoonose emergente. AGRADECIMENTOS Aos docentes da Universidade Federal do Pará: Alessandra Scofield Amaral, Carlos Magno Chaves Oliveira, Valíria Duarte Cerqueira e Marcos Dutra Duarte e à Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ) pelo apoio financeiro. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ABEL, I. S.; MARZAGÃO, G.; YOSHINARI, N. H.; SCHUMAKER, T. T. S. Borrelia-like spirochetes recovered from ticks and small mammals collected in the Atlantic Forest Reserve, Cotia county, state of São Paulo, Brazil. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, v.95, n. 5, p , ANDERSON, J. F. Mammalian and avian reservoirs for Borrelia burgdorferi. Annals New York Academy of Sciences, v. 25, n. 8, p , AZULAY, D. A.; AZULAY-ABULAFIA, L.; SODRÉ, C. T.; AZULAY, D. R.; AZULAY, M. M. Lyme disease in Rio de Janeiro, Brazil. International Journal of Dermatology, v. 30, n. 8, p , BRIGGS P. L.; FRAGA S.; FILGUEIRA A. L. Doença de Lyme: Apresentação de um caso com demonstração de Borrelia. In: 48º CON- GRESSO BRASILEIRO DERMATOLOGIA, 1993, Curitiba-PR. Anais... Curitiba-PR, COLLOW, L. L. Observations on ticktransmitted spirochaetes of cattle in Australia and South Africa. British Veterinary Journal, v. 123, p , CARTER, S. D.; MAY, C.; BARNES, A.; BENNETT, D. Borrelia burgdorferi infection in UK horses. Equine Veterinary Journal, v. 26, n. 3, p , COHEN, D.; BOSLER, E. M.; BERNARD, W.; MEIRS II, D.; EISNER, R.; SCHULZE, T. C. Epidemiologic studies of Lyme Disease in horses and their public health significance. Annals New York Academy of Sciences, v. 539, p , 1988.

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