Ciência Animal - Suplemento, 2012

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1 Ação da glutationa reduzida na criopreservação do sêmen caprino em diferentes tempos de estabilização resultados preliminares Reduced glutathione action on goat sperm cryopreservation at different stabilization times preliminary results Sildivane Valcácia Silva * ; Ellen Cordeiro Bento da Silva; Helder Melo de Souza; Maria Madalena Pessoa Guerra Laboratório de Andrologia, Departamento de Medicina Veterinária da UFRPE * sildivane@yahoo.com.br. ABSTRACT The aim of this work was to evaluate the effect of reduced glutathione (GSH) in goat semen cryopreservation at different times of stabilization. Three pools of sperm obtained from five male goats were frozen in skim milk-based extender, in presence or absence of 5.0 mm GSH, using conventional method of cryopreservation and different stabilization times (0, 2 or 4 hours) after reaching 5 C. After thawing, semen samples were analyzed for motility (PM), vigor, acrosome integrity (iac), plasma membrane integrity (imp) and mitochondrial membrane potential (MMP). PM and iac were lower in GSH 4h group (P<0.05), whereas GSH 4h was higher than GSH 0h group (P<0.05) for imp. It is concluded that the addition of 5.0 mm GSH no interferes in goat sperm frozen quality, independent of stabilization time used. Palavras-chaves: acrossoma; membrana plasmática; motilidade Keywords: acrosome; plasma membrane; motility INTRODUÇÃO A criopreservação ocasiona aumento da fluidez da membrana plasmática dos espermatozoides e as expõe a sítios de ligação com moléculas externas, o que resulta em capacitação espermática prematura, bem como outras crioinjúrias (Hashida et al., 2005) e danos oxidativos. O tempo de estabilização usado na criopreservação auxilia na manutenção da viabilidade celular pós-congelação/descongelação (Câmara et al., 2011) de algumas espécies. Entretanto, para a espécie caprina, poucos trabalhos relatam a importância do período de estabilização no protocolo de conservação do sêmen e no efeito protetor exercido pela glutationa reduzida (GSH) sobre os espermatozoides criopreservados (Irvine, 1996). Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar a ação 289

2 da glutationa reduzida na criopreservação do sêmen caprino em diferentes tempos de estabilização. MATERIAL E MÉTODOS Foram utilizados três pools de sêmen, obtidos de cinco reprodutores caprinos, os quais foram diluídos em leite desnatado acrescido de glicerol (7%), na presença de GSH (5,0mM/mL) ou não (Controle), para a concentração final de 200x10 6 sptz/ml, acondicionados em palhetas e congelados em sistema convencional (geladeira e vapor de nitrogênio), utilizando diferentes tempos de estabilização (0, 2 ou 4h) depois de atingir a temperatura de 5 C. Após descongelação (37 C/30 segundos), alíquotas de sêmen de cada grupo experimental foram avaliadas para motilidade (MIP) e vigor (microscópio de contraste de fases), integridade da membrana plasmática (imp) com Diacetato de Carboxifluoresceína e Iodeto de Propídio, do acrossoma (iac) com FITC- PNA e potencial da membrana mitocondrial (PMM) com JC-1 (Silva et al., 2012). Os resultados foram analisados por ANOVA, após transformação pelo arco seno (arcsen P/100), e pelo teste de Tukey-Kramer; com exceção do vigor, analisado pelo teste de Kruskal-Wallis, com significância de P<0,05. RESULTADOS E DISCUSSÃO Para a MIP, os grupos GSH 0 e 4h foram inferiores (P<0,05) aos demais e não obedeceram às normas do Manual... (CBRA, 1998) para aprovação do sêmen descongelado. Ressalta-se, ainda, o GSH 4h também apresentou menor (P<0,05) percentual de iac, em relação a todos os grupos. Em contrapartida, os grupos 4h (sem e com GSH) apresentaram maiores (P<0,05) percentuais de células com imp em comparação ao grupo GSH 0h, sem diferir dos demais grupos. Tais achados podem ser justificados pelo fato de que, durante a criopreservação, ocorre influxo de Ca 2+ para o interior da célula com desencadeamento de reação acrossomal prematura (Sanocka & Kurpisz, 2004), não havendo relatos de que a GSH possa impedir tal evento, enquanto que, em relação à membrana plasmática, este antioxidante tem o papel de reduzir a produção exacerbada dos agentes oxidantes, prevenindo os efeitos deletérios das ROS sobre a célula espermática (Irvine, 1996). 290

3 Tabela 1 Parâmetros espermáticos (Média ± desvio padrão) de amostras congeladas de sêmen caprino com ou sem GSH e em diferentes tempos de estabilização a 5 C Grupos Experimentais 0h 2h 4h Parâmetros Sem GSH Com GSH Sem GSH Com GSH Sem GSH Com GSH MIP (%) 35,00±15,00 ab 28,33±6,41 b 38,24±2,89 a 38,33±2,78 a 41,66±2,89 a 28,33±1,05 b Vigor 3,00±1,00 2,00±0,50 3,00±0,00 3,00±0,50 3,00±0,50 3,00±0,50 iac (%) 54,00±5,07 a 55,83±4,05 a 61,66±6,82 a 60,67±5,17 a 62,33±6,82 a 39,53±4,15 b imp (%) 39,83±9,68 ab 36,50±6,31 b 48,16±7,48 ab 45,16±2,65 ab 47,66±3,51 a 50,49±4,35 a apmm (%) 41,33±20,55 49,83±7,54 34,83±22,00 50,00±9,11 35,83±25,41 44,50±4,11 MIP= motilidade progressiva; iac= integridade do acrossoma; imp= integridade de membrana plasmática; apmm= alto potencial de membrana mitocondrial. Letras diferentes na mesma linha significam P<0,05. CONCLUSÃO Conclui-se que a adição de 5,0mM de GSH não interfere na qualidade de espermatozoides congelados/descongelados de caprinos, independente do tempo de estabilização utilizado. REFERÊNCIAS CÂMARA, D.R.; SILVA, S.V.; ALMEIDA, F.C.; NUNES, J.F.; GUERRA, M.M.P. Effects of antioxidants and duration of pre-freezing equilibration on frozen-thawed ram semen. Theriogenology, v. 76, p , CBRA. Manual para exame andrológico e avaliação do sêmen animal. 2ª Ed. Belo Horizonte: Colégio Brasileiro de Reprodução Animal, p. HASHIDA, N.H.; ABDULLAH, R.B.; RAJIKIN, M.H.; MAT NOOR, M. Ultrastructural studies of fresh, frozen-thawed and acrosome-reacted goat sperm. Biomedical Research, v.16, n. 2, p , IRVINE, D.S. Glutathione as a treatment for male infertility. Reviews of Reproduction, v.1, p. 6-12, SANOCK, D.; KURPISZ, M. Reactive oxygen species and sperm cells. Reproductive Biology and Endocrinology, v. 2, p , SILVA, E.C.B.; CAJUEIRO, J.F.P.; SILVA, S.V.; SOARES, P.C.; GUERRA, M.M.P. Effect of antioxidants resveratrol and quercetin on in vitro evaluation of frozen ram sperm. Theriogenology, v. 77, p ,

4 Adição de Aloe vera ao diluente a base de água de coco em pó (ACP-101 ) como crioprotetor do sêmen caprino resfriado a 4 ºC Addition of Aloe vera to powder coconut water solution (ACP-101 ) like cryoprotector of the goat semen cooled at 4 o C Gyselle Viana Aguiar 1* ; Bárbara Mara Bandeira Santos 1 ; José Maurício Maciel Cavalcante 1 ; Fábio Ranyeri Nunes Rodrigues 2 ; Cristiane Clemente Mello Salgueiro 1 ; José Ferreira Nunes 1 1 FAVET/UECE; 2 FATENE * gyselleaguiar@yahoo.com.br ABSTRACT This study aimed to evaluate the total and progressive motility of the goat spermatozoa extended in powder coconut water (ACP-101 ) solution added with egg yolk or Aloe vera (mature and young leaf). Six pools of four bucks were divided in aliquots and extended in three treatments: T1 = ACP ,5% egg yolk; T2 = ACP % Aloe vera young leaf; T3 = ACP % Aloe vera mature leaf. After that, the semen was cooled at 4 ºC for 48 hours, and evaluated at 0, 2 24 and 48 hours. The total motility of the T1 was superior then T2 and T3 at 0H, and then T2 at 24H. The progressive motility was no influenced for treatment. As well as both cryoprotectors (Aloe vera e egg yolk) were similar to maintain the sperm motility, the Aloe vera is indicated considering that is a vegetal product. Keywords: Buck; spermatozoa; extender. Palavras chaves: Bode; espermatozoide; diluidor. INTRODUÇÃO A água de coco tem sido utilizada em biotecnologias da reprodução animal obtendo-se bons resultados na preservação do sêmen de várias espécies, contudo para criopreservação do sêmen é necessária a utilização uma substância crioprotetora ao diluidor, na qual a mais amplamente utilizada é a gema de ovo. No entanto, a eliminação de substâncias de origem animal em meios de conservação de sêmen tem sido sugerida, com a finalidade de controlar doenças. Dessa forma, estipula-se o uso de produtos de origem vegetal na qual a Aloe vera, apresenta-se como uma alternativa por possuir, em sua composição, substâncias similares aos 292

5 crioprotetores convencionais (Boudreau & Beland, 2006). Dessa forma, este trabalho teve por objetivo avaliar a motilidade total e progressiva dos espermatozoides caprinos frescos (0H) e resfriados a 4 ºC (2, 24 e 48 horas), diluído em ACP-101 adicionado de gel mucilaginoso da folha jovem ou madura de Aloe vera ou gema de ovo. MATERIAL E MÉTODOS Os ejaculados de 4 caprinos adultos (2 Saanen e 2 SPRD) foram coletados uma vez por semana para formação de um pool, por 6 semanas. O pool foi dividido em três aliquotas que foram diluídas em uma solução à base de água de coco em pó (ACP-101 ) adicionado de crioprotetor de acordo com o tratamento: T1 = ACP ,5% gema de ovo; T2 = ACP % Aloe vera folha jovem; T3 = ACP % Aloe vera folha madura. O sêmen diluído foi resfriado a 4 ºC e uma amostra retirada e incubada a 37 ºC para avaliação da motilidade total e motilidade progressiva no sistema SCA (Sperm-Class Analyzer, Microptic S.L., versão 3.2.0) a 0 hora (sêmen fresco) e às 2, 24 e 48 horas de resfriamento. As comparações das médias dos parâmetros cinéticos foram avaliadas pelo teste de Kruskal-Wallis. Os resultados foram expressos como média ± erro padrão (p<0,05). RESULTADOS E DISCUSSÃO As médias e erros-padrão entre os tratamentos e os tempos de avaliação estão demonstrados na tabela 1. O T1 apresentou maior motilidade total do que os outros tratamentos no momento 0h (sêmen fresco diluído) e que T2 às 24h. Às 2h e 48 horas a motilidade total não diferiu entre os tratamentos. A motilidade progressiva não foi influenciada pelos tratamentos, independente do tempo de avaliação. Por outro lado, nos tratamentos T1 e T2 foi observada uma redução dos valores de motilidade progressiva às 48 horas de conservação. Os valores de motilidade total obtidos por Melo (2010) utilizando para o sêmen caprino resfriado em ACP + 5% de gema foram inferiores aos obtidos neste estudo. A utilização de uma menor concentração de gema de ovo (2,5%) associado à ACP-101 favoreceu a conservação do sêmen provavelmente devido a uma menor produção de lisolecitinas que danificariam a membrana espermática. Por outro lado, a motilidade 293

6 total obtida neste estudo foi inferior ao observado por Melo (2010) para o sêmen caprino diluído em ACP-101 adicionada a 5% de Aloe vera, resfriado a 4ºC. Tabela 1 Média + erro-padrão da motilidade total e motilidade progressiva do sêmen caprino diluído em água de coco em pó (ACP-101 ) adicionado de gema de ovo ou Aloe vera resfriado a 4 ºC por 48 horas. Tempo (horas) T1 T2 T3 Motilidade Total 0 91,3 ±12,1 Aa 59,5±10,9 Ab 62,4±10,9 Ab 2 74,6±10,9A Ba 67,7±10,9 Aa 53,2±10,9 Aa 24 75,4±10,9A Ba 48,8±10,9 Ab 54,5±12,1 Aab 48 40,5±12,1 Ba 32,2±10,9 Aa 38,5±12,1 Aa Motilidade Progressiva 0 31,8±6,6 Aa 23,5±6,0 ABa 29,8±6,0 Aa 2 43,6±6,0 Aa 29,6±6,0 Aa 28,1±6,0 Aa 24 29,6±6,0 ABa 21,0±6,0 ABa 24,6±6,0 Aa 48 13,5±6,6 Ba 12,7±6,0 Ba 17,8±6,6 Aa Letras maiúsculas indicam diferença significativa entre os tempos de conservação. Letras minúsculas indicam diferença significativa entre os tratamentos. (p < 0,05). T1 ACP ,5% de gema; T2 ACP % de Aloe vera (folha jovem); T3 ACP % de Aloe vera (folha madura). No presente estudo quando comparado a utilização da mucilagem de Aloe vera de folha jovem e ou madura adicionada ao ACP-101, não influenciou a motilidade total ou progressiva do sêmen caprino resfriado 4ºC. Provavelmente a composição das folhas de Aloe vera nos diferentes estágios de maturação não apresenta diferença que influencie a conservação espermática do sêmen caprino a 4 ºC. CONCLUSÃO Como ambos crioprotetores adicionados ao meio à ACP-101 funcionaram de forma similar na conservação do sêmen caprino a 4 ºC, indica-se a utilização de Aloe vera como crioprotetor devido a este ser produto de origem vegetal. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 294

7 BOUDREAU, M. D.; BELAND, F. A. Uma avaliação das propriedades biológicas e toxicológicas de Aloe barbadensis (Müller), Aloe vera. Jornal da Ciência Ambiental e da Saúden, Parte C, v.24, p , MELO, C.C.S. Conservação de sêmen caprino a 4 ºC utilizando ACP-101 com duas concentrações de Aloe vera ou gema de ovo. Fortaleza, Dissertação (Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias) UECE.Fortaleza, Ceará,

8 Aglutininas anti- Brucella abortus e anti- Brucella ovis em ovinos na microrregião de Presidente Dutra, MA Anti Brucella abortus and anti Brucella ovis agglutinins in sheep in the microregion of Presidente Dutra, MA Layla Excelsa Sotero do Nascimento 1 ; Rômulo José Vieira 1 ; Sonia Maria de Carvalho 2 ; Isôlda Márcia Rocha do Nascimento 1 ; Francisco de Assis Lima Costa 1 ; Ana Lys Bezerra Barradas Mineiro 1* 1 Universidade Federal do Piauí - UFPI; 2 Agência de Defesa do Maranhão - AGED * lysbarradas@ufpi.br ABSTRACT Brucellosis is a zoonosis of worldwide occurrence that affects mammals, the agent etiological is bacteria of the genus Brucella and is characterized as a patology of reproduction with symptoms of infertility and abortion. The objective of this study to conduct a survey Soroepidemiological for Brucella abortus and Brucella ovis in sheep flocks of the region of Presidente Dutra, MA. Therefore, we collected blood of 91 breed sheep Dorper, Santa Inês and crossbred, reared in extensive management and intercropping with cattle. The tests for the detection of agglutinins anti-brucella abortus and anti-brucella ovis were the Slow Agglutination Test (TAT), 2-Mercaptoethanol (2- ME) and Agar Gel Immunodiffusion (AGID). Of the 91 samples analyzed none was positive tests for Brucella abortus. And five samples (5.5%) reacted the IDGA for Brucella ovis. Key words: zoonosis, brucellosis, sheep Palavras-chaves: zoonose, brucelose, ovina INRODUÇÃO A brucelose é uma zoonose de ocorrência mundial que tem como agente etiológico bactérias do gênero Brucella. Provoca grandes prejuízos na produção animal, pois é uma doença infecto-contagiosa de evolução crônica, especialmente no trato reprodutivo (NOGUEIRA, et al., 2006). A transmissão normalmente ocorre pelo contato direto com fetos abortados, descargas uterinas, sêmen e restos placentários contaminados com Brucella. Também ocorre pela via oral, através de ingestão de leite de animais infectados e/ou pela via venérea (PESSEGUEIRO, et al., 2003). 296

9 Na Nigéria foram relatados alguns casos de ovinos reagentes para B. abortus por diagnóstico sorológico e pelo isolamento da bactéria em ovelhas que abortaram (OCHOLI, et al., 2005). No Brasil, Pinheiro Júnior et al. (2008), detectaram 2,5% de aglutininas anti-b.abortus em ovinos no estado de Pernambuco. Como no Nordeste brasileiro é comum o pastoreio consorciado de bovinos, ovinos e caprinos (ARAÚJO FILHO, 2002), e este pastoreio pode favorecendo assim a ocorrência de Brucella abortus em ovinos e caprinos. Por isso objetivou com o presente trabalho investigar da ocorrência de B. abortus e B.ovis em ovinos da microrregião de Presidente Dutra no estado do Maranhão. MATERIAL E MÉTODO Foram colhidos sangue, por meio de venopunção da jugular em tubos a vácuo sem anticoagulante,de 91 ovinos das raças Dorper, Santa Inês e mestiços com idade superior a seis meses provenientes de oito propriedades de criação de ovinos da Microrregião de Presidente Dutra MA. O soro foi obtido por centrifugação e colocado em frascos do tipo eppendorf e armazenados a -20 o C até o momento da realização dos testes sorológicos. Cada soro foi submetido aos testes de 2-Mercaptoetanol, SAL (Soroaglutinção Lenta) e IDGA (Imunodifusão em gel Ágar). RESULTADOS E DISCUSSÃO Não foram identificados ovinos reagentes nas provas sorológicas empregadas para a Brucella abortus. Estes resultados corroboram aos encontrados por Salaberry (2010), mas diferem dos resultados encontrados por Pinheiro Júnior et al. (2008) que encontraram 2,5% (9/360) das amostras positivas para Brucella abortus utilizado o método Antígeno Acidificado Tamponado (AAT). Nas provas sorológicas para a Brucella ovis somente na prova do IDGA identificou cinco soros positivos (5,5%). Os resultados obtidos se assemelham aos encontrados por Magalhães Neto e Gil- Turnes (1996) que foi de 5,5% de prevalênca para Brucella ovis. E inferior ao obtido por Azevedo et al., (2004), no Rio Grande do Norte (11,3%). CONSIDERAÇÕES FINAIS Não houve ovinos reagentes para a Brucella abortus nas oito propriedades da 297

10 microrregião de Presidente Dutra- MA, porém, pela falta de medidas sanitárias e pelo manejo consorciado com bovinos, não se pode descartar a possibilidade da introdução deste agente bacteriano nos rebanhos. Com os resultados obtidos no presente estudo em relação a soro-reatividade de ovinos à B.ovis conclui-se que a doença encontra-se presente, tornando-se um problema sanitário. A adoção de medidas profiláticas e sanitárias deve ser feitas, visto as grandes perdas que essa patologia pode provocar. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ARAÚJO FILHO, J.A.; CRISPIN, S.M.A. Pastoreio Combinado de Bovinos, Caprinos e Ovinos em Áreas de Caatinga no Nordeste do Brasil. Mato Grosso do Sul: Embrapa, p. AZEVEDO, S.S.; ALVES, C. J.; ALVES, F. S. L.; CLEMENTINO, I. J.; BATISTA, C. S. A.; AZEVEDO, A.S. Ocorrência de Anticorpos anti- Brucella ovis em Ovinos Procedentes de Quatro Municípios do Estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Agropecuária Técnica, v.25, n.2, p.45-50, MAGALHÃES NETO, A.; GIL TURNES, C. Brucelose ovina no Rio Grande do Sul. Pesq. Vet. Bras. Rio de Janeiro. v.16, p.75-79, NOGUEIRA, A.H.C.; FERRARI, C.I.L.; CURCI, V.C.L.M. Brucelose ovin (Brucella ovis). Agencia de Tecnologia dos Agronegócios- APTA, São Paulo,2006. OCHOLI, R.A.; KWAGA, J.K.P.; AJOGI, I.; BALE, J.O.O. Abortion due to Brucella abortus in sheep in Nigéria. Revie scientifique et technique/ OIE, Paris, v.24, n.3, p , PESSEGUEIRO, P.; BARATA, C.; CORREIA, J. Medicina Interna, v.10, n.2, PINHEIRO JUNIOR, N.R.; SANTANA, V.L.A.; MOTA, R.A.; SOUZA, M.M.A.; GUERRA, N.R. Frequência de aglutininas anti- Brucella abortus em caprinos e ovinos do sertão do estado de Pernambuco, Brasil, Ciência Animal Brasileira, Goiânia, v.9, n.4, p , SALABERRY, S.R.S. Epidemiologia das Principais Doenças Infecciosas de Ovinos do Município de Uberlândia. Minas Gerais: UFMG, p. 298

11 Análise Morfométrica de espermatozoides caprinos criopreservados com diluidor em meio à base da água de coco em pó (ACP-101c) ou TRIS Morphometric analysis of goat sperm cryopreserved with extender through the base of coconut milk powder (ACP-101c) or TRIS Sérvulo Pinheiro Maia Filho 1 ; Bruna Farias Brito 1 ; Priscila Palácio de Queiroz Farias 1 ; Carla Patrícia Mota Aragão 1 ; José Maurício Maciel Cavalcante 1 ; José Ferreira Nunes 1 ; 1 Faculdade de Veterinária/UECE; * servulo.maia@yahoo.com.br ABSTRACT Cryopreservation can alter the dimensions of spermatozoa in goats. The objective of this study was to evaluate the diluents ACP-101c and TRIS as the morphometric parameters of goat semen diluted fresh and cryopreserved. The semen was collected from 4 goats using artificial vagina, twice a week. In each collection the semen obtained from four goats were pooled, divided into two aliquots, diluted in ACP-101c and TRIS and cryopreserved. 100 sperm were evaluated correctly scanned per slide for size parameters (length, width, area and perimeter of the head). The morphometric parameters related to the size of the sperm fresh diluted semen thawed semen were higher than for length, area and perimeter in the diluent ACP-101c and with in TRIS. Keywords: Goat, CASA, diluents, semen Palavras-chave: Bodes, CASA, diluentes, sêmen INTRODUÇÃO A criopreservação de sêmen tem permitido a preservação indefinida de gametas de animais de alto valor genético (Hidalgo et al., 2007). Entretanto, esta técnica pode produzir efeitos danosos aos espermatozóides comprometendo a atividade espermática e conseqüentemente o poder fertilizante (Watson, 2000). A avaliação morfológica do espermatozóide tem sido realizada subjetivamente, resultando em variação de resultados entre técnicos e laboratórios. Isto motivou o desenvolvimento de sistemas automatizados de análise morfométrica do sêmen (Verstegen et al., 2002), permitindo uma avaliação objetiva e acurada de diferenças sutis nas dimensões do espermatozóide. Deste modo, este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da 299

12 criopreservação sobre a morfometria de espermatozóides de caprinos diluídos em meio à base de água de coco em pó (ACP-101c) e TRIS. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado no Laboratório de Tecnologia do Sêmen Caprino e Ovino (LTSCO), do Núcleo Integrado de Biotecnologia (NIB) da Universidade Estadual do Ceará. O sêmen foi coletado de quatro reprodutores caprinos com auxílio de vagina artificial, duas vezes por semana, totalizando 28 ejaculados. Em cada coleta o sêmen obtido destes animais foram reunidos em um pool, divididos em duas alíquotas a serem diluídas em ACP-101c e TRIS e em seguida submetidas à criopreservação. As análises morfométricas foram realizadas tanto com o sêmen fresco diluído como criopreservado em ACP-101c e TRIS. Cinco microlitros de sêmen fresco diluído ou criopreservado foram diluídos/re-diluídos em solução de cloreto de sódio 0,9% e incubados por cinco minutos a 37 o C. Cinco microlitros desta suspensão foram utilizados para confecção de esfregaços em lâminas para microscopia e secas ao ar. As lâminas foram coradas utilizando o kit Panótico CBC (Instant-Prov). Um mínimo de 100 cabeças de espermatozóides corretamente digitalizadas foram analisadas utilizando o módulo morfológico do sistema de análise do sêmen auxiliado por computador (SCA, Microptics S.L., Barcelona, Espanha). O módulo de morfometria calculou automaticamente os parâmetros morfométricos dos espermatozóides analisados. Para a análise estatística, os dados foram expressos em média e desvio padrão. Dados com distribuição normal foram submetidos à ANOVA, enquanto os não paramétricos foram avaliados pelo teste de Kruskall Wallis. RESULTADOS E DISCUSSÃO O sêmen fresco diluído em ACP-101c apresentou valores superiores nos parâmetros comprimento, área e perímetro em relação ao sêmen fresco diluído em TRIS. Todos os parâmetros de tamanho dos espermatozóides no sêmen fresco diluído, em ACP-101c ou TRIS, encontraram-se maiores àqueles encontrados por Gravance et al. (1997), e menores do que os valores encontrados por Hidalgo et al (2007), sendo que os espermatozóides diluídos em ACP-101c apresentaram também dimensões superiores ao TRIS, exceto na largura. 300

13 CONCLUSÃO Estudos complementares da avaliação in vivo desses diluentes poderão esclarecer o benefício dessas alterações em programas de inseminação artificial, uma vez que o diluente ACP-101c foi capaz de manter parâmetros morfométricos pósdescongelamento semelhantes aos encontrados no diluente TRIS. Tabela 1. Distribuição do percentual das alterações morfométricas quanto aos parâmetros de dimensão do sêmen caprino fresco diluído e criopreservado em ACP-101c e TRIS. Parâmetro Diluente Sêmen fresco Sêmen diluído descongelado CV(%) Comprimento ACP-101c 8.19 ± 0.20 Aa 7.79 ± 0.35 Ba 3.59 TRIS 7.91 ± 0.23 Ab 7.67 ± 0.17 Aa 2.66 CV(%) Largura ACP-101c 3.90 ± 0.11 Aa 3.76 ± 0.16 Aa 3.54 TRIS 3.81 ± 0.10 Aa 3.65 ± 0.10 Ba 2.78 CV(%) Área ACP-101c ± 1.18 Aa ± 1.92 Ba 5.98 TRIS ± 1.42 Ab ± 1.30 Aa 5.39 CV(%) Perímetro ACP-101c ± 0.46 Aa ± 0.84 Ba 3.27 TRIS ± 0.57 Ab ± 0.51 Aa 2.69 CV(%) Letras maiúsculas distintas representam diferenças significativas entre colunas (sêmen fresco diluído x descongelado). Letras minúsculas distintas representam diferenças significativas entre linhas (ACP x TRIS). p<0.05. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS HIDALGO, M., I.; RODRÍGUEZ and J.M. DORADO The effect of cryopreservation on sperm head morphometry in Florida male goat to sperm freezability Anim. Reprod. Sci., 100:

14 WATSON, P.F The causes of reduced fertility with cryopreservad semen. Anim. Reprod. Sci., 60/61: VERSTEGEN, J, M.; IGUER-OUADA and K. ONCLIN Computer assisted semen analyzers in andrology research and veterinary practice. Theriogenology,57:

15 Aspectos genéticos sobre a prolificidade em caprinos utilizando modelo bayesiano de limiar Genetic aspects on prolificacy in goats using Bayesian model threshold Dayana Maria do Nascimento¹*; Natanael Pereira da Silva Santos²; José Lindenberg Rocha Sarmento 3 ; Edgard Cavalcante Pimenta Filho 4 ; Antonio Moreira da Silva Junior 5 ¹Campus Cinobelina Elvas UFPI - Bom Jesus*; ²Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, UFPI Teresina; ³Campus Cinobelina Elvas UFPI - Bom Jesus 4 Universidade Federal da Paraíba, UFPB/CCA Areia; 5 Campus Cinobelina Elvas UFPI - Bom Jesus * dayana.vet@hotmail.com ABSTRACT The aim of this study was to estimate variance components and genetic parameters for prolificacy of dairy goats, using Bayesian threshold model with different sizes of chains. Data was obtained from goats reproductive control in semi-intensive crossbred from Pardo Alpine bucks and with type Gurguéia naturalized females, collected during representative range of eight (8) consecutive years. In conclusion, the use of animal models threshold in the Bayesian analysis showed to be suitable for the study of prolificacy. Palavras-Chave: Modelo Bayseano; prolificidade; caprinos leiteiros; Keywords: Bayesian models, prolificacy, dairy goat INTRODUÇÃO Os baixos índices reprodutivos atribuídos às raças caprinas indicam que a reprodução é um processo complexo e sensível às variações ambientais. Dentre as características de natureza reprodutiva a prolificidade se apresenta com potencial para contribuir com o ganho genético anual nos rebanhos caprinos. A aplicação de modelos bayesianos de limiar na avaliação de características categóricas pode favorecer maiores ganhos genéticos ao identificar de forma mais eficiente os animais com valor genético superior, pois a estimação de herdabilidades na escala subjacente mostra-se mais elevada (Sousa et al., 2000). Diante disso, objetivou-se estimar os componentes de variância e parâmetros genéticos da prolificidade de 303

16 caprinos leiteiros utilizando modelo bayesiano de limiar com diferentes tamanhos de cadeias. MATERIAL E MÉTODOS O trabalho foi realizado com dados do rebanho caprino da Fazenda Carnaúba, situada no município de Taperoá-Paraíba. Os registros de prolificidade foram obtidos do controle reprodutivo, em sistema semi-intensivo, de cabras mestiças oriundas do cruzamento de reprodutores da raça Pardo Alpino com fêmeas do tipo naturalizado Gurguéia, coletados com representatividade durante intervalo de 8 (oito) anos consecutivos. Os componente de variância e parâmetros genéticos foram estimados com modelos animais linear e de limiar, mediante análise Bayesiana unicaracterística, realizada com o aplicativo MTGSAM Threshold (Multiple Trait Gibbs Sampler for Animal Models) desenvolvido por Van Tassell et al. (1998). No modelo de limiar, assume-se que a escala subjacente apresenta distribuição normal contínua (Liability - Predisposição), e é representada como: ( ) em que é o vetor da escala base de ordem ; ( ) é o vetor dos parâmetros de locação de ordem com, e ordem com e (como efeito genético aditivo direto e não-correlacionados, respectivamente); é a matriz de incidência conhecida de ordem por ; é a matriz de identidade de ordem por e é a variância residual. Neste caso, as categorias de (característica definida em parto simples e parto múltiplo) para cada animal foram definidas por, na escala subjacente: { em que, é o número de observações para cada categoria. Neste estudo o grau de liberdade correspondente à distribuição Wishart Invertida, que indica o grau de confiabilidade da distribuição inicial ( ), foi flat para todas as variâncias iniciais, ou seja, não refletia grau de conhecimento sobre os parâmetros ( ). Foram realizadas análises com cadeias de 500, 800 mil e 1 milhão de ciclos. Dimensão de burn-in e intervalo de amostragem para cada tamanho da cadeia foram obtidos utilizando o programa Gibanal (Van Kaam, 1998). RESULTADOS E DISCUSSÃO Observou-se que a não utilização de informação a priori em cadeias de 500,

17 mil e 1 milhão de ciclos, não apresentou variação considerável dos parâmetros estimados, sendo indicativos de possível convergência à distribuição conjunta a posteriori, como recomendado por Cardoso (2008). Como a variância residual ( ) não é estimável em modelos de limiar, para se obter a identificabilidade na função de verossimilhança foi feita a parametrização atribuindo-se o valor 1 para a mesma ( ). O desvio-padrão do erro de Monte Carlo foi pequeno e praticamente nulo, confirmando que o tamanho da cadeia amostral utilizada foi suficiente para obtenção de estimativas a posteriori das distribuições marginais dos componentes de (co)variância, ou seja, a convergência foi alcançada pela cadeia de Gibbs. CONCLUSÃO O uso de modelo animal de limiar sob análise Bayesiana mostrou-se adequado para o estudo da prolificidade. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CARDOSO, F.F. Manual de utilização do programa INTERGEN: versão 1.0 em estudos de genética quantitativa animal. Bagé: Embrapa Pecuária Sul, SOUSA, W.H.; PEREIRA, C.S.; BERGMANN, J.A.G. et al. Estimativas de componentes de variância e de parâmetros genéticos para características de reprodução por intermédio de modelos lineares e de limiar. Revista Brasileira de Zootecnia. v. 29, n. 6, p , VAN KAAM, J.B.C.H.M. Gibanal 2.9: analyzing program for Markov Chain Monte Carlo Sequences. Wageningen, The Netherlands: Department of Animal Science, Wageningen Agricultural University, VAN TASSELL, C.P.; VAN VLECK, L.D.; GREGORY, K.E. Bayesian Analysis of Twinning and Ovulation Rates Using a Multiple-Trait Threshold Model and Gibbs Sampling. Journal of Animal Science, v. 76, p ,

18 Avaliação da melatonina na maturação in vitro de oócitos caprinos Evaluation of melatonin in vitro maturation of oocytes goats Yndyra Nayan Teixera Carvalho¹; Marlon de Araújo Castelo Branco¹; Deyse Nayara Mascarenhas Costa*¹; Isolda Márcia Rocha do Nascimento¹; ¹ Universidade Federal do Piauí UFPI * missmascarenhas@hotmail.com ABSTRACT Melatonin has been added to media for oocyte maturation increase the rate of nuclear maturation and decrease the apoptosis of cumulus cells.therefore, the aim of this study was to evaluate the effect of supplementation melatonin, at diffantonio Sousa Júnior¹; José Adalmir Torres de Souza¹erent concentrations in the middle of oocyte maturation goats. We used oocytes from ovaries obtained from slaughtered goats, transported to the Laboratory of Biotechnology of Animal Reproduction, Federal University of Piauí, these being punched ovaries. The liquid obtained was placed in a Petri dish containing maturation medium (TCM-199), and later the cumulus-oocytes (COCs) was rated. The 75 selected oocytes were taken to maturation. After this period the oocytes were assessed for the degree of expansion cumulus. The data rate of maturation were analysed by chi-square test. Key words: oocyte; goat; melatonin Palavras-chave: oócito; caprino; melatonina INTRODUÇÃO Um dos grandes entraves desta biotécnica, ainda, são os meios de cultivos utilizados, por isso a busca incessante por meios mais eficientes. A melatonina tem sido avaliada em função de sua associação ao fotoperíodo natural e com o período claro e escuro (Alila-Johansson et al., 2001). Além dessa utilização clássica, a melatonina, tem sido adicionada aos meios de maturação dos oócitos, pois aumenta a taxa de maturação nuclear e diminui a apoptose das células do cumulus (Na et al., 2005).Portanto, o objetivo do presente experimento foi avaliar a suplementação de melatonina, em diferentes concentrações, no meio de maturação de oócitos caprinos, a fim de avaliar a influência deste hormônio na maturação in vitro dos oócitos. 306

19 MATERIAL E MÉTODOS Foram utilizados ovários caprinos adquiridos de matadouro, transportados em frascos com PBS, em temperatura de 39 C, ao Laboratório de Biotecnologia da Reprodução Animal da Universidade Federal do Piauí. O tempo entre colheita e a chegada ao Laboratório para a aspiração não foi superior a 3 horas. Para aspiração folicular foram utilizadas agulhas 21G, acopladas a seringas de 10 ml, contendo PBS. O liquido obtido foi mantido em repouso por 15 minutos, o sedimento aspirado e colocado em placa de Petri contendo meio de maturação (TCM-199), sendo então observados em lupa estereomicroscópica para classificação do complexo cumulus-oócitos (COCs), segundo Leibfried e First (1979). Os 75 oócitos selecionados foram distribuídos em três grupos, sendo 25 oócitos por tratamento, da seguinte forma: Controle, oócitos cultivados em meio TCM 199 (400uM);Tratamento 1, oócitos cultivados em meio TCM 199 (400ul) acrescidos de 10 um de melatonina; e Tratamento 2, oócitos cultivados em meio TCM 199 (400ul) acrescidos de 100 um de melatonina. Depois foram incubada em estufa com saturação de umidade atmosférica de 5% de CO2 em ar, a 39ºC por um período de 24 horas. Após a maturação os oócitos foram reavaliados. Os dados de taxa de maturação foram analisados mediante o teste Qui-Quadrado (X²). RESULTADO E DISCUSSÃO Como pode se verificar na Tab.1 não houve diferença entre os grupos de óocitos maturados com ou sem melatonina. Os valores encontrados nos grupos de maturação oócitária foram aquém do esperado, podendo ser justificado pela qualidade dos oócitos utilizados, que, no geral eram de qualidade 3 e em sua maioria desnudos. As células do complexo cumulus-oócitos exercem um importante papel na regulação da maturação do oócito, na fertilização in vitro e no desenvolvimento embrionário (ZHANG ET AL., 1995; NAGAI, 2001). As células do cumulus durante o período de maturação dão um suporte aos oócitos no estágio de metáfase-ii e estão envolvidos na maturação citoplasmática necessária para capacidade de desenvolvimento de pós-fertilização, tais como formação de pronúcleo masculino e no desenvolvimento para o estágio de blastocisto (NAGAI, 2001). No entanto, a presença de células do cumulus durante a maturação parece não ser um requisito absoluto em bovinos (NAGAI, 2001). Porém a espécie caprina caracteriza-se por apresentar oócitos com qualidade desnuda, fator que compromete na 307

20 capacidade do oócito imaturo desnudo de sofrer maturação, formação pronuclear e desenvolvimento de preimplantação quando comparados aos oócitos providos de células do cumulus (ZHANG et al., 1995; FULKA; FIRST; MOOR, 1998). CONCLUSÃO Isso sugere que a suplementação de melatonina nessa metodologia não foi capaz de interferir na maturação de oócitos caprinos, implicando em alterações no protocolo de execução do experimento. Tabela 1. Avaliação qualitativa de oócitos caprinos quanto à suplementação de diferentes concentrações de melatonina no meio de maturação TCM-199. Tratamentos N Maturado (%) Não Maturado (%) Controle 25 T1 10uM 25 T2 100uM 25 4,00 a (1/25) 4,00 a (1/25) 0,00 a (0/25) 96,00 a (24/25) 96,00 a (24/25) 100,00 a (25/25) Total 75 2,67 (2/75) 97,33 (73/75) Percentuais seguidos da mesma letra, na coluna, não diferem estatisticamente entre si pelo teste X² (p>0,05) REFERÊNCIAS BIBLIORÁFICAS ALILA-JOHANSSON, A.; ERIKSSON, L.; SOVERI, T.; LAAKSO, M-L. Seasonal variation in endogenous serum melatonin profiles in goats: a difference between spring and fall. Journal of Biological Rhytms, New York, v.16, n.3, p , FULKA, J.R., FIRST N.L.; MOOR R.M. Nuclear and cytoplasmic determinants involved in the regulation of mammalian oocyte maturation. Mol. Hum. Reprod. v.4: p. 41 9,

21 NA,K.,et al.,effect of melatonin on the maturation of mouse GV oocytes and apoptosis of cumulus cells in vitro. Fertility & Sterility, vol.84.p ,2005. NAGAI, T. The improvement of in vitro maturation system for bovine and porcine oocytes. Theriogenology, v. 55, p , ZHANG L.; JIANG, S.; WOZNIAK, P.J.; YANG, X. GODKE, R.A. Cumulus cell function during bovine oocyte maturation, fertilization, and embryo development in vitro. Mol. Reprod. Dev.; v. 40: p ,

22 Avaliação da motilidade total de sêmen caprino com glicerol associado a dimetilsulfóxido e etilenoglicol Evaluation of total motility of goat semen with glycerol associated the sulfoxide dimethyl and ethylene glycol Brandinice de Almada Guerra 1 *; Leonardo Alves Rodrigues Cabral 1 ; Talita Soares Câmara 1 ; Bárbara Mara Bandeira Santos 1 ; Cristiane Clemente Mello Salgueiro 1 ; José Ferreira Nunes 1 1 Faculdade de Veterinária, UECE; * brandvet@hotmail.com ABSTRACT The objective of this work was to evaluate the efficiency of glycerol and the combination of glycerol with ethylene glycol or dimethyl sulfoxide (DMSO) in cryopreserving buck semen. The semen of four buck was pooled and frozen in powder coconut water solution (ACP-101) added with one of three cryoprotectant (treatments): T1 (ACP + 10% egg yolk + 7% glycerol); T2 (ACP + 10% egg yolk + 3,5% glycerol + 3,5% ethylene glycol) and T3 (ACP + 10% egg yolk + 3,5% glycerol + 3,5% DMSO). After thawing the total motility was evaluated in SCA system (Sperm Class Analyser, Microptic S.L. version 3.2.0). The T1 is superior to T3 and thet2 does no differ of the T1 e T3. Key-words: Buck; cryopreservation; spermatozoa; viability. Palavras-chave: Bodes; criopreservação; espermatozoide; viabilidade. INTRODUÇÃO A finalidade de conservar o sêmen é prolongar a capacidade de fertilização dos espermatozóides ao reduzir ou parar o seu metabolismo, como é feito na conservação do sêmen líquido, usando o resfriamento ou outro método que deprima o metabolismo espermático, e no estado congelado, submetendo-o a temperaturas abaixo de zero (Maxwell e Salamon, 1993). Para realizar o congelamento, é necessário o uso de crioprotetores, para prevenir a formação de cristais de gelo e sua toxicidade (Pereira e Marques, 2008). Eles podem permanecer no interior da célula ou fora dela e são divididos em duas categorias: permeáveis [propilenoglicol, glicerol, etilenoglicol, dimetilsulfóxido (DMSO)] e não 310

23 permeáveis (Pereira e Marques, 2008). Dessa forma, este trabalho teve como objetivo avaliar a motilidade total do sêmen caprino congelado em diluente a base de água de coco em pó (ACP-101) adicionado de diferentes crioprotetores celulares, avaliado em sistema SCA (Sperm Class Analyser, Microptic S.L. version 3.2.0). MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado no Núcleo Integrado de Biotecnologia (NIB), localizado na Universidade Estadual do Ceará localizado no município de Fortaleza - Ceará, durante os meses de janeiro e fevereiro de Foram coletados os ejaculados de 4 bodes adultos da raça Saanen, com o uso de uma vagina artificial adequada para espécie caprina. As coletas ocorreram durante 4 semanas, sendo uma por semana, totalizando assim 4 pools. Imediatamente após a coleta, os ejaculados foram mantidos em banho-maria a 35 C, enquanto se realizava a análise de turbilhonamento (0-5), vigor (0-5) e motilidade espermática (%), sendo utilizados apenas os ejaculados que apresentaram padrões preconizados pelo CBRA (1998). Cada pool seminal foi dividido em alíquotas que foram diluídas em três tratamentos: T1 (ACP % de gema de ovo + 7% de glicerol); T2 (ACP + 10% de gema de ovo + 3,5% de glicerol + 3,5% de etilenoglicol) e T3 (ACP % de gema de ovo + 3,5% glicerol + 3,5% DMSO). O sêmen foi então envasado e congelado (-196 ºC) e mantido em botijão criogênico até o descongelamento e análise em sistema yi7usca (Sperm Class Analyser, Microptic S.L. version 3.2.0), para avaliação da motilidade total do sêmen. Os dados foram expressos como média ± desvio padrão e analisados por meio da ANOVA seguido pelo teste de Tukey (p<0,05) para identificação de diferenças significativas utilizando o programa estatístico ASSISTAT versão 7.6 beta (2012). RESULTADOS E DISCUSSÃO Conforme os resultados observados na Tabela 1 demonstram que T1 foi mais eficiente em manter a motilidade total dos espermatozoides caprinos criopreservados quando comparado com T3. T2 não diferiu dos outros tratamentos. Estes resultados corroboram com os encontrados por Singh et al. (1995) que observaram que quando o glicerol foi utilizado como crioprotetor houve maior eficácia na manutenção da 311

24 motilidade progressiva do sêmen caprino quando comparado com o glicerol associado com o DMSO. Tabela 1. Média + desvio padrão da motilidade total (MT) do sêmen caprino congelado. T1 T2 T3 MT (%) 60,50±20,45 a 35,03±19,22 ab 26,68±9,46 b Valores seguidos de letras maiúsculas distintas diferem entre si (P<0,05). T1 (ACP % de gema de ovo + 7% de glicerol); T2 (ACP + 10% de gema de ovo + 3,5% de glicerol + 3,5% de etilenoglicol) e T3 (ACP % de gema de ovo + 3,5% glicerol + 3,5% DMSO). CONCLUSÃO O diluidor a base de ACP-101 adicionado apenas de glicerol foi mais eficaz na manutenção da motilidade total dos espermatozoides caprinos congelados quando comparado ao diluidor acrescido do glicerol associado com DMSO. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CBRA. Colégio Brasileiro de Reprodução Animal. Manual para exame andrológico e avaliação de sêmen animal. 2ed. Belo Horizonte: CBRA, 49p MAXWELL, W.M.C.; SALAMON, S. Liquid Storage semen: A review. Reproduction Fertility. Dev., v.5, p , PEREIRA, R.M.; MARQUES, C.C. Animal oocyte and embryo crypreservation Cell Tissue Bank, v9, p , SINGH, M.P.; SINHA, A.K.; SINGH, B.K. Effect of cryoprotectants on certain seminal attributes and on the fertility of buck spermatozoa. Theriogenology. v.43 p ,

25 Avaliação da ocorrência de anticorpos anti- Brucella abortus em ovinos nos municípios da Microrregião de Teresina, Piauí Occurrence of antibodies to Brucella abortus in sheep in the municipalities of the micro-region of Teresina, Piauí Gardênia Alves da Silva 1 ; Romulo José Vieira 1 ; Micherlene Silva Carneiro 1 ; Antonio do Nascimento Ferreira 1 ; Ykro Talvanis Duarte Cavalcante* 1 ; Ana Lys Bezerra Barradas Mineiro 1 1 Universidade Federal do Piauí - UFPI * ykroduarte@hotmail.com ABSTRACT In order to verify the occurrence of antibodies to Brucella abortus in the municipalities of the micro-region of Teresina, Piauí. We examined 336 serum sanguínineo sheep by Buffered Acidified Antigen Test (AAT) for the diagnosis of brucellosis. Of the 336 serum samples analyzed all negative for the presence of antibodies to Brucella abortus. based on these results, we conclude that the risk of spreading the disease to humans through contact with sheep is small. Key words: brucellosis, antibodies, Brucella abortus, diagnosis Palavras chave: brucelose, anticorpos, Brucella abortus, diagnóstico INTRODUÇÃO A brucelose é uma doença infecto-contagiosa, antropozoonótica de distribuição mundial, é responsável por causar vários problemas sanitários e perdas econômicas. A brucelose em ovinos é caracterizada por abortamento no terço final da gestação, natimortalidade e queda da fertilidade. O principal agente causador da brucelose em ovinos é a Brucella ovis (Paulin, 2003). No entanto, infecções esporádicas por Brucella abortus, que tem os bovinos como hospedeiros preferenciais, podem ocorrer em outras espécies inclusive nos ovinos. O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de anticorpos anti- Brucella abotus nos municípios da Microrregião de Teresina, Piauí. MATERIAL E MÉTODOS Foram analisadas amostras de 336 animais oriundos de 18 rebanhos de 8 municípios da Microrregião de Teresina, Piauí. Em cada propriedade, participaram da 313

26 amostra, de forma aleatória, 20 animais por fazenda, constituído por 60% de matrizes, 30% de jovens (entre 6 a 12 meses) e 10% de reprodutores adultos. A colheita de sangue por venopunção foi realizada entre os meses de Setembro de 2011 a Março de Os tubos contendo as amostras foram mantidos numa caixa isotérmica contendo gelo para o transporte. Para obtenção do soro o sangue foi submetido à centrifugação 3000rpm por 10 minutos. A pesquisa de anticorpos anti-brucella abortus foi realizada por meio da técnica de Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), no Laboratório de Fisiopatologia da Reprodução da Universidade Federal do Piauí (UFPI). RESULTADOS E DISCUSSÃO Das 336 amostras analisadas todas resultaram não reagentes ao AAT. Tais dados assemelham-se aos encontrados por Nozaki et al.(2004) que ao analisarem 1033 soros de ovinos provenientes da região centro-oeste do estado de São Paulo não observaram animais reagentes. Já Pinheiro Junior et al.(2008) analisaram 360 amostras de ovinos no sertão do Estado de Pernambuco e nove (2,5%) foram reagentes. Ocholi et al. (2005) afirmam que é rara, a infecção por Brucella abortus em ovinos, porém, já foi relatada em alguns países a ocorrência de abortos em ovelhas relacionados com a bactéria. CONCLUSÃO Com base nos resultados obtidos, conclui-se que o risco de disseminação da doença através dos ovinos é pequeno. Entretanto, as medidas de prevenção e controle da brucelose em qualquer espécie animal são fundamentais para a erradicação desta importante zoonose. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS NOZAKI, C.N.; MEGID, J.; LIMA, K.C.; SILVA JÚNIOR, F.F.; VELOSO, C.S. Comparação das técnicas de imunodifusão em gel de ágar e Elisa no diagnóstico de brucelose ovina em cabanhas da região Centro-Oeste do Estado de são Paulo. Arquivo Instituto Biológico, v. 71,n.1, p.1-5, OCHOLI, R.A.; KWAGA, J.K.P.; AJOGI, I.; BALE. J.O.O. Abortion due to Brucella abortus in sheep in Nigeria. Revue Scientifique Techinique off International Epizooites, v.24, n.3, p ,

27 PAULIN, L.M. Brucelose. Arquivo Instituto Biológico, v.70, p , PINHEIRO JUNIOR, J.W.; SOUZA, M.M.A.; GUERRA, N.R. SANTANA, L.A.; MOTA, R.A. Frequência de aglutininas anti-brucella abortus em caprinos e ovinos do sertão do estado de Pernambuco, Brasil. Ciência Animal Animal Brasileira, v. 9, n. 4, p , out./dez

28 Avaliação da Viabilidade Espermática do Sêmen Caprino Criopreservado com a Combinação de Diferentes Crioprotetores Assessment of Sperm Viability of Goat Semen Cryopreserved with the Combination of Different Cryoprotectants Leonardo Alves Rodrigues Cabral¹; Brandinice Almada¹; Lívia Pereira Antunes¹; Talita Soares Câmara¹; Barbara Mara Bandeira Santos¹; José Ferreira Nunes¹ ¹ Universidade Estadual do Ceará-UECE * leocabral1991@gmail.com ABSTRACT The objective of this work was to evaluate the possibility of the combination of glycerol with ethylene glycol and dimethyl sulfoxide when cryopreserving goat semen. Semen of four buck was pooled and frozen in one of these three diluents: ACP+ 10% egg yolk + 7% glycerol, ACP+ 10% egg yolk + 3,5% glycerol + 3,5% ethylene glycol and ACP+ 10% egg yolk + 3,5% glycerol + 3,5% dimethyl sulfoxide. After thawing the sperm viability was assessed with the eosin-nigrosin staining technique. The percentage of viable spermatozoa in frozen semen was not different between treatments. Keywords: spermatozoa; freezing; buck Palavras-chave: espermatozóide; congelamento; bode INTRODUÇÃO A inseminação artificial (IA) tem um importante papel na criação de caprinos, especialmente em sistemas intensivos de produção, facilitando o controle reprodutivo e auxiliando na realização de testes de progênie mais precisos e em menor espaço de tempo (Leboeuf et al., 2000). Para realizar o congelamento, é necessário o uso de crioprotetores internos que se caracterizam por serem substâncias de baixo peso molecular e que impedem a formação de cristais de gelo intracelular e o choque osmótico, a exemplo do glicerol, etilenoglicol, dimetilssulfóxido, entre outros (Vajta & Nagy, 2006). Os crioprotetores podem ser usados em combinação para diminuir a concentração necessária dos mesmos e, consequentemente, sua toxicidade (Pereira & Marques, 2008). O objetivo deste trabalho foi avaliar a associação do glicerol com etilenoglicol e dimetilsulfóxido sobre a viabilidade espermática do sêmen caprino diluído e criopreservado em diluidor à base de água de coco em pó ACP

29 MATERIAL E MÉTODOS Os animais experimentais pertencem ao Núcleo Integrado de Biotecnologia (NIB), localizado no município de Fortaleza-Ceará. Para coleta de sêmen, foram utilizados quatro bodes adultos da raça Saanen com auxílio da vagina artificial. Foram obtidas quatro coletas semanais e os ejaculados foram acondicionadas em banho maria a 35 C e avaliados para volume, aspecto, turbilhonamento (0-5), vigor (0-5) e motilidade espermática (%), como preconizado pelo Colégio Brasileiro de Reprodução (CBRA, 1998). Os ejaculados aprovados foram reunidos em um pool. Os diluentes foram preparados utilizando água de coco em pó (ACP-101), conforme recomendação do fabricante (ACP-Biotecnologia). O pool foi diluído a uma concentração final de 400 x 10 6 sptz/ml em duas etapas, a primeira com adição de fração A contendo ACP + 10% de gema, seguida de resfriamento até 4 C, quando então adicionou-se a fração B nos respectivos tratamentos: T1 (14% Glicerol), T2 (7% Glicerol + 7% Etilenoglicol) e T3 (7% Glicerol + 7% DMSO). Após envase em palhetas 0,25 ml, o sêmen foi congelado em vapores de nitrogênio líquido e acondicionados em botijões criogênicos. Para análise da viabilidade espermática, as palhetas foram descongeladas a 37 C por 30 segundos, e uma alíquota de sêmen foi diluída em eosinanigrosina seguida de confecção de esfregaços em lâmina para microscopia. Foram avaliadas 200 células espermáticas em microscopia óptica (400x) e classificadas como viáveis (não coradas) e inviáveis (coradas). Os dados foram expressos como média ± desvio padrão e analisados por meio da ANOVA, seguida pelo teste de Tukey (p<0,05) para identificar diferenças significativas utilizando o programa estatístico ASSISTAT versão 7.6 beta (2012). RESULTADOS E DISCUSSÃO De acordo com os resultados apresentados na Tabela 1, não houve diferença significativa entre os tratamentos em relação à viabilidade espermática. Estes resultados contrastam com os obtidos por Singh et al, (1994), onde a associação de glicerol e DMSO apresentou menor viabilidade espermática em relação ao sêmen caprino criopreservado com glicerol como único crioprotetor, mas concordam com Rovay (2006), que observou que o sêmen caprino criopreservado com glicerol ou etilenoglicol não diferiram no percentual de espermatozoides viáveis por coloração supravital. 317

30 Tabela 1. Percentual da viabilidade espermática (média ± desvio padrão) do sêmen caprino criopreservado com diferentes crioprotetores. T1 T2 T3 Viabilidade espermática 38,0 a ± 9,86 22,2 a ± 7,86 34,3 a ± 8,33 Valores seguidos de letras minúsculas distintas em uma linha diferem entre si. T1: ACP+ 10% gema de ovo + 7% glicerol, T2: ACP+ 10% gema de ovo + 3,5% glicerol + 3,5% etilenoglicol e T3: ACP+ 10% gema de ovo + 3,5% glicerol + 3,5% de dimetilsulfóxido (p<0,05). CONCLUSÃO Os três protetores são equivalentes para proteção na criopreservação de sêmen. Entretanto, sugere-se a necessidade de estudos complementares. REFERÊNCIAS Colégio Brasileiro de Reprodução Animal CBRA. Manual para exame andrológico e avaliação de sêmen animal. 2 ed. Belo Horizonte: CBRA, 49p HERBERT R. Efeitos de diferentes curvas de resfriamento, tempos de equilibrios e crioprotetores permeáveis no congelamento de espermatozóides caprinos p. Dissertação Curso de Pós-graduação em Zootecnia, Universidade Federal de Viçosa. LEBOEUF, B.; RESTALL, B.; SALAMON, S. Production and storage of goat semen for artificial insemination. Animal Reproduction Science, v.62, p , SINGH M.P,; SINHA A.K,; SINGH B.K. Effect of cryoprotectants on certain seminal attributes and on the fertility of buck spermatozoa. Theriogenology, India, PEREIRA, R.M.; MARQUES, C.C. Animal oocyte and embryo cryopreservation. Cell Tissue Bank, v.9, p , VAJTA, G.; NAGY, Z.P. Are programable freezers still needed in the embryo laboratory? Review on vitrification. Reproductive Biomedicine Online. V.12, p ,

31 Avaliação do efeito crioprotetor da Aloe vera no congelamento do sêmen ovino Evaluation of the cryoprotectant effect of Aloe Vera in ram frozen semen Talita Soares Câmara¹*; Nayra Carvalho Bandeira¹; Juliana de Souza Fernandes¹; Cristiane Clemente de Mello Salgueiro¹; Gyselle Viana¹; José Ferreira Nunes¹. ¹ Universidade Estadual do Ceará UECE; * ABSTRACT A pool of ram semen was collected and frozen using three treatments (T1 ACP + 20% egg yolk, T2 ACP + 20% Aloe vera e T3 Tris + 20% egg yolk) in order to verify the cryoprotectant potential of the Aloe vera. According to the results in Table 1, there was a significant difference between T2 and T3 connected to total motility and a significant difference between T3 and T2, T3 and T1 to progressive motility (p<0.05). It was concluded that the Aloe vera (20%) was not a efficient cryoprotector to froze the ram semen compared with the egg yolk. Key words: Ram; seminal cryopreservation; sperm parameters. Palavras-chave: Carneiro; criopreservação seminal; parâmetros espermáticos. INTRODUÇÃO O uso de sêmen diluído e criopreservado conserva sua capacidade fecundante por longos períodos de armazenamento. Os diluentes para congelamento devem imprescindivelmente possuir substâncias que atuem como crioprotetor externo (gema de ovo ou leite desnatado) e como crioprotetor interno [glicerol, dimetilsulfóxido (DMSO) ou etilenoglicol] (Evans & Maxwell, 1987). Atualmente existe a necessidade de um maior controle de doenças, com isso a supressão de substâncias de origem animal em meios de conservação de sêmen tem sido sugerida, a fim de garantir a segurança sanitária nos processos biológicos (Bousseau et al., 1998). Em virtude disso, objetivou-se nesse trabalho testar o potencial de crioprotetor externo da Aloe vera, como uma alternativa a substituição de produtos de origem animal, no congelamento do sêmen ovino. 319

32 MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado no Laboratório de Tecnologia do Sêmen Caprino e Ovino pertencente ao Núcleo Integrado de Biotecnologia da Universidade Estadual do Ceará, no município de Fortaleza, Ceará, durante o semestre Foram utilizados quatro reprodutores ovinos adultos, dois da raça Dorper e dois da raça Santa Inês. Os ejaculados dos quatros reprodutores foram coletados com auxílio de uma vagina artificial, uma vez por semana e reunidos em um pool, durante 4 semanas. Os ejaculados foram avaliados em relação ao turbilhonamento e concentração espermática, em Câmara de Neubauer. Uma amostra de 10µL do pool de sêmen foi diluído em 1mL de Água de Coco em pó (ACP-102 ) para avaliação dos parâmetros cinéticos do sêmen fresco no sistema CASA (Sperm Class Analyser, Microptic S.L. versão 3.2.0). Os pools foram divididos em três alíquotas e diluídos em: T1 (ACP + 20% gema de ovo), T2 (ACP + 20% Aloe vera) e T3 (Tris + 20% gema de ovo). Os diluentes à base de ACP foram preparados segundo recomendação do fabricante (ACP Biotecnologia). Todos os diluentes foram divididos em duas frações ( A e B ). A fração B de cada diluente tinha a mesma constituição da fração A, mas acrescida de 14% de glicerol, de modo a obter, após a diluição final, a concentração de 7% de glicerol. O sêmen foi diluído para a obtenção da concentração final de 400 x 10 6 sptz/ml. O sêmen foi resfriado até chegar em 4ºC, sendo adicionada a fração B em três steps com intervalo de 10 minutos e em seguida dado um tempo de equilíbrio de 2 horas. Após o envase, as palhetas foram colocadas em suportes próprios e congeladas em vapores de nitrogênio líquido a 3,5 cm acima do nível do nitrogênio líquido por 10 minutos (-70 ºC), em seguida imersas em nitrogênio líquido, acondicionadas em racks e estocadas em botijões criogênicos a -196ºC. O sêmen descongelado foi avaliado quanto aos parâmetros de motilidade total e motilidade progressiva no CASA. Os dados foram expressos como média±desvio padrão e analisados pela ANOVA seguida pelo teste de T (p<0,05) para identificar diferenças significativas utilizando o programa estatístico ASSISTAT versão 7.6 beta (2012). RESULTADOS E DISCUSSÃO Os parâmetros cinéticos de motilidade total (MT) e motilidade progressiva (MP) 320

33 estão apresentados na Tabela 1. Foram observadas diferenças significativamente superiores da MT do T3 quando comparados com T2. O T3 se mostrou significativamente superior ao T2 quando comparada a MP. Não houve diferença significativa entre T1 e T2 ou T1 e T3 no que se refere à MT. Já em relação à MP, não houve diferença significativa entre T1 e T2 ou T1 e T3 (p<0,05). Tabela 1: Média ± Desvio Padrão dos parâmetros cinéticos de MT e MP nos diferentes tratamentos no congelamento de sêmen ovino. T1 T2 T3 Motilidade Total 22,17±10,01ᵃᵇ 7,95±7,38ᵇ 43,85±31,71ᵃ Motilidade Progressiva 5±4,35ᵃᵇ 0,30±0,34ᵇ 18,47±18,78ᵃ Letras iguais diferem estatisticamente entre si (p<0,05). T1 = ACP % gema de ovo; T2= ACP % Aloe vera; T3= TRIS + 20% gema de ovo. A motilidade espermática é um dos principais parâmetros a serem considerados na análise da qualidade do sêmen. Para tanto, deve-se levar em conta que a mesma é influenciada por inúmeros fatores, como temperatura, estado nutricional e sanitário, condições de análise, soluções ativadoras empregadas e espécie estudada. Em estudos anteriores Melo (2010), observou que a viscosidade do gel mucilaginoso da Aloe vera possivelmente interferiu na diminuição dos parâmetros de velocidade encontrados, o que coincide com os resultados observados neste experimento. CONCLUSÃO A utilização do extrato bruto de Aloe vera na concentração de 20% adicionado ao diluidor ACP-102 foi ineficaz como crioprotetor externo para congelamento do sêmen ovino, comparada com a gema de ovo. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BOUSSEAU, S.; BRILLARD, J.P.; MARQUANT-LE GUIENNE, B.; GUÉRIN, B.; CAMUS, B.; LECHAT, M. Comparison of bacteriological qualities of various egg yolk 321

34 sources and in vitro and in vivo fertilizing potential of bovine semen frozen in egg yolk or lecithin based diluents. Theriogenology, v.50, p , EVANS, G.; MAXWELL, W. M. C. Salamon s artificial insemination of sheep and goats. Butterworth, London, 194p, MELO, C.C.S. Conservação de sêmen caprino a 4ºC utilizando ACP-101 com duas concentrações de Aloe vera ou gema de ovo p. Dissertação (Mestrado) Programa de Pós-graduação em Ciências Veterinárias, Universidade Estadual do Ceará. 322

35 Características seminais de carneiros Dorper e Santa Inês nos períodos chuvoso e seco na região Meio Norte do Brasil Seminal characteristics of Dorper and Santa Inês sheep in the rainy and dry in the Mid North region of Brazil José Adalmir Torres de Souza 1* ; Ícaro Oliveira Torres de Souza 1 ; Marlon de Araújo Castelo Branco 1 ; Siluana Benvindo Ferreira 1 ; Luanna Soares de Melo Evangelista 1 1 Laboratório de Biotecnologia da Reprodução Animal Universidade Federal do Piauí * adalmir@ufpi.edu.br ABSTRACT The reproductive efficiency of sheep can be influenced by climatic factors and nutrition, especially during the dry season, causing changes in semen characteristics. The objective of this study was to evaluate possible variations in sperm quality of semen from rams Dorper and Santa Inês, between the rainy and dry seasons. We used 18 adult sheep, ranging in age from 18 to 24 months, weighing kg and divided into two groups of six animals in each group. Regardless of race and time of year, the values ranged, respectively, for volume, 0.74 to 1.40 ml; whirlwind, from 2.85 to 3.73 (scale 0-5), motility of the %; force, from 3.18 to 3.74 (scale 0-5) and concentration from 2.07 to 3.65 x 109 sperm / mm 3, demonstrated that wooless breeds may be more adapted to the Mid North region of Brazil, suffering little influence of climatic factors on sperm production. Key words: breed; seasonal; semen; sheep. Palavras-chave: raça; estacional; sêmen; ovino. INTRODUÇÃO No Nordeste do Brasil, a pouca disponibilidade de alimentos e as altas temperaturas ambientais, principalmente na época seca, são indicadas como os principais fatores relacionados às variações na qualidade do sêmen durante o ano (Maia et al., 2011). O carneiro, em particular, é um animal que manifesta estacionalidade reprodutiva (Folch, 1993) e que pode ser avaliado pela variabilidade anual de algumas características seminais quantitativas e qualitativas (Ibrahim, 1997). Para mensurar a qualidade seminal, vários parâmetros são utilizados. Na rotina, pode-se avaliar o volume do ejaculado, o turbilhonamento, a motilidade, o vigor, a 323

36 concentração e a morfologia espermática (Correa et al., 1997). Entretanto, ainda são poucas as informações sobre a qualidade do sêmen dos machos de raças ovinas exóticas nas condições de clima e manejo na região Nordeste do Brasil. Dessa forma, objetivouse avaliar possíveis variações na qualidade espermática do sêmen de carneiros Dorper e Santa Inês, nos períodos chuvoso e seco na região Meio Norte do Brasil. MATERIAL E MÉTODOS Foram utilizados 12 animais das raças Dorper e Santa Inês, divididos em dois grupos experimentais com seis animais em cada grupo. Foram realizadas 32 colheitas de sêmen em cada animal, sendo, 16 no período chuvoso, correspondente aos meses de janeiro a abril de 2011 e 16 no período seco, correspondente aos meses de agosto a novembro de 2011, períodos estes, estabelecidos de acordo com os índices pluviométricos, registrados pela EMBRAPA/MEIO-NORTE. Os animais foram submetidos à colheita de sêmen por meio do método de vagina artificial, tendo como manequim uma fêmea em cio artificial. O sêmen foi avaliado quanto ao volume (ml), turbilhonamento (0-5); motilidade (%); vigor (0-5); concentração (nº de células por mm 3 de sêmen) e morfologia (nº de células anormais em relação às normais), esta classificadas em defeitos maiores e defeitos totais (Blom, 1973). As médias foram comparadas pelo teste de Tukey. RESULTADOS Como verificado na tab. 1, na raça Santa Inês houve diferença entre os períodos chuvoso e seco para volume seminal. Em relação ao turbilhonamento, entre as raças, houve diferença entre os períodos chuvoso e seco, o mesmo verificando-se em relação à motilidade. Quanto ao vigor houve diferença entre as raças apenas para o período seco. Ao se comparar as raças, a concentração espermática foi diferente apenas no período seco e ao se comparar períodos, foi observado que a raça Santa Inês apresentou melhor concentração espermática no período seco, constatação essa também verificada em relação aos defeitos totais. Muito embora a atividade reprodutiva dos ovinos seja afetada pela estação do ano, tendo no fotoperíodo o fator-chave para desencadeamento da atividade reprodutiva, nas regiões tropicais, onde o fotoperíodo varia muito pouco, como é o caso do Nordeste do Brasil, a espécie ovina não apresenta estacionalidade reprodutiva, podendo se reproduzir durante todo o ano. Nesta região, o desempenho 324

37 reprodutivo do carneiro é influenciado principalmente pela nutrição e pelo sistema de criação (manejo extensivo), além de fatores como idade, raça e sanidade (Maia et al., 2011). Tabela 1. Médias dos parâmetros seminais de carneiros das raças Dorper e Santa Inês nos períodos chuvoso e seco na região meio norte do Brasil. Parâmetros Dorper Santa Inês Chuvoso Seco Chuvoso Seco Volume 1,19aA 1,31aA 1,09bA 1,37aA Turbilhonamento 2,81aB 2,91aB 3,31aA 3,65aA Motilidade 79,33aA 79,33aB 83,33aB 87,23aA Vigor 3,30aA 3,26aB 3,66aA 2,07bA Concentração (x 2,17aA 1,97aB 2,07bA 2,50aA 10 6 ) Def. Maiores 3,00aA 4,60aA 3,10aA 4,4aA Def. Totais 17,00aA 19,80aA 17,40aA 21,70bA ** letra minúscula refere-se ao período;** letra maiúscula refere-se à raça. * Médias comparadas pelo teste de Tukey (p<0,05). CONSIDERAÇÕES FINAIS Dorper. Os parâmetros seminais referentes à raça Santa Inês foram superiores aos da raça REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BLOM, E. The ultrastructure of some characteristics sperm defects and a proposal for a new classification on the bull spermiogram. Nordisk Veterinaer Medicin, v. 25, p ,

38 CORREA, J.R.; PACE, M.M.; ZAVOS, P.P. Relationships among frozen-thawed sperm characteristics assessed via the rotine semen analysis, sperm functional tests and fertility of bulls in artificial insemination program. Theriogenology, v. 48, p , FOLCH, J. Estacionalidad sexual de los ovinos y caprinos en la Peninsula Iberica. VSimpósio Internacional de Reprodução Animal Luso, v. 1, p IBRAHIM, S. Seasonal variations in semen quality of local and crossbred rams raised in United Arab Emirates. Animal Reproduction Science, v. 49, p , MAIA, M.S.; MEDEIROS, I.M.; LIMA, C.A.C. Características seminais de carneiros no Nordeste do Brasil: parâmetros seminais. Revista Brasileira Reprodução Animal, v. 35, n. 2, p , abr./jun

39 Cinética Espermática do sêmen caprino resfriado à base de agua de coco em pó (ACP-101 ) adicionado de extrato soja e gema de ovo. Sperm kinetics of goat semen cooled in powder coconut water solution (ACP-101 ) added with soybean extract and egg yolk. Juliana de Souza Fernandes *1 ; Nayra Carvalho Bandeira 1 ; Johnny Correia Girão de Oliveira 1 ; Talita Soares Câmara 1 ; Bárbara Mara Bandeira Santos 1 ; José Ferreira Nunes 1 1 Faculdade de Veterinária/UECE * juliana-sfernandes1@hotmail.com ABSTRACT This study was to compare the cryoprotectant effect of the soybean extract with egg yolk over the total motility (MT) and progressive motility (MP). Four pools of goat semen were collected in artificial vagina and extended in solution based in ACP-101 added of egg yolk (ACP-101 -yolk) or soybeans extract (ACP-101 -soybean) and cooled at 4 o C. When the semen arrived at 4 C (0h) and 24 hours later (24h), the MT and MP were evaluated in SCA system (Sperm Class Analyser, Microptic S.L. version 3.2.0). According with results, there was no significant difference between ACP yolk and ACP-101 -soybean to MT and MP at 0h. However, at 24h, the MT and MP were superior in ACP-101 -yolk than ACP-101 -soybean. In conclusion, the egg yolk is more efficient than soybean extract to maintain the sperm total and progressive motility. Keywords: Buck, spermatozoa, cryoprotector, CASA. Palavras-chave: bodes; espermatozoide, crioprotetor, CASA. INTRODUÇÃO A lecitina da soja, presente no extrato de soja, por possuir uma fração lipoprotéica de baixa densidade semelhante à encontrada na gema de ovo, pode ser uma alternativa de origem não animal interessante para conservação seminal por proporcionar maior biossegurança de diluentes, atuando no controle da transmissão de doenças e na contaminação bacteriana (Bousseau et al., 1998; Kasimanickam et al., 2011). Diluidores adicionados de extrato de soja já foram utilizados para conservação do sêmen bovino, suíno e canino, porém, estes não foram superiores aos diluidores à base de gema de ovo (Kasimanickam et al., 2011). 327

40 Visando verificar o efeito da adição do extrato de soja ao diluidor também de origem vegetal, esse trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência do uso do extrato de soja adicionado ao diluente a base de água de coco em pó (ACP-101 ) sobre a motilidade total e motilidade progressiva do sêmen caprino refrigerado a 4 C por 24 horas. MATERIAIS E MÉTODOS O trabalho foi realizado no Núcleo Integrado de Biotecnologia (NIB) da Universidade Estadual do Ceará, na cidade de Fortaleza durante os meses de janeiro e fevereiro de O sêmen foi obtido de quatro reprodutores caprinos adultos das raças Saanen coletados uma vez por semana durante quatro semanas com auxilio de vagina artificial. Imediatamente após a coleta, os ejaculados foram mantidos em banho-maria a 33 C e avaliados por microscopia óptica e utilizados apenas aqueles que atingiram motilidade total 70% (0-100%), vigor e turbilhonamento 3 (0-5), (CBRA, 1998) e, assim, reunidos em um pool. O experimento foi conduzido com a diluição do sêmen nos tratamentos ACP+10% de gema de ovo (ACP-gema) e ACP+10% de extrato de soja (ACP-soja). O sêmen diluído foi resfriado a uma taxa de -0,35 C por minuto até 4 C. Os parâmetros motilidade total e motilidade progressiva foram analisados pelo sistema de análise computadorizada CASA (Sperm Class Analyser, Microptic S.L. versão 3.2.0) quando o sêmen chegou atingiu 4 C (0h) e após 24 horas (24h). Os dados foram expressos como media + desvio padrão e analisados por meio de ANOVA seguido pelo teste de Tukey (p<0,05) para identificar diferenças significativas utilizando o programa estatístico ASSITAT versão 7.6 beta (2012). RESULTADOS E DISCUSSÃO De acordo com os resultados mostrados na Tabela 1, não houve diferença estatística no tratamento ACP-gema para motilidade total em ambos os tempos de avaliação (0h e 24h). Para o tratamento ACP-soja, houve redução significativa da motilidade total 24h após a conservação. Sobre motilidade progressiva, somente houve redução significativa em ACP-soja às 24h. 328

41 Tabela 1. Motilidade total (MT) e motilidade progressiva (MP) (média + desvio padrão) para os dois tratamentos (gema ou soja) quando o sêmen atingiu os 4 C (0h) e 24h após conservação 4 C (24h) Tempo 0h 24h Diluidor ACP-Gema ACP-Soja ACP-Gema ACP-Soja MT 95,2 + 3,01 a 77,4 + 7,56 b 91,7 + 3,75 a 65,5 + 11,86 c MP 38,93 + 8,51 a 33,25 + 6,13 ab 39,25 + 1,89 a 24,25 + 6,18 b Valores seguidos de letras minúsculas distintas em uma linha diferem entre si (p<0,01). A importância do desenvolvimento de alternativas de crioprotetores de origem vegetal tem recebido intenso impulso objetivando dar uma eficiente proteção aos espermatozoides em relação às taxas de contaminação e preservando a célula espermática da deteriorização e injúrias causadas pelo processo de resfriamento tão eficientemente quanto os diluidores adicionados de produtos de origem animal. Os resultados obtidos não são compatíveis com os de Kasimanickama et al. (2011) que obtiveram resultados equivalentes entre diluidores com extrato de soja e diluidores com gema de ovo para sêmen ovino resfriados a 4 C por 48h. Entretanto, a motilidade espermática em diluidor ACP-gema apresentou, de forma geral, um desempenho superior ao diluidor ACP-soja. CONCLUSÃO O extrato de soja adicionado ao diluente a base de água de coco em pó (ACP- 101 ) não foi eficaz na manutenção da motilidade total e motilidade progressiva do sêmen caprino refrigerado a 4 C por 24 horas. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BOUSSEAU, S.; BRILLARD, J.P.; MARQUANT-Le B. G.; GUERIN, B.; CAMUS, A.; LECHAT, M.; Comparison of bacteriological qualities of various egg yolk sources and the in vitro and in vivo fertilizing potential of bovine semen frozen in egg yolk or lecithin based diluents. Theriogenology, v.50, p , 1998 Manual para exame andrológico e avaliação de sêmen animal. Belo Horizonte: CBRA, p

42 KASIMANICKAMA, R.; KASIMANICKAMB, V.; TIBARYC, A.; PELZERA, K.; Effect of semen extenders on sperm parameters of ram semen during liquid storage at 4 C; Small Ruminant Research v. 99, p ,

43 Comportamento sexual de cabras sob efeito macho criadas em sistema agrossilvipastoril Sexual behavior of goats under male effect created in agrosilvopasture system Solange Damasceno Sousa 1 *; Ismênia França Brito 2 ; Amanda Aragão Ávila 3 ; Alice Andrioli4; Carla Renata Figueiredo Gadelha 2 ; Assis Rubens Montenegro 2 1,3 Universidade Estadual Vale do Acaraú, 2 Universidade Federal do Ceará, 4 EMBRAPA Caprinos e Ovinos * solangesousa15@hotmail.com ABSTRACT It was performed a breeding season lasting 45 days, in it waswhich assessed the sexual behavior of 16 Anglonubians goats through anethogram divided into behavioral and physical signs. Data were analyzed by chi-square test. The behavioral signs like seeking male, shaking tail, mount or let it ride for others females and the physicists like red and swollen vulva showed a significant relationship (p< 0,05) with the sexual receptivity of the female to the male. The estrus concentration occurred until the fourth week (around thirty days), resulting in 93.75% of pregnancy. While in the fifth week it was not observed signs of estrus. Therefore, the visual identification of the receptive female to the male reduces using of the reproductives in excess. Moreover the period of thirty days for the breeding season was satisfactory for the reproductive success. Key words: breeding season; behavioral signs; physical signs; estrus. Palavras-chave: estação de monta; sinais comportamentais; sinais físicos; estro. INTRODUÇÃO Por meio do entendimento da conduta sexual dos animais é possível mensurar parâmetros bastante importantes para avaliar a libido, a habilidade de serviço dos machos, a manifestação do estro e a fertilidade das fêmeas, determinando a eficácia dos processos de acasalamento (Tontiniet al., 2011). O comportamento sexual tem sido manipulado atravésda utilização do efeito macho que se baseia na reação fisiológica da manifestação do estro em resposta à presença de um macho posterior a um tempo de afastamento deste das fêmeas (Rekwotet al.,2001). Diante disso, objetivou-se observar o comportamento sexual identificando os sinais manifestados durante o estro e relacionar os aspectos físicos e comportamentais 331

44 com a receptividade sexual da fêmea durante a estação de monta. MATERIAL E MÉTODOS O estudo foi desenvolvido nos meses de janeiro e fevereiro de 2010 durante o período chuvoso em um sistema Agrossilvipastoril da Embrapa Caprinos e Ovinos, em Sobral - CE(latitude ,5 sul, longitude ,8 oeste, 111 metros de altitude). Foi avaliado o comportamento sexual de 16 cabras da raça Anglo Nubiana com manejo alimentar de livre acesso a pastagem nativa, sal mineral e água. A estação de monta teve duração de 45 dias com o uso do efeito macho. As avaliações foram feitas por meio de um etograma do comportamento sexual, que foi dividido em sinais comportamentais: bale, agita a cauda, busca o macho, monta e deixase montar por fêmeas; e físicos visíveis a distancia: vulva inchada, avermelhada e úmida, presença de muco e micção na presença do macho. Considerou-se o período de atividade sexual o momento em que a fêmea aceitou a monta, dessa forma incluíram-se as informações comportamentais do horário anterior e posterior a este. A avaliação dos dados foi realizada por meio do teste dequi-quadrado. RESULTADOS E DISCUSSÃO Foi possível notar que a maior porcentagem (68,7) dos sinais de estro apareceu na primeira semana, provavelmente devido ao efeito macho. Esses dados corroboram com os observados por Chemineau (1983), onde uma alta proporção (80 a 100%) de cabras foi induzida a ovular dentro dos cinco primeiros dias da introdução do macho. Tambémse evidenciou uma maior concentração dos estros até a quarta semana (30 dias), e resultou em 93,75% de prenhez. A partir da quinta semana as fêmeas não apresentaram mais sinais comportamentais de estro. Na tabela 1 os parâmetros comportamentais: busca o macho, agita a cauda e monta ou deixa-se montar por fêmeas e os sinais físicos: vulva avermelhada e inchada apresentaram uma relação significativa (p< 0,05) com aceitação da monta. A presença de muco, micção e vulva úmida, embora relatados na literatura por alguns autores, não apresentaram uma freqüência significativa relacionada à aceitação ao macho (tabela 1).Esses comportamentos podem não ser tão evidentes durante o estro por serem influenciados por outros estímulos fisiológicos ou ambientais. 332

45 Tabela 1. Distribuição das variáveis analisadas de fêmeas caprinas relacionadas com os comportamentos manifestados durante o estro e aceitação da monta. Variáveis Aceitação da monta Não % Sim % P Agita a cauda Não% 35,2 23,8 0,000* Sim% 3,3 37,7 Bale Não% 56,6 2,5 0,964 Sim% 39,3 1,6 Sinais Busca o macho comportamentais Não% 35,2 23,8 0,000* Sim% 5,7 35,2 Monta ou deixa-se montar por fêmeas Não% 58,2 0,8 0,006* Sim% 35,2 5,7 Presença de muco Não% 50,8 8,2 0,243 Sim% 32,0 9,0 Micção Não% 39,3 19,7 0,065 Sim% 20,5 20,5 Vulva avermelhada Sinais físicos Não% 44,3 14,8 0,000* Sim% 14,8 26,2 Vulva inchada Não% 45,9 13,1 0,000* Sim% 18,9 22,1 Vulva úmida Não% 41,8 17,2 0,087 Sim% 12,3 28,7 (*) Associação significativa (p < 0,05) ao teste do Qui-quadrado. CONSIDERAÇÕS FINAIS O reconhecimento visual da fêmea que está apta ao acasalamento minimiza o desgaste dos reprodutores e, ainda, pode auxiliar no direcionamento de manejos facilitando o trabalho do produtor, além disso, o período de 30 dias para a estação de monta foi satisfatório para o sucesso reprodutivo reduzindo, dessa forma, a necessidade da presença dos reprodutores dentro do sistema e conseqüentemente reduzindo custos. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CHEMINEAU, P. Effect on oestrus and ovulation of exposing Creole goats to the male at three times of the year. Journal of Reproduction and Fertility, v. 67, p REKWOT, P.I.; OGWU, D.; OYEDIPE, E.O.; SEKONI, V.O. The role of pheromones 333

46 and biostimulation in animal reproduction. Animal Reproduction Science, v. 65, n. 3-4, p , Mar TONTINI, J. F.; BASTOS, A.M.; BARBOSA, I.S.; NEVES, A. P.; CORREA, G. F. Comportamento Sexual de Carneiros Corriedale e Cruza Merino X Ideal com ovelhas sincronizadas. In: XX Congresso de Iniciação Científica III Mostra científica UFPEL, 2011, Pelotas. 334

47 Cultivo in vitro a longo prazo de tecido cortical ovariano em cabras: Efeitodo FSH e do IGF-Ina expressão de mrna para receptores de FSH eigf-i Long-term in vitro culture of ovarian cortical tissue in goats: effects of FSH and IGF-I on FSH and IGF-I receptor mrna expression Deborah de Melo Magalhães-Padilha 1,2 ; Paula Correia Medeiros dos Santos 1 *; Gabriela Rios dafonseca 2 ; Áurea Wischral 2 ; Eduardo Leite Gastal 2 ; José Ricardo de Figueiredo 1 1 Universidade Estadual do Ceará; 2 Southern Illinois University * paulacorreiams@gmail.com ABSTRACT Ovarian fragments from 10 goats were cultured in α-mem + alone or supplemented with FSH and IGF-I for 16 days. Fragments from each treatment were processed using a tissue chopper and mrna isolation was performed. The relative expression of mrna for IGFR-1 and FSHR was determined by qpcr.ovarian cortex tissue cultured in the FSH+IGF-I supplementation had similar FSHR mrna expression when compared to the control. However, tissue cultured for 16 days in α-mem + alone had a lower relative expression of FSHR than the control. No difference was detected among treatments for IGFR-1 mrna expression.in conclusion, a similarity of FSH receptor mrna expression was observed in cultured ovarian tissue when compared with the control tissue. This effect, detected in the tissue cultured with medium supplemented with FSH and IGF-I during long-term in vitro culture of preantral follicles, might be associated with the positive effect of these substances duringearly folliculogenesis. Key words: IGFR-ImRNA expression, FSHR mrna expression,in vitro culture of preantral follicles Palavras chave : Expressão do mrnapara IGFR-I, expressão do mrnapara FSHR, cultivo in vitro de folículos pré-antrais INTRODUCTION In order to obtain an ideal medium for in vitro culture of PF, several substances have been tested, including the FSH and IGF-1, which play an important role onfollicular and oocyte viability and growth and they are known to be essential substances for adequate folliculogenesis (Magalhães-Padilha et al., 2011). However, there is a lack of information about mrna expression for FSHand IGF-I receptors 335

48 before and after in vitro culture of ovarian cortical tissue in goats. The aims of this study was to test the hypothesis that the combination of FSH and IGF-I would increase FSHRand IGFR-1 mrna expression during in vitro culture of preantral follicles. MATERIAL AND METHODS Ten goat ovaries (n=10) were used in a triplicate. Ovarian fragments were cultured in α-mem + alone or supplemented with FSH and IGF-I in 24-well culture dishes containing 1 ml of culture medium. The basic culture medium consisted of α- MEM supplemented with ITS, 2 mm glutamine, 2 mm hypoxanthine, 1.25 mg/ml bovine serum albumin (BSA) and 50 µg/ml ascorbic acid, α-mem +. The culture media were replenished every other day. Fragments from each treatmentwere processed using a tissue chopper and mrna isolation was performed using an RNeasy Mini Kit (Qiagen, Maryland, USA) for animal tissue. The elutes of total follicle RNA were treated with 1 µl ofdnase (Fisher Scientific, 1u/µl) for 10 min at 37 C and 2 min at 65 C to remove genomic DNA. Quality of the extracted RNA was evaluated by gel electrophoresis while quantity was evaluated by ND 1000 (NanoDrop 1000 spectrophotometer). The mrna was reverse transcribed into first-strand cdna using an iscriptcdna synthesis kit (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) with random primers. The relative expression of mrna for IGFR-1 and FSHR was determined by qpcr (quantitative Polymerase Chain Reaction) technique. The delta-delta-ct method was used to transform CT values into normalized relative steady-state levels of mrna (Magalhães-Padilha et al. 2011). For the statistical analysis, ANOVA was used to test the effect of FSH and IGF-I on the relative expression of FSH and IGF-I receptors on non-cultured control and ovarian fragments submitted to culture for 16 days in α-mem+ alone and FSH+IGF- Isupplementation. RESULTS AND DISCUSSION Ovarian cortex tissue cultured for 16 days in the FSH+IGF-I supplementation had similar (P>0.05) FSHR mrna expression when compared to the non-cultured control. However, tissue cultured for 16 days in α-mem + alone had a lower (P<0.05) relative expression of FSHR than the non-cultured control. No difference (P>0.05) was detected among treatments for IGFR-1 mrna expression. 336

49 The ovarian cortex might contain all follicular stages, even secondary and tertiary follicles, which have large amounts of mrna for FSH receptors. During the in vitro culture process, some of the follicles become atretic, especially tertiary follicles (Meresman, 2011). This may explain the decrease in FSH receptors mrna expression in this study for the α-mem + treatment. However, although follicular viability reduces after in vitro culture,when the culture medium is supplemented with FSH and IGF-I the relative expression of mrna for FSHR was similar to the non-cultured control. This finding might be explained by the fact that the FSH+IGF-I supplementation increase the formation of secondary follicles (Magalhães-Padilha et al.,2011) No difference was detected among treatments for IGFR-1 mrna expression. This result is in agreement with Armstrong et al. (2000), who detected IGFR-1 mrna in both granulosa and theca cells of bovine preantral and antral follicles, with no difference in IGFR-1 mrna expression among follicular stages. CONCLUSION In conclusion, a similarity of FSH receptor mrna expression was observed in cultured ovarian tissue when compared with the non-cultured (control) tissue. This effect, detected in the tissue cultured with medium supplemented with FSH and IGF-I during long-term in vitro culture of preantral follicles, might be associated with the positive effect of these substances duringearly folliculogenesis. REFERENCES ARMSTRONG, D. G.; GUTIERREZ, C. G.; BAXTER, G.; GLAZYRIN, A. L.; MANN, G. E.; WOAD, K. J.; HOGG, C.O.; WEBB, R.;Expression of mrna encoding IGF-I, IGF-II and type 1 IGF receptor in bovine ovarian follicles. Journal of Endocrinology,v. 165, p , MAGALHÃES PADILHA, D. M.; DUARTE, A. B. G.; ARAÚJO, V. R.; SARAIVA, M. V. A.; ALMEIDA, A. P.; RODRIGUES, G. Q.; MATOS, M. H. T.; CAMPELLO, C. C.; SILVA, J. R.; GASTAL,M. O.; GASTAL, E. L.; FIGUEIREDO, J. R.; Steady-state level of Insulin-like growth factor-i (IGF-I) receptor mrna and the effect of IGF-I on the in vitro culture of caprine preantral follicles. Theriogenology,v. 77, p , MERESMAN, G.; Relevance of apoptosis in the female reproductive system.the Journal of Clinical Investigation,v. 52, p ,

50 Descrição histológica do escroto de ovinos nativos do Estado da Paraíba, segundo o grau de bipartição escrotal Histologic descriptionof the scrotumof sheepnative to thestate of Paraiba, according to the degree ofscrotalbipartition Mikael Leandro Duarte de Lima Tolentino¹*; Laura Honório de Oliveira¹; Maria Acelina Martins de Carvalho²; Antonio Chaves de Assis Neto³; Danilo José Ayres de Menezes¹; Otávio Brilhante de Sousa¹ ¹ Universidade Federal de Campina Grande (UFCG) Patos PB ² Universidade Federal do Piauí Teresina PI 3 Universidade de São Paulo São Paulo - SP * mikaeltolentino@gmail.com ABSTRACT The objective of this research was to evaluate the histological characteristics of the scrotum of sheep with or without scrotal bipartition.were used 12 adult animals divided into two groups: GE (animals without scrotal bipartition) and GEII(animals with bipartite scrotum). Fragments of the scrotum of these animals were histologically processed and analyzed according to the thickness of the epidermis and dermis, and the number of sweat glands, usingimage analysis system coupled to a light microscope.the results were subjected to analysis of variance by BioEstat 5.0 by the method of ANOVA: a criterion. The parameters analyzed were statistically similar (P>0,05). It follows that thickness the epidermis and dermis and the amount of sweat glands of the scrotum are split in animals compared toanimals that did not shows splitting scrotum. Key words: Scrotum;Small Ruminant; Bipartition; Histology. Palavras - Chave: Escroto; Pequeno Ruminante; Bipartição; Histologia. INTRODUÇÃO A bipartição escrotal está presente nos reprodutores criados próximo da linha do equador, em regiões de temperaturas elevadas (ROBERTSHAW, 1982; NUNES et al., 1984). Esta característica morfológica aumenta a superfície de contato do escroto e dos testículos com o meio externo, facilitando assim a dissipação do calor na região (NUNES et al.,1984, SILVA et al.,1986). É no tegumentos escrotal onde estão contidas as principais estruturas relacionadas com o processo determorregulação. Diante da importância do escroto para o mecanismo determorregulação testicular, e da falta de 338

51 informações sobre a influência externa do escroto de ovinos na morfofisiológica desse órgão, objetivou-se com esse trabalho avaliar os aspectos histológicos da pele escrotal, por meio de sua análise estrutural, e a quantificação das glândulas sudoríparas em ovinos com ou sem bipartição escrotal. MATERIAL E MÉTODOS Foram coletados 12 animais oriundos do abatedouro público da cidade de Patos PB divididos segundo a configuração escrotal (GEI grupo de 6 animais com escroto sem bipartição e GEII grupo de 6 ovinos com bipartição escrotal dos testículos).foram coletados fragmentos transversais da pele escrotal, dos terços proximal, médio e distal das faces cranial e caudal(nos animais sem escroto bipartido) e proximal, médio e medial da rafe escrotal (nos animais com escroto bipartido).as amostras foram fixadas em formaldeído a 10% tamponado, por 48 horas. O material foi processado em rotina histológica normal e confecção de lâminas histológicas as quais foram analisadas em microscopia de luz e mensurada a espessura da epiderme(eepi) e derme(eder).posteriormente foram feitas as quantificações das glândulas sudoríparaspor área (QGSA) por meio do programa de análise de imagem (ImagePro- Express v.6.0).. Os resultados obtidos foram submetidos submetidos à análise de variância pelo programa BioEstat 5.0 e os valores médios foram comparados pelo teste de ANOVA: um critério com nível de significância P<0,05. RESULTADOS O escroto dos ovinos pesquisados apresentaram-se compostos da epiderme,derme e hipoderme, além de uma camada de grandes glândulas sudoríparas, algumas glândula sebáceas e folículos pilosos Em relação a epiderme, observou-se que esta aumentava gradativamente sua espessura da região proximal à região distal, conforme relatado na literatura (BANKS,1992) A derme apresentava-se normalmente constituída de tecido conjuntivos frouxo e pouco tecido adiposo com presença de uma camada de glândulas sudoríparas e algumas glândulas sebáceas conforme descrito(dellman & BROWN, 1982; BANKS, 1992) Não foi encontrado diferenças significativas entre a espessura da epiderme e derme do tegumento escrotal dos animais bipartidos em comparação com os não 339

52 bipartidos (Tabela 1) nas regiões do escroto pesquisadas na sua face cranial e caudal. A quantidade de glândulas sudoríparas por área também mostraram-se estatisticamente semelhantes, entre ambos os grupos estudados (Tabela 1) presentes no escroto também não se mostraram diferentes entre os grupos. Tabela 01. Valores médios da espessura do escroto (Epiderme e Derme), densidade numérica das glândulas sudoríparas por área analisada em escroto de ovinos com e sem bipartição escrotal. Região/Grupos Proximal (Cranial/Caudal) Média (Cranial/Caudal) Distal/Rafe (Cranial/Caudal) GEI GEII GEI GEII GEI GEII EEPI ((µm 550,25 515,83 734,26 666,71 870,42 806,26 linear) EDER (µm 6388, , , , , ,60 linear) QGSA CONCLUSÕES Com base no exposto, conclui-se que os reprodutores da espécie ovina portadores de bipartição escrotal, apresentam-se significativamente semelhante quando comparados com os reprodutores não bipartidos no que diz respeito a constituição histológica do escroto (epiderme, derme e glândulas sudoríparas), visto que esse animais não apresentaram diferenças nas estruturas que o compõe. Sendo assim, pode-se afirmar que os ovinos portadores de bipartição escrotal não apresentam diferenças em relação a produção de suor desta região quando comparados com os ovinos não bipartidos devido a quantidade de glândulas sudoríparas no tegumento escrotal de ambos os grupos serem semelhantes. Com isso, sugere-se que este tipo de adaptação nos ovinos seja de carácter anatômico, devendo outros estudos serem realizados com o intuito de confirmar esta hipótese. 340

53 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS NUNES, J.F. et al. Preliminary report on observed differences in goat semen characteristics based on scroat morphology. In: Reunion Internacionale de Reproduction des Ruminants en Zone Tropical, Guadelupe. Proceding. Paris: INRA, p ROBERTSHAW, D. Concepts in animal adaptation: thermoregulation of the goat. In: International Bonference on Goat Production and Disease, 3., 1982, Tucson. Proceedings. Seoltsdale: Dairygoatjournal, p SILVA, A. E. D. F.; NUNES, J. F.; MELO, F. A. Influência da morfologia escrotal nas características do sêmen e seus efeitos na fertilidade de caprinos. A Hora Veterinária. Ano 5,n. 29, p. 66-9,

54 Detection of the Small Ruminants Lentivirus (SRLV) in blood, semen from bucks naturally and experimentally infected in the semi-arid region of Brazil Detecção do Lentivírus de Pequenos Ruminantes (LVPR) no Sangue e Sêmen de Bodes Naturalemnte e Experimentalmente Infectados no semi-árido do Brasil Ney Rômulo de Oliveira Paula 1 *; Alice Andrioli 2 ; Janaína de Fátima Saraiva Cardoso 1 ; Raimundo Rizaldo Pinheiro 2 ; Kelma Costa de Souza 2 ; Francisco Selmo Fernandes Alves 2 1 Campus de Bom Jesus, Universidade Federal do Piauí, Bom Jesus-PI, Brasil 2 Pesquisador Embrapa Caprinos e Ovinos, Sobral-CE, Brasil * neyromulo@ufpi.edu.br RESUMO O objetivo deste estudo foi relatar a eliminação do CAEV e comparar os perfis virais de animais naturalmente e experimentalmente infectados. Foram selecionados, quatro animais naturalmente infectados pelo CAEV e cinco experimentalmente infectados. Foram realizados os testes de IDGA e Nested-PCR. Os resultados foram analisados pelo teste do qui-quadrado (P <0,05). A soroconversão foi detectada 16 semanas após a inoculação viral em 80% dos bodes naturalmente infectados. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas quanto à presença do DNA proviral no sangue e sêmen nos dois grupos testados. Não foi identificado um padrão de eliminação viral durante o período de avaliação, contudo o DNA proviral foi verificado em intervalos mais curtos após a 18ª semana e a 22ª semana, nos machos infectados experimentalmente e naturalmente, respectivamente. Portanto, caprinos no período que antecede à soroconversão eliminam o DNA proviral do CAEV no sêmen e são importantes fontes de infecção. Palavras-chave: caprino, LVPR, Nested-PCR mc Keywords: goat, SRLV, Nested-PCR INTRODUCTION Animals positive for small ruminants lentivirus (SRLV) in the PCR blood test presented positive result in one or more tissues and fluids of the reproductive tract. Specifically in goats, SRLV DNA was present only in the testis, vesicular glands, 342

55 ejaculated semen and epididymis (Peterson et al., 2008, Paula et al., 2009). PCR has been shown to be highly specific for CAEV proviral DNA detection in infected animals because crossed reaction has not been identified with other ruminant retroviruses such as Maedi Visna Virus (MVV), bovine immunodeficiency virus or bovine leukemia virus. This specificity is important because goats may be infected with other retroviruses (Clavijo & Thorsen, 1996). The aim of this study was to report the chronology of CAEV elimination and compare the blood and semen viral profiles of animals naturally and experimentally infected by SRLV raised in the semi-arid region of Brazil. MATERIALS AND METHODS The experiment was carried out at the National Goat Research Center, Brazil (Embrapa). Nine bucks were selected, four naturally infected by CAEV and five animals proven negative that were inoculated with the goat lentivirus (CAEV-Cork strain). Every week the animals were submitted to semen collection using an artificial vagina. The blood was collected by puncturing the jugular vein with tubes containing EDTA, seven days after inoculation (experimentally infected group) or at the start of the experiment (naturally infected group) and then at every 30 days. The genomic viral DNA was extracted from semen and blood and then Nested-PCR was applied. An agar gel microimmunodiffusion (AGID) was performed to detect anti-caev antibodies. The results were described in percentage and analyzed by the chi square test (P<0.05). RESULTS The presence of anti-caev antibodies was detected in the 16th week after inoculation that characterized the seroconversion from four of the five naturally infected goat bucks (80%). The fifth reproducer presented late seroconversion, totaling 32 weeks post-inoculation. A quantity was observed in the total of samples collected of 12.50% and 17.14% positive results in the blood and 10.98% and 11.25% positive results in the semen of the naturally and experimentally infected animals, respectively, and there was no statistical difference. No statistically significant differences were observed regarding the presence of proviral DNA in the blood and semen of the naturally and experimentally infected animals. A viral elimination patter was no identified during the assessment period, but the presence of proviral DNA was shown at shorter intervals 343

56 after the 18th week and the 22nd week, for the experimentally and naturally infected bucks, respectively. CONCLUSIONS Bucks recently infected in the phase that precedes seroconversion eliminate SRLV proviral DNA in the semen and are important sources of infection that should be considered in a control program of this small ruminant lentivirus. Bearing in mind the intermittent elimination of the virus in the semen, Nested- PCR could be used as an important tool to select ejaculations without the virus from animals, that although infected, show high genetic and economic value. ACKNOWLEDGEMENTS The author thanks the Ceará Foundation for Support to Scientific and Technological Development FUNCAP, Banco do Nordeste - BNB - for financial support and the Brazilian Center for Goat Research (EMBRAPA) for use of the structure and technical and financial support. REFERENCES CLAVIJO, A.; THORSEN, J. Application of polymerase chain reaction for the diagnosis of caprine arthritis-encephalitis. Small Ruminant Research, v.22, p.69-77, PETERSON, K.; BRINKHOF, J.; HOUWERS, D.; COLENBRANDER, B.; GADELLA, B. Presence of pro-lentiviral DNA in male sexual organs and ejaculates of small ruminants. Theriogenology, v.69, p , PAULA, N. R. O.; ANDRIOLI, A., CARDOSO, J. F. S., PINHEIRO, R. R., SOUSA, F. M. L., SOUZA, K. C., ALVES, F. S. F., CAMPELLO, C. C., RICARTE, A. R. F., TEIXEIRA, M. F. S. Profile of the Caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV) in blood, semen from bucks naturally and experimentally infected in the semi-arid region of Brazil. Small Ruminant Research, v. 85, p.27-33,

57 Efeito da adição de antioxidante ao meio de congelação sobre a motilidade do espermatozóide caprino após a descongelação Effect of antioxidant addition on the cryopreservation medium on the goat sperm motility after thawing Marciane da Silva Maia 2* ; Iralice Montenegro de Medeiros 3 ; Claudio Adriano Correia Lima 3 ; Flora Suzane Parente Maia 4 1 Financiado pelo BNB/ETENE/FUNDECI; 2 Embrapa/EMPARN, Natal-RN; 3 EMATER/ EMPARN, Natal-RN; 4 Graduanda UFPI, Teresina-PI. * marcianemaia@yahoo.com.br ABSTRACT The objective of this study was to evaluate the effect of antioxidant Reveratrol added to semen cryopreservation extender, on the maintenance of post-thaw sperm motility. Ejaculates from two bucks of American Alpine breed were evaluated and diluted to contain 400 x 10 6 cells/ml, in Tris-egg yolk extender and supplemented with Resveratrol (4, 6 or 8 g ml), or no antioxidant (control). The semen was loaded into 0.25ml straws, cooled and frozen in a programmable freezer and stored in liquid nitrogen. The supplementation of extender with 4 and 8 mg/ml Resveratrol had a significant (P<0.05) effect on post-thawingsperm motility and TDM, when compared to the control, indicating that the antioxidant was able to protect sperm membranes during the cryopreservation process. Keywords: freezing, goat semen, Resveratrol, Palavras chave: congelação, Resveratrol, sêmen caprino. INTRODUÇÃO A baixa fertilidade obtida na inseminação artificial (IA) cervical de caprinos com sêmen congelado limita o uso da técnica como rotina de manejo reprodutivo. Uma das razões para a reduzida fertilidade do sêmen congelado são os danos acarretados ao espermatozoide pelo processo de congelação e descongelação. Em parte, esses danos se devem ao acúmulo de produtos tóxicos produzidos pelo metabolismo espermático, entre eles, os metabólitos reativos do oxigênio (ROS, Aitken, 1995) associado à redução da atividade dos antioxidantes no sêmen provocada pela criopreservação (Bilodeauet al., 2000). Sendo assim, a adição de antioxidantes aos meios de congelação de sêmen tem 345

58 sido avaliada nas diferentes espécies podendo apresentar um efeito protetor tanto na atividade metabólica, quanto na viabilidade do espermatozoide criopreservado (Sarlóset al., 2002). O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da adição de Resveratrol, ao diluidor sobre a preservação da motilidade do espermatozoide caprino pósdescongelação. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado no Laboratório de Tecnologia de Sêmen (LATES) da EMPARN, localizado na Estação Experimental Rommel Mesquita de Faria, no Município de Parnamirin, RN. Foram utilizados dois reprodutores caprinos da raça Alpina Americana, com cerca de três anos de idade, dos quais foram colhidos por meio de vagina artificial, 16 ejaculados. Após a colheita, os ejaculados foram avaliados e submetidos a duas centrifugações (600 x g) para a retirada do plasma seminal. Em seguida o pellet foi ressuspendido em diluidor Tris-glicose-gema (Tris-hidroximetilaminometano4,5375 g; ácido cítrico monohidratado 2,6057g; glicose anidra 0,7495 g; gentamicina 13,4 mg; gema de ovo 10% (v/v), Orvus es paste 0,5% (v/v); água destilada para 100 ml e glicerol 10 % (v/v) no meio II, ph 6,8) para uma concentração de 400 x 10 6 sptz/ml e dividido em quatro alíquotas de volume igual. Três das alíquotas foram suplementadas com Resveratrol (SIGMA R5010) nas concentrações de 4, 6 e 8 g/ml. A congelação foi realizada em sistema automatizado, modelo Tetakon -TK 3000 (TK Tecnologia em congelação Ltda). As palhetas foram armazenadas em botijão criobiológico e antes das avaliações foram descongeladas em banho-maria à 37 C por 30 segundos. Os dados foram submetidos à ANOVA com comparação de médias pelo teste de Duncan a P<0,05. RESULTADOS E DISCUSSÃO A motilidade espermática pós-descongelação foi significativamente maior (P<0,05) nas amostras congeladas com 4 e 8 g de resveratrol/ml do que no controle. Da mesma forma, o percentual de perda da motilidade após a criopreservação, denominado taxa de degradação da motilidade (TDM) foi significativamente (P<0,05) menor nos diluidores com 4 e 8 g de resveratrol/ml do que no controle (Tabela 1). O efeito benéfico do Resveratrol na conservação de sêmen também foi observado por Sarlóset al. 346

59 (2002) no sêmen ovino. Segundo os autores, esse efeito se deve à alta capacidade do antioxidante em inibir a lipoperoxidação comparado a outros antioxidantes. Já Silva etal. (2011) não observaram efeito significativo do Resveratrol sobre a motilidade do espermatozoide ovino após a descongelação. Tabela 1 - Médias ± erro padrão dos parâmetros espermáticos no sêmen caprino fresco e congelado em diluidor Tris-gema aditivado ou não de Resveratrol Parâmetro MT VIGOR VIVOS NORMAIS TDM Sêmen Fresco 81,3± 0,6 4,4±0,1 81,1±0,5 83,6±0,2 - Pós-descongelação Controle 39,4± 2,3 b 2,8± 0,1 66,8± 2,4 71,6± 1,9 50,8± 2,8 a 4,0 g/ml 47,5± 2,3 a 2,8± 0,1 69,4± 2,4 76,9± 1,9 41,5± 2,8 b 6,0 g/ml 45,6± 2,3 ab 2,8± 0,1 65,6± 2,4 71,8± 1,9 43,8± 2,8 ab 8,0 g/ml 50,6± 2,3 a 2,9± 0,1 68,5± 2,4 70,0± 1,9 37,3± 2,8 b Médias seguidas de letras diferentes na mesma linha ou coluna diferem entre si a P< 0,05 pelo teste Duncan. MT, motilidade espermática; TDM, taxa de degradação da motilidade CONCLUSÕES A adição de Resveratrol ao diluente Tris-gema melhora a congelabilidade, conferindo maior proteção ao espermatozoide contra a crio-injúria, resultando em efeito benéfico na preservação da motilidade pós-descongelação. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS AITKEN, R, J. Free radicals, lipid peroxidation and sperm function. Reproduction, Fertility and Development, v. 7, p , BILODEAU, J.F.; CHATTERJEE, S.; SIRARD, M.A.; GAGNON, C. Levels of antioxidant defenses are decreased in bovine spermatozoa after a cycle of freezing and thawing. Molecular Reproduction and Development, v.55, n.3, p , SARLÓS, P. MOLNAR, A.; KOKAI, M. GABOR, G.Y.; RÁTKY, J. Comparative evaluation of the effect of antioxidants in the conservation of ram semen. ActaVeterinariaHungarica, v.50, n.2, p , SILVA, E.C.B.; CAJUEIRO, J.F.P.; SILVA, S.V.; SOARES, P.C.; GUERRA, M.M.P. 347

60 Effect of antioxidants resveratrol and quercetin on in vitro evaluation of frozen ram sperm. Theriogenology. No prelo. (doi: /j.theriogenology ). 348

61 Efeito da adição de plasma seminal ao diluidor ACP-102c nas subpopulações espermáticas avaliadas em sistema CASA do sêmen ovino criopreservado Effects of seminal plasma addition to ACP-102c extender on sperm subpopulations evaluated by CASA system of cryopreserved ram semen José Maurício Maciel Cavalcante * ; Gyselle Viana Aguiar; Carminda Sandra Salmito Vanderley; José Ferreira Nunes Faculdade de Veterinária, Universidade Estadual do Ceará (UECE) * jmmcavalcante@bol.com.br ABSTRACT The aim of this study was to evaluate the addition of seminal plasma to ACP-102c ram extender on the different sperm subpopulation on the basis of the motility characteristics. Ram semen was pooled and cryopreserved in ACP-102c extender (ACP) and ACP-102c + 30% of ram seminal plasma (ACP+PS). The frozen semen was evaluated using computer assisted semen analyzer (CASA) system at thawed (t0) and after 2 h of incubation at 37 C (t2). The spermatozoas were classified into four subpopulations: fast progressive, lower progressive, nonprogressive and statics. Ram semen cryopreserved in ACP+PS showed higher fast progressive sperm and lower static when compared to ACP at t0 and t2. The addition of seminal plasma to ACP-102c extender offers better protection to ram sperm during cryopreservation. Key word: seminal plasma, ram, cryopreservation, ACP-102c Palavras-chave: plasma seminal, ovino, criopreservação, ACP-102c INTRODUÇÃO O desenvolvimento de diluidores que melhor protejam os espermatozóides após criopreservação é um dos desafios da biotecnologia da reprodução de ovinos. Neste sentido, o diluidor à base de água de coco em pó (ACP-102c) têm-se mostrado como alternativa na criopreservação de sêmen nesta espécie (Cavalcante, 2008). O plasma seminal ovino tem importante atuação na função espermática e fertilização e sua interação com espermatozoides ovinos tem apresentado efeitos benéficos no sêmen criopreservado (Maxwell et al., 1999). Além disso, o sêmen é composto por subpopulações espermáticas de diferentes padrões de motilidade e a criopreservação altera o percentual de participação de cada uma destas subpopulações 349

62 (Muiño et al., 2009). Deste modo, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da adição de plasma seminal ovino ao diluidor ACP-102c nas diferentes subpopulações espermáticas avaliadas em sistema computadorizado de análise de sêmen (CASA). MATERIAL E MÉTODOS Foram realizadas cinco coletas de sêmen de dois carneiros da raça Santa Inês e dois da raça Dorper, totalizando 20 ejaculados. Em cada coleta, os ejaculados foram reunidos em um pool. Este foi dividido em duas alíquotas e diluídas nos tratamentos: (1) ACP (ACP-102c + 15% gema de ovo + 5% glicerol) e (2) ACP+PS (ACP-102c + 15% gema de ovo + 5% glicerol + 30% de plasma seminal ovino). O sêmen diluído em cada tratamento foi envasado em palhetas de 0,25ml (100x10 6 sptz/palheta) e criopreservado. As palhetas foram descongeladas à 37 o C/30s e o sêmen avaliado em sistema CASA (Sperm Class Analyser, Microptic S.L.) ao descongelamento (t0) e após duas horas de incubação à 37 o C (t2) para o percentual das seguintes subpopulações espermáticas: rápidos progressivos (STR>80% e VAP>70 µm/s), lentos progressivos (STR>80% e VAP>20µm/s), não progressivos (STR 80%) e estáticos. Os resultados foram transformados em arcoseno e submetidos à ANOVA seguido de teste de Tukey a 5%. RESULTADOS E DISCUSSÃO Os resultados estão expressos na Figura 1. Ao descongelamento, o tratamento ACP+PS apresentou maior percentual de espermatozoides rápidos progressivos (38,9±4,1%) e menor percentual de estáticos (23,8±4,6%) quando comparados ao controle ACP (25,5±7,7% e 41,1±10,0% respectivamente). A incubação do sêmen por duas horas reduziu o percentual de espermatozóides rápidos e lentos progressivos e aumentou o percentual de estáticos em ambos os tratamentos. Entretanto, o sêmen ovino criopreservado em ACP+PS foi superior para o percentual de espermatozoides progressivos rápidos (28,3±7,4%) e lentos (15,9±6,4%), e menor no percentual de estáticos (41,8±14,6%) em comparação ao ACP (13,5±9,4%; 8,4±3,2%; 65,7±10,0%, respectivamente) após incubação por duas horas. A proteção oferecida pelo plasma seminal ao espermatozóide ovino encontrada neste trabalho corrobora com os achados de Maxwell et al. (1999) que verificaram aumento da motilidade e da fertilidade pela adição do plasma seminal ao sêmen ovino criopreservado pós-descongelamento e com Leahy et al. (2010) que observaram aumento na viabilidade de espermatozoides ovinos 350

63 criopreservados após a adição de plasma seminal ao sêmen, seguida de diluição e criopreservação. A-B Diferença significativa entre tratamentos para mesmo momento de avaliação de mesma subpopulação espermática a-b Diferença significativa entre momentos de avaliação de mesmo tratamento de mesma subpopulação espermática Figura 1. Percentual das diferentes subpopulações espermáticas do sêmen ovino criopreservado em ACP-102c (ACP) e com adição de plasma seminal (ACP+PS), ao descongelamento (t0) e após incubação de duas horas à 37 o C (t2). CONCLUSÕES A adição de plasma seminal ovino ao diluidor ACP-102c promove maior proteção aos espermatozoides durante a criopreservação. AGRADECIMENTOS Ao CNPq, Capes e Funcap pelo apoio financeiro desta pesquisa. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CAVALCANTE, J.M.M. Avaliação do sêmen ovino diluído e congelado em meio à base de água de coco em pó (ACP-102c) ou TRIS. Fortaleza, Dissertação (Mestrado) em Ciências Veterinárias da Universidade Estadual do Ceará, UECE, LEAHY, T.; MARTI, J.I.; EVANS, G.; MAXWELL, W.M.C. Seasonal variation in the protective effect of seminal plasma on frozen-thawed ram spermatozoa. Animal Reproduction Science, v.119, p , MAXWELL, W.M.C.; EVANS, G.; MORTIMER, S.T.; GILLAN, L.; GELLATLY, E.S.; McPHIE, C.A. Normal fertility in ewes after cervical insemination with frozen-thawed 351

64 spermatozoa supplemented with seminal plasma. Reproduction, Fertility and Development, v.11, p , MUIÑO, R.; PEÑA, A.I.; RODRÍGUEZ A.; TAMARGO C.; HIDALGO C.O. Effects of cryopreservation on the motile sperm subpopulations in semen from Asturiana de los Valles bulls. Theriogenology, v.72, n.6, p ,

65 Efeito da associação de Misoprostol e Sulfato de Terbutalina na dilatação cervical de ovelhas Dorper submetidas à inseminação artificial transcervical Effect of combination of misoprostol and terbutaline sulfate on cervical dilation of Dorper ewes submitted to transcervical artificial insemination Lívia Correia Magalhães 1* ; Celso Henrique Souza Costa Barros 1 ; Alane Pains Oliveira do Monte 1 ; Jonathan Maia da Silva Costa 1 ; Mabel Freitas Cordeiro 1 ; Edilson Soares Lopes Júnior 1 1 Laboratório de Fisiologia e Biotecnologia da Reprodução Animal (LAFIBRA) Universidade Federal do Vale do São Francisco (UNIVASF) * liviamagalhaes@yahoo.com.br ABSTRACT In order to evaluate the effect of administration of misoprostol associated to terbutalin sulphate in crossbred ewes submitted to artificial insemination (AI), were used 40 Dorper ewes divided into two groups (n = 20). Females were submitted to estrus synchronization treatment and, after this, estrus detection was performed using a Dorper ram. Control Group (CG) received saline and Misoprostol/Terbutalin Group (MT), an association of Misoprostol (400 mg) and Terbutalin Sulphate (2.5 mg), 60 minutes before artificial insemination. The ewes were inseminated by transcervical way with cervical traction. Data were expressed as mean and analyzed by ANOVA and Tukey's test with P<0.01. The estrus onset was later in CG than in MT (P<0.05). The cervical traction in MT was better than in CG (P<0.05). The use of misoprostol associated to terbutalin sulphate promoted cervical dilation and optimized the AI using cervical traction in Dorper ewes. Keywords: artificial insemination, misoprostol, sheep, terbutalin sulphate Palavras chave: inseminação artificial, Misoprostol, ovinos, Sulfato de Terbutalina INTRODUÇÃO As fêmeas ovinas apresentam dificuldade na execução de inseminação artificial com deposição intra-uterina do sêmen, devido às características anatômicas da cérvix, que dificultam a passagem do aplicador. Dada a existência de uma correlação positiva entre a fertilidade e a profundidade da IA nos ovinos (Barbas et al., 2001), pesquisadores têm testado vários fármacos, dentre eles: o Misoprostol e o Sulfato de 353

66 Terbutalina, os quais estão relacionados ao relaxamento muscular e a dilatação do canal cervical, tentando viabilizar a inseminação artificial através do canal cervical em ovelhas. Assim, objetivou-se avaliar efeito da administração da associação Misoprostol e Sulfato de Terbutalina na dilatação cervical de ovelhas mestiças de Dorper submetidas à inseminação artificial no submédio São Francisco. MATERIAL E MÉTODOS Quarenta ovelhas mestiças de Dorper foram submetidas ao mesmo tratamento de sincronização do estro por 12 dias, utilizando esponjas intravaginais impregnadas com 60 mg de Acetato de Medroxiprogesterona (Progespon, Intervet Schering-Plough, Brasil). A detecção de estro foi realizada em intervalos de 4 horas por um carneiro da raça Dorper. As fêmeas foram alocadas em dois grupos experimentais de 20 animais cada, sendo: o Grupo Controle (C), no qual foi administrado 5 ml de solução fisiológica a 0,9% NaCl, depositados no fundo de saco vaginal próximo à abertura cervical externa, 60 minutos antes da IA; e o grupo tratamento, denominado Misoprostol/Terbutalina (MT), recebeu uma associação de 400 μg de Misoprostol (Prostokos, Hebron, Brasil), diluídos em 5 ml (2,5 mg) de Sulfato de Terbutalina (Terbutil, Nova Química, Brasil), administrados com o mesmo tempo antes da IA e no local que o grupo controle (Barbas et al., 2001). As ovelhas foram inseminadas por via transcervical com tração cervical, 50 a 54 horas após o final do tratamento progestágeno. Os dados foram submetidos à análise de variância (ANOVA), e ao teste de Tukey, com P<0,05. RESULTADOS E DISCUSSÃO O início do estro foi mais tardio no Grupo C (37,0 ± 8,2 h) do que no MT (31,0 ± 5,3 h) (P<0,05). O tempo entre a retirada da esponja e o início do estro pode ser influenciado pelo tipo da esponja, estação do ano, idade do animal, estado nutricional, lactação, tipo de progesterona, uso de gonadotrofinas, entre outros (Romano et al., 2001). Os resultados deste estudo podem estar relacionados a um erro de dosagem no lote da esponja utilizada neste grupo ou, ainda, à individualidade dos animais. O grau de flexibidade da cérvice, que foi significativamente (P<0,05) superior no Grupo MT, no qual 90,0% das ovelhas desse grupo permitiu tração vaginal, enquanto em apenas 47,4% do Grupo C foi possível esse procedimento, o que pode ter facilitado a passagem dos 354

67 anéis cervicais dos animais no grupo tratado com a associação Misoprostol e Sulfato de Terbutalina. Isto indica que a associação destas substâncias age de forma eficiente no relaxamento do tecido cervical, facilitado a passagem dos anéis cervicais. Sendo assim, este grupo sofreu um menor trauma cervical, e um menor estresse causado pela tração o que pode influenciar positivamente na fertilidade. Quanto ao grau de profundidade da inseminação, o Grupo MT foi estatisticamente igual (P>0,05) ao Grupo Controle (79,0% vs. 100,0% de inseminações intra-uterinas, respectivamente). O mesmo foi observado para o tempo gasto na inseminação artificial, onde foram registrados 129,8 ± 47,0 e 112,9 ± 54,0 segundos para os Grupos C e MT, respectivamente (P>0,05). A demora no início do estro no Grupo C parece ter inibido a superioridade do efeito dilatador no Grupo MT, pois, com o início do estro mais tardio no Grupo C, os seus níveis plasmáticos de 17β-Estradiol, estavam, provavelmente, mais altos no momento da inseminação artificial em tempo fixo de suas ovelhas, culminando com o alto grau de inseminações intra-uterinas, mesmo sem o uso da associação dilatadora usada nesse estudo. CONCLUSÕES O uso de Misoprostol associado ao Sulfato de Terbutalina foi capaz de promover a dilatação cervical, otimizando a inseminação artificial por tração cervical em ovelhas Dorper. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BARBAS, J.P.; GONÇALVES, S.C.; MARQUES, C.C.; HORTA, A.E.M. Efeito da aplicação vaginal de dilatadores do cérvix durante a fase folicular do ciclo em ovelhas. Estoril, Portugal,2001. In: Proceedings do III Congresso Ibérico de Reprodução Animal, 2001.v.3, p ROMANO, J. E.; FERNANDEZ ABELLA, D.; VILLEGAS, N. A note on the effect continuous ram presence on estrus onset, estrus duration and ovulation time in estrus synchronized ewes. Applied Animal Behaviour Science, v. 72, p ,

68 Efeito da lectina de Phaseolus vulgaris (PHA) sobre o cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos (Capra hircus) Effect of Phaseolus vulgaris (PHA) on the in vitro culture of goat (Capra hircus) preantral follicles Autores: Anderson Weiny Barbalho Silva 1 *, Ellen de Vasconcelos da Cunha 1, Rodrigo Otávio Decaria de Salles Rossi 1, Antonia Moemia Lúcia Rodrigues Portela 1, Ricardo Pires dos Santos 1, José Roberto Viana Silva 1. 1 Universidade Federal do Ceará - Núcleo de Biotecnologia de Sobral - NUBIS, Sobral Ceará - Brasil * andersonweiny@hotmail.com ABSTRACT The optimization of exploration of the reproductive potential of females requires a better understanding of the mechanisms that rule follicular growing. The development of efficient systems of culture is extremely important to assure the follicular growth in vitro. This study aimed to evaluate the effect of lectin Phytohemagglutinin (PHA) of Phaseolus vulgaris on survival, growth and antrum formation of caprine secondary follicles cultured in vitro. Secondary follicles (~0,2 mm) were isolated from the cortex of caprine ovaries and individually cultured for six days in α-mem + supplemented with PHA at concentrations of 0, 1, 10, 50, 100 or 200 µg/ml. The results showed that, after culture, there was no significant difference among all treatments regarding follicular growth. However, PHA at concentrations of 10µg/mL increased the antrum formation rate when compared with control. At the end of culture, the treatments have been shown to maintain follicular survival. Keywords: caprine, culture, follicle, lectin Palavras-chave: caprino, cultivo, folículo, lectina INTRODUÇÃO Ao nascimento, o ovário caprino contém milhares de folículos primordiais, os quais são considerados o pool de estoque de folículos ovarianos. Entretanto, mais de 99,9% destes morrem por um processo natural designado atresia folicular (Markström et al., 2002). O 356

69 desenvolvimento de sistemas de cultivo de folículos ovarianos permite a recuperação de um maior número de oócitos, prevenindo a morte por atresia que ocorre in vivo (Figueiredo, 2008). Diversas substâncias têm sido testadas em sistemas de cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos, dentre elas o hormônio folículo estimulante (FSH) (Silva et al., 2004). Contudo, algumas substâncias não produzidas pelo ovário, como as lectinas, ainda não foram testadas em cultivo de folículos pré-antrais. As lectinas são proteínas que se ligam especificamente a mono e/ou oligossacarídeos (Peumans e Van Damme, 1995). O objetivo desse trabalho foi estudar o efeito da lectina Fitohemaglutinina (PHA) de Phaseolus vulgaris sobre a sobrevivência, crescimento e formação de antro de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro por seis dias. MATERIAIS E MÉTODOS Folículos secundários (~0,2mm) foram microdissecados de córtex ovariano caprino e individulamente cultivados em gotas de 100µL de meio base (α-mem + ) suplementado com a lectina PHA nas concentrações 1, 10, 50, 100 e 200µg/mL, sob óleo mineral. Como controle foi utilizado apenas o α-mem +. As placas foram incubadas a 39 C, 5% de CO 2 no ar por seis dias. A sobrevivência, o crescimento e a formação de cavidade antral nos folículos cultivados foram avaliados a cada dois dias. Para a comparação da sobrevivência folicular e formação do antro, foi utilizado o teste não paramétrico Exato de Fisher e os resultados das medidas foram expressos na forma de frequências. Para a comparação dos diâmetros foliculares, foi utilizado o teste paramétrico t para duas amostras independentes. Os resultados das medidas dos diâmetros foram expressos por meio de seus valores médios ± erro padrão e as diferenças foram consideradas significativas quando P< 0,05. RESULTADOS Ao final do período de cultivo, todos os tratamentos se mostraram capazes de manter a sobrevivência folicular. Entretanto, não houve diferença significativa entre os tratamentos: α-mem+ (94,59%); PHA 1µg/mL (96,43%); PHA 10µg/mL (84,85%); PHA 50µg/mL (85,29%); PHA 100µg/mL (88,57%) e PHA 200µg/mL (87,50%). No tocante ao diâmetro folicular, não foram observadas diferenças significativas entre o grupo controle e os grupos tratados com a lectina PHA após seis dias de cultivo: α- MEM+ (225,96 ± 65,26); PHA 1µg/mL (212,30 ± 60,01); PHA 10µg/mL (228,34 ± 357

70 76,50); PHA 50µg/mL (200,90 ± 54,27); PHA 100µg/mL (230,76 ± 70,92) e PHA 200µg/mL (230,76 ± 70,92). Em relação à formação de antro, folículos cultivados na presença de PHA na concentração de 10µg/mL mostraram um aumento significativo (21,21%) na taxa de formação de antro quando comparado aos demais tratamentos: α- MEM+ (5,41%); PHA 1µg/mL (7,14%); PHA 50µg/mL (5,88%); PHA 100µg/mL (5,71%) e PHA 200µg/mL (0,00%). CONCLUSÕES Em conclusão, a lectina PHA apresenta um efeito positivo no desenvolvimento inicial de folículos pré-antrais caprinos, pois manteve a viabilidade folicular e promoveu a formação de cavidade antral após seis dias de cultivo in vitro. Apesar disso, não foi observado aumento no diâmetro folicular após o período de cultivo em todos os tratamentos. REFERÊNCIAS FIGUEIREDO, J. R., RODRIGUES, A. P. R., AMORIM, C. A., SILVA, J. R. V. Manipulação de oócitos inclusos em folículos ovarianos pré-antrais. In: GONÇALVES, P. B. D., FIGUEIREDO, J. R., FREITAS, V. J. F. Biotécnicas aplicadas à reprodução animal, 2.ed. São Paulo, Roca, p , MARKSTRÖM, E., SVENSSON, E. C., SHAO, R., SVANBERG, B., BILLIG, H. Survival factors regulating ovarian apoptosis: dependence on follicle differentiation. Reproduction, v. 123, p , PEUMANS, W. J., VAN DAMME, E. J. L. Lectins as plant defense proteins. Plant Physiology, v.109, p , SILVA, J. R. V., VAN DEN HURK, R., MATOS, M. H. T., SANTOS, R. R., PESSOA, C., MORAES, M. O., FIGUEIREDO, J. R. Influences of FSH and EGF on primordial follicles during in vitro culture of caprine ovarian cortical tissue. Theriogenology, v. 61, p ,

71 Efeito da Ocitocina na dilatação cervical de ovelhas Dorper submetidas à inseminação artificial transcervical Effect of oxytocin on cervical dilation of Dorper ewes submitted to transcervical artificial insemination Celso Henrique Souza Costa Barros 1 ; Lívia Correia Magalhães 1* ; Alane Pains Oliveira do Monte 1 ; Jonathan Maia da Silva Costa 1 ; Mabel Freitas Cordeiro 1 ; Edilson Soares Lopes Júnior 1 1 Laboratório de Fisiologia e Biotecnologia da Reprodução Animal (LAFIBRA) Universidade Federal do Vale do São Francisco (UNIVASF) * liviamagalhaes@yahoo.com.br ABSTRACT In order to evaluate the effect of oxytocin on the efficiency of artificial insemination in sheep, it was used 40 Dorper ewes, divided into two groups (n = 20). All animals were submitted to estrus synchronization treatment and, after this, an estrus detection was performed using a Dorper ram. Control Group (CG) received saline and Oxytocin Group (OC), 200 IU of oxytocin, five minutes before the artificial insemination. The ewes were inseminated by transcervical way with cervical traction. Data were expressed as mean and analyzed by ANOVA and Tukey's test with P<0.01. It was verified that the insemination time was significantly (P<0.01) higher at OC than CG. Concerning to cervical penetration grade, it was not observed significant difference between experimental groups (P>0.05). The oxytocin has not cervical dilation action in Dorper ewes at artificial insemination. Keywords: artificial insemination, oxytocin, sheep Palavras-chave: inseminação artificial, ocitocina, ovinos INTRODUÇÃO Ovelhas apresentam dificuldade na execução da inseminação artificial (IA) transcervical com deposição intra-uterina do sêmen, devido às características anatômicas da cérvix. Dada a existência de uma correlação positiva entre a fertilidade e a profundidade da IA nos ovinos, pesquisadores têm testado vários fármacos, dentre eles a Ocitocina (Devonish et al., 2003), a qual tenta viabilizar a IA através da dilatação do canal cervical em ovelhas, aumentando a profundidade da IA e as taxas de gestação, 359

72 melhorando os índices reprodutivos nas ovelhas inseminadas. Embora existam relatos que mostram a eficácia da administração de fármacos para dilatação cervical, são escassos e contraditórios os dados sobre este procedimento. Portanto, o estudo buscou avaliar o efeito da Ocitocina quanto à dilatação cervical de ovelhas mestiças de Dorper submetidas à inseminação artificial no submédio São Francisco. MATERIAL E MÉTODOS Quarenta ovelhas Dorper foram submetidas ao mesmo tratamento de sincronização do estro por 12 dias. A detecção de estro foi realizada em intervalos de 4 horas por um carneiro da raça Dorper. As fêmeas foram alocadas aleatoriamente em dois grupos (n=20, cada), sendo no Grupo Controle (GC), administrados 10 ml, via endovenosa (EV), de solução fisiológica, 5 minutos antes da IA, enquanto no Grupo Ocitocina (OC), foi administrada uma dose de 200 UI de Ocitocina (Placentina, UCB, Brasil), correspondentes a 10 ml de solução via EV, 5 minutos antes da IA. As ovelhas foram inseminadas por via transcervical com tração cervical. Os dados foram expressos em média e submetidos à Análise de Variância (ANOVA). Para a comparação entre os grupos, realizou-se o teste de Tukey. Foi considerado o nível de significância de 1%. RESULTADOS E DISCUSSÃO Todos os animais entraram em estro em um intervalo que não diferiu estatisticamente entre os grupos. O grau de profundidade da IA, não diferiu entre os grupos (P>0,05) em qualquer tipo de IA, seja intracervical superficial (GC: 21,05 vs. OC: 36,84), profunda (GC: 0,00 vs. OC: 10,53) e intra-uterina (GC: 78,95 vs. OC: 52,63). O mesmo grau de profundidade da IA indica que a ocitocina não agiu de forma eficiente no relaxamento do tecido cervical, o que poderia facilitar a passagem dos anéis cervicais dos animais deste grupo, proporcionando um menor trauma cervical, e um menor estresse causado pela tração, repercutindo positivamente na fertilidade (Rabassa et al., 2007). Barbas et al. (2001) não encontraram aumento na penetrabilidade cervical com o uso de 20 UI de Ocitocina por via transvaginal. Sayre & Lewis (1997) administraram 20 ou 5 UI de Ocitocina, por via intravenosa, algumas horas antes da inseminação artificial, e encontraram uma diminuição drástica em taxas de fertilidade devido a uma série de contrações tetânicas no útero, cuja duração foi proporcional às doses administradas. Rabassa et al. (2007) não encontraram diferença significativa entre 360

73 animais inseminados em diferentes níveis de profundidade, porém foi observada uma tendência a aumentar a taxa de fertilidade quanto mais profunda fosse a inseminação. O tempo de inseminação foi significativamente (P<0,05) maior no Grupo OC (GC: 129,84 ± 47,33 vs. OC: 194,84 ± 75,11). Isto pode ser relacionado ao grau de dificuldade de tração e penetrabilidade, encontrado neste grupo, o que pode ter sido causado por uma possível hipertonia, que é um dos possíveis efeitos colaterais encontrados no uso de altas doses de Ocitocina, segundo indicação na bula do medicamento. CONCLUSÕES Neste estudo a Ocitocina não demonstrou ter ação dilatadora na cérvix de ovelhas Dorper, por ocasião da inseminação artificial. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BARBAS, J.P.; GONÇALVES, S.C.; MARQUES, C.C.; HORTA, A.E.M. Efeito da aplicação vaginal de dilatadores do cérvix durante a fase folicular do ciclo em ovelhas. Estoril, Portugal, In: Proceedings do III Congresso Ibérico de Reprodução Animal, 2001.v.3, p DEVONISH, E.; ROBERTS, E.; HUNTE, M.; THOMAS, G. Use of exogenous oxytocin in non-surgical artificial insemination of the Barbados Blackbelly sheep, Barbados, Groelândia, In: Ministry of Agriculture and Rural Development, Greenland, St. Andrew, Barbados RABASSA, V.R.; TABELEÃO V.C.; PFEIFER, L.F.M.; SCHNEIDER, A.; ZIGUER, E.A.; SCHOSSLER, E.; SEVERO, N.C.; DEL PINO, F.A.B.; CORRÊA, M.N. Efeito das técnicas transcervical e laparoscópica sobre a taxa de prenhez de ovelhas inseminadas em tempo-fixo. Ciência Animal Brasileira. v. 8, p , SAYRE, B.L.; LEWIS, G.S. Fertility and ovum fertilization rate after laparoscopic or transcervical intrauterine artificial insemination of oxytocin-treated ewes. Theriogenology, v. 48, p ,

74 Efeito da Pentoxifilina na viabilidade de espermatozoides ovinos póscriopreservação Effect of Pentoxifylline on viability of ovine frozen semen Sildivane Valcácia Silva 1* ; André Mariano Batista 1 ; Victor Netto Maia 2 ; Flávia Camila S. P. Ramalho 3 ; Maria Madalena P. Guerra 1 ; Gustavo Ferrer Carneiro 3 1 Laboratório de Andrologia (ANDROLAB) Depto. Medicina Veterinária, UFRPE; 2 Centro de Equinos de Pernambuco CEPE; 3 UAG /UFRPE * sildivane@yahoo.com.br ABSTRACT The goal of this work was to evaluate the effect of addition of Pentoxyfilline to frozen semen evaluating motility and acrosome and plasma membrane integrity as well as mitochondrial potential. Data are presented at table. No difference was seen in motility, vigor and membrane integrity of control and treatment samples between 0 and 30 minutes times. However there was a drop in Mitochondrial Potential in control group after 30 minutes (56.0% to 40.5%; P<0.05). Similarly, acrosome integrity despite not having statistical difference had a numerical drop in control group after 30 minutes (46.25%) compared to treatment group (68.75%). The maintenance of mitochondrial potential in the group containing Pentoxyfilline is a new and positive information with respect to cellular ATP production. Thus, pentoxifylline addition (2 mg/ml) in postthawing ram sperm preserves spermatic integrity after 30 minutes of incubation time. Key-words: Semen, Pentoxyfilline, Mitocondrial Potential, acrosome. Palavras-chave: Sêmen, Pentoxifilina, Potencial Mitocondrial, Acrossoma. INTRODUÇÃO A motilidade é uma característica importante como estimativa para a capacidade fertilizante do espermatozoide. A pentoxifilina age como inibidor da fosfodiesterase, podendo aumentar as concentrações intracelulares do AMPc e preservar a motilidade (Stachecki et al., 1994). Outros autores têm descrito que o efeito benéfico da pentoxifilina no espermatozóide humano pode ser mediado pela neutralização das reações formadoras de radicais de oxigênio reativo (Yovich, 1993). O desenvolvimento de técnicas de associação de sondas fluorescentes, que permitam a avaliação simultânea da integridade das membranas plasmática e acrossomal e da função mitocondrial nas 362

75 diferentes espécies tem servido como ferramenta para avaliar os efeitos da criopreservação sobre o sêmen (Celeghini et al., 2007). Desta forma, o objetivo desse trabalho foi avaliar a adição de pentoxifilina sobre os parâmetros de sêmen ovino pósdescongelação. MATERIAIS E MÉTODOS Foram utilizadas amostras de sêmen congeladas de três reprodutores Santa Inês, com qualidade seminal comprovada. Previamente, o sêmen foi diluído em Tris-Gema Glicerol (Carneiro, 2008), envasado em palhetas (0,25 ml) e congelado por método automatizado. Pós-descongelação foram formados dois grupos de avaliação: o controle, que recebeu 25 L/mL de Tris e o tratamento, com 25 L/mL de Pentoxifilina (2 mg/ml). Avaliaram-se parâmetros de motilidade (CASA), integridade de membrana plasmática, integridade do acrossoma e o potencial da membrana mitocondrial (Silva et al., 2011). Alíquotas dos grupos controle e tratamento foram examinadas nos tempos 0 e 30 minutos pós-adição da pentoxifilina. Os dados foram analisados pelo teste de análise de variância (ANOVA), pós-transformação pelo arco seno (arcsen P/100) e teste Tukey-Kramer, com nível de significância de 5%. RESULTADOS E DISCUSSÃO Os dados estão expressos na Tabela 1. Não foi observado diferença nos parâmetros de motilidade, vigor e integridade de membrana entre controle e tratamento nos tempos 0 e 30 minutos. Entretanto houve queda no alto potencial mitocondrial do grupo controle após 30 minutos enquanto o grupo tratamento manteve-se sem diferença significativa. A função mitocondrial é de fundamental importância, pois representa a viabilidade espermática em relação à produção de energia em forma de ATP, que é a matriz energética para os batimentos flagelares. A manutenção do alto potencial mitocondrial no grupo contendo a adição da Pentoxifilina apresenta uma informação nova e positiva com relação a essa produção do ATP celular. Na avaliação da integridade acrossomal, apesar de não ter sido observado diferença estatística, houve queda numérica no grupo controle após 30 minutos enquanto o grupo tratamento apresentou queda numérica inferior. A tendência à manutenção da integridade 363

76 acrossomal após 30 minutos podem também servir de parâmetro para fins prognósticos quanto à qualidade das amostras congeladas. Tabela 1 Parâmetros espermáticos (Média ± desvio padrão) de amostras pós-descongelação de sêmen ovino com ou sem adição de Pentoxifilina Grupos Experimentais Controle Pentoxifilina Parâmetros Momento 0h Momento 30 Momento 0h Momento 30 MIP (%) 47,14±15,04 40,17±11,78 46,94±8,66 45,08±14,48 Vigor 2,50±1,00 2,50±0,50 2,50±0,00 3,00±0,50 iac (%) 68,75±22,58 46,25±7,67 68,12±14,96 61,50±20,23 imp (%) 27,50±6,22 24,50±3,86 36,45±8,57 34,83±10,72 apmm (%) 56,33±7,43 a 40,67±5,88 b 53,33±7,14 a 52,25±7,59 a MIP= motilidade progressiva; iac= integridade do acrossoma; imp= integridade de membrana plasmática; apmm: alto potencial da membrana mitocondrial. Letras diferentes na mesma linha significam P<0,05. CONCLUSÃO Diante do exposto, conclui-se que a adição de pentoxifilina (2 mg/ml) ao sêmen ovino pós-descongelação preserva a integridade espermática após 30 minutos de incubação. AGRADECIMENTOS Esse trabalho obteve parte do financiamento proveniente do PROJETO REPENSA/CNPq/562455/ REFERÊNCIAS BIBIOGRÁFICAS CARNEIRO, G.F. Biotécnicas da reprodução assistida em pequenos ruminantes. Tecnologia & Ciencia Agropecuaria, v. 2, p , CELEGHINI, E. C. C.; ARRUDA, R. P.; ANDRADE, A. F. C.; NASCIMENTO, J.; RAPHAEL, C. F. Practical techniques for bovine sperm simultaneous fluorimetric assessment of plasma, acrosomal and mitochondrial membranes. Reproduction in Domestic Animals, v. 42, p , SILVA, S.V.; SOARES, A.T.; BATISTA, A.M.; ALMEIDA, F.C.; NUNES, J.F.; 364

77 PEIXOTO, C.A.; GUERRA, M.M.P. In vitro and in vivo evaluation of ram sperm frozen in Tris egg-yolk and supplemented with superoxide dismutase and reduced glutathione. Reproduction in Domestic Animal, v. 46, p , STACHECKI, J.J.; GINSBURG, K.A.; ARMANT D.R. Stimulation of cryopreserved epididymal spermatozoa of the domestic cat using the motility stimulants caffeine, pentoxifylline and 2 -deoxyadenisine. Journal of Andrology, v. 15, p , YOVICH, J.M. Pentoxifylline: action and applications in assisted reproduction. Human Reproduction, v. 8, p ,

78 Efeito da restrição alimentar sobre o peso vivo, peso ao abate e peso testicular em carneiros Santa Inês Effect of food restriction on live weight, slaughter weight and testicular weight in Santa Inês rams Arthur Pombo Almeida 1 *; Gabriella Marinho Pereira 1 ; Jaime Miguel de Araujo Filho 2 ; Aderbal Marcos de Azevedo Silva 1 ; Carlos Enrique Peña-Alfaro 1 ; Maiza Araújo Cordão 1 1 Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária UFCG/Patos, 2 Doutorando do PDIZ, Areia/Fortaleza * arthurpombo_mv@hotmail.com ABSTRACT The objective of this study was to evaluate the correlation between testicular weight to body weight at slaughter and carcass weight in Santa Inês rams subjected to increasing levels of food restriction (0, 30 and 60%), using 24 male with initial weight of 30 kg. Food restriction did not affect testicular weight between treatments, since the body weight of animals and carcasses differ considerably. The correlation between the weight testicular weight and the live animal carcasses presented, albeit at a low level positive and not significant. Key words: sheep; testicles; nutrition; food restriction Palavras-chave: ovinos; testículos; nutrição; restrição alimentar INTRODUÇÃO A nutrição é talvez o principal fator que influência no desempenho reprodutivo de ruminantes, uma vez que falhas na disponibilidade nutricional resultam em retardamento da puberdade, queda da produção de gametas, sobrevivência embrionária, desenvolvimento fetal e lactação (Freitas, 2008; Pereira, 2011). Martin & Walkden-Brown (1995), estudaram com detalhes os efeitos da nutrição sobre o crescimento testicular e a produção espermática em machos sexualmente maturos. Já os resultados de Salhabet al. (2001), ressaltam que a análise biométrica do desenvolvimento testicular de ovinos tem grande importância, pois possui correlação positiva com o peso vivo, com a idade e com a atividade reprodutiva. Neste trabalho, objetivou-se avaliar se existe correlação entre o peso testicular com o peso vivo ao abate 366

79 e o peso das carcaças, decarneiros Santa Inês submetidos a níveis crescentes de restrição alimentar. MATERIAL E MÉTODOS A pesquisa foi conduzida no Nupeárido - UFCG, Patos/PB. Foram utilizados 24 carneiros, com idade entre oito e dez meses e peso médio de 30Kg.Os animais foram mantidos em confinamento e receberam ração similar, que consistiu de 45% de feno de capim elefante e 55% de concentrado. Cada tratamento utilizou-se da mesma ração, porém com níveis crescentes de restrição alimentar (0, 30, e 60% de restrição), sendo o tratamento com 0% de restrição referencia para o cálculo do fornecimento dos demais tratamentos. Antes do abate os animais foram pesados para determinação do peso vivo ao abate, e após o abate foram mensurados os pesos dos testículos e das carcaças completas, no estado quente e fria. Os resultados expressos em média e coeficiente de variação foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% e os coeficientes de correlação calculados pelo método de Pearson utilizando o procedimento proc. CORR, utilizando o SAS (2003). RESULTADOS E DISCUSSÃO As médias dos tratamentos para peso vivo dos animais, peso dos testículos, e peso das carcaças no estado quente e fria, com seus respectivos coeficientes de variação estão expressos na Tab. 1.Verifica-se que não houve diferença significativa (P<0,05) para o peso médio testicular entre os tratamentos. Monteiro (2007), ao analisar 41 genitais de machos ovinos deslanados submetidos a diferentes manejos, não havendo, portanto, homogeneidade na alimentação,apresentou média igual a 123,97g aos 303 dias de idade, indicando desta forma que o manejo e a nutrição interferiram nos resultados dos pesos testiculares. A correlação entre o peso dos testículos com a média do peso vivo dos animais e peso das carcaças quente e fria foi (r=0,32; r=0,25 e r=0,26) respectivamente. Configurando-se desta forma como positiva, no entanto baixa e não significativa. Resultados semelhantes, porem um pouco maiores, foi observado por Monteiro (2007) com uma correlação de r=0,40. No presente trabalho, o efeito do peso do animal e o peso da carcaça não mostraram uma correlação média à alta com o peso médio testicular, provavelmente devido à homogeneidade dos animais na formação dos grupos 367

80 de tratamento, bem como em decorrência do grau de adaptabilidade e o curto período de tempo imposto sob restrição alimentar. Tabela 1. Média e coeficiente de variação dos pesos testicular, peso vivo do animal, peso da carcaça quente e fria de ovinos submetidos a níveis crescentes de restrição alimentar. NRA (%) PTES (Kg) PV (Kg) PCQ (Kg) PCF (Kg) 0 0,38 A 45,19 A 21,74 A 21,13 A 30 0,39 A 39,36 B 18,64 B 18,09 B 60 0,31 A 32,31 C 15,58 C 15,06 C CV (%) 22,44 4,61 7,17 7,21 PTES - peso dos testículos; PV - peso vivo; PCQ - peso da carcaça quente; PCF - peso da carcaça fria; CV coeficiente de variação. Médias seguidas por letras distintas na coluna indicam diferença significativa (P<0,05), entre os tratamentos. CONSIDERAÇOES FINAIS A restrição alimentar não afetou o peso médio testicular entre os tratamentos, já o peso vivo dos animais e das carcaças apresentaram diferença considerável. A correlação entre o peso testicular com o peso do animal vivo e das carcaças apresentouse, embora positiva em um patamar baixo e não significativo. REFERÊNCIAS BIBLIOGRAFICAS FREITAS, V. J. de F. Influência da nutrição para o sucesso da biotécnicas reprodutivas utilizadas em caprinos e ovinos. In: I CONGRESSO BRASILEIRO DE NUTRIÇÃO ANIMAL, 2008, Fortaleza. MARTN, G. B.; WALKDEN-BROWN SW. Nutritional influences on reproduction in mature male sheep and goats.j. Reprod. Fertil, v.49, p , MONTERIO, A. W. U. Biometria testículo-epididimária e reserva espermática de ovinos deslanados sem padrão racial definido. Dissertação (Mestrado) Curso de pósgraduação em Zootecnia, Universidade Federal do Ceará. PEREIRA, G. M. Exigências de proteína para manutenção e crescimento de carneiros santa inês em região semiárida do Nordeste do Brasil.Dissertação (Mestrado) Curso de pós-graduação em Zootecnia, Universidade Federal de Campina Grande. SALHABA, S. A.; ZARKAWI, M.; WARDEHC, M. F.; AL-MASRIB, M. R.; 368

81 KASSEM, R. Development of testicular dimensions and size, and their relationship to age, body weight and parental size in growing Awassi ram lambs. Small Ruminant Research, v. 40, p ,

82 Efeito da Utilização da Jurema (Mimosa tenuiflora) sobre as Características Espermáticas de Ovinos Effects of Mimosa tenuiflora on the spermatic characteristics of the ram Norma Lúcia de Souza Araújo* 1 ; Carlos Enrique Peña Alfaro 1 Laboratório de Reprodução Animal - Universidade Federal de Campina Grande Campus de Patos PB * nlucia@cstr.ufcg.edu.br ABSTRACT Reproductive diseases as malformations as cleft palate, flexure of fore limbs, and scoliosis caused by the ingestion of Mimosa tenuiflora are common in goats, sheep and cattle in the Brazilian semiarid. The aim of this research was to identify the effects of M. tenuiflora in characteristics of the semen in sheep. Three male sheep were used and the results indicated that there were not significant differences (P>0.05) for the progressive motility, spermatic strengthand morphology among sheeps with and without M. tenuiflora. These results indicated that the M. tenuiflora does not influence negatively on the spermatic characteristics of the ram. Key Words: spermatozoa; ram; Mimosa tenuiflora. Palavras-chave: espermatozoide; ovino; Mimosa tenuiflora. INTRODUÇÃO A jurema preta (Mimosa tenuiflora), planta nativa do Nordeste brasileiro, pode causar problemas reprodutivos como malformações e mortalidade embrionária em caprinos, ovinos e bovinos quando ingerida em grande quantidade durante a gestação (Riet-Correa, 2007). Principalmente no período da seca, em função da escassez de alimento, a referida planta apresenta-se como uma das poucas alternativas de forragem verde disponível, o que ocasiona os animais a ingerirem uma grande quantidade da mesma. Devido a ausência de estudos sobre a ação da referida planta sobre a reprodução nos machos, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da utilização da Mimosa tenuiflora como forragem verde, sobre as características espermáticas de ovinos. MATERIAL E MÉTODO Foram utilizados três machos ovinos SRD, adultos, conhecidamente férteis, 370

83 mantidos em regime de confinamento durante todo o experimento. Previamente ao início do experimento foram realizadas quatro avaliações andrológicas, com intervalos semanais, para fins de nivelamento biológico. Para efeito experimental foram realizadas colheitas de sêmen, em intervalos semanais, pelo método de eletroejaculação, conforme descrito por Mies Filho (1977), sendo oito colheitas (n=8) quando os animais receberam ração concentrada e capim triturado (Brachiaria decumbens) e oito colheitas (n=8) quando os mesmos receberam ração concentrada e jurema (Mimosa tenuiflora) como única forragem verde. Em ambos os momentos a suplementação concentrada, foi fornecida atendendo às recomendações para a categoria, de acordo com o NRC (2001) As características do sêmen avaliadas foram: turbilhonamento, motilidade progressiva, vigor, concentração espermática e defeitos espermáticos totais em microscopia de contraste de fase, segundo os critérios do Colégio Brasileiro de Reprodução Animal (CBRA, 1998). A analise estatística foi realizada utilizando ANOVA e comparação das medias pelo teste de Tukey-Kramer Multiple Comparisons Test para as variáveis motilidade progressiva, concentração espermática e defeitos totais. As variáveis turbilhonamento e vigor foram analisadas pelo teste não paramétrico de Kruskal-Wallis, ao nível de 5% de significância. RESULTADOS E DISCUSSÃO Os dados obtidos no exame de sêmen não apresentaram diferença significativa (P>0,05) para os valores de turbilhonamento e vigor. Igualmente, para a motilidade progressiva, concentração espermática e defeitos totais, com ou sem a suplementação com jurema, não houve diferença significativa (P>0,05), como pode ser observado na tabela 1. As características seminais avaliadas neste experimento são altamente correlacionadas com a capacidade reprodutiva nos carneiros. A diminuição nesses parâmetros, caso estivesse presente, poderia ser associada à presença de compostos citotóxicos, os quais poderiam atuar no epitélio seminífero, refletindo em uma redução na qualidade espermática (Chenoweth et al., 1984; Gipson et al., 1985), alterações essas que não foram observadas no presente experimento. As colheitas de sêmen foram realizadas semanalmente, por oito semanas após o início da administração da Mimosa tenuiflora, sendo a última colheita realizada 56 dias após o início do tratamento. A duração do período experimental foi estabelecida 371

84 levando-se em consideração que a espermatogênese nos ovinos leva em torno de 42 dias para completar-se (Cardoso & Queiroz, 1988). Desse modo, seguiu-se o tempo necessário para que os possíveis efeitos da planta sobre o processo de formação espermática fossem manifestados. Tabela 1. Média ± desvio padrão (DP) para as variáveis motilidade progressiva, concentração e defeitos totais de espermatozóides de ovinos, segundo tratamento com Mimosa tenuiflora. Motilidade Concentração Defeitos Totais Animal Média DP Média DP Média DP * ** * ** * ** * Sem Mimosa tenuiflora ** Com Mimosa tenuiflora Conclui-se, com os resultados obtidos nas condições do presente trabalho, que a administração de Mimosa tenuiflora como única fonte de volumoso na alimentação de ovinos SRD não interfere no processo espermatogênico, a julgar pela ausência de alterações no quadro espermático dos ovinos neste experimento. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CARDOSO, F.M.; QUEIROZ, G.F. Duration of the cycle of the seminiferous epithelium and daily sperm production of Brazilian hairy rams. Animal Reproduction Science, v. 17, p , CBRA. COLÉGIO BRASILEIRO DE REPRODUÇÃO ANIMAL. Manual para exame andrológico e avaliação de sêmen animal. 2. ed. Belo Horizonte: CBRA, p. CHENOWETH, P. J. Bull behavior, sex-drive and management. In: Field, M. J.; Sand, R. S. (Ed.). Factors affecting calf crop. Ann Arbor: CRC Press, p GIPSON, T. A.; VOGHT, D. W.; MASSEY, J. W.; ELLERSIECK, M. R. Associations of scrotal circumference with semen traits in young beef bulls. Theriogenology, v. 24, n. 372

85 2, p , MIES FILHO, A. Reprodução dos animais e inseminação artificial. 4. ed. Porto Alegre: Sulina, p RIET-CORREA, F. Plantas tóxicas e micotoxinas que afetam a reprodução em ruminantes e equinos no Brasil. Biológico, v.69, n.2, p.63-68,

86 Efeito de diferentes períodos do ano na maturação de oócitos ovinos Effectof different seasons in sheep oocytes Paula Miranda Costa 1 ; Ricardo de Macedo Chaves 1 ; Filipe Queiros Godim Bezerra 2 ; Paulo Fernandes Lima 2 ; Marco Antonio Lemos de Oliveira 2 1 Laboratório de Reprodução Animal/ Universidade Estadual do Maranhão - UEMA; 2 Laboratório de Biotécnicas da Reprodução do Departamento de Medicina Veterinária/Universidade Federal Rural de Pernambuco - UFRPE * paulynha_vet@hotmail.com ABSTRACT Slaughter house ovaries were collected from sheep in the dry season (October-March) and rainy (April-September), and transported to the Laboratory of Reproductive Biotechnology UFRPE. Cumulus complexes were collected by the technique of "slicing" of follicles between 2-6min diameter and selected based on morphological classification. Next, we determined the stage of nuclear maturation, the activity of enzymes of group II caspases and DNA fragmentation(tunel), and it was found that the stage of germinal vesicle, metaphase I, telophase I and metaphase II showed no significant difference (P>0.05). Regarding the enzyme activity of caspases in vitro matured oocytes was significant difference (P <0.05), while the DNA fragmentation was not significantly different (P>0.05). It is concluded that the seasons have no influence on in vitro nuclear maturation of oocytes and apoptosis in sheep. Keywords: Apoptosis, cumulusoophorus complexes, follicles, caspases, TUNEL. Palavras-chave: Apoptose,complexos cumulusoophorus, folículos, caspases, TUNEL. INTRODUÇÃO Existe na literatura apenas um relato em que o estresse térmico in vitro foi aplicado durante a fase de vesícula germinativa (VG). A exposição de oócitos na fase VG ao estresse térmico de 41 C reduziu o desenvolvimento embrionário (Paytonet al., 2004). No entanto, tendo em vista que a apoptose é a principal responsável pela redução do número de oócitos durante a vida reprodutiva de fêmeas mamíferas (Tilly, 2001), é possível que esta forma de morte celular seja induzida em oócitos expostos às condições de estresse.diante do exposto, objetivou-se com este estudo avaliar o efeito das estações (seca vs chuvosa) na maturação nuclear in vitro e na indução da morte celular por 374

87 apoptose em oócitos da espécie ovina. MATERIAL E MÉTODOS Foi utilizado o modelo de estresse térmico calórico descrito por Al-Katananiet al. (2002) para demonstrar o efeito da estação do ano na capacidade de desenvolvimento dos oócitos. Neste modelo, os ovários foram colhidos de ovelhas em abatedouro na estação seca (outubro a março) e chuvosa (abril a setembro), onde os mesmos foram transportados ao Laboratório de Biotécnica da Reprodução do Departamento de Medicina Veterinária da Universidade Federal Rural de Pernambuco no intervalo máximo de uma hora e em seguida classificados de acordo com o número de folículos e os oócitos, sendo processados separadamente em todos os experimentos. Os complexos cumulusoophorus (CCOs) foram colhidos pela técnica de fatiamento slicing dos folículos ovarianos que mediam de 2 a6 mm de diâmetro, e o líquido folicular foi depositado em placa de Petri contendo o meio de coleta (MC). Em seguida os CCOsforam selecionados morfologicamente de acordo com a classificação descrita por Gonçalves et al. (2008) e lavados três vezes no meio de coleta, onde foram maturados em gotas de 100 L, no meio básico de maturação. Foram realizadas 12 repetições em cada estação, sendo que o número de oócitos na estação seca (n = 1158) e na chuvosa (n = 1151) de 240 e 286 ovários, respectivamente. Em cada repetição os CCOs foram divididos em dois grupos: no Grupo-1 os CCOs foram avaliados imediatamente após a coleta e no Grupo 2 os CCOs foram avaliados após a maturação in vitro(miv). Para a análise estatística foi realizada análise de variância pelo método dos quadrados mínimos. Considerando as medidas tratadas em percentuais procedemos ao seguinte teste, uma comparação de variâncias, pelo teste F para variâncias ao nível de significância 5% (P < 0,05), para variâncias equivalentes ou variâncias distintas (Sampaio, 2007). RESULTADOS No Grupo-1 houve efeito das estações seca ou chuvosa na qualidade dos CCOs recuperados apresentando diferença significativa (P < 0,05) na média e desvio padrão dos oócitos qualidade I, II e IV sendo superior a qualidade I na seca e IV na chuvosa, enquanto no Grupo-2, não houve efeito da estação (P > 0,05) do ano na média e desvio 375

88 padrão dos oócitos em todas as qualidades estudadas. Também não foi verificada diferença significativa (P > 0,05) quando comparados a maturação in vitro de oócitos de fêmeas abatidas na estação seca e chuvosa.em oócitos do Grupo-2 a média e desvio padrão dos oócitos degenerados, não definido, vesícula germinativa, Metáfase I, Telófase I e Metáfase II não foram afetadas pela estação do ano (P > 0,05). No entanto, a média e desvio padrão dos oócitos nas fases de rompimento da vesícula germinativa (VGBD) e Anáfase I foram maiores na estação seca e chuvosa respectivamente (P < 0,05). No teste de atividade de enzimas caspases observamos que os oócitos do Grupo I não sofreram interferência da estação do ano, diferente do Grupo II que sofreu efeito da estação do ano (8,62% na estação seca e 9,08% na chuvosa). Na porcentagem de oócitos com fragmentação de DNA pelo teste de TUNEL, tanto o Grupo I e Grupo II não sofreram efeito da estação do ano, não apresentando diferença significativa (P > 0,05). CONCLUSÃO Concluiu-se que as estações do ano não exercem influência na maturação nuclear in vitro e na apoptose de oócitos da espécie ovina. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS AL-KATANANI, Y. M.; PAULA-LOPES, F. F.; HANSEN, P. J. Effect of season and exposure to heat stress on oocyte competence in Holstein cows. Journal Dairy Science.v.85, p , PAYTON, R. R.; SAXTON, A. M.; LAWRENCE, J. L.; EDWARD, J. L. Susceptibility of bovine germinal vesicle-stage oocytes from antral follicles to direct effects of heat stress in vitro. BiologyofReproduction. v.71, p , SAMPAIO, I. B. M. Estatística Aplicada a Experimentação Animal, 3ª Ed.. Belo Horizonte: FEPMVZ, p. TILLY, J. L. Commuting the death sentence: how oocyte strive to survive.naturereviewsmolecular CellularBiology, v.2, p , GONÇALVES, P. B. D.; OLIVEIRA, M. A. L.; MEZZALIRA, A.; MONTAGNER, M. M.; VISINTIN, J. A.; COSTA, L. F. S. Produção in vitro de embriões. In: GONÇALVES, P. B. D.; FIGUEIREDO, J. R.; FREITAS, J, V. F. (2ª Ed.), Biotécnicas aplicadas à reprodução animal. Editora Roca, São Paulo, p ,

89 Efeito de diferentes pesos moleculares da polivinilpirrolidona sobre a atividade estral e ovariana de ovelhas Dorper submetidas à produção in vivo de embriões no Nordeste do Brasil Effect of different molecular weights of polyvinylpyrrolidone on the estrous and ovarian activity of Dorper ewes subjected to in vivo embryo production in Northeastern Brazil Celso Henrique Souza Costa Barros 1 ; Lívia Correia Magalhães 1 ; Thiago Vinicius Costa Nascimento 1 ; Daniel Maia Nogueira 2 ; Mabel Freitas Cordeiro 1 ; Edilson Soares Lopes Júnior 1* 1 Laboratório de Fisiologia e Biotecnologia da Reprodução Animal (LAFIBRA) Universidade Federal do Vale do São Francisco (UNIVASF); 2 CPATSA Embrapa Semiárido * edilsonlopesjunior@yahoo.com.br ABSTRACT This study was conducted to evaluate the effects of different molecular weights of polyvinylpyrrolidone (PVP) in the estrous and ovarian activity in Dorper ewes. For this, six Dorper ewes were subjected to superovulation treatment using a combination of pfsh only (G1) and this drug associated to PVP having from 10,000 (G2) to 40,000 (G3) and a concentration of 30%. All ewes were treated for estrus synchronization for 12 days of progestogen impregnation. To compare various parameters between groups, it was used the Analysis of Variance (ANOVA). And control groups PVP10 PVP40 showed estrus at 36.0 ± 2.6, 32.0 ± 2.6 and 36.0 ± 2.6, respectively, but no significant difference (P> 0.05), as well as the ovulation rates between groups. We conclude that high doses of pfsh did not permit to determine the true effect of pfsh combined with PVP. Keywords: embryo production, northeastern of Brazil, polyvinylpyrrolidone, sheep Palavras chave: nordeste do Brasil, ovinos, polivinilpirrolidona, produção de embriões INTRODUÇÃO O FSH é caracterizado por uma meia-vida curta, devendo, portanto, ser administrado em doses múltiplas. Sucessivas injeções superovulatórias podem resultar em estresse para os animais, o que se constitui num processo trabalhoso e, portanto, economicamente desvantajoso. A polivinilpirrolidona (PVP) é um polímero orgânico 377

90 sintético com diferentes pesos moleculares ( e ). É utilizado para o processamento das chamadas drogas "de longa ação", devido a sua propriedade de se ligar e estabilizar muitas moléculas, prolongando, assim, a sua taxa de depuração in vivo. Assim, este estudo foi realizado para avaliar os efeitos da associação PVP-pFSH em diferentes pesos moleculares ( e ) sobre a atividade estral e ovariana de ovelhas Dorper submetidas à produção in vivo de embriões no Nordeste do Brasil. MATERIAL E MÉTODOS As ovelhas do Grupo 1 (n = 2; T1), foram submetidas a um tratamento de sincronização do estro de 12 dias de impregnação progestágena. Além disso, as fêmeas deste grupo receberam, intramuscularmente e a partir de 48 horas antes da retirada da esponja, 200 UI de NIH-FSH-P1 (Pluset, Pfizer, Brasil), fracionadas em seis doses decrescentes, a cada 12 horas e 75 µg de cloprostenol (Ciosin, Intervet Schering, Brasil). No Grupo 2 (n = 2; T2), as ovelhas foram submetidas ao mesmo protocolo empregado no Grupo 1, porém o tratamento superovulatório foi feito através da aplicação única de 200 UI de NIH-FSH-P1 (Pluset, Pfizer, Brasil), dissolvidas em uma solução de PVP com peso molecular a 30% (w/v) (PVP, Sigma Aldrich Brasil Ltda., Brasil), 24 h antes da remoção da esponja. No Grupo 3 (n = 2; T3), as fêmeas foram submetidas ao mesmo protocolo empregado nos Grupos 1 e 2, porém a superovulação foi obtida através da aplicação única de 200 UI de NIH-FSH-P1 (Pluset, Pfizer, Brasil), dissolvidas em uma solução de PVP com peso molecular a 30% (w/v) (PVP, Sigma Aldrich Brasil Ltda., São Paulo, Brasil), 24 h antes da remoção da esponja. A colheita de embriões foi realizada pelo método de laparotomia. Os embriões encontrados foram avaliados quanto ao estádio de desenvolvimento e qualidade seguindo os critérios morfológicos da Sociedade Internacional de Transferência de Embriões. Os resultados foram expressos como média ± erro padrão. Para comparação dos diversos parâmetros, entre os três grupos, foi utilizada a análise de variância (ANOVA). Os dados expressos em porcentagem foram submetidos ao Teste de Fisher ou Qui-quadrado, conforme a normalidade dos dados. Os testes foram realizados a uma probabilidade de 5%. RESULTADOS E DISCUSSÃO No presente estudo, as ovelhas do Grupo 2 apresentaram estro às 32 horas após o 378

91 fim do tratamento progestágeno, enquanto as do Grupo 3, 36 horas após, não havendo diferença significativa (P>0,05). D Alessandro et al. (2001) observaram o mesmo em ovelhas Gentile di Puglia, encontrando valores de 33,0 ± 5,1h e 40,2 ± 3,0 h para ovelhas tratadas com PVP10 e PVP40, respectivamente. Quanto ao percentual de fêmeas ovulando, nos Grupos 1 e 2, todas as ovelhas ovularam, apresentando 4 e 5 corpos lúteos, respectivamente, ao contrário do Grupo 3, que demonstrou 50% de fêmeas ovulando, produzindo 1 corpo lúteo. No animal que não ovulou, pudemos observar que os ovários estavam completamente lisos e atípicos. Todas as doadoras não apresentaram superovulação e suas taxas de ovulação foram inferiores às relatadas por D Alessandro et al. (2001) que, utilizando o PVP40, PVP10 e apenas pfsh encontraram taxas ovulação de 6,2 ± 1,2; 8,1 ± 1,7 e 8,9 ± 1,7, respectivamente. Essa resposta ovariana indesejada no presente estudo pode ser atribuída às altas doses de FSH/LH administrados. Isto tem sido observado mais freqüentemente em animais tratados com uma dose alta de gonadotrofinas, sugerindo que pode estar relacionado à estimulação excessiva do folículo e a altos níveis circulantes de estrogênio durante a fase luteal inicial (Armstrong & Evans, 1983). CONCLUSÕES Assim, podemos concluir que a alta dosagem de pfsh não permitiu verificar o verdadeiro efeito da associação pfsh-pvp10 ou pfsh-pvp40. Portanto, novos trabalhos com dosagens de pfsh em outras concentrações devem ser avaliadas. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ARMSTRONG, D.T.; EVANS, G. Factors influencing success of embryo transfer in sheep and goats. Theriogenology, v. 19, p , D ALESSANDRO, A.G.; MARTEMUCCI, G.; COLONNA, M.A.; BORGHESE, A.; TERZANO, M.G.; BELLITTI, A. Superovulation in ewes by a single injection of pfsh dissolved in polyvinylpyrrolidone (PVP): effects of PVP molecular weight, concentration and schedule of treatment. Animal Reproduction Science, v. 65, p ,

92 Efeito do hormônio folículo estimulante recombinante (FSHr) sobre a viabilidade de folículos pré-antrais ovinos cultivados in vitro. Effect of the recombinant follicle stimulating hormone (FSHr) on the viability of sheep preantral follicles cultured in vitro. Aglailson Silva Pinheiro*¹; Laritza Ferreira de Lima¹; Rebeca Magalhães Rocha¹; Anelise Maria Costa Vasconcelos Alves 1 ; José Ricardo de Figueiredo¹. 1 Universidade Estadual do Ceará, Faculdade de Medicina Veterinária, Laboratório de Manipulação de Oócitos e Folículos Pré-antrais * aglailsonsp@hotmail.com ABSTRACT The Manipulation of oocytes enclosed in ovarian preantral follicles (MOIFOPA) is a biotechnology which emerges as an alternative for in vitro culture of ovarian follicles in early stages of development. Therefore, the present study aims to evaluate the effect of FSH on survival of sheep preantral follicles after culture in situ. Ovarian fragments were cultured for 1 or 7 days in alpha-minimum essential medium (α-mem cultured control) supplemented with different concentrations of recombinant FSH (0, 10, 50, 100 e 200 ng/ml). Results showed a greater percentage of morphologically normal follicles after 7 days of culture in the presence of 50 ng/ml of rfsh when compared to α-mem alone or supplemented with other concentrations of rfsh. Key words: Oocyte, preantral follicle, FSH, sheep. Palavras-chave: Oocito, folículo pré-antral, FSH, ovelha. INTRODUÇÃO O ovário mamífero contém milhares de oócitos inclusos em folículos primordiais, porém, somente uma pequena proporção consegue alcançar a ovulação (FORTUNE, 1994). Nesse sentido, a biotécnica de MOIFOPA surge como uma alternativa para a manipulação e o cultivo de folículos ovarianos em estádios iniciais de desenvolvimento até estádios em que os oócitos estejam competentes para serem maturados e fertilizados in vitro. Para tanto, tem-se utilizado uma variedade de meios de base, aos quais são acrescidos de suplementos, como fatores de crescimento e hormônios, como por exemplo, o hormônio folículo estimulante (FSH). Estudos apontam para uma ação do FSH no desenvolvimento de folículos pré-antrais, através da 380

93 manutenção da sobrevivência e promoção da ativação e do crescimento folicular após o cultivo de fragmentos do córtex ovariano (Matos et al., 2007; Magalhães et al., 2009). Entretanto, ainda não é conhecido o efeito do FSH no cultivo in vitro de folículos préantrais ovinos. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos do FSH sobre a sobrevivência de folículos pré-antrais ovinos após cultivo in vitro através da histologia clássica. MATERIAL E MÉTODOS Fragmentos de córtex ovariano de ovelhas foram cultivados durante 1 ou 7 dias em -meio essencial mínimo alfa (α-mem controle cultivado) suplementado com diferentes concentrações de FSH recombinante (0, 10, 50, 100 e 200 ng/ml), sendo 12 fragmentos destinados ao controle fresco. Fragmentos de tecido ovariano fresco e cultivado foram desidratados, diafanizados e inclusos em parafina. Posteriormente, os blocos confeccionados foram seccionados seriadamente a uma espessura de 7 m e as secções obtidas foram coradas pelo método do ácido periódico de Schiff (PAS)- hematoxilina. Os folículos foram classificados, de acordo com a morfologia, em normais ou degenerados, considerando as seguintes características: presença ou ausência de corpos picnóticos, retração citoplasmática, e organização das células da granulosa. RESULTADOS E DISCUSSÃO Após 1 ou 7 dias de cultivo, houve uma redução significativa na sobrevivência folicular em todos os tratamentos quando comparados ao o controle fresco. Além disso, após 1 dia de cultivo, não foram observadas diferenças significativas no percentual de folículos normais entre os tratamentos. Contudo, após 7 dias, um percentual significativamente superior de folículos morfologicamente normais foi observado na presença de 50 ng/ml de FSHr quando comparado ao α-mem sozinho ou as demais concentrações de FSHr (Tab.1). Este fato foi semelhante ao apresentado por outros estudos, em que o FSH nessa mesma concentração, promoveu a manutenção da sobrevivência e promoção do desenvolvimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados in situ por 7 dias (MATOS et al., 2007; MAGALHÃES et al. 2009). Alguns autores afirmam que a expressão de receptores de FSH desenvolvem-se 381

94 progressivamente durante a transição da fase de folículo primordial para primário e secundário (OKTAY, 1997). Tabela 1. FOPA Normais Dia 1 Dia 7 Controle ± 5.92 MEM ± 8.91*A ± 7.57*B FR ± 9.96*Aa ± 9.51*Bb FR ± 9.80*Aa ± 9.89* Ba FR ± 9.40*Aa ± 9.31*Bb FR ± 9.62*Aa ± 9.62*Bb *Difere significativamente do grupo controle. Difere significativamente do grupo MEM. Letras maiúsculas distintas representam diferenças significativas entre colunas (dias). Letras minúsculas distintas representam diferenças significativas entre linhas (concentrações). CONCLUSÕES Em conclusão, este estudo mostrou que 50 ng/ml mantém a sobrevivência de folículos pré-antrais ovinos cultivados por 7 dias. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS FORTUNE, J. E. Ovarian follicular growth and development in mammals. Biology Reproduction, v. 50, p , MAGALHÃES, D. M.; ARAUJO, V. R.; LIMA-VERDE, I. B.; MATOS, M. H. T.; SILVA, R. C.; LUCCI, CM.; BÁO, S. N.; CAMPELLO, C. C.; FIGUEIREDO, J. R. Different Follicle Stimulating Hormone (FSH) sources influence caprine preantral follicle viability and development in vitro. Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, v.46, p , MATOS, M. H. T.; LIMA-VERDE, I. B.; LUQUE, M. C. A.; MAIA Jr, J. E.; SILVA, J. R. V.; CELESTINO, J. J. H.; MARTINS, F. S.; BÁO, S. N.; LUCCI, A. M.; FIGUEIREDO, J. R. Essential role of follicle stimulating hormone in the maintenance of caprine preantral follicle viability in vitro. Zygote, v. 15, p , 2007a. OKTAY, K.; BRIGGS, D.; GOSDEN. R. G. Ontogeny of follicle-stimulating hormone receptor gene expression in isolated human ovarian follicles. Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, v.82, n.11, p ,

95 Efeito do peso corporal na produção de embriões em ovelhas Dorper criadas na região semiárida do Vale do São Francisco Effect of body weight on embryo production in Dorper ewes reared in semi-arid region of the São Francisco Valley João Bosco Loiola Filho 1 ; Alane Pains Oliveira do Monte 1 ; Thais Thatiane dos Santos Souza 1 ; Mayara de Souza Miranda 1 ; Mabel Freitas Cordeiro 1 ; Edilson Soares Lopes Júnior 1* 1 Laboratório de Fisiologia e Biotecnologia da Reprodução Animal (LAFIBRA) Universidade Federal do Vale do São Francisco (UNIVASF) * edilsonlopesjunior@yahoo.com.br ABSTRACT To ascertain the influence of weight on embryo production, we selected 12 Dorper ewes divided into two groups: Light Group (LG) included animals up to 60 kg and Heavy Group (HG), higher than 60 kg. Embryo donors were subjected to a progesteronic estrus synchronization treatment for 14 days, and from the day 12, six decreasing doses of pfsh were administered. Six days after estrus onset and mating, females were submitted to embryo collection. Data were presented as mean ± SD and were analyzed by ANOVA and Tukey's Test at P<0.05. Females at LG had higher fertilization rate than the other ones from HG (P<0.05). However, it was not observed a significant difference concerning to number of structures recovered and viable embryos (P>0.05). In conclusion, body weight influence on embryo production in Dorper ewes and light ewes present better embryo production than heavy females. Key words: Body weight; embryos; sheep Palavras-chave: Embriões; ovinos; peso corporal INTRODUÇÃO Existem diversos fatores que podem influenciar o sucesso da Múltipla Ovulação e Transferência de Embriões (MOTE), afetando quantitativamente e qualitativamente a produção de embriões. Dentre esses fatores, os de maior relevância são os que afetam diretamente a doadora de embriões, a exemplo da nutrição, estresse térmico, sanidade e, principalmente, peso e condição corporal. No entanto, trabalhos em ovinos que correlacionam a MOTE com o peso vivo são escassos e, em se tratando de animais da 383

96 raça Dorper explorados na região semiárida do Nordeste brasileiro, são inexistentes. Portanto, o objetivo do trabalho foi verificar o efeito do peso corporal sobre a produção e qualidade embrionária em ovelhas Dorper divididas em duas categorias de peso. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado na Fazenda Baixa Grande, em Afrânio-PE, em outubro de Como doadoras de embriões, 12 ovelhas Dorper foram distribuídas em dois grupos (n=6), de acordo com a categoria peso, sendo o Grupo Leve (GL) formado por animais de até 60 kg, enquanto o Grupo Pesado (GP), por animais acima de 60 kg. No Dia Zero, foi inserido um dispositivo intravaginal com 300 mg de Progesterona (CIDR-G, PHARMACIA, Brasil). A partir do dia 12 do tratamento, iniciou-se uma série de seis doses (im) decrescentes de pfsh (Folltropin-V, Vetrepharm, Canada), a cada 12 horas, totalizando 128 (GL) ou 200 mg (GP). A cobertura foi realizada no início do estro e 24 horas após. Seis dias após a primeira monta, as doadoras foram submetidas à colheita dos embriões por laparotomia. Em estereomicroscópio (SMZ 745, Nikon, Japão), foi realizada a procura e avaliação das estruturas, quanto ao estádio de desenvolvimento e qualidade, seguindo os critérios da Sociedade Internacional de Transferência de Embriões (Robertson & Nelson, 2010). Os dados foram apresentados em média ± desvio padrão, e submetidos à ANOVA e, posteriormente, ao Teste de Tukey, utilizando o programa ASSISTAT 7.6 BETA sendo consideradas diferenças significativas, quando P < 0,05. RESULTADOS E DISCUSSÃO Um animal do GL apresentou uma patologia uterina, sendo eliminado das análises. Foi observado que os animais do GL apresentaram uma taxa de fertilização, significativamente (P<0,05), superior ao grupo de animais do GP. Neste trabalho, não foi observada diferença estatística quanto ao nº de estruturas colhidas e de embriões viáveis, porém houve uma forte tendência dos embriões produzidos pelo GL apresentarem um grau de qualidade melhor quando comparadas ao GP (Tab. 1). O fato de animais mais pesados terem uma menor taxa de fertilização e tendência à menor taxa de viabilidade embrionária pode estar relacionado ao nível de leptina, pois animais que apresentam uma maior quantidade de tecido adiposo tendem a secretar um 384

97 maior nível de leptina, havendo, desta forma, uma diminuição dos níveis séricos de estrógeno (Metwally et al., 2007), o que refletiu em uma menor a qualidade oocitária. Tabela 1. Produção e qualidade embrionária de ovelhas Dorper submetidas a um protocolo de produção de embriões em duas categorias de peso. Grupo Pesado (n=6) Grupo Leve (n=5) CV(%) Nº de Estruturas colhidas 2,50 ± 2,16 3,40 ± 2,08 90,73 Nº de Embriões 2,00 ± 1,66 3,40 ± 2,08 90,47 Taxa de Fertilização (%) 82,5 ± 9,16 B 100,00 ± 0,00 A 10,61 Taxa de Embriões Viáveis (%) 51,25 ± 38,75 91,67 ± 12,5 48,98 A, B Letras diferentes entre colunas indicam diferença significativa (P<0,05). CONCLUSÕES Pode-se concluir que o peso influencia na produção de embriões de ovelhas Dorper, onde animais leves apresentam melhor produção embrionária do que animais pesados. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS METWALLY, M.; LI, T.C.; LEDGER, W.L. The impact of obesity on female reproductive function. Obesity Review, v.8, p , ROBERTSON, I.; NELSON, R Certification and identification of embryos. In: D.A. Stringfellow; M.D. Givens (eds.), Proceedings of Guide of International Embryo Transfer Society. USA: IETS, p

98 Efeito Macho, alternativa natural de indução e sincronização de estro em fêmeas caprinas criadas em sistema agrossilvipastoril Male Effect, natural alternative for induction and synchronization of estrus in female goats bred in agrosilvopasture system Amanda Aragão Ávila 1 *; Ismênia França Brito 2 ; Solange Damasceno Sousa 3 ; Darly Araújo de Abreu 4 ; Alice Andrioli 5 ; Pedro Alberto Freitas da Silva 6 1,3,4 Universidade Estadual Vale do Acaraú, 2 Universidade Federal do Ceará, 5 EMBRAPA Caprinos e Ovinos, 6 Instituto Superior de Teologia Aplicada * amandazootec@yahoo.com.br ABSTRACT The females were exposed to the male effect for 45 days for 80 minutes twice a day. Reproductive parameters recorded were: percentage of females in estrus, onset of estrus, rate of return to estrus and rate of fertility. Data were analyzed using descriptive statistic. Of the females submitted to male effect 100% they had revealed estrus clinical. With respect to clinical signs of estrus, it was observed that 69% had estrus between 7-10 days after introduction of the ruffian in the flock. The rate of return to estrus was 25% in the interval of 8 to 24 days. The fertility rate of the herd was 93.75%. Therefore it is concluded that the male effect showed satisfactory results for female goats bred in agrosilvopasture system. Key words: agrosilvopasture system, reproductive parameters; goats Palavras-chave: sistema agrossilvipastoril; parâmetros reprodutivos; caprinos INTRODUÇÃO O efeito macho consiste em uma técnica natural e de baixo custo, de indução da atividade sexual de cabras em período de anestro. Esta metodologia apresenta vantagens quando comparada aos farmacológicos, tais como a possibilidade de repetição do método em um mesmo animal sem diminuição da fertilidade, ausência de sequelas e efeitos colaterais, prolifícidade normal e suporte técnico reduzido (Cordeiro, 1992). Estudos alicerçados em base ecológica vêm sendo desenvolvidos com o intuito de contribuir para a sustentabilidade da propriedade rural por meio da substituição de 386

99 insumos externos. Nesse contexto, o presente trabalho teve por objetivo determinar os parâmetros reprodutivos que contribuem para o aumento da eficiência do efeito macho em cabras criadas em sistema agrossilvipastoril. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi desenvolvido no sistema agrossilvipastoril da Embrapa Caprinos e Ovinos, situada em Sobral, Ceará, nos meses de janeiro a fevereiro de Para tanto foram utilizadas 16 fêmeas caprinas, multíparas, da raça Anglo Nubiano. As fêmeas foram expostas ao efeito macho durante 45 dias por 80 minutos, duas vezes ao dia. Todas foram acasaladas no primeiro e no segundo estro com reprodutores Anglo Nubiano, com fertilidade comprovada. Foram realizadas duas coberturas propriamente dita, sendo uma pela manhã e outra à tarde, de acordo com o horário de detectação do estro. Os parâmetros registrados foram porcentagem de fêmeas em estro, início das manifestações de estro, taxa de retorno ao estro e taxa de fertilidade do rebanho. Foi utilizada análise estatística descritiva para os parâmetros reprodutivos. RESULTADOS E DISCUSSÃO Das fêmeas submetidas à indução e sincronização de estro 100% (16/16) manifestaram estro clínico, sendo cobertas em 33 dias após exposição ao efeito macho. Esses resultados estão de acordo com os relatados por Lima et al. (2000). O forte odor do bode que é acentuado pela estação reprodutiva e associado à visualização do macho pela fêmea poderá de acordo com Traldi (1994), desencadear o aparecimento do estro nas cabras adultas e mesmo nas fêmeas jovens. A diminuição da duração da estação de monta de 45 para 33 dias incrementa a produtividade do plantel, pois permite ao criador diminuir os intervalos entre partos, sendo possível obter até dois partos em dois anos. Com relação ao início das manifestações clínicas de estro, observou-se que 69% (11/16) das fêmeas apresentaram estro entre 7 a 10 dias após introdução do rufião no plantel. Resultados superiores foram observados por Flores et al. (2000), os quais verificaram que 100% das cabras apresentaram pelo menos um estro durante os primeiros 11 dias de exposição aos machos. O restante do rebanho correspondente a 31% (5/16) manifestaram estro entre 20 a 24 dias após a introdução do rufião, possivelmente devido diferença entre a fase estral em que as fêmeas se encontravam no início da estação de monta. 387

100 A taxa de fêmeas que retornaram ao estro esteve em 25% (4/16) no intervalo entre 8 à 24 dias. Segundo Traldi (1994), é comum algumas fêmeas apresentarem retorno ao estro, quando utilizada à técnica do efeito macho, pois muitas vezes o pico de LH é insuficiente para provocar ovulações ou formar corpos lúteos que apresentem pleno funcionamento. Alguns autores relatam que o efeito macho pode ter seus índices melhorados quando associado à utilização prévia de progestágenos, porém a taxa de fertilidade do rebanho foi de 93,75% (15/16) sendo estes achados superiores aos encontrado por Maia Júnior et al. (2009), o qual verificou uma fertilidade de 80% para as cabras submetidas ao efeito macho associado ao tratamento com progesterona e gonadotrofina coriônica equina (ecg). CONCLUSÃO O efeito macho apresentou resultados satisfatórios em fêmeas criadas em sistema agrossilvipastoril, podem assim, ser utilizado como técnica alternativa de indução e sincronização de estro visando à sustentabilidade da propriedade rural por meio da diminuição de insumos externos e mão de obra especializada. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CORDEIRO, P.R.C. Sincronização de cio em cabras leiteiras com fotoperiodismo artificial. In: Congresso brasileiro de Medicina Veterinaria, 22., 1992, Curitiba. Anais... Curitiba: Sociedade Goiana de Veterinária, p FLORES, J.A.; VÉLIZ, F.G.; PÉREZ-VILLANUEVA, J.A. et al. Male reproductive condition is the limiting factor of efficiency in the male effect during seasonal anestrus in female goats. Biology of Reproduction, v.62, n.5, p , LIMA, S.A.; COSTA, A.N.; PEREIRA, R.J.T. de A. Efeito macho associado ou não ao cloprostenol na indução e sincronização do estro em cabras Anglo-Nubianas. Ciência Veterinária nos Trópicos, v.3, n.2, p , MAIA JÚNIOR, A.; ARAÚJO, A. A.; SALLES, M.G.F. Indução e sincronização do estro e da ovulação em cabras leiteiras saanen com uso de dispositivos vaginais associados ou não à ecg ou efeito macho. Acta Veterinaria Brasilica, v.3, n.4, p , TRALDI, A.S. Tópicos em reprodução e inseminação artificial em caprinos. São Paulo, p. (Manual técnico). 388

101 Efeitos do clima tropical sobre os parâmetros reprodutivos de bodes Saanen Effects of tropical climate under reproductive parameters of Saanen bucks Maria Gorete Flores Salles 1* ; David Ramos da Rocha 2 ; Aderson Martins Viana Neto 2 ; Inti Campos Salles Rodrigues 1 ; Airton Alencar de Araújo 1 1 PPGCV-UECE; 2 PPGZ UFC; 1 Médica Veterinária DSc. Lar Antonio de Pádua * mgfsalles@yahoo.com.br ABSTRACT The study evaluated the climatic factors on the reproductive parameters of Saanen bucks in tropical climate and the occurrence of heat stress. The year was divided in four periods according to rainfall; during each period were collected environmental data for ambient temperature and relative humidity of air to calculate the temperature and humidity index. Semen was collected fortnightly from 9 Saanen bucks to assess libido, volume, concentration, mass motility, individual progressive motility, percentage of motile sperm and sperm pathologies (SP). The scrotal circumference (SC) and the surface temperatures of the testes (STT) were measured. The results show that climatic parameters had an influence on reproduction, in the dry season decreases sperm quality and an increase the SP, SC and STT. We conclude that, Saanen bucks suffer heat stress situations when raised in tropical climate and the first half of year is the most favorable season for their reproduction. Key words: Saanen bucks; tropical climate; heat stress Palavras-chave: bodes Saanen; clima tropical; estresse térmico INTRODUÇÃO O sucesso da produção animal depende de vários aspectos, dos quais o reprodutivo constitui um dos principais, e está relacionado, principalmente, à interação genótipo/meio ambiente (Almeida et al., 2007). Nos trópicos, procura-se a melhoria da produtividade dos rebanhos pela introdução de raças especializadas com bom desempenho nas regiões de origem. Assim, é necessário conhecer o comportamento reprodutivo da raça Saanen em clima tropical e, determinar práticas de manejo que permitam a produtividade sustentável, sem prejudicar o bem-estar dos animais, pois o êxito da produção animal está em conter os fatores estressantes, que incidem negativamente no bem-estar dos animais. O objetivo do estudo foi avaliar as variações 389

102 dos parâmetros reprodutivos de bodes Saanen em clima tropical MATERIAL E MÉTODOS O estudo foi realizado em Pacatuba-Ce, latitude de 3 53 Sul, longitude de Oeste. Utilizou-se 9 bodes Saanen com peso médio de 67,1±14,2 kg e idade média de 3,4±1,9 anos criados em confinamento, alimentados com concentrado, forragem verde e água ad libitum. O ano foi dividido em 4 períodos: Chuvoso: fevereiro, março, abril e maio; Transição chuvoso-seco: junho e julho Seco: agosto, setembro, outubro e novembro e Transição seco-chuvoso: dezembro e janeiro. Os dados climáticos de temperatura ambiente (TA) e da umidade relativa do ar (UR) foram coletados e utilizados para estimar o índice de temperatura e umidade (ITU) de Thom (1959): ITU= tbs + 0,36. tpo + 41,5 Onde: tbs: temperatura de bulbo seco ( C) e tpo: temperatura do ponto de orvalho ( C). Quinzenalmente, mediu-se a circunferência escrotal, coletou-se a temperatura superficial dos testículos (TST) e o sêmen de cada bode e observou-se a libido. O volume e a concentração espermática foram mesurados, bem como a motilidade massal e a motilidade individual progressiva (MIP) foram avaliadas com notas de 0 a 5. A porcentagem de espermatozóides móveis (PEM) em escala de 0-100%. Para as patologias espermáticas o esfregaço de sêmen foi corado com solução de azul de bromofenol e determinada a percentagem de anomalias de cabeça, cabeça sem flagelo, gota citoplasmática: distal e proximal, anomalias de flagelo e células normais. Calcularam-se as médias e os erros-padrão da média para os dados climáticos e os parâmetros seminais, nos diferentes períodos do ano. Na ANOVA o modelo GLM do Systat 12 verificou o efeito da época do ano sobre os parâmetros seminais e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey com probabilidade de 5% de erro. RESULTADOS E DISCUSSÃO A TA teve seus valores máximos no período seco. Os valores máximos do ITU mostram que os reprodutores Saanen criados em clima tropical vivem em ambientes com perigo de estresse térmico na maior parte do ano e, em algumas situações de emergência. O ITU estima e avalia o conforto ambiental; valor inferior ou igual a 70 indica condição normal; entre 71 e 78 crítico; entre 79 e 83 perigo; acima de 83 condição de emergência (Hahn, 1985). O maior volume seminal foi na transição seco- 390

103 chuvoso (P<0,05). A motilidade massal e a motilidade individual progressiva não diferiram entre os períodos do ano. No período chuvoso foram encontrados os maiores valores da concentração espermática que diferiu dos outros períodos (P<0,05), pois a TA mais amena do ano favorece a termorregulação testicular. Na transição seco-chuvoso onde o volume foi maior, a concentração espermática foi inversamente proporcional a este. No segundo semestre a alta TA elevou o número de células morfologicamente anormais, que foram elevadas durante todo o ano, sendo o principal indício de diminuição da qualidade espermática (Salviano e Souza, 2008). Em ambientes onde o ITU está fora da zona de conforto térmico a termorregulação testicular é afetada, elevando as patologias e interferindo nos parâmetros seminais (Marai et al., 2007). Em bodes Saanen os parâmetros seminais mais afetados no clima tropical foram a PEM e as patologias espermáticas. O tempo de libido foi significativamente superior no período seco (P<0,05), quando a TA estava mais elevada e a melhor libido ocorreu durante o período chuvoso, confirmando os melhores parâmetros seminais encontrados nos períodos do ano em que a TA é mais amena. A temperatura superficial dos testículos (TST) foi mais elevada no período seco (P<0,05) onde se obteve o pior tempo de libido, concordando com Marai et al. (2007) que registraram em ovinos uma significativa correlação positiva entre, a temperatura da pele escrotal o tempo de reação e, o percentual de anomalias espermáticas, também encontrado no presente estudo. A circunferência escrotal (CE) foi menor no período chuvoso (P<0,05), diferindo dos demais períodos e o maior valor da CE foi no período seco (P<0,05). CONCLUSÕES Resultados apontam para os efeitos deletérios dos períodos mais quentes do ano sobre a qualidade do sêmen caprino, bem como, fomentam discussão sobre a sensibilidade da raça Saanen ao estresse térmico, deduzindo que, ao usar esta raça em programas de melhoramento genético nessas regiões, as condições de manejo devem ser apropriadas, para que seu genótipo possa ser expresso com mais eficiência. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ALMEIDA, A.M.; SCHWALBACH, L.M.J.; CARDOSO, L.A.Scrotal, testicular and semen characteristics of young Boer bucks fed winter veld hay: The effect of nutritional supplementation. Small Ruminant Research, v.73, n.1-3, p ,

104 MARAI, I.F.M. ; EL-DARAWANY, A.A.; FADIEL, A.; ABDEL-HAFEZ, M.A.M. Physiological traits as affected by heat stress in sheep-a review. Small Ruminant Research, v.71, n.1, p.1-12, SALVIANO, M.S.; SOUZA, J.A.T. Avaliação andrológica e tecnologia do sêmen caprino. Revista Brasileira de Reprodução Animal, v.32, n.3, p ,

105 Efeitos in vitro da BMP-15 no desenvolvimento de folículos pré-antrais caprinos The in vitro effects of BMP-15 on goat preantral follicle development Mirlla Baracho Ferreira 1* ; Isadora Machado Teixeira Lima 1 ; Rebeca Magalhães Pedrosa Rocha 1 ; Ivina Rocha Brito 1 ; José Ricardo de Figueiredo 1 ; Ana Paula Ribeiro Rodrigues 1. 1 Faculdade de Veterinária, Laboratório de Manipulação de Oócitos e Folículos Ovarianos Pré-antrais (LAMOFOPA), Universidade Estadual do Ceará * mirlla.baracho@gmail.com ABSTRACT This study evaluated the effects of bone morphogenetic protein- 15 (BMP-15) on the in vitro development of cultured goat preantral follicles. Preantral follicles ( 150 μm) were isolated from goat ovaries and cultured for 18 days in α- MEM + supplemented with or without BMP-15 (10, 50, or 100 ng/ml). In culture, 50 ng/ml BMP-15 positively influenced antral cavity formation and follicle growth after 18 days and also maintained follicular integrity. In conclusion, BMP-15 (50 ng/ml) stimulates growth and antrum formation of isolated caprine preantral follicles after 18 days of culture. Key words: BMP-15; culture; follicle growth; caprine. Palavras-chave: BMP-15; cultivo; crescimento folicular; caprino. INTRODUÇÃO A proteína morfogenética óssea- 15 (BMP-15) tem demonstrado um importante papel no controle das funções ovarianas e na fertilidade feminina (Paulini & Melo 2011). As principais atividades da BMP-15 durante a foliculogênese incluem a estimulação da mitose em células da granulosa e a inibição da expressão dos receptores de hormônio folículo estimulante (FSH) (Moore et al., 2003). A BMP-15 também estimulou a expansão das células do cumulus (Yoshino et al., 2006) e a expressão de kit ligand (KL) nas células da granulosa. No entanto, na espécie caprina, a influência da BMP-15 durante a foliculogênese não é totalmente elucidada. Para tanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos de diferentes concentrações de BMP-15 na sobrevivência e desenvolvimento de folículos pré-antrais caprinos após cultivo in vitro. 393

106 MATERIAL E MÉTODOS Folículos pré-antrais ( 150 μm de diâmetro) caprinos foram obtidos por microdissecção do córtex ovariano, e posteriormente, foram cultivados individualmente em gotas de 100 μl de meio α-mem suplementado com 3 mg/ml de albumina sérica bovina (BSA), ITS (10 μg/ml de insulina, 5,5 μg/ml transferrina e 5 ng/ml de selênio), 2 mm de glutamina, 2 mm hipoxantina e 50 μg/ml de ácido ascórbico na ausência (controle) ou presença de BMP-15 (10, 50 ou 100 ng/ml). O cultivo in vitro foi realizado em placas de Petri cobertas por óleo mineral por 18 dias a 39 C em 5% CO 2. A troca de 60 μl de meio foi realizada a cada 2 dias e cada tratamento foi repetido 4 vezes. O diâmetro dos folículos, que apresentavam membrana basal intacta e células da granulosa homogêneas e claras, foi mensurado nos dias 0, 6, 12 e 18 de cultivo. A formação de antro foi definida em ocorrência de uma cavidade translúcida entre as camadas de células da granulosa. O crescimento folicular diário foi calculado da seguinte forma: diâmetro final dos folículos sobreviventes menos o diâmetro inicial dos mesmos, dividido pelo número de dias de cultivo. Quanto às análises estatísticas, os dados de sobrevivência e formação de antro foram analisados por Qui-quadrado. Os dados de diâmetro e crescimento folicular foram avaliados por Student Newman Keuls (SNK), com P < 0,05. RESULTADOS E DISCUSSÃO Após 12 dias de cultivo, quando os tratamentos foram comparados entre si, apenas o tratamento com BMP-15 (50 ng/ml) resultou em folículos com diâmetros superiores aos obtidos no grupo controle (P<0,05). O mesmo tratamento, após 12 dias, manteve as taxas de sobrevivência folicular similares ao dia 0 (P>0,05). Os elevados valores de diâmetro folicular verificados no tratamento BMP-15 (50 ng/ml) podem ser explicados pelos efeitos mitogênicos da BMP-15 sobre as células da granulosa, contribuindo para o crescimento durante as várias fases da foliculogênese, incluindo a ativação folicular (Celestino et al., 2011). Além disso, BMP-15 (50 ng/ml), comparado com o controle, também foi o único tratamento que mostrou altas porcentagens de formação de antro em todos os dias de cultivo avaliados (P<0,05), provavelmente pelo efeito positivo desta concentração de BMP-15 sobre as interações célula-célula (oócitocélulas da granulosa), as quais são essenciais para a formação da cavidade antral. 394

107 CONCLUSÃO Em conclusão, a BMP-15 na concentração de 50 ng/ml promoveu a formação de antro e o crescimento de folículos pré-antrais caprinos após 18 dias de cultivo in vitro. REFERÊNCIAS CELESTINO, J. J. H.; LIMA-VERDE, I. B.; BRUNO, J. B.; MATOS, M. H. T.; CHAVES, R. N.; SARAIVA, M. V. A.; SILVA, C. M. G.; FAUSTINO, L. R.; ROSSETTO, R.; LOPES, C. A. P.; DONATO, M. A. M.; PEIXOTO, C. A.; CAMPELLO, C. C.; SILVA, J. R. V.; FIGUEIREDO, J. R. Steady-state level of bone morphogenetic protein-15 in goat ovaries and its influence on in vitro development and survival of preantral follicles. Molecular Cell Endocrinology, v. 338, p. 1 9, MOORE, R. K.; OTSUKA, F.; SHIMASAKI, S. Molecular basis of bone morphogenetic protein-15 signaling in granulosa cells. The Journal of Biological Chemistry, v. 278, n.1, p , PAULINI, F.; MELO, E.O. The role of oocyte-secreted factors GDF9 and BMP15 in follicular development and oogenesis. Reproduction in Domestic Animals, v. 46, n. 2, p , YOSHINO, O.; MCMAHON, H. E.; SHARMA, S.; SHIMASAKI, S. A unique preovulatory expression pattern plays a key role in the physiological functions of BMP- 15 in the mouse. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, v. 103, n. 28, p ,

108 Evaluation of different times of stabilization to goat sperm cryopreservation preliminary results Avaliação de diferentes tempos de estabilização para a criopreservação de sêmen caprino resultados preliminares Ellen Cordeiro Bento da Silva * ; Sildivane Valcácia Silva; Helder Melo de Souza; Maria Madalena Pessoa Guerra Laboratório de Andrologia (UFRPE) * silva.ecb@gmail.com ABSTRACT The objective of this study was to evaluate the better time of stabilization to goat sperm cryopreservation. So, three goat semen pools from five breeders were diluted with skimmed milk based-extender, packed in straws and submitted to different times of stabilization (0, 2 and 4h) after reaching 5 C. The semen samples, after each specific time of stabilization, were frozen with nitrogen vapor and, in a minimal interval of one day, thawed and analyze to motility, vigor, membrane integrity, mitochondrial membrane potential and acrosome integrity. No significance difference (P>0.05) was observed among the times of stabilization studied (0, 2 and 4h at 5 C) on the goat sperm parameters after thawing. In conclusion, the time of stabilization do not interfere on the viability of goat frozen sperm, but are necessary more researches with in vivo analyze. Keywords: frozen semen; goat; sperm Palavras-chaves: congelação de sêmen; caprino; espermatozoide INTRODUCTION Despite the capacity of prolong the sperm life, cryopreservation cause lethal and sublethal damages on the gametes, with reduction of their viability, functionality (Salamon & Maxwell, 1995) and fertilizing capacity (Watson, 2000). The sperm damages caused by cryopreservation process resulting, especially, from dilution, refrigeration and time of stabilization to which the cell are submitted (Oettlé, 1986). Thus, it is important optimize the initial steps of semen cryopreservation to preserve the viability of these gametes. In this context, the objective of this study was evaluated the better time of stabilization to goat sperm cryopreservation. 396

109 MATERIALS AND METHODS Three goat semen pools were collected by artificial vagina from five matured breeders. The semen samples were diluted with skimmed milk based-extender, packed in straws and submitted to different times of stabilization (0, 2 and 4h) after reaching 5 C. Subsequently to each specific time of stabilization, the semen was frozen with nitrogen vapor and stored in liquid nitrogen (-196 C). Semen samples were thawed (37 ºC for 30 s), after minimal interval of one day, and analyzed to motility and vigor in a phase-contrast microscopy, membrane integrity (PMi) using double staining with carboxyfluorescein diacetate and propidium iodide (Silva et al., 2011), mitochondrial membrane potential (MMP) with JC-1 (Guthrie & Welch, 2006) and acrosome integrity (ACi) using the fluorescein isothiocyanate-conjugated aglutin (Roth et al., 1998). All the values obtained were statistically analyzed by ANOVA, with exception of vigor that was analyzed by Kruskal-Wallis test. The significant level was RESULT AND DISCUSSION No significance difference (P>0.05) was observed among the times of stabilization studied (0, 2 and 4 h at 5 C) on the goat sperm parameters after thawing (Tab. 1), fact also observed by Bittencourt et al. (2007) when used 1 and 2 h to stabilization of goat semen submitted to cryopreservation. Although these values not differ statistically, is visible higher percentages of motility, plasma membrane integrity and acrosome integrity when were used times of stabilization of 2 and 4 h, demonstrating that longest time of stabilization can preserve the cells from deleterious effects of the low temperatures (Westhuysen, 1978). Table 1. Means and standard deviation of goat sperm parameters frozen after different times of stabilization PMi = membrane integrity; MMP= mitochondrial membrane potential; ACi= acrosome integrity. Significance level was B1 B2 397

110 CONCLUSION In conclusion, the time of stabilization no interfere on the viability of frozen goat semen, but are necessary more researches with in vivo analyze. REFERENCE BITTENCOURT, R.F.; RIBEIRO FILHO, A.L.; ALVES, S.G.G.; BISCARDE, C.E.; VASCONCELOS, M.F.; OBA, E. Criopreservação do sêmen caprino: efeito da curva de refrigeração e tempo de equilíbrio. Ciência Animal, v. 17, p , GUTHRIE, H.D.; WELCH, G.R. Determination of intracellular reactive oxygen species and high mitochondrial membrane potential in Percoll-treated viable boar sperm using fluorescence-activated flow cytometry. Journal of Animal Science, v. 84, p , OETTLÉ, E.E. Changes in acrossome morphology during cooling and freezing of dog semen. Animal Reproduction Science, v.12, p , ROTH, T.L.; WEISS, R.B.; BUFF, J.L.; BUSH, L.M.; WILDT, D.E.; BUSH, M. Heterologous in vitro fertilization and sperm capacitation in an endangered African antelope, the scimitar-horned oryx (Oryxdammah). Biology of Reproduction, v. 58, p , SALAMON, S.; MAXWELL, W.M.C. Frozen storage of ram semen II, Cause of low fertility after cervical insemination and methods of improvement. Animal Reproduction Science, v. 38, p. 1-36, SILVA, S.V.; SOARES, A.T.; BATISTA, A.M.; ALMEIDA, F.C.; NUNES, J.F.; PEIXOTO, C.A.; GUERRA, M.M.P. In vitro and in vivo evaluation of ram sperm frozen in Tris egg-yolk and supplemented with superoxide dismutase and reduced glutathione. Reproduction in Domestic Animals, v. 46, p , WATSON, P.F. The cause of reduced fertility with cryopreserved semen. Animal. Animal Reproduction Science, v. 61, p , WESTHUYSEN, J.M.V. Observations on the deep-freezing of Angora goat semen. South African Journal of Animal Science, v.8, p ,

111 Evaluation of goat sperm DNA extraction by two different methods Avaliação da extração de DNA de espermatozoides caprinos por dois diferentes métodos Ellen Cordeiro Bento da Silva 1* ; Marina Arruda Pelinca 1 ; Atzel Candido Acosta 2 ; Manoel Adrião Gomes Filho 3 ; Maria Madalena Pessoa Guerra 1 1 Laboratório de Andrologia (ANDROLAB, UFRPE), Recife, Brazil; 2 Laboratório de Genética Molecular (CENSA), San José de las Lajas, Cuba; 3 Laboratório de Fisiologia e Morfologia Animal (UFRPE), Recife, Brazil. * silva.ecb@gmail.com ABSTRACT The objective of this study was to evaluate two protocols for goat sperm DNA extraction. For this, eight goat semen pools were used to DNA extraction by DNeasy Blood & Tissue Kit and phenol-chloroform protocol. The DNA samples were spectrophotometrically assayed to determinate their quantity and purity and visualized in 0.8% agarose gel. The DNA quantity was higher (P<0.05) after use of phenolchloroform protocol than that after use DNeasy Blood & Tissue Kit. It was observed amplification after electrophoresis with 150ng DNA extracted by both methods, although with phenol-chloroform protocol it just was possible after complementary DNA purification. Thus, DNA extraction from goat sperm by DNeasy Blood & Tissue Kit is more effective than by phenol-chloroform to use in PCR. Keywords: DNA extraction; sperm; phenol-chloroform; polymerase chain reaction Palavras-chaves: extração de DNA; espermatozoide; fenol-clorofórmio; reação em cadeia da polimerase INTRODUCTION The polymerase chain reaction (PCR) revolutionized the molecular genetics because it is a relatively fast, easy and sensitive technique that permits fast amplification and in vitro analysis of specific DNA sequences (Koch & Andrade, 2008). However, the success of PCR depends of the quality and quantity of DNA extracted (Coelho et al., 2004), which should be free of contaminants and DNA nucleases, that impair the amplification (Manuja et al., 2010). The objective of this study was to evaluate two protocols for goat sperm DNA extraction. 399

112 MATERIALS AND METHODS Eight semen pools from five goats were used to DNA extraction by DNeasy Blood & Tissue Kit (QIAGEN GmbH, Hilden, Germany), according to the manufacturer s recommendations, and phenol-chloroform protocol, according to Hanson & Ballantyne (2004), with little modifications, to which was used 100µL of semen from each sample. The DNA absorbance was measured at 260nm, and the purity was determined by A 260/280 ratio. The DNA presence and quality was analyzed in 0.8% agarose gel, and the genomic DNA was amplified by PCR using primers GAPDH with analyze in 1.5% agarose gel. The values of DNA concentration and purity were statistically analyzed by ANOVA and the significant differences were compared by Tukey test, with significance level of RESULT AND DISCUSSION The quantity of DNA extracted was higher (P<0.05) after use of phenolchloroform protocol than that with DNeasy Blood & Tissue Kit, although both presented purity nearly of 1.8 (Tab. 1) and visualization of DNA after Electrophoresis in 0.8% agarose gel (Fig. 1A). The amplification occurred with DNA extracted by two methods and it was visualized by formation of specific bands in 1.5% agarose (Fig. 1B), despite with phenol-chloroform it only was possible after complementary DNA purification. These results demonstrate that although the good DNA purity, the extraction with phenol-chloroform determined PCR inhibition, which result from the organic solvent action (Barea et al., 2004). Table 1. Quantity and purity assay of DNA extracted from goat sperm, expressed on ng/μl Samples DNeasy Blood & Tissue Kit Phenol-chloroform protocol Quantity Purity Quantity Purity Means 53,17 2,07 153,48 1,63 standard 24,42 A 1,38 a 24,10 B 0,10 a deviation Different capital letters indicate P<0.05 to DNA quantity; different minuscule letters indicate P<0.05 to DNA purity. 400

113 A1 A2 B1 B2 Figure 1. Electrophoresis with DNA extracted by DNeasy Blood & Tissue Kit (A1) and Phenol-chloroform protocol (A2). Electrophoresis with PCR product resulted of DNA extracted by DNeasy Blood & Tissue Kit (B1) and Phenol-chloroform (B2). CONCLUSION DNA extraction from goat sperm by DNeasy Blood & Tissue Kit is more effective than by phenol-chloroform, to use in PCR. REFERENCES BAREA, J.A.; PARDINI, M.I.M.C.; GUSHIKEN, T. Extração de DNA de materiais de A1 A2 B1 arquivo e fontes escassas para utilização em reação de polimerização em cadeia (PCR). Revista Brasileira de Hematologia e Hemoterapia, v. 26, p , COELHO, E.G.A.; OLIVEIRA, D.A.A.; TEIXEIRA, C.S.; SAMPAIO, I.B.M.; RODRIGUES, R.G.; ALVES, C. Comparação entre métodos de estocagem de DNA extraído de amostras de sangue, sêmen e pêlo e entre técnicas de extração. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v. 56, p , HANSON, E.K.; BALLANTYNE, J. A highly discriminating 21 locus Y-STR Megaplex system designed to augment the minimal haplotype loci for forensic casework. Journal Forensic Sciences, v. 49, p. 1-12, KOCH, A.; ANDRADE, F.M. A utilização de técnicas de biologia molecular na genética forense: uma revisão. Revista Brasileira de Análises Clínicas, v. 40, p , MANUJA, A.; MANCHANDA, S.; KUMAR, B.; KHANNA, S.; SETHI, R.K. Evaluation of different methods of DNA extraction from semen of buffalo (Bubalus bubalis) bulls. Buffalo Bulletin, v. 29, p ,

114 Expressão de RNAm para BMPRIB e BMPRII em folículos ovarianos caprinos BMPRIB and BMPRII mrna expression levels in goat ovarian follicles Emmanuel Teles Sales 1* ; Isadora Machado Teixeira Lima 1 ; Ivina Rocha Brito 1 ; Rafael Rosseto 1 ; Ana Paula Ribeiro Rodrigues 1 ; José Ricardo de Figueiredo 1 1 Universidade Estadual do Ceará (UECE) * emmanuel.teles@gmail.com ABSTRACT This study evaluated the levels of bone morphogenetic protein receptors BMPRIB and BMPRII mrna in goat follicles. Real-time polymerase chain reaction (PCR) was used to analyze the levels of BMPRIB and BMPRII mrna in caprinepreantral follicles and in small and large antral follicles. Real-time PCR showed a reduction in BMPRII mrna levels from the primary to secondary follicles. Higher levels of BMPRIB mrna were observed in granulosa/theca cells from large antral follicles compared with small antral follicles. Moreover, BMPRII mrnawas expressed to a greater extent in cumulus oocyte complexes from large antral follicles than in their respective granulosa/theca cells. Key words:preantral follicles, Caprine, BMP-15 Palavras-chave: Folículos pré-antrais, Caprino, BMP-15 INTRODUÇÃO Os mecanismos fisiológicos e regulatórios da foliculogênese ovariana estão diretamente relacionados a fatores de crescimento, dentre os quais podemos citar a proteína morfogenética óssea 15 (BMP-15).A BMP-15 é integrante da superfamília de fatores de crescimento transformante β (TGF- β), conhecida por estar envolvida no crescimento folicular até o estágio pré-ovulatório (Paulini e Melo 2011). Em todas as espécies estudadas, tem-se observado que o ovário é o maior sítio de produção da BMP- 15 (Penget al. 2009), sendo tanto seu RNAm como sua proteína detectada em oócitos de folículos primordiais de diferentes espécies de mamíferos. Entretanto, uma vez que na espécie caprina os níveis desses receptores ainda não foram estudados por categoria folicular, o objetivo desse trabalho foi avaliar os níveis dos receptores de BMP-15 (BMPRIB e BMPRII) durante os diferentes estágios foliculares em ovários caprinos. 402

115 MATERIAL E MÉTODOS Foram coletados 26 ovários de cabras adultas SRD em abatedouro local. Logo após o abate, transportados ao laboratório em meio essencial mínimo (MEM) tamponado com HEPES e suplementado com antibióticos à temperatura de 4 C por um período de 1 hora. Uma vez no laboratório, foram selecionados aleatoriamente 10 desses ovários para serem destinados ao isolamento mecânico de folículos primordiais, primários e secundários. Dos demais 16 ovários foram coletados complexos cumulusoócitos e células murais de folículos antrais pequenos e grandes. Após o isolamento esses folículos foram lavados em meio MEM-HEPES, separados por categoria em grupos de 10 e envasados em tubos Eppendorf para serem armazenados a -80 C até a extração do RNA. O RNA foi isolado com Trizol e submetido em volumes de 20 µl ao procedimento de transcrição reversa. A quantificação do RNAm para BMPRII e BMPRIB foi realizada com SYBER Green, sendo a β-actina e β-tubulina usados como controles endógenos. Para a análise estatística, os dados referentes à expressão de RNAm para BMPRIB e BMPRII em folículos pré-antrais foram analisados usando o teste de Kruskal-Wallis, e para folículos antrais os dados foram analisados por teste-t (P<0,05). RESULTADOS E DISCUSSÃO No presente estudo, a análise dos níveis de expressão dos receptores de BMP-15 demonstrou a presença de ambos os receptores em todos os estágios dos folículos préantrais (primordial, primário e secundário) caprinos. Esses resultados são similares aos de Sun et al. (2010) para camundongos, suínos e humanos.neste estudo houve uma queda nos níveis de RNAm para BMPRII na transição dos folículos do estágio primário para secundário, o que entra em contraste com o observado em estudos prévios em camundongos (Sun et al. 2010) onde não existe alteração da expressão desse receptor entre as fases foliculares. Quando os níveis de ambos receptores foram comparados entre os CCO s provenientes de folículos grandes e pequenos, não foram observadas diferenças significativas. Entretanto, quando avaliados as suas células murais, foi observado maiores níveis de RNAm para BMPRIB nas células da granulosa e da teca de folículos antrais grandes quando comparados a folículos antrais pequenos. Esse resultado está de acordo com Chen et al. (2009) que, na espécie ovina, também observou uma maior expressão de BMPRIB nas células da granulosa e da teca de 403

116 folículos antrais grandes, o que pode sugerir que a BMP-15 pode possuir papel importante no processo de ovulação (Paradis et al. 2009). Com relaçãoao receptor BMPRII não foram encontradas diferenças significativas entre as células murais provenientes de folículos grandes e pequenos. Em folículos grandes, os níveis de BMPRII foram significativamente superiores nos CCO s quando comparados às células murais. Esse achado está de acordo comparadiset al. (2009) que observou abundante expressão de RNAm para BMPRII em oócitos de folículos antrais suínos, e baixos níveis desse receptor nas células da granulosa e teca. CONCLUSÃO O RNAm para ambos os receptores de BMP-15 (BMPRIB e BMPRII) estão presentes na espécie caprina em todas as células de todas as categorias foliculares investigadas. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CHEN, A. Q.; YU, S. D.; WANG, Z. G.; XU, Z. R.; YANG, Z. G. Stage-specific expression of bone morphogenetic protein type I and type II receptor genes: effects of folliclestimulating hormone on ovine antral follicles. Animal Reproduction Science, v. 111, p , PARADIS, F.; NOVAK, S.; MURDOCH, G. K.; DYCK, M. K.; DIXON, W. T.; FOXCROFT, G. R. Temporal regulation of BMP2, BMP6, BMP15, GDF9, BMPR1A, BMPR1B, BMPR2 and TGFBR1 mrna expression in the oocyte, granulosa and theca cells of developing preovulatory follicles in the pig. Reproduction, v. 138, p , PAULINI, F.; MELO, E. O.The role of oocyte-secreted factors GDF9 and BMP15 in follicular development and oogenesis. Reproduction in Domestic Animals,v. 46, p , PENG, C.; CLELLAND, E.; TAN, Q. Potential role of bone morphogenetic protein-15 in zebrafish follicle development and oocyte maturation.comparative Biochemistry and Physiology, v. 153, n. 1, p , SUN, R. Z.; LEI, L.; CHENG, L.; JIN, Z. F.; ZU, S. J.; SHAN, Z. Y.;WANG, Z. D.; ZHANG, J. X.; LIU, Z. H.(2010) Expression of GDF-9, BMP-15 and their receptors in mammalian ovary follicles. Journal of Molecular Histology,v. 41, n. 6, p ,

117 Histórico das pesquisas sobre morfofisiologia da reprodução em caprinos com escroto bipartido realizadas na Universidade Federal do Piauí History of research on morphophysiology of reproduction in goat with bipartite scrotum held at the Federal University of Piaui Antonio Augusto Nascimento Machado Júnior 1 *; Maria Acelina Martins de Carvalho 1 ; Mônica Marcos Almeida 2 ; Aline Soares Nunes 3 1 Universidade Federal do Piauí; 2 Agência de Defesa Agropecuária do Pará; 3 Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. * machadojúnior2@yahoo.com.br ABSTRACT The aim of the study was to make a historical account about the researches in goats with bipartite scrotum in the Graduate Studies Program. The researcher used three groups of animal divided according to scrotal conformation. The results showed data about the semen evaluated, sexual behavior, testicular and scrotal temperatures, histology of scrotum and testicles and spermatogenic process that was the best to the goats with bipartite scrotum. It was concluded then that the animals with bipartite scrotum showed greater reproductive efficiency. Key words: goats; testicles; scrotum Palavras-chave: caprino; testículo; escroto INTRODUÇÃO Os pesquisadores do PPG em Ciência Animal da Universidade Federal do Piauí vêm, desde 2002, desenvolvendo pesquisas abordando a morfofisiologia da reprodução, comparando caprinos com escroto bipartido e não bipartido. Nesse período foram investigados a biometria, a morfologia macro e microscópica e a fisiologia escrototesticulares, e aspectos da reprodução nesses animais, dos quais resultaram 01 tese, 03 dissertações que se encontram publicadas em periódicos especializados. Objetivou-se fazer o relato abordando a história das pesquisas em caprinos com escroto bipartido realizadas no PPGCA da UFPI. MATERIAL E MÉTODOS As pesquisas foram feitas em Teresina PI (Latitude sul e Longitude 405

118 oeste, altitude: 72m, radiação solar mensal: 676 cal.cm 2.dia -1 ) dividindo-se os animais em 03 grupos: GI - caprinos com escroto não bipartido; GII - caprinos com escroto bipartido até 50 % do comprimento testicular; GIII - caprinos com bipartição do escroto superior a 50 % do comprimento dos testículos. Foram avaliadas características físicas e morfológicas do sêmen, concentração plasmática de testosterona, comportamento sexual, temperaturas testicular, escrotal e dos funículos espermáticos, histologia do escroto e processo espermatogênico. A metodologia detalhada encontra-se nos artigos, listados nos resultados, oriundos da tese e das dissertações dos autores deste resumo. Os dados foram submetidos a testes estatísticos a 5% de significância. RESULTADOS E DISCUSSÃO Nos animais com escroto bipartido foi observado que a região da bipartição apresentava maior número de ramos terminais da artéria escrotal (Almeida et al., 2008). Nesses animais foi evidenciada uma pele escrotal com uma quantidade de glândulas sudorípara e sebáceas maior que nos do GI e GII (p<0,05) (Nunes et al., 2010). Nos animais com escroto bipartido o funículo espermático apresentou maior comprimento e diâmetro e uma maior extensão da artéria testicular no seu interior enquanto que a quantidade de tecido adiposo na região subcapsular do funículo espermático foi menor. A temperatura dos funículos espermáticos foi de 37,13ºC nos caprinos do GIII contra 37,27ºC e 37,40ºC do GII e GI, respectivamente. A temperatura do testículo apresentou como média geral 33.90ºC para o GIII, 34,22ºC para o GII e 34, 65ºC para o GI. A temperatura escrotal mostrou os animais do grupo III apresentando, em média, 30,66ºC, o grupo II 31,08ºC e o grupo I 31,79ºC (p<0,05) (Machado Júnior et al., 2009). Essas temperaturas mais baixas refletem diretamente na espermatogênese desses animais, pois Machado Júnior et al. (2011a) e Machado Júnior et al. (2012) relataram que os animais do GIII apresentaram melhor um processo espermatogênico que refletiu positivamente sobre a produção espermática diária. Os caprinos do GIII apresentaram circunferência escrotal de 25,80 cm, comprimento escrotal de 17,42 cm, comprimento testicular de 5,62 cm, volume testicular de 188,41 cm 3 (Machado Júnior et al., 2011b) e comportamento sexual classificado como excelente, sendo todos esses parâmetros superiores aos encontrados para GI e GII (p<0,05). Quanto às características seminais, foi observado que os caprinos com escroto bipartido apresentavam um sêmen com melhor vigor, concentração, motilidade massal e individual (Almeida et al., 2010), 406

119 sendo que a literatura relata que em períodos do ano com maiores temperatura a escolha de animais com escroto bipartido pode ser mais vantajosa (Vieira et al., 2008). CONCLUSÃO As pesquisas, até então realizadas, permitem inferir que os caprinos com escroto bipartido criados no Estado do Piauí apresentam maior eficiência no processo reprodutivo, com base nos parâmetros estruturais e funcionais estudados, no entanto, estudos complementares necessitam ser realizados para fundamentar melhor esses resultados. AGRADECIMENTO CNPq - Processos: / (Edital Universal-01/2002), /04-8 (MCT/CNPq/PADCT "Casadinho"); FAPEPI/CNPq - Edital - 01/2004 (ppp). REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ALMEIDA, M.M.; CARVALHO, M.A.M.; MACHADO JÚNIOR, A.A.N.; RIGHI, D.A.; BOMBONATO, P.P.; Efeito do grau de bipartição escrotal sobre a vascularização arterial do escroto de caprinos nativos do Estado do Piauí. Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, v. 45, n. 3, p , ALMEIDA, M.M.; MACHADO JUNIOR, A.A.N.; MENEZES, D.J.A.; CARVALHO, M.A.M. Influência do grau de bipartição escrotal sobre parâmetros reprodutivos de caprinos. Pesquisa Veterinária Brasileira, v. 30, n. 4, p , MACHADO JÚNIOR A.A.N.; MIGLINO M.A.; MENEZES D.J.A.; CARVALHO M.A.M. Influence of the bipartite scrotum on the testicular and sacrotal temperatures in goats. Pesquisa Veterinária Brasileira, v. 29, n. 10, p , MACHADO JUNIOR, A.A.N.; ASSIS NETO, A.C.; MENEZES, D.J.A.; CARVALHO, M.A.M. Daily sperm production and testicular morphometry in goats according to external scrotal conformation. Animal Reproduction Science, v. 127, p , 2011a. MACHADO JÚNIOR, A.A.N.; ASSIS NETO, A.C.; AMBRÓSIO, C.E.; LEISER, R.; CARVALHO, M.A.M. Goat scrotal-testicular biometry: Influence of the season on scrotal bipartition. Pesquisa Veterinária Brasileira, v. 31, n. 12, p , 2011b. MACHADO JÚNIOR, A.A.N.; OLIVEIRA, L.SL.; ASSIS NETO, A.C.; ALVES, F.R.; MIGLINO, M.A.; CARVALHO, M.A.M. Spermatogenesis in goats with and wtihout 407

120 scrotum bipartition. Animal Reproduction Science, v. 130, p , NUNES, A.S.; CAVALCANTE FILHO, M.F.; MACHADO JÚNIOR, A.A.N.; ABREU- SILVA, A.L.; CONDE JÚNIOR, A.M.; SOUZA, J.A.T.; CARVALHO, M.A.M. Descrição histológica do escroto de caprinos nativos do Estado do Piauí, segundo o grau de bipartição escrotal. Ciência Rural, v. 40, n. 8, p , VIEIRA, R.J.; CARDOSO, F.T.S.; AZEVEDO, L.M.; CUNHA, L.A.L.; SALVIANO, M.B. Influência da morfologia escrotal e da época do ano na qualidade do sêmen de caprinos criados no Estado do Piauí. Revista Brasileira de Ciências Agrárias, v.3, n. 4, p ,

121 Impactos dos fatores climáticos na estrutura testicular de ovinos: resultados parciais Impacts of climatic factors in testicular structure of sheep: Partial results Raffael Oliveira Eufrasio 1 *; Antonio Augusto Nascimento Machado Júnior 1 ; Juanna D Arc Fonseca dos Santos 1 ; Maristela Melo de Oliveira 1 ; George Fernando Miranda Pinheiro 1 1 Universidade Federal do Piauí UFPI * raffael-oliveira1906@hotmail.com ABSTRACT The aim of the study was to evaluate the influence of different environmental temperatures and humidity on the structure of testis. Were used 08 testicles of ovine for obtaining testicular parameters. The testicles were processed for of light histology. The results showed the volume density of the seminiferous tubule were ± 25.25, tubular diameter were 164 µm and seminiferous epithelium height of µm. It was concluded then that the results showed mostly lower than those found by another authors. Key words: Histometry, testicles, sheep Palavras-chave: histometria; testículos; ovinos INTRODUÇÃO Estudos para elucidar melhor a função reprodutiva, em especial a espermatogênese, dos animais apresenta como vantagem permitir a identificação ou definição de parâmetros morfológicos de organização testicular permitindo identificar variações na morfofisiológica do testículo frente a condições experimentais ou patológicas (Leal, 2004). Em caprinos já foram realizados alguns estudos para avaliar a estrutura testicular e a espermatogênese em caprinos (Machado Junior et al., 2012), no entanto em ovinos são escassas as pesquisas abordando esse foco. Assim, objetivou-se avaliar a influencia de fatores climáticos sobre a morfologia testicular de ovinos criados no município de Bom Jesus PI. MATERIAL E MÉTODOS Foram utilizados 08 testículos de ovinos sem raça definida adquiridos de 409

122 abatedouros localizados em Bom Jesus PI coletados durante o período quente (setembro a novembro). Os testículos foram fixados em solução de Bouin processados para microscopia de luz. Foram analisados a proporção volumétrica dos compartimentos testiculares, a altura do epitélio seminífero e o diâmetro dos túbulos com um retículo quadriculado e uma ocular micrométrica acoplados na objetiva de 40x. RESULTADOS E DISCUSSÃO Os resultados apresentado são referentes aos valores da histometria testicular de ovino no período seco do ano em Bom Jesus-PI. Os dados referentes ao período chuvoso estão sendo coletados e ao final poder-se-á fazer uma comparação entre os dois períodos do ano, portanto os dados aqui relatados têm a finalidade de divulgar o trabalho que está sendo desenvolvido. Os resultados da histometria testicular em ovinos estão expressos na Tab. 1. Dos dados apresentado chama-se a atenção para a densidade de volume dos túbulos seminíferos de ovinos foi menor que observado em cães por Mascharenhas et. al. (2006) que foi de 87,3%. A altura do epitélio seminífero e diâmetro tubular foi semelhante ao valor relatado por Martins et. al. (2008) que encontraram valores de 52,7±7,4 e 164,2±20 µm, respectivamente. Vários fatores, dentre eles o nutricional, podem alterar a estrutura do testículo (Beattie et al., 1984; Igdoura & Wieber, 1994; Mruk & Cheng, 2004). Algumas diferenças podem ser explicadas pelas técnicas histológicas utilizadas que foram diferentes, no entanto, outras discrepâncias de valores podem ter sido encontradas devido ao período das coletas, porém só poderemos realmente confirmá-las após a análise dos dados do período chuvoso CONCLUSÃO Com base nos resultados parciais da pesquisa, conclui-se que os valores encontrados encontram-se, em sua maioria, abaixo dos resultados obtidos por outros autores, sendo importante sobrepujar estes resultados são parciais e a complementação dos dados referente o período chuvoso permitirá fazer uma comparação dos dados permitindo responder a hipótese deste estudo. 410

123 Tabela 1. Média ± desvio padrão dos dados de biometria corporal e testicular de ovinos SRD criados extensivamente no período seco do ano em Bom Jesus - PI Peso corporal (Kg) 33,5± 1 Peso testicular (g) 122,75±22,81 Índice gonadossomatico (%) 0,35 ± 0,06 Densidade de volume do parênquima testicular (%) Túbulo seminífero 55,55 ± 25,25 Lâmina própria 6,5 ± 1,0 Epitélio Seminífero 40,34 ± Lúmen 8,71 ± 6,38 Compartimento Intersticial 43,15 ± 23,99 Células de Leydig 0,09 ± 0,18 Tecido conectivo 42,96 ± 24,06 Vasos Testiculares 0,09 ± 0,18 Diâmetro Tubular (µm) 164 ± 7,60 Altura do epitélio seminífero (µm) 46,80 ± 7,78 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BEATTIE, P. J.; WELSH, M. J.: BRABEC, M. J. The effect of 2-methoxyethanol and methoxyacetic acid on Sertoli cell lactate production and protein synthesis in vivo.toxicology, andappliedpharmacology, v. 76, n. 1, p , COSTA, D.S. Análise morfofuncional da espermatogênese e características seminais de Catetos (Tayassutajacu) f. Tese (Doutorado) - Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte. IGDOURA, S.A.; WIEBER, J.P. suppression of spermatogenesis by low-level glycerol treatment. Journal of Andrology, v.15, n.3, p , LEAL, M.C.; BECKER-SILVA, S.C.; CHIARINI-GARCIA, H. FRANCA, L.R. Sertoli cell efficiency and daily sperm production in goats (Capra hircus). Anim. Reprod. v. 1, p , LEITE, E.R.; SIMPLICIO, A.A. Importância econômica da produção de caprinos eovinos no Nordeste Brasileiro. Acesso em: 09 março de Disponivel em: MACHADO JÚNIOR, A.A.N.; OLIVEIRA, L.SL.; ASSIS NETO, A.C.; ALVES, F.R.; 411

124 MIGLINO, M.A.; CARVALHO, M.A.M. Spermatogenesis in goats with and wtihout scrotum bipartition. Animal Reproduction Science, v. 130, p , MARTINS, J.A.M.; SOUZA, C.E.A.; CAMPOS, A.C.N.; AGUIAR, G.V.; LIMA, A.C.B.; ARAUJO, A.A.; NEIVA, J.N.M.; MOURA, A.A.A. Biometria do trato reprodutor e espermatogenese em ovinos sem padrão racial definido. Archives Zootecnia v. 57, n. 220, p , MASCHARENHAS, R. M.; PAULA, T. A. R.; MATTA, S. L. P.; LANNA, L. L.; FONSECA, C. C.; NEVES, M. T. D.; Morfometria macro e microscópica e índices somáticos dos componentes testiculares de cães sem raça definida, da puberdade à senilidade. Revista Ceres p MRUK, D.D.; CHENG, C.Y. Sertoli-sertoli and Sertoli-germ interaction and their significance in germ cell movement in the seminiferous epithelium during spermatogenesis. Endocrine Reviews, v. 25, n.5, p ,

125 Influência do efeito macho na taxa de gestação de cabras da raça Anglo-nubiana Influence of male effect on pregnancy rate of goat Anglo-Nubian breed Allan Andrade Rezende* 1 ; Rebeca Santos da Silva 1 ; Maíra Oliveira Paixão 1 ; Leopoldo Mayer de Freitas Neto 2 ; Roniery Carlos G. Galindo 1 ; Antonio Matos Fraga Junior 1 1 Depto. de Medicina Veterinária da Faculdade Pio Décimo, Aracaju, SE 2 Médico Veterinário Autônomo, João Pessoa, PB * allan_a.rezende@hotmail.com ABSTRACT The experiment was conducted to evaluate pregnancy rates in goats, checking the effect of the male reproductive efficiency through its practical applicability in dairy goats. The male effect is the removal of the male from the herd and reintroduced in about 60 days later, causing a high percentage of estrus on females in 72 hours. A total of 120 pluriparous Anglo-Nubian breed, 24 to 60 months old, in semi-extensive systems where sanitary measures were adopted for the welfare of the animals. The goats were evaluated for body condition score and ultrasound examinations were performed to examine the reproductive status of females. Females were divided randomly into three groups G1, totally away from the female male (non-contact visual, auditory or olfactory), G2: 300 m away from the male and G3: 50 m distance from the male (with eye contact, auditory and olfactory). Pregnancy diagnosis was performed by transrectal ultrasonography (SSD-500, Aloka Co. Ltd., Japan) coupled to a linear transducer of 5 Mhz 21 days after AI. Key words: male effect, goat, reproduction, gestation Palavras-chave: Efeito macho, cabra, reprodução, gestação INTRODUÇÃO A sincronização e indução do estro em cabras podem ser conseguidas através de métodos hormonais ou natural. O método natural apresenta um custo reduzido, porém não provoca o estro e a ovulação com precisão e a sua aplicação é mais restrita a determinadas épocas do ano, outono e inverno. Porém, como o Nordeste brasileiro situa-se próximo a linha do Equador esse fator não influencia significativamente (Neves & Luz, 1996). A cabra utiliza os sentidos do olfato, visão, audição e tato, para perceber os 413

126 estímulos, através dos receptores olfativos existentes nelas. Entretanto diferentes sinais sensitivos poderem atuar sozinhos nos resultados positivos da bioestimulação, o efeito máximo pode ser em muitos casos constatado, quando os efeitos atuam de forma sinérgica. (Rosa; Bryant, 2002). O experimento teve por objetivo avaliar as taxas de gestação em cabras, verificando a eficiência reprodutiva do efeito macho, através da sua aplicabilidade prática nos rebanhos caprinos. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado no Município de Sertânia-PE, foram utilizadas 120 fêmeas pluríparas da raça Anglo-Nubiana, com 24 a 60 meses de idade criadas em sistema semi-extensivo. As fêmeas foram dividas aleatoriamente em três grupos G1 (n:40): fêmeas totalmente afastadas do macho (sem contato visual, auditivo ou olfativo), G2 (n:40): distância de 300 m do macho e G3 (n:40): distância de 50 m do macho (com contato visual, auditivo e olfativo). Foram utilizados três reprodutores com idade de 24 a 48 meses, no dia anterior ao início do experimento, foi feito o exame andrológico recomendado pelo CBRA (1998) para confirmação da capacidade reprodutiva. A relação reprodutor:fêmea foi estabelecida 1:40 sendo o reprodutor introduzido no rebanho, com uma mistura de graxa e tinta xadrez na região do esterno com o intuito de identificar as fêmeas acasaladas. O diagnóstico de gestação foi realizado por ultrassonografia transretal (SSD- 500; Aloka Co. Ltda, Japão) acoplado a um transdutor linear de 5 Mhz após 21 dias da IA. A análise estatística foi realizada por meio do programa estatístico SPSS 10.0 for Windows. As diferenças entre os tratamentos foram testadas pelo modelo linear de variância (ANOVA) e pelo teste t de Student com nível de significância de 5%. RESULTADOS E DISCUSSÃO As taxas de gestação observadas não diferiram entre os grupos (tabela 1). Em clima tropical, Stagnaro (1974) obteve fertilidade de 47% e prolificidade de 1.1 em zonas áridas da Venezuela, porém quando em 1993 o autor utilizou o efeito macho em animais que foram suplementadas nutricionalmente, com condições corporais entre

127 e 5.0, obteve êxito e alcançou melhores resultados com 82,4% de parições e com 1,6 crias ao parto em sistema semi-intensivo na mesma zona climática. Tabela 1. Taxa de prenhez das cabras da raça Anglo-Nubiana em cada um dos níveis de afastamento do macho Afastamento Taxa de prenhez % Totalmente afastado 85 (34/40) a Contato visual, auditivo e olfativo 90 (36/40) a Afastado a 300m 75 (30/40) a Médias, na mesma linha, seguidas de letras diferentes, são diferentes (P<0,05) pelo teste Quiquadrado CONCLUSÃO Os resultados obtidos com a utilização do efeito macho para indução e sincronização do estro em cabras são similares, aos obtidos com a utilização de tratamentos hormonais, com a vantagem do seu custo quase nulo e da ausência de resíduos hormonais. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS STAGNARO, C.G. Control hormonal del ciclo estrual en cabras criollas.1 Sincronización artificial del celo antes de la estación sexual principal com Esponjas vaginales impregnadas con cronolone (SC 9880) e inyección gonadotrópica (PMS). Cien. Vet.,v.4, p ,1974. ROSA, H. J. D.; BRYANT, M. J. The ram effect as away of modifying the reproductive activity in the ewe. Small Ruminant Research, v. 45, p. 1-16, COLÉGIO BRASILEIRO DE REPRODUÇÃO ANIMAL -CBRA. Manual para exame andrológico e avaliação de sêmen animal. 2.ed. Belo Horizonte, p. NEVES, J. P. et al. Biotecnologia da reprodução em ovinos: inseminação artificial. In: XXXIII Reunião anual da Sociedade Brasileira de Zootecnia - II Semana de Caprinocultura e Ovinocultura. Anais... p ,

128 Influência do efeito macho na taxa de prenhez nas categorias primíparas e pluríparas de cabras Anglo-Nubiana Influence of male effect in probability of pregnancy in the categories of primiparous and pluriparous Anglo-Nubian goats Rebeca Santos da Silva* 1 ; Allan Andrade Rezende 1 ; Maíra Oliveira Paixão 1 ; Leopoldo Mayer de Freitas Neto 2 ; Roniery Carlos G. Galindo 2 ; Antonio Matos Fraga Junior 2 1 Depto. de Medicina Veterinária da Faculdade Pio Décimo, Aracaju, SE 2 Médico Veterinário Autônomo, João Pessoa, PB * beca19silva@hotmail.com ABSTRACT The experiment was conducted to evaluate pregnancy rates in goats in the categories primiparous and pluriparous using the male effect. The male effect is the removal of the male from the herd and reintroduced in about 60 days later, causing a high percentage of estrus on females in 72 hours. A total of 120 pluriparous Anglo-Nubian breed, 24 to 60 months old, in semi-extensive systems where sanitary measures were adopted for the welfare of the animals. The goats were evaluated for body condition score and ultrasound examinations were performed to examine the reproductive status of females. Females were divided randomly into three groups G1, totally away from the female male (non-contact visual, auditory or olfactory), G2: 300 m away from the male and G3: 50 m distance from the male (with eye contact, auditory and olfactory). Pregnancy diagnosis was performed by transrectal ultrasonography (SSD-500, Aloka Co. Ltd., Japan) coupled to a linear transducer of 5 Mhz 21 days after AI. Key words: Male effect; animal category; estrus Palavras-chave: Efeito macho; categoria animal; estro INTRODUÇÃO A eficiência da produção está diretamente relacionada com o desempenho reprodutivo da matriz, do êxito no desenvolvimento dos cordeiros e do valor nutricional que é ofertado aos animais. (Siqueira, 1990; Pilar et al., 2002). O efeito macho é bastante recomendado na estação de monta, em pequenos intervalos e sistemas de produção ao longo do ano, por se obter um resultado reprodutivo satisfatório. Vale ressaltar a cautela que deve ser tomada com o primeiro 416

129 estro do animal, por ser um período de baixa fertilidade, de acordo com Otto (1998), após a introdução do macho, o segundo estro é considerado o mais fértil. Assim, um método bastante utilizado é a presença de um macho estéril entre as fêmeas, denominado rufião, em um espaço de tempo entre uma a duas semanas antes de inserir os machos férteis, ao reintroduzi-lo um número expressivo de fêmeas ovulam em 72 horas (Simplício et al., 2007). O experimento teve por objetivo avaliar as taxas de gestação em cabras nas categorias primíparas e pluríparas com a utilização do efeito macho. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado no Município de Sertânia-PE, foram utilizadas 60 fêmeas primíparas (12-18 meses) e 60 pluríparas (24-36 meses) da raça Anglo-Nubiana criadas em sistema semi-extensivo. Um dia antes do início dos experimentos, as cabras foram avaliadas quanto ao escore de condição corporal, pesadas e identificadas com brincos plásticos enumerados. Com relação aos reprodutores foram utilizados três reprodutores com idade de 24 a 48 meses no dia anterior ao início do experimento, foi feito o exame andrológico recomendado pelo CBRA (1998) para confirmação da capacidade reprodutiva. As fêmeas foram dividas aleatoriamente em três grupos G1: fêmeas totalmente afastadas do macho (sem contato visual, auditivo ou olfativo) G2: distância de 300 m do macho e G3: distância de 50 m do macho (com contato visual, auditivo e olfativo). O diagnóstico de gestação foi realizado por ultrassonografia transretal (SSD- 500; Aloka Co. Ltda, Japão) acoplado a um transdutor linear de 5 Mhz após 21 dias da IA. A análise estatística foi realizada por meio do programa estatístico SPSS 10.0 for Windows. As diferenças entre os tratamentos foram testadas pelo modelo linear de variância (ANOVA) e pelo teste t de Student com nível de significância de 5%. RESULTADOS E DISCURSSÃO Os resultados obtidos (Tabela 1) estão condizentes com as de estações de reprodução por monta natural e semelhante às relatadas por Espeschit (1998) com 80% de parição em cabras submetidas ao efeito macho, mas diferindo dos achados de Ritar (1993) com relação ao tipo de parto, onde afirma que o uso do efeito macho reduz a 417

130 possibilidade de ocorrência de partos múltiplos e no estudo a taxa de partos múltiplos foi de 64,54%. Tabela 1. Taxa de prenhez das cabras da raça Anglo-Nubiana por categoria em cada um dos níveis de afastamento do macho Taxa de prenhez Primíparas Multíparas G1 G2 G3 G1 G2 G3 85% (17/20) a 80% (16/20) 70% (14/20) 80% (16/20) 90% (18/20) 75% (15/20) Médias, na mesma linha, seguidas de letras diferentes, são diferentes (P<0,05) pelo teste Quiquadrado CONCLUSÃO Conclui-se que a utilização do efeito macho em cabras da raça Anglo-nubiana foi satisfatório, pois promoveu a sincronização do estro alcançando índices comparáveis aos de tratamentos hormonais tendo a vantagem de custo quase nulo. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS COLÉGIO BRASILEIRO DE REPRODUÇÃO ANIMAL -CBRA. Manual para exame andrológico e avaliação de sêmen animal. 2.ed. Belo Horizonte, p. ESPESCHIT, C.J.B. Alternativas para controle da estacionalidade reprodutiva de cabras leiteiras. In: ENCONTRO NACIONAL PARA O DESENVOLVIMENTO DA ESPÉCIE CAPRINA, 5., 1998, Botucatu. Anais..., p OTTO de SÁ, C. Manejo reprodutivo para intervalo entre partos de oito meses; VI Simpósio Paulista de Ovinocultura; Anais do...; Botucatu-SP; novembro; p PILAR, R. C., PÉREZ, J. R. O., SANTOS, C. L. Manejo reprodutivo da ovelha recomendações para uma parição a cada 8 meses. Boletim Agropecuário, São Paulo, n.50, 2002, 28p. SIMPLÍCIO, A. A.; FREITAS, V. J. F.; FONSECA, J. F. Biotécnicas da reprodução como técnicas de manejo reprodutivo em ovinos. Revista Brasileira de Reprodução Animal, Belo Horizonte, v.31, n.2, p, , SIQUEIRA, E. R. Estratégias de alimentação do rebanho e tópicos sobre produção de carne ovina. In: Produção de Ovinos. Jaboticabal: FUNEP, p ,

131 Influência do período do ano sobre a espermatogênese em ovinos: Resultados parciais Influence of the year period on the spermatogenesis in ovine: Partial results George Fernando Miranda Pinheiro 1* ; Antonio Augusto Nascimento Machado Júnior 1 ; Juanna D Arc Fonseca dos Santos 1 ; Raffael Oliveira Eufrasio 1 1 Universidade Federal do Piauí * George-Pinheiro@hotmail.com ABSTRACT The aim of the study was to evaluate spermatogenesis in testicles of ovine in different periods of the year. The testicles was fixed is Bouin and processed for the light microscopy. Were quantified the different type cell of the seminiferous epithelium and evaluated the spermatogenic efficiency. The spermatogonium number were 11, Pachytene primary spermatocyte number were 17.72, the round spermatide were 36.36, the mitotic efficiency were 1.64, meiotic efficiency 2.11 and general spermatogenesis efficiency It was concluded then that the results showed mostly lower than those found by other authors. Key words: rams; testicle; germ cell Palavras-chave: ovinos; testículo; células germinativas INTRODUÇÃO Conhecer a função reprodutiva, em especial a espermatogênese, dos animais apresenta como principal vantagem permitir a identificação de variações na fisiologia testicular frente a condições experimentais ou patológicas (França & Russell, 1998). Objetivou-se avaliar o rendimento da espermatogênese em ovinos em diferentes períodos do ano em Bom Jesus-PI. MATERIAL E MÉTODOS Foram utilizados 08 testículos de ovinos sem raça definida adquiridos de abatedouros localizados em Bom Jesus PI coletados durante o período quente (setembro a novembro/2011). Os testículos foram fixados em solução de Bouin processados para microscopia de luz. A quantificação dos diferentes tipos celulares foi obtida em 20 secções transversais de túbulos seminíferos, no estádio 1 do CES, em 419

132 aumento de 400x. O rendimento espermatogênese foi determinado por meio das seguintes razões: 1. Rendimento ou coeficiente de eficiência de mitoses: calculado pelas razões entre espermatócitos primários em paquíteno e espermatogônia no estágio 1; 2. Rendimento meiótico: calculado pela razão entre espermátide arredondada e espermatócito primário em paquíteno no estágio 1; 3. Rendimento geral da espermatogênese: calculado pela razão entre espermátides arredondada e espermatogônia no estágio 1. RESULTADOS E DISCUSSÃO O número total corrigido de espermatogônias encontrado para os ovinos foi de 11 ± 2,48, sendo esse valor superior ao relatado por Costa et al. (2007) para o queixada. O valor observado para o número de espermatócitos primários foi de 17,72 ± 3,43, semelhante ao relatado por Queiroz & Cardoso (1989), no período quente, para carneiros deslanados. A quantidade de espermátides arredondadas encontrada por secção transversal de túbulo seminífero (36,36 ± 11,25) foi menor que o relatado por Machado Júnior et al. (2012) para caprinos. O rendimento mitótico encontrado para os ovinos foi de 1,64 ± 0,29 espermatócitos primários para cada espermatogônia. O rendimento meiótico apresentou valor de 2,11 ± 0,71 espermátides arredondadas para cada espermatócito primário. O rendimento geral da espermatogênese expressou um valor de 3,42 ± 1,2 espermátides para cada espermatogônia. Com exceção do rendimento mitótico, todos os demais rendimentos foram menores que o relatado por Machado Júnior et al. (2012) para caprinos. CONCLUSÃO Com base nos resultados parciais da pesquisa, conclui-se que os valores encontrados encontram-se, em sua maioria, foram menores aos resultados obtidos por outros autores, sendo importante sobrepujar que estes resultados são parciais e a complementação dos dados referente o período chuvoso é de suma importância para a completa compreensão dos dados. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS COSTA, D.S.; MENEZES, C.M.C.; PAULA, T.A.R. Spermatogenesis in whitelipped peccaries (Tayassu pecari). Animal Reproduction Science, v. 98, p , 420

133 2007. FRANÇA, L.R.; RUSSELL, L.D. The testis of domestic animals. In: REGADERA, J.; MARTINEZ-GARCIA (Ed.). Male Reproduction, p MACHADO JÚNIOR, A.A.N.; OLIVEIRA, L.SL.; ASSIS NETO, A.C.; ALVES, F.R.; MIGLINO, M.A.; CARVALHO, M.A.M. Spermatogenesis in goats with and wtihout scrotum bipartition. Animal Reproduction Science, v. 130, p , QUEIROZ, G.C.; CARDOSO, F.M. Avaliação histológica do rendimento da espermatogênese de carneiros deslanados adultos. Revista Brasileira de Reprodução Animal, v. 13, n. 2, p ,

134 Influência do período seco ou chuvoso sobre a integridade da membrana plasmática e da integridade do acrossoma e função mitocondrial de espermatozoides de carneiros Dorper e Santa Inês Influence of the dry and rainy season on the plasma membrane integrity and acrosome integrity and mitochondrial function of spermatozoa from Dorper and Santa Inês rams José Adalmir Torres de Souza 1 *; Marlon de Araújo Castelo Branco 1 ; Ícaro Oliveira Torres de Souza 1 ; Yndyra Nayan Teixeira Carvalho 1 1 Laboratório de Biotecnologia da Reprodução Animal Universidade Federal do Piauí. * adalmir@ufpi.edu.br ABSTRACT To assess the integrity of the plasma membrane, acrosome and mitochondrial activity of spermatozoa of Dorper and Santa Inês sheep during the rainy season and dry, we used fluorescent markers in the semen of 12 adult sheep were divided into two groups of six animals each. The Integrity of the plasma membrane during the rainy season (39.08 ± 8.3, ± 6.3) and in the dry season (36.28 ± 5.6, ± 7.2), as well as the integrity of the acrosome during the rainy season (39.80 ± 5.2, ± 3.6) and dried (34.12 ± 4.8, ± 3.8) and mitochondrial activity in the rainy season (37.36 ± 5.8, ± 2.8) and dried (42.76 ± 5.6, ± 4.6) were, respectively, of the Dorper and Santa Inês. The plasma membrane integrity was better (P < 0.05) in the Santa Ines than in the Dorper breed in the dry period. The other parameters did not differ. Key words: Sheep; semen; sperm structure. Palavras-chave: Ovino; sêmen; estrutura espermática. INTRODUÇÂO Com um efetivo de 9,5 milhões de cabeças (IBGE, 2009), a ovinocultura tornase um componente importante da produção pecuária do nordeste brasileiro. O carneiro é um animal que manifesta estacionalidade reprodutiva a qual pode ser avaliada pela variabilidade anual de algumas características seminais quantitativas e qualitativas (Ibrahim, 1997). Em regiões de clima tropical, a alta temperatura ambiental, observada no período seco, é o principal fator limitante à eficiência reprodutiva, por interferir na termorregulação testicular, repercutindo negativamente na espermatogênese e, 422

135 consequentemente, na qualidade do sêmen (Chemineau et al., 1991). Altas temperaturas afetam, sobretudo, a produção de espécies reativas do oxigênio (ROS), que irão lesar as estruturas espermáticas, sendo as características, motilidade, vigor e morfologia espermática, as mais afetadas (Moreira et al., 2001). O trabalho objetivou avaliar, por meio de marcadores fluorescentes, a integridade do acrossoma e da membrana plasmática e a função mitocondrial de espermatozoides de carneiros Dorper e Santa Inês nos períodos seco e chuvoso na região Norte do Piauí. MATERIAL E MÉTODOS As colheitas de sêmen foram realizadas no município de Teresina PI com latitude de 5 5'20 sul e longitude de 42 48'07 oeste, em dois períodos distintos do ano, classificadas de acordo com o índice pluviométrico, como período chuvoso, correspondente aos meses de janeiro a abril (precipitação pluviométrica= 279,7 mm/mês e temperatura media de 26,3ºC) e período seco, correspondente aos meses de agosto a novembro (5,6 mm/mês e 32,46 ºC), de acordo com os dados fornecidos pela EMBRAPA/MEIO-NORTE. Foram utilizados 12 carneiros com idade entre 2 a 3 anos, sendo seis da raça Dorper e seis da raça Santa Inês. O sêmen foi obtido por meio de vagina artificial e avaliado quanto aos aspectos macroscópicos (volume e aspecto) e microscópicos (turbilhonamento, motilidade e vigor), além da concentração e morfologia espermática. O sêmen foi diluído em Tris-Gema, de modo a preservar uma concentração mínima de 30 milhões de células por palheta de 0,25 ml. Após envasadas e identificadas, as palhetas foram congeladas em máquina automatizada (TK3000) e armazenadas em botijão criogênico ( C). Após descongelação (37 o C / 30 segundos) as amostras foram avaliadas quanto à motilidade e vigor, e, uma vez consideradas viáveis, foram avaliadas a integridade do acrossomo (marcador florescente FITC-PNA), membrana plasmática (associação de Diacetato de Carboxifluoresceína e Iodeto de Propídio) e função mitocondrial (marcador JC-1), em 200 espermatozoides por lâmina, sobre microscopia de epifluorescência. A comparação das médias foi realizada pelo teste de Tukey. 423

136 RESULTADOS E DISCUSSÂO A integridade da membrana plasmática dos espermatozoides de carneiros da raça Dorper e Santa Inês avaliadas no período chuvoso e seco apresentaram diferença significativa (P < 0,05) apenas entre as raças no período seco, onde a raça Santa Inês teve valores de integridade da membrana plasmática (46.04 ± 7,2 %) superiores a raça Dorper (36.28 ± 5,6). As avaliações do sêmen demonstraram que os parâmetros integridade do acrossoma e atividade mitocondrial não foram influenciados pelo período e raça. Segundo Bittencourt (1999), um dos fatores mais importantes na avaliação da morfologia é a integridade do acrossoma, a qual é indispensável para uma boa fertilização. Tabela 1. Médias e desvios-padrão das características estruturais da célula espermática do sêmen congelado de ovinos Dorper e Santa Inês nos períodos seco e chuvoso. Parâmetro Raça Período Chuvoso Seco Integridade da membrana Dorper ±8,3aA ± 5,6 aa plasmática (%) Santa Inês ± 6,3aA ± 7,2aB Integridade do acrossoma (%) Dorper ±5,2 aa ± 4,8aA Santa Inês ± 3,6aA ± 3,8a A Atividade de mitocondrial Dorper ± 5,8aA ± 5,6aA (%) Santa Inês ±2,8 aa ± 4,6aA * Médias comparadas pelo teste de Tukey (p<0,05) * Letra minúscula refere-se ao período; ** letra maiúscula refere-se à raça. CONCLUSÕES Os animais da raça Santa Inês apresentam melhor integridade da membrana plasmática no período seco em comparação aos animais da raça Dorper. A integridade do acrossoma e atividade mitocondrial não sofreram influência entre as raças e entre os períodos estudados. 424

137 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS INSTITUTO BRASILEIRO DE GEOGRAFIA E ESTATÍSTICA. Pesquisa Pecuária Municipal Disponível em: Acesso em: 23 fev IBRAHIM, S. Seasonal variations in semen quality of local and crossbred rams raised in United Arab Emirates. Animal Reproduction Science, v. 49, p , CHEMINEAU P, CAGNIÉ Y, GUÉRIN Y, ORGEUR P, VALLET J-C. Training manual on artificial insemination in sheep and goats. Rome: FAO, p. (FAO Animal Production and Health, n.83). MOREIRA E. P, MOURA A. A. A, ARAÚJO A. A. Efeito da insulação escrotal sobre a biometria testicular e parâmetros seminais em carneiros da raça Santa Inês criados no estado do Ceará. Rev Bras Zootec, v.30, p , BITTENCOURT, R. F.; RIBEIRO FILHO, A. DE L.; SANTOS, A. D. F. et al. Utilização do teste hiposmótico para avaliar a eficácia de diferentes protocolos de criopreservação do sêmen caprino. Ciência Animal Brasileira, v. 6, p ,

138 Influência do sistema de cultivo sobre o desenvolvimento in vitro de folículos préantrais caprinos Influence of culture system on in vitro development of goat preantral follicles Victor Reis Galindo* 1, Ivina Rocha Brito 1, Cleidson Manoel Gomes da Silva 1, Giovanna Quintino Rodrigues 1, Isadora Machado Teixeira Lima 1 e José Ricardo de Figueiredo 1. 1 Universidade Estadual do Ceará UECE * victorgalindo91@hotmail.com ABSTRACT The aim of this study was to verify whether the development of goat preantral follicles in vitro is affected by culture system (two or three-dimensional) or by concentration of alginate. Thus, follicles were cultured in bi-dimensional control treatment (in absence of alginate), or encapsulated in alginate (0.5% or 1.0%). It was verified that encapsulated follicles showed higher percentage of survival compared to control (P<0.05). On the other hand, bi-dimensional control treatment was capable of promoting a higher percentage of antrum formation than control treatment (P<0.05). It was not verified, in both evaluated parameters, the influence of alginate concentration after 18 days of culture. In conclusion, the culture system influences the surviving and antrum formation of goat preantral follicles cultured in vitro. Keywords: Alginate; three-dimensional culture; preantral follicles; caprine. Palavras-chave: Alginato; cultivo tridimensional; folículos pré-antrais; caprinos. INTRODUÇÃO Os folículos podem ser cultivados em dois sistemas: bidimensional (2D - diretamente sobre um substrato), ou tridimensional (3D - inclusos em uma matriz). Diversos tipos de matrizes podem ser utilizados para o cultivo 3D, contudo, o alginato, um biopolímero natural extraído de algas pardas, tem sido utilizado no cultivo folicular, obtendo-se bons resultados, devido à sua ausência de bioatividade e à sua biocompatibilidade (Heise et al., 2005). Contudo, em caprinos ainda não há estudos utilizando o sistema tridimensional para o cultivo in vitro de folículos pré-antrais. Dessa forma, este trabalho tem como 426

139 objetivo avaliar se o cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos inclusos em diferentes concentrações de alginato afeta o seu desenvolvimento. MATERIAL E MÉTODOS Os ovários (n=55) de cabras adultas sem padrão racial definido, foram coletados em abatedouro local e transportados para o laboratório a 4 C, no período de 1 hora. No laboratório, folículos pré-antrais com diâmetro 200 m foram mecanicamente isolados e distribuídos aleatoriamente entre os tratamentos: Controle bidimensional (ausência de alginato) ou encapsulados em alginato nas concentrações de 0,5% (ALG. 0,5%) e 1% (ALG. 1%). Para o controle bidimensional, os folículos foram cultivados individualmente em gotas de 100 µl, disposta em placas de Petri (60 x 15 mm) e cobertas com óleo mineral. Para os demais tratamentos, os folículos foram encapsulados em 5 µl de alginato e cultivados individualmente em placas de 48 poços, contendo 300 µl de meio por poço. A troca parcial de meio foi feita a cada dois dias, sendo de 60 µl para o controle e de 150 µl para os tratamentos com alginato. O cultivo foi realizado por 18 dias, a 39 C e 5% de CO 2. O meio utilizado consistiu de α-mem suplementado com 3 mg/ml de BSA, ITS (10 ng/ml de insulina, 5,5 µg/ml de transferrina e 5 ng/ml selênio), 2 mm de glutamina, 2 mm de hipoxantina, 50 μg/ml de ácido ascórbico e FSH sequencial (100 ng/ml: Dia 0 Dia 6, 500 ng/ml: Dia 6 Dia 12, 1000 ng/ml: Dia 12 Dia 18). Antes e após o período de cultivo, os folículos foram avaliados e classificados de acordo com a sobrevivência e formação de antro. Os dados foram analisados por dispersão de frequência, expressos em percentagens e comparados por Qui-quadrado. Os valores foram considerados significativos quando P<0,05. RESULTADOS E DISCUSSÃO Com relação à sobrevivência, ao término do cultivo, verificou-se que o tratamento ALG. 1% (92,11%) apresentou um percentual significativamente superior ao controle (76,62%), mas similar ao ALG. 0,5% (85,90%). Estudos utilizando folículos pré-antrais de camundongas (West et al., 2007) e macacas (Xu et al.,2009) têm mostrado que o cultivo 3D utilizando alginato foi eficiente em manter a sobrevivência. De fato, esse sistema permite a preservação da arquitetura folicular de forma semelhante à encontrada no ovário (Benton et al., 2009). 427

140 No que se refere à formação de antro, após 18 dias de cultivo, verificou-se que o controle (72,73%) apresentou-se significativamente superior quando comparado aos demais tratamentos (ALG. 0,5%: 56,41% e ALG. 1%: 51,32%), não sendo observada diferença entre os grupos utilizando alginato. Alguns autores sugerem que folículos encapsulados requerem um tempo de cultivo maior para se desenvolver, em relação a folículos não encapsulados (Xu et al., 2006). Por outro lado, estudos têm demonstrado que a densidade da matriz afeta a formação de antro, uma vez que limita a passagem de moléculas até o folículo. Além disso, a matriz forma uma barreira física que pode impedir a expansão do folículo (West et al., 2007). CONSIDERAÇÕES FINAIS O presente estudo mostrou que, independente da concentração de alginato, o cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos em sistema tridimensional, é eficaz na manutenção da sobrevivência, porém, retarda a formação de antro folicular. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BENTON, G.; GEORGE, J.; KLEINMAN, H.K.; ARNAOUTOVA, I.P.; Advancing Science and Technology Via 3D Culture on Basement Membrane Matrix. Journal of Cellular Physiology, v. 221, p , HEISE, M.; KOEPSEL, R.; RUSSELL, A.J.; MCGEE, E.A.; Calcium alginate microencapsulation of ovarian follicles impacts FSH delivery and follicle morphology. Reproductive Biology Endocrinology, v. 3, p , WEST, E.R.; XU, M.; WOODRUFF, T.K., SHEA, L.D. Physical properties of alginate hydrogels and their effects on in vitro follicle development. Biomaterials, v. 28, p , XU, M.; WEST, E.; SHEA, L.D.; WOODRUFF, T.K.; Identification of a stage-specific permissive in vitro culture environment for follicle growth and oocyte development. Biology of Reproduction, v. 75, p , XU, M.; WEST-FARRELL, E.R.; STOUFFER, R.L.; SHEA, L.D.; WOODRUFF, T.K.; ZELINSKI, M.B.; Encapsulated three-dimensional culture supports development of nonhuman primate secondary follicles. Biology of Reproduction, v. 81, p ,

141 Integridade da membrana plasmática do espermatozoide caprino diluído em ACP- 101 adicionado com gema de ovo ou extrato de soja Integrity plasma membrane of goat spermatozoa extended in ACP-101 added with egg yolk or soybean Nayra Carvalho Bandeira 1* ;Juliana de Souza Fernades 1 ; Cleyson Teófilo Braga Filho 1 ; Talita Soares Câmara 1 ; Gyselle Viana Aguiar 1 ; José Ferreira Nunes 1 1 Faculdade de Veterinária/UECE; * nayracarvalhob@hotmail.com ABSTRACT This study aimed to evaluate the cryoprotectant efficiency of egg yolk and soybeans extract for goat sperm membrane extended in powder coconut water (ACP-101 ) solution. Four pools of goat semen were collected in artificial vagina and extended in solution based in ACP-101 added with egg yolk or soybeans extract and cooled. When the semen arrived at 4 C (0h) and 24 hours later (24h), 10 µl of semen was placed in 100 µl hyposmotic solution and incubate (water-bath - 37 C) for 60 minutes. A 10 µl aliquot was observed in optical microscope (200x) and 200 cells was evaluated to verify the functional integrity of the sperm membrane. According to the results, difference between the cryoprotectant efficacy of egg yolk and soybeans extract was observed at 0h, but not at 24h. Then, both (egg yolk and soybeans extract) may be indicated for cryoprotect the sperm membrane in ACP-101 solution. Keywords: semen; cooling; diluents; cryoprotectants; hypoosmotic test. Palavras-chave: sêmen; resfriamento; diluidor; crioprotetores; teste hiposmótico. INTRODUÇÃO Devido a atual necessidade no controle de doenças, a supressão de substâncias de origem animal em meios de conservação de sêmen tem sido sugerida, a fim de garantir a segurança sanitária nos processos biológicos (BOUSSEAU et al., 1998), fazendo com que a procura por um substituto para a gema de ovo seja intensificada. Em virtude disso, a lecitina da soja, por possuir uma fração de lipoproteína de baixa densidade semelhante à encontrada na gema de ovo, pode ser uma alternativa interessante. A integridade da membrana plasmática (CHEMINEAU et al., 1991) pode ser verificada pelo teste hiposmótico, que avalia a atividade bioquímica da membrana 429

142 celular intacta, sendo uma importante ferramenta para predizer a capacidade de fertilização do sêmen. O objetivo do trabalho foi comparar o extrato de soja com a gema de ovo como crioprotetores externos de espermatozoides caprinos diluídos em solução à base de água de coco em pó (ACP-101 ), resfriados a 4 ºC por 24 horas, avaliando a integridade de membrana utilizando o teste hiposmótico. MATERIAIS E MÉTODOS O experimento foi realizado no Laboratório de Tecnologia do Sêmen Caprino e Ovino da UECE, com latitude de 3º43 47 sul e longitude de 38º30 37 oeste e altitude de 16 metros acima do nível do mar. O ejaculado de quatro caprinos adultos (Saanen) com idade entre 1,5 a 3 anos, foi coletado de uma vez por semana para formação de um pool, totalizando quatro coletas por animal. O pool foi dividido em duas alíquotas que foram diluídas (1:9 - sêmen:diluidor) em soluções à base de água de coco em pó (ACP- 101 ) preparada seguindo a recomendação do fabricante (ACP Biotecnologia) adicionadas de 10% de gema de ovo (ACP-gema) ou 10% extrato de soja (ACP-soja). O sêmen diluído foi resfriado a uma taxa de -0,35 C por minuto até 4 C. Após atingir a temperatura de resfriamento (T0) e 24 horas depois (T24), 10µL do pool de sêmen diluído foi incubada em 100 µl de solução hiposmótica (100 mosmol/kg) por 60 minutos em banho-maria (37ºC). Posteriormente, 10uL desta suspensão foi avaliada em microscópio óptico (200x) e 200 espermatozoides foram contados e classificados em endosmose positiva (membrana íntegra - cauda enrolada) e endosmose negativa (membrana danificada - cauda reta). Os dados foram expressos como media + desvio padrão e analisados por meio de ANOVA seguido pelo teste de Tukey (p<0,05) para identificar diferenças significativas utilizando o programa estatístico ASSITAT versão 7.6 beta (2012). RESULTADOS E DISCUSSÃO De acordo com os resultados na Tabela 1, é possível observar que ACP-gema somente apresentou resultados significativamente superiores ao ACP-soja no tempo de avaliação de 0h. Não foram observadas diferenças significativas entre os tratamentos ACP-gema e ACP-soja no tempo de 24h. Logo após o resfriamento foi observado diferença no percentual de espermatozóides com membrana íntegra, no sêmen diluído em ACP-gema ou ACP-soja, como esta diferença não foi observada às 24 horas de 430

143 conservação do sêmen caprino a 4 ºC, ambos podem ser igualmente recomendados para o resfriamento do sêmen caprino por até 24 horas. De acordo com ROOF et al. (2011), a lectina de soja se mostrou superior à gema de ovo, podendo ser eficaz na substituição da gema, mesmo em um intervalo inferior a 24 horas. Tabela 1. Percentual de espermatozoides com membrana íntegra do sêmen caprino diluído em ACP acrescido de gema de ovo (ACP-gema) ou extrato de soja (ACP-soja) resfriado a 4 C por 24 horas. Tempo 0h 24h % Membrana íntegra ACP-gema ACP-soja ACP-gema ACP-soja 62,8 a 52,25 b 62,5 a 54 ab Valores seguidos de letras minúsculas distintas na mesma linha diferem entre si (p<0,05). CONCLUSÃO Os resultados demonstram que o extrato de soja foi tão eficiente quanto a gema de ovo para criopreservar a integridade da membrana espermática do sêmen caprino diluído em ACP-101 e resfriado a 4 ºC por 48 horas. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS BOUSSEAU, S.; BRILLARD, J.P.; MARQUANT-LE GUIENNE, B.; GUÉRIN, B.; CAMUS, B.; LECHAT, M. Comparison of bacteriological qualities of various egg yolk sources and in vitro and in vivo fertilizing potential of bovine semen frozen in egg yolk or lecithin based diluents. Theriogenology, v.50, p , CHEMINEAU, P.; COGNIE, Y.; GUERIN, Y.; ORGEUR, P.; VALLET, J.C. Training Manual on Artificial Insemination in Sheep and Goats. Food and Agriculture Organization of the United Nations, Rome, Italy, 223p, D.J. ROOF, S.; BOWLEY, L.L.; PRICE, D.J.; MATSAS. Comparison of two commercial extenders for cryopreservation of goat semen without sperm washing. Theriogenology v.77, p ,

144 Melhora na produção de blastocisto em doadoras ovinas utilizando rbst Improved production of blastocysts in sheep donor using rbst Isôlda Márcia Rocha do Nascimento 1*, Antonio de Sousa Júnior 1, Ícaro Oliviera Torres de Souza 1, Luiz Harliton Cavalcante Mota 1, Yndyra Nayan Teixeira Carvalho 1, José Adalmir Torres de Souza 1 1 Universidade Federal do Piauí UFPI, Brasil * isoldamarcia@bol.com.br; ABSTRACT The objective was to evaluate the recombinant bovine somatotropin (rbst) effect on the quality of embryos in Santa Ines sheep embryo donors. 13 donors were used, randomly assigned to two groups, G1 (n = 07) and G2 (n = 06). In both groups, the donors were synchronized with vaginal device for 14 days and received 100μg of PGF 2α on day 7 and were superovulated, from the 12th day, with 250IU of FSH in six decreasing doses. On the day of implant removal the donor G2 received 125mg of rbst, and were covered by Santa Inês male every 12 hours until the end of estrus. In the sixth day after the first mating embryonic harvests were performed by laparotomy. The administration of rbst in the superovulation protocol caused a significant increase of embryos at the blastocyst stage. Key words: embryo; sheep; blastocyst Palavras-chave: embrião; ovelha; blastocisto INTRODUÇÃO Estudos recentes tem sugerido a utilização da somatotropina recombinante bovina (rbst) em protocolos de superovulação, por acreditar-se que a rbst aumenta o número de folículos antrais recrutados, melhorando a resposta superovulatória e o número de oócitos (Ramos et al., 2007). Esses estudos revelam que a rbst induz a produção do fator de crescimento semelhante à insulina tipo I (IGF-I) e que o aumento do IGF-I no fluido folicular melhora a qualidade do oócito, acelera o desenvolvimento embrionário, aumenta o número de células por embrião e diminui o número de estruturas não fertilizadas (Moreira et al., 2002). Esse aumento do número de células por embrião resulta em maior secreção de interferon-tau, promovendo um reconhecimento materno mais eficaz (Mann & Lamming, 2001). 432

145 Atualmente a rbst vem sendo utilizada em associação com vários hormônios, nos programas de superovulação das doadoras de embriões. Entretanto as informações sobre está utilização em ovelhas ainda são escassas. Objetivou-se com o presente trabalho avaliar o efeito da rbst sobre a qualidade de embriões em ovelhas da raça Santa Inês. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi conduzido no Setor de ovinocultura da Embrapa Meio-Norte, no município de Campo Maior/PI. Foram utilizadas 13 ovelhas Santa Inês, divididas, aleatoriamente, em dois grupos, G1 (n=07) e G2 (n=06), sincronizadas com dispositivo intravaginal (CIDR ) por 14 dias, receberam no 7 dia 100µg de PGF 2 (Ciosin ) e foram superovuladas com 250UI de FSH (Folltropin-V ) em seis doses decrescentes, a partir do 12 dia. No dia da retirada do implante as doadoras do G2 receberam 125mg de rbst (Boostin ). Caracterizada a manifestação do estro, as doadoras foram cobertas por monta natural, a cada 12 horas, até o final de estro. As colheitas embrionárias foram realizadas, por lapatoromia, no 6 dia após a 1 cobertura. Ao término da lavagem, o fluido uterino foi transferido para placa de Petri e observado em estereomicroscópio para contagem e classificação das estruturas recuperadas.o delineamento estatístico foi inteiramente ao acaso. Os dados de estágio de desenvolvimento, por não apresentarem normalidade ou homogeneidade, foram submetidos à análise não-paramétrica de Mann- Whitney. RESULTADOS E DISCUSSÃO A Tab. 01 demonstra que as doadoras com rbst tiveram um aumento de embriões em estágios de blastocisto. Montero-Pardo et al. (2011), também encontrou uma maior proporção de embriões na fase de blastocisto quando aplicou rbst em ovelhas. Talvez, a maior taxa de blastocisto deve-se a uma melhor qualidade de oócitos, pois a rbst promove uma expansão do cumulus pela proliferação de células e a inibição de apoptoses (Kolle et al., 2003), e, também, pela melhora na maturação nuclear e citoplasmática do oócito (Bevers & Izadyar, 2002). Demonstra também que não houve diferença estatística quanto ao estágio de mórula, entre os grupos de doadoras. O número de estruturas não fertilizadas, foi menor no grupo de doadoras tratadas com rbst, provavelmente devido ao fato de que em tratamentos superovulatórios os 433

146 folículos pré-ovulatórios produzem altos níveis de estrógenos, que modificam o ambiente tubário, aumentando a taxa de oócitos não fertilizados ou de embriões degenerados. Acredita-se que a IGFBP (Proteína Ligadora do Fator de Crescimento Semelhante à Insulina) induzido pela administração exógena da rbst module a produção do estrógeno, após o tratamento de superovulação, favorecendo assim a melhoria no ambiente tubário, consequentemente na fertilização (Folch et al, 2001). Tabela 01 Estruturas recuperadas em doadoras ovinas tratadas ou não com rbst no protocolo de superovulação. Estruturas Mediana Valor max. Valor min Recuperadas G1 G2 G1 G2 G1 G2 BL 1 b 3,5 a MO 3 a 3 a NF 2 b 0 a Letras distintas, na mesma coluna, indicam diferença pelo teste de Mann-Whitney (P<0,05). BL-Blastocisto; MO-Mórula; NF-Não Fecundado CONCLUSÕES Concluí-se que a rbst aplicada no final do protocolo de superovulação aumenta proporção de blastocisto e reduzem a quantidade de oócitos não fertilizados REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BEVERS, M.M.; IZADYAR, F. Role of growth hormone and growth hormone receptors in oocyte maturation. Mollecular Cell Endocrinology, v.197, p , FOLCH, J.; RAMON, J.P.; COCERO, J.L.; Exogenous growth hormone improves the number of transferable. Theriogenology, v.55, n. 9, p , 200l. KOLLE, S.; STOJKOVIC, M.; BOIE. G.; SINOWATZ, F.; Growth hormone related effects on apoptosis, mitosis, and expression of connexin 43 in bovine in vitro maturation cumulus-oocyte complexes. Biology Reproduction, v. 68, p , MANN G.E.; LAMMING G.E.; Relationship between maternal endocrine environment, early embryo development and inhibition of luteolytic mechanism in cows. Reproduction, v. 121, n. 1, p ,

147 MOREIRA F.; BADINGA L.; BURNLEY C.; THATCHER W.W. Bovine somatotropin increases embryonic development in superovulated cows and improves post-transfer pregnancy rates when given to lactating recipient cows. Theriogenology, v. 57, n.4, p , 2002 MONTERO-PARDO A., HERNÁNDEZ-CERÓN J., ROJAS-MAYA S., VALENCIA J.,RODRÍGUEZ-CORTEZ A., GUTIÉRREZ C.G. Increased cleavage and blastocyst rate in ewes treated with bovine somatotropin 5 days before the end of progestin-based estrous synchronization. Animal Reproduction Science, v.125, n.1, p , 2011 RAMOS, A.A.; FERREIRA, A.M.; SÁ, W.F.; VIANA, J.H.M.; CAMARGO, L.S.A.; POLISSENI, J.; HENRY, M. Efeito da somatotropina na população folicular, recuperação de oócitos e produção in vitro de embriões em vacas Gir. Revista. Brasileira de Zootecnia., v.36, n.2, p ,

148 Níveis de cortisol, T3 e T4 em bodes Saanen criados em clima tropical Levels of cortisol, T3 and T4 in Saanen bucks raised in tropical climate Maria Gorete Flores Salles 1*, Priscila Teixeira de Souza 1, David Ramos da Rocha 2, Inti Campos Salles Rodrigues 1, Airton Alencar de Araújo 1 1 PPGCV-UECE; 2 PPGZ UFC; *1 Médica Veterinária DSc. Lar Antônio de Pádua. * mgfsalles@yahoo.com.br ABSTRACT This study evaluated the influence of climatic factors on the physiological parameters and plasma levels of cortisol T3 and T4 of Saanen bucks in a tropical climate at different periods of the year and the occurrence of heat stress. To this, it was evaluated the ambient temperature and relative humidity to calculate the temperature and humidity index (THI) and rectal temperature and respiratory frequency to verify the existence of heat stress. Fortnightly blood was collected to evaluate serum levels of cortisol, T3 and T4. The concentrations of cortisol, T3 and T4 were affected by temperature and relative humidity, so that, during heat stress, there is a more rapid response of cortisol and increased latency period in the response of thyroid hormones. We conclude that Saanen bucks are susceptible to heat stress at any time of year and the transition dry rainy period, it the most critical for the animals. Key words: Saanen bucks; cortisol; heat stress; T3; T4 Palavras chave: bodes Saanen; cortisol; estresse térmico, T3, T4 INTRODUÇÃO Na adaptação de animais de raças exóticas a ambiente climático diferente ao de sua origem, ocorrem mudanças físicas, fisiológicas e hormonais, sendo que as glândulas adrenais/tireóide têm importantes funções nesse mecanismo (Helal et al., 2010). Animais adaptados, respondem às mudanças ambientais, com ajustes fisiológicos para manter a homeostase por respostas autonômicas, neuroendócrinas e comportamentais. Para aumentar a produção caprina leiteira nos trópicos, a introdução da raça Saanen, requer manejos diferenciados para a ótima expressão de sua produtividade. É fato que esta raça produz em ambiente ao qual seu genótipo não está adaptado e, em diversos estudos se inclui a medida dos níveis sanguíneos dos hormônios das adrenais e da tireóide como indicador da resposta ao estresse térmico. Portanto, o objetivo do estudo 436

149 foi comparar as respostas fisiológicas dos animais nos diferentes períodos do ano em bodes Saanen criados no clima tropical e avaliar os efeitos estresse térmico sobre os hormônios da tireóide e das adrenais. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado em Pacatuba-Ce, latitude 3 53 Sul, longitude Oeste e temperatura média anual de 28 C. Utilizou-se 9 bodes Saanen com peso médio de 67,1±14,2 kg e idade média de 3,4±1,9 anos confinados, alimentados com concentrado, capim elefante e água ad libitum. O ano foi dividido em 4 períodos: Chuvoso: fevereiro, março, abril e maio; Transição chuvoso-seco: junho e julho; Seco: agosto, setembro, outubro e novembro e Transição seco-chuvoso: dezembro e janeiro, conforme a pluviosidade. Dados de temperatura ambiente (TA) e umidade relativa do ar (UR) foram coletados para estimar o índice de temperatura e umidade (ITU) de Thom (1958) na fórmula: ITU= tbs + 0,36. tpo + 41,5 sendo, tbs: temperatura de bulbo seco ( C) e tpo: temperatura do ponto de orvalho ( C). Dados fisiológicos e climáticos foram coletados pela manhã (9h) e tarde (13h), 3 vezes/semana em um ano. A temperatura retal (TR) mediu-se com termômetro clínico no reto do animal por 2 minutos. A frequência respiratória (FR) por observação dos movimentos do flanco do animal, durante 1 minuto (mov min -1 ). Quinzenalmente coletou-se amostras de sangue para a dosagem do cortisol, triiodotironina (T3) e tiroxina (T4) livres, testadas em duplicata, na metodologia imunoensaio enzimático de microparticulas (MEIA) no equipamento AxSYM. Calcularam-se as médias, valores máximos e os erros-padrão da média para os dados climáticos, parâmetros fisiológicos e nível sanguíneo de cortisol, T3 e T4. Na ANOVA utilizou-se o modelo GLM do Systat 12 para o efeito da época do ano sobre os parâmetros fisiológicos e os níveis hormonais e, as médias comparadas pelo teste de Tukey com probabilidade de 5% de erro. RESULTADOS E DISCUSSÃO Valores máximos da TR mostram hipertermia nos períodos: chuvoso (41,4 o C), transição chuvoso-seco e seco (41 o C) e na transição seco-chuvoso (43 o C) e, valores máximos do ITU de 86, mostram situação emergencial de estresse térmico. Valores máximos da FR no período chuvoso (200 mov/min) e na transição chuvoso-seco (160 mov/min) mostram que a UR alta leva o organismo a uma situação de estresse térmico, 437

150 por falhas no mecanismo de termorregulação (Gomes et al. 2008). Os maiores valores de TR e FR foram na transição seco-chuvoso com elevada TA e UR, quando os animais sofrem por desconforto térmico, justamente no período em que os valores médios de cortisol em μg/ml foram mais elevados (2,9) (P<0,05), chuvoso (1,08), transição chuvoso-seco (1,36) e seco (1,43). Na transição seco-chuvoso diminuiu a secreção de T3 em pg/ml (1,47) em relação aos períodos, chuvoso (2,0), transição chuvoso-seco (1,97) e seco (1,97) (P<0,05), mostrando que há estresse térmico nos reprodutores Saanen, responsável por reduzir os hormônios tireoideanos, também encontrado por Helal et al. (2010) em bodes Balady e Damascus sob estresse térmico. Valores médios de T4 em bodes Saanen no clima tropical não diferiram entre os períodos do ano. O estresse térmico alterou as concentrações plasmáticas de T3 nos machos da raça Saanen, mas não nos da raça Alpina, mostrando que os Saanen são menos tolerantes à elevação da temperatura ambiente (Coelho et al., 2008). As concentrações de cortisol, T3 e T4 são afetadas pela temperatura ambiente e umidade relativa do ar, de modo que, durante o estresse térmico, há uma resposta mais rápida do cortisol e maior período de latência na resposta dos hormônios tireoideanos. A utilização destes hormônios como indicadores de estresse térmico, facilita a compreensão dos mecanismos fisiológicos envolvidos nos processos de termólise e homeotermia, mas o tipo de resposta de cada indivíduo frente ao estresse depende da união de fatores ambientais e genéticos. CONCLUSÃO Independente do período do ano os reprodutores da raça Saanen estão susceptíveis ao estresse térmico, sendo o período de transição seco-chuvoso o mais crítico para os animais, estando os resultados dos dados climáticos, em consonância com as respostas fisiológicas e os perfis hormonais. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS COELHO, L.A.; SASA, A.; BICUDO, S.D.; BALIEIRO, J.C.C. Concentrações plasmáticas de testosterona, triiodotironina (T3) e tiroxina (T4) em bodes submetidos ao estresse calórico. Arq. Bras.Med.Vet.Zootec., v.60, n.6, p , GOMES, C.A.V.; FURTADO, D.A.; MEDEIROS, A.N.; SILVA, D.S. Efeito do ambiente térmico e níveis de suplementação nos parâmetros fisiológicos de caprinos Moxotó. Rev. Bras. Eng. Agríc. Amb., v.12, n.2, p ,

151 HELAL, A.; HASHEM, A.L.S.; ABDEL-FATTAH, M.S.; EL-SHAER, H.M. Effect of heat stress on coat characteristics and physiological responses of Balady and Damascus goats in Sinai, Egypt. AEJAES, v.7, n.1, p ,

152 O funículo espermático de carneiros com diferentes conformações escrotais The spermatic cord of rams with different scrotal conformations Laura Honório de Oliveira*¹; Mikael Leandro Duarte de Lima Tolentino¹; Maria Acelina Martins de Carvalho²; Antonio Augusto Nascimento Machado Júnior²; Antonio Chaves de Assis Neto 3 ; Otávio Brilhante de Sousa¹; Danilo José Ayres de Menezes¹ ¹Universidade Federal de Campina Grande Patos PB ²Universidade Federal do Piauí Teresina PI 3 Universidade de São Paulo São Paulo - SP *lauraoliveira@veterinaria.med.br ABSTRACT The scrotal bipartition is a feature that has demonstrated improvements in reproductive performance of goats reared in warm climates, however nothing is known about the sheep. This proposal aims to evaluate the histological composition of the spermatic cord of sheep with scrotal bipartition and without scrotal bipartition. Six animals were used, three with scrotal bipartition and three split. The spermatic cords were fixed and processed in paraffin for impregnation and preparation of histological slides. Histological features were evaluated for comparison between the groups. We observed no differences in the structural composition of the spermatic cord of sheep with different conformations scrotal, but animals with scrotal bipartition had higher average wall thickness of both the testicular artery and veins of the pampiniform plexus, as well as greater total area of venous lumen of the plexus. Key words: Scrotum; Small Ruminant; Bipartition; Histology. Palavras - Chave: Escroto; Pequeno Ruminante; Bipartição; Histologia. INTRODUÇÃO Os mecanismos da plasticidade reprodutiva dos animais atuam de maneira integrada ao ambiente e seu clima, sendo de fundamental importância o conhecimento da relação entre o genótipo e o meio ambiente (Santos, Simplício e Machado, 1998). Em regiões de clima tropical, relatos de manifestações de alterações morfológicas dos órgãos reprodutivos em caprinos, como o aparecimento de divisão no escroto destes animais (Nunes et al., 1983), impulsionaram estudos para analisar a influência desta característica nos parâmetros reprodutivos, que apontaram melhoras em parâmetros 440

153 reprodutivos para esta espécie, em regiões de clima quente. Esta alteração vem sendo denominada de bipartição escrotal (Almeida, 2003). Com o crescente desenvolvimento da ovinocultura no nordeste brasileiro é salutar a buscar de informações a respeito das características morfológicas dos órgãos reprodutores de ovinos machos no intuito de identificar se a bipartição escrotal é uma característica desejável no rebanho ovino e se a dinâmica testicular para a espécie ovina responde a esta característica da mesma forma que para a caprina. MATERIAL E MÉTODOS Foram utilizados 6 animais oriundo do abatedouro público da cidade de Patos- PB, sendo 3 ovinos com escroto sem bipartição escrotal (Grupo I) e 3 com bipartição escrotal (Grupo II). Foram coletados os funículos espermáticos e divididos em fragmentos proximal, médio e distal, e posteriormente fixados em Formaldeído a 10%. O material foi processado em rotina histológica normal e confecção de lâminas histológicas as quais foram analisadas em microscopia de luz e mensurada a espessura das paredes dos vasos do funículo, bem como a área vascular venosa do plexo pampiniforme, por meio do programa de análise de imagem (ImagePro-Express v.6.0). RESULTADOS Foram identificados os componentes do funículo espermático, a artéria testicular e a veia testicular, formando o plexo pampiniforme, além do ducto deferente, sustentado pelo seu mesoducto deferente. Independente da conformação do escroto o funículo espermático mostra-se circundado por uma camada de epitélio pavimentoso simples, apoiado em uma fina camada de tecido conjuntivo denso não modelado, constituindo a lamina parietal da túnica vaginal, seguido de tecido conjuntivo frouxo contendo vasos subcapsulares. Observam-se secções da artéria testicular em sentido longitudinal e transversal, e das veias que formam o plexo. Tanto a artéria testicular quanto as veias do plexo mostram estrutura histológica típica, sendo a artéria com parede muscular espessa e a lâmina elástica profunda ao epitélio, dando aspecto de pregueado da mucosa. A veia testicular forma, desde a parte proximal do funículo espermático até sua porção distal, espaços vasculares cheios de sangue. A camada externa dos vasos do plexo de tecido conjuntivo frouxo, muitas vezes mostra-se delgada, dando proximidade destes vasos com a artéria 441

154 testicular. Em algumas regiões do funículo espermático, sob a lamina visceral da túnica vaginal, foi observado uma pequena quantidade de tecido adiposo. Referente aos dados morfométricos, a espessura média da parede da artéria para os animais com escroto não bipartido (Grupo I) é de 206,29+70,83µm no antímero esquerdo e de 266,64+98,69µm no direito, já com escroto bipartido (Grupo II) no esquerdo é de 230,15+55,81µm e no direito de 339,32+34,94µm. Quando analisada a espessura das veias do plexo pampiniforme, observa-se no Grupo I, no antímero esquerdo 25,51+1,5µm e no direito 26,50+5,03µm, e no Grupo II, no antímero esquerdo de 40,72+19,03µm, já no direito de 38,80+2,30µm. Em relação à área total média do lume vascular das veias do plexo pampiniforme, para os animais do Grupo I, no funículo esquerdo observa-se 16,19x ,22x10 5 µm 2 e no direito 4,09x ,4 x10 5 µm 2, e os animais do Grupo II apresentam a área total média para o funículo esquerdo de 9,4 x ,55x10 5 µm 2 e no direito de 33,95 x ,43 x10 5 µm 2. CONCLUSÕES Concluímos que não existem diferenças na composição estrutural do funículo espermático de ovinos com diferentes conformações escrotais, porém os animais com escroto bipartido apresentaram maior espessura média da parede, tanto da artéria testicular quanto das veias do plexo pampiniforme, bem como maior área total do lume das veias do plexo pampiniforme. Outros estudos merecem ser realizados na busca por resposta de como essa diferença morfométrica pode afetar a plasticidade reprodutiva dos animais e se esta característica de bipartição é desejável para a espécie ovina. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ALMEIDA, M. M. Características seminais e arranjos vasculares sanguíneos dos testículos e escroto, em caprinos com diferentes graus de divisão escrota. Teresina - PI: UFPI, f. NUNES, J.F.; RIERA, G.S.; SILVA, A.E.F.D.; PONCE DE LEON F.A.; LIMA, F.A.M. Características espermáticas de caprinos moxotó de acordo com a morfologia escrotal.sobral: EMBRAPA/CNP Caprinos, p. (Circular técnica, 6). SANTOS, D.O.; SIMPLÍCIO, A.A.; MACHADO, R. Características escrototesticulares e do ejaculado em bodes mestiços submetidos à insulação escrotal. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v.50, n.3, p ,

155 Otimização do sistema de maturação in vitro de oócitos caprinos utilizando retinóides System optimization of in vitro maturation of goat oocytes using retinoids Lucas Hossoe Gomes 1 ; Diego Santos Almeida 1(*) ; Madson Atila Vidal e Silva 1 ; Mysa Tatiana Corrêa Gonçalves 1 ; Fernando Andrade de Souza 1 ; Ricardo Macêdo Chaves 1 1 Universidade Estadual do Maranhão UEMA, *: diegosan1990@hotmail.com ABSTRACT The aim of this study was establish in vitro culture conditions of oocyte goats to offer recovery structures similar those produced in vivo. Ovaries were obtained in the São Luís (MA). And then transported to Laboratory of Animal Reproduction (UEMA). The oocytes were then tested and ranked efficiency of retinol (RT) and retinoic acid (RA) on the in vitro maturation, using as parameters level of nuclear maturation. Significant difference (P <0.05) in the percentage of matured oocytes when using the basic medium maturity (MBM) compared to means and MBM+ RT, MBM + RA (53% vs 61% vs 62%), respectively, showing an increase in expanded oocytes number that reached nuclear maturation. Thus an effective strategy and should be adopted to improve in vitro maturation in goats. Key words: Retinoic Acid, Retinol, Nuclear maturation. Palavras-chave: Ácido Retinóico, Retinol, Maturação nuclear. INTRODUÇÃO No Brasil, a caprinocultura constitui uma atividade de considerável importância econômica e social. Na última década, biotécnicas como a fecundação in vitro (FIV) tem ocupado lugar de destaque acelerando a melhoria genética dos rebanhos. Na produção in vitro (PIV), a maturação in vitro (MIV) é uma técnica que consiste na preparação dos oócitos para a fecundação e subsequente desenvolvimento embrionário (Gonçalves et al., 2008). Quando os oócitos atingem 65 a 70% do seu volume final, já podem ser percebidos mudanças estruturais e bioquímicas (Cavalcanti Neto, 2004). Desta forma vários fatores podem influenciar na capacidade dos oócitos 443

156 atingirem plena maturação nuclear e citoplasmática, assim se busca encontrar o meio ideal que proporcione alta qualidade aos embriões (Ménezo et al., 1998). Diante do que foi exposto, este trabalho objetivou estabelecer condições satisfatórias para o cultivo de oócitos in vitro, analisando a eficiência das vitaminas retinóides necessárias para a maturação oocitária, buscando assim uma semelhança qualitativamente a estruturas oocitárias que são produzidas in vivo. MATERIAL E MÉTODOS Os ovários de caprinos foram obtidos em abatedouros da Região Metropolitana do São Luís-MA. Em seguida, transportados em garrafa térmica contendo solução fisiológica acrescida de 30 g/ml de sulfato de gentamicina a 30º C. Os oócitos foram coletados de folículos medindo de 2 a 6 mm de diâmetro e colocados em placa de cultura de 35 x 10 mm, contendo o meio de colheita (MC), foram lavados, classificados e selecionados segundo Gonçalves et al. (2008). De forma aleatória, foram colocamos 25 oócitos por gota de 100 L sob óleo de parafina estéril, no meio MBM contendo 0,3 M retinol ou 0,5 M de ácido retinóico, dependendo do grupo experimental e incubados a 39º C em atmosfera úmida contendo 5% de CO2 durante 24 horas. Após a maturação foram testadas, em 10 repetições, as eficiências do retinol (RT) e do ácido retinóico (AR) sobre a maturação in vitro de oócitos caprinos, utilizando como parâmetros o estádio de maturação nuclear, conforme as técnicas utilizadas por Izadyar et al. (1998). Onde os 200 oócitos de cada tratamento foram desnudados e incialmente processados para determinar o estádio de maturação nuclear. Sendo assim, foi usado primeiro a comparação de variâncias, o teste F para variâncias ao nível de significância 5% (p < 0,05) e o teste t para comparação das medias, no nível de significância de 5%. RESULTADOS E DISCUSSÕES Foi observada diferença significativa (p < 0,05) quando comparados o estádio de maturação nuclear alcançada pelos oócitos nos três tratamentos utilizados. Em todos os tratamentos a fase final da maturação nuclear dos oócitos, a metáfase II no meio MBM (controle) obteve 53 oócitos maturados, no MBM+RT = 61 e MBM+AR = 62, corroborando com os valores obtidos por Paula et al. (2008) com 62,35% de oócitos 444

157 maturados com o uso de retinóides, quando estudou sobre a produção de embriões caprinos. Porém foi de encontro aos resultados encontrados por Cavalcanti Neto (2004) ao trabalhar com o RT e o AR durante a MIV de oócitos caprinos, o que foi explicado devido este autor ter adicionado soro sanguíneo ao meio de maturação que deve ter mascarado o efeito potencial desses retinóides. As porcentagens observadas na metáfase II obtidas no grupo MBM, explicam-se pelo fato de que, em cultivo in vitro de oócitos caprinos ocorre uma menor proporção de oócitos que completam a maturação nuclear devido à fatores intrínsecos das células e a pouca quantidade ou ausência de células do cumulus, pois segundo Cecconi et al. (2007) oócitos com baixa qualidade, paralisam seu desenvolvimento nas fases iniciais e intermediárias da meiose, não favorecendo a maturação nuclear completa, como foi observado neste estudo no grupo MBM, sem adição de retinóides. REFERÊNCIAS CAVALCANTI NETO, C. C. Uso do retinol na produção in vitro de embriões caprinos.113p Tese (Doutorado em Ciência Animal) Programa de Pósgraduação em Medicina Veterinária. Universidade Federal de Minas Ferais. CECCONI, S.; MAURO, A.; CAPACCHIETTI, G.; BERARDINELLI, P.; BERNABÒ, N.; DI VINCENZO, A. R.; MATTIOLI, M.; BARBONI, B. Meiotic Maturation of Incompetent Prepubertal Sheep Oocytes Is Induced by Paracrine Factor(s) Released by Gonadotropin-Stimulated Oocyte-Cumulus Cell Complexes and Involves Mitogen- Activated Protein Kinase Activation. Endocrinology, v.149, n.1, p , 2007 GONÇALVES PBD, OLIVEIRA MAL, MEZZALIRA A, MONTAGNER MM, VISITIN JA, COSTA LFS. Produção in vitro de embriões. In: Biotécnicas aplicadas à reprodução animal. 2.ed. São Paulo: Roca, p IZADYAR, F.; ZEINSTRA, E.; BEVERS, M. M. Follicle-stimulating hormone and growth hormone act differently on nuclear maturation while both enhance developmental competence of in vitro matured bovine oocytes. Molecular Reproduction Development, v. 51, p ,

158 MÉNEZO, L.; STRTINGFELLOW, D.; BIELANSKI, A. Thougts on risk management for in vitro production of bovine embryos. Human reproduction, v. 13, n. 4, p , PAULA, N. R. O.; CARDOSO, J. F. S.; OLIVEIRA, M. A. L.; FREITAS, V. J. F. Embriões caprinos produzidos in vivo ou in vitro: técnicas, problemas e perspectivas. Revista Brasileira de Reprodução Animal, Belo Horizonte, v.32, n.1, p.21-35,

159 Parâmetros cinéticos dos espermatozóides caprinos diluidos em meio à base de água de coco em pó (ACP-101) adicionado de Aloe vera Kinetic parameters of goat spermatozoa diluted in medium based on coconut water powder (PCW-101) supplemented with Aloe vera Bárbara Mara Bandeira Santos 1*, Cibele Cavalcanti de Souza Melo 1, Lívia Pereira Antunes 1, Cristiane Clemente Mello Salgueiro 1, Gyselle Viana Aguiar 1, José Ferreira Nunes 1. 1 Faculdade de Veterinária/UECE * barbarabandeiras@hotmail.com ABSTRACT The aim of the study was to evaluate the extender based on powder coconut water (PCW-101) and the addition of egg yolk or Aloe vera in the cooling process of goat semen at 4 C, on the kinetic parameters. Ejaculates from male goats were diluted in three treatments: T1 (PCW-101) - control group, T2 (PCW % egg yolk); T3 (PCW % Aloe vera). The semen was evaluated in the times of 24 and 48 hours of cooling. In times of 24 and 48 hours, the T3 has obtained the best averages of total motility. After 24 hours, the T3 group showed significantly higher progressive motility when compared with treatment of egg yolk (T2) and was similar to control group. In conclusion, the use of extract of Aloe vera added to extender PCW-101 at a concentration of 5%, is able to keep the sperm parameters at 4 C. Keywords: Goat; Motility; spermatozoa Palavras chaves: Caprino; Motilidade; Espermatozoide INTRODUÇÃO Devido a atual necessidade no controle de doenças, a supressão de substâncias de origem animal em meios de conservação de sêmen tem sido sugerida, a fim de garantir a segurança sanitária nos processos biológicos (Sampaio Neto et al., 2002), fazendo com que a procura por um substituto para a gema de ovo seja intensificada. Como alternativa para esta dificuldade, estipula-se o uso de produtos de origem vegetal que tenham, em sua composição, substâncias similares aos crioprotetores convencionais. Uma opção é a Aloe vera, uma planta encontrada em grande escala em diversos países do mundo e que contêm muitas substâncias, dentre estas, vitaminas, 447

160 proteínas, aminoácidos essenciais, mono e polissacarídeos e minerais (Boudreau & Beland, 2006). Desta forma o trabalho objetivou-se por avaliar o diluidor ACP-101 adicionado de Aloe vera ou gema de ovo no processo de resfriamento do sêmen caprino a 4ºC, quanto aos parâmetros cinéticos durante um período de 48 horas. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado no Laboratório de Tecnologia do Sêmen Caprino e Ovino (LTSCO) da UECE. Foram utilizados quatro reprodutores caprinos de três raças distintas (Saanen, Boer e Murciano-Granadina). A coleta do sêmen foi realizada com o auxílio de uma vagina artificial específica para pequenos ruminantes, sendo obtidos 12 pool s. Em todos os tratamentos, foi utilizado o diluidor ACP-101, específico para a espécie caprina, preparado conforme recomendação do fabricante. Em seguida o pool foi diluído nos seguintes tratamentos: T1 = ACP-101 (grupo controle); T2 = ACP % gema de ovo e T3 = ACP % Aloe vera. Após a diluição, as amostras foram acondicionadas em geladeira previamente estabilizada a temperatura de 4 C para o resfriamento do sêmen, com taxa média de resfriamento de -0,3ºC/ min. Posteriormente às diluições o sêmen foi avaliado através de análise computadorizada pelo sistema CASA (SCA, Microptics S.L, Barcelona, Espanha), tanto nos tempos 24 e 48 horas de resfriamento quanto aos parâmetros de motilidade total e motilidade progressiva. Os parâmetros de motilidade progressiva (MP) foram analisados através da ANOVA, e o teste de Student-Newman-Keuls (SNK) foi empregado para comparação das médias. A motilidade total (MT) foi analisada por meio do teste de Kruskall Wallis, sendo, os resultados expressos como média ± erro padrão da média e as diferenças foram consideradas significativas quando p<0,05. RESULTADOS E DISCUSSÃO Os parâmetros cinéticos de MT e MP estão apresentados nas Tabelas 1 e 2, respectivamente. Quando observados os tempos de 24 e 48 horas, o tratamento que utilizou 5% de Aloe vera (T3), obteve valores significativamente superiores quando comparado com o tratamento T2, mas, mostrou-se semelhante ao grupo controle (T1). Em relação às médias dos percentuais de MP pode-se observar que às 24 horas de resfriamento, o T3 apresentou-se significativamente superior ao T2, e semelhante ao T1 (p>0,05). Apesar de não ter sido observado diferenças entre os tratamentos T1 e T3, 448

161 sabemos que o resfriamento é o primeiro passo para os processos de criopreservação, e desta forma o diluidor sozinho (T1) não tem a capacidade de manter os espermatozóides viáveis durante os processos de congelação/descongelação. Tabela 1: Média ± erro padrão da média da Motilidade Total de espermatozóides caprinos diluídos e refrigerados a 4 C em ACP-101 adicionados de gema de ovo ou de Aloe vera por um período de 48 horas. TRATAMENTOS 24h 48h T1 67,10 ± 5,05Bab 52,96 ± 5,86Bab T2 33,02 ± 13,09Bbc 31,29 ± 13,00Bbc T3 70,32 ± 4,46Ba 71,60 ± 4,13Ba Letras minúsculas na mesma coluna (p<0,05) e maiúsculas na mesma linha diferem entre si (p<0,05). T1: ACP-101; T2: ACP % gema de ovo; T3: ACP % Aloe vera. Tabela 2: Média ± erro padrão da média da Motilidade Progressiva de espermatozóides caprinos diluídos e refrigerados a 4 C em ACP-101 adicionados de gema de ovo ou de Aloe vera por um período de 48 horas. TRATAMENTOS 24h 48h T1 30,62 ± 2,42ABab 26,64 ± 2,69Bab T2 13,50 ± 5,46Bc 16,59 ± 7,15Bbc T3 39,88 ± 3,18Aa 31,97 ± 2,33Ba Letras minúsculas na mesma coluna (p<0,05) e maiúsculas na mesma linha diferem entre si (p<0,05). T1: ACP-101; T2: ACP % gema de ovo; T3: ACP % Aloe vera. CONCLUSÕES A utilização do extrato bruto de Aloe vera adicionado ao diluidor ACP-101, na concentração de 5%, é capaz de manter os parâmetros espermáticos de motilidade total e motilidade progressiva a 4 C por um período de até 48 horas. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BOUDREAU, M. D.; BELAND, F. A. Uma avaliação das propriedades biológicas e toxicológicas de Aloe barbadensis (Miller), Aloe vera". Jornal da ciência ambiental e da saúde. Part C, Environmental carcinogenesis & ecotoxicologia, v.24, p ,

162 SAMPAIO NETO, J.C.; SALGUEIRO, C.C.M.; MATEOS-REX, E.; NUNES, J.F. Utilização do diluente ACP-105 na refrigeração do sêmen eqüino. Revista Brasileira Reprodução Animal, v.5, p ,

163 Parâmetros cinéticos dos espermatozoides ovinos diluídos em meio a base de água de coco em pó (ACP-102 ) adicionada de Aloe vera ou gema de ovo Kinetics parameters of ram spermatozoa extended in powder coconut water solution (ACP-102) added with Aloe Vera or egg yolk Priscila Palácio de Queiroz Farias 1* ; Bruna Farias Brito; Sérvulo Pinheiro Maia Filho; Bárbara Mara Bandeira Santos; José Ferreira Nunes; Gyselle Viana Aguiar 1 Faculdade de Veterinária/UECE; * priscilap91@gmail.com ABSTRACT This study aimed to evaluate the total motility (MT) and the progressive motility (MP) of ram semen extended in powder coconut water solution (ACP-102 ) added with 5% egg yolk (t1) or 5% Aloe vera (T2) and cooled at 4 ºC, for 48 hours. The MT and MP were evaluated in SCA system (Sperm Class Analyser, Microptic S.L. version 3.2.0). There was no significant difference between the treatments for total and progressive motility at 0h. However at 24h, MT and MP were superior in T1 than in T2. In conclusion, the ACP-102 added with 5% Aloe vera was not efficient to maintain the total and progressive motility of ram spermatozoa cooled at 4 ºC, for 24 hours. Key-words: semen; cooling; sperm motility. Palavras-chave: sêmen; resfriamento; motilidade espermática. INTRODUÇÃO Devido a atual necessidade no controle de doenças, a supressão de substâncias de origem animal em meios de conservação de sêmen tem sido sugerida, a fim de garantir a segurança sanitária nos processos biológicos (Sampaio Neto et al., 2002), fazendo com que a procura por um substituto para a gema de ovo seja intensificada. Uma opção é a Aloe vera, uma planta encontrada em grande escala em diversos países do mundo e que contêm muitas substâncias, dentre estas, vitaminas, proteínas, aminoácidos essenciais, mono e polissacarídeos e minerais (Boudreau e Beland, 2006). Para tanto, o trabalho teve como objetivo avaliar a motilidade total (MT) e a motilidade progressiva (MP) do sêmen ovino resfriado, utilizando diluente a base de água de coco em pó (ACP-102 ) adicionado de gema de ovo ou Aloe vera. 451

164 MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado no Laboratório de Tecnologia do Sêmen Caprino e Ovino (LTSCO), inserido no Núcleo Integrado de Biotecnologia (NIB) da UECE. Foram utilizados quatro reprodutores ovinos, dois da raça Santa Inês e dois da raça Dorper. Os ejaculados dos reprodutores foram reunidos em um pool, perfazendo 3 coletas por animal (3pools). Em todos os tratamentos, foi utilizado como diluidor a solução de água de coco em pó(acp-102 ), específico para a espécie ovina, diluído conforme recomendação do fabricante. Posteriormente, foram adicionadas 40mg/ 100 ml de antibiótico (gentamicina, Gentatec Agro Veterinária) e concentrações específicas de gema de ovo ou Aloe vera, sendo obtidos os seguintes tratamentos: T1 = ACP % gema de ovo; T2 = ACP % Aloe vera. O sêmen diluído foi resfriado utilizando uma curva de resfriamento -0,3ºC/minuto, até atingir 4 ºC. As amostras foram avaliadas imediatamente após o resfriamento (0h) e depois de 24 horas (24h), quanto aos parâmetros de motilidade total e motilidade progressiva no sistema CASA (SpermClassAnalyser, Microptic S.L. versão 3.2.0). Os dados foram expressos como media + desvio padrão e analisados por meio de ANOVA seguido pelo teste de Tukey (p<0,05) para identificar diferenças significativas utilizando o programa estatístico ASSITAT versão 7.6 beta (2012). RESULTADOS E DISCUSSÃO Os parâmetros cinéticos de MT e MP estão apresentados na Tabela 1. Não houve diferenças significativas entre os tratamentos quanto à motilidade total ou progressiva a 0h. Contudo, o ACP adicionado de Aloe vera na concentração de 5% não foi eficiente para manter a motilidade total e progressiva às 24 horas de resfriamento a 4 ºC de acordo com os parâmetros preconizados para espécie pelo CBRA (1998), mostrando-se inferior à gema de ovo. Quando observadas as taxas de motilidade total do T2, estas foram inferiores (0h: 70,9 ± 14,80 ; 24h: 25,4 ± 6,22) às taxas encontradas por Melo (2010), quando utilizou a mesma concentração de Aloe vera no resfriamento seminal de caprinos (0h: 86,93 ± 2,38; 24h: 70,32 ± 4,46). Quando comparado o T1 com os valores encontrados por esse autor, estes foram semelhantes. A capacidade da planta Aloe vera de aumentar a permeabilidade celular (MATOS, 1998), pode ter contribuído para a 452

165 redução nos resultados das motilidades quando são comparados aos tratamentos com gema de ovo. Tabela 1. Motilidade total (MT) e motilidade progressiva (MT) dos espermatozoides ovinos diluído em ACP acrescido de 5% gema de ovo (T1) ou 5% Aloe vera (T2) resfriado a 4 C por 24 horas. 0H 24H T1 T2 T1 T2 MT 93,06 ± 6,42 A 70,9 ± 14,80 A 85,7 ± 11,71 A 25,4 ± 6,22 B MP 53,07 ± 6,30 A 41,66 ± 5,60 A 51 ± 6,16 A 12,56 ± 0,80 B Letras maiúsculas diferentes diferem estatisticamente entre si (p<0,01). CONCLUSÃO O ACP-102 adicionado de Aloe vera como crioprotetor não foi eficiente em manter a motilidade total e motilidade progressiva dos espermatozoides ovinos resfriados a durante 4 ºC durante 24 horas, mostrando-se inferior à gema de ovo. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BOUDREAU, M. D.; BELAND, F. A. Uma avaliação das propriedades biológicas e toxicológicas de Aloe barbadensis (Miller), Aloe vera". Jornal da ciência ambiental e da saúde. Part C, Environmental carcinogenesis & ecotoxicologia, v.24, p , COLÉGIO BRASILEIRO DE REPRODUÇÃO ANIMAL. Manual para Exame Andrológico e Avaliação de Sêmen Animal, 2ª Ed., Belo Horizonte, MATOS, F.J.A. Farmácias Vivas. 3.ed. Fortaleza: Edições UFC, MELO, C.C.S. Conservação de sêmen caprino a 4ºC utilizando ACP-101 com duas concentrações de Aloe vera ou gema de ovo. Dissertação de Mestrado (Reprodução e Sanidade de Pequenos Ruminantes) Universidade Estadual do Ceará, Faculdade de Veterinária. SAMPAIO NETO, J.C.; SALGUEIRO, C.C.M.; MATEOS-REX, E.; NUNES, J.F. Utilização do diluente ACP-105 na refrigeração do sêmen eqüino. Revista Brasileira Reprodução Animal, 5, ,

166 Parâmetros reprodutivos e fisiológicos de bodes e carneiros: influência da sazonalidade no sul do Piauí Reproductive and physiological parameters of rams and bucks: influence of seasonal changes in the southern of Piauí Danilo de Sousa Lima 1 ; Laércio Fontinele Bandeira de Macêdo 1 ; Kenney de Paiva Porfírio 1 ; Wagner Martins Fontes do Rêgo 1 ; Janaína de Fátima Saraiva Cardoso 1 ; Ney Rômulo de Oliveira Paula 1 * 1 Campus de Bom Jesus, Universidade Federal do Piauí * neyromulo@ufpi.edu.br ABSTRACT The aim of this study was to evaluate the clinical and reproductive parameters of sheep and goats in southern Piauí for six months. We evaluated animal breeds Morada Nova, Santa Inês and Anglo Nubian. Heart rate (HR), respiratory rate (RR), rectal temperature (RT), ruminal movements (RM), joint clinical index (JCI), scrotal circumference (SC), right testicular volume RTV) and left testicular volume (LTV) were collected weekly. Data were collected from room temperature (T), precipitation and relative humidity (RH). Data were analyzed by t - test or Kruskal Wallis (P <0.05). Only HR was significantly higher in the transition period, the other parameters were not affected by the climatic season. The animals showed little or no thermal discomfort at the period evaluated. In conclusion, Morada Nova and Santa Inês rams and Anglo Nubian bucks shows good adaptation to the climatic conditions of southern Piauí. Key words: bioclimatology; goat; sheep; clinical parameters; reproductive parameters. Palavras-chave: bioclimatologia; caprino; ovino; parâmetros clínicos; parâmetros reprodutivos. INTRODUÇÃO O clima é o principal fator que atua interferindo sobre a fisiologia dos pequenos ruminantes, podendo ser favorável ou não a sua sobrevivência, portanto, a capacidade dos animais em se adaptar a um determinado ambiente depende de um conjunto de ajustes fisiológicos (Paula et al., 2008). O clima exerce efeito sobre o comportamento, o bem-estar animal e, consequentemente, sobre a produtividade, atuando como um fator regulador da exploração animal com finalidade zootécnica (Rocha, 2008). Atua ainda 454

167 sobre os animais de duas formas: direta e indireta, por ação isolada ou pela interação dos elementos ou variáveis climáticas. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi avaliar os parâmetros clínicos e reprodutivos de reprodutores ovinos e caprinos na microrregião do Alto-Médio-Gurgueia durante o período de seis meses. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado no Campus de Bom Jesus da Universidade Federal do Piauí. Foram examinados os parâmetros de bodes (n=2) da raça Anglo-nubiana e de carneiros da raça Morada Nova (n=2) e santa Inês (n=2). O estudo teve duração de seis meses, dividindo-se em três estações distintas, a saber: de abril a maio (estação chuvosa), de junho a julho (zona de transição) e de agosto a setembro (estação seca). Semanalmente, os animais foram submetidos a exame clínico no qual foi verificada a coloração das mucosas orais e oculares, e palpados os linfonodos superficiais (Pugh, 2004). Foi realizada a avaliação morfométrica dos reprodutores, onde utilizou-se uma fita métrica com finalidade de obter o índice articular clínico (IAC) e a circunferência escrotal (CE) (cm). A largura e comprimento dos testículos e espessura da pele do saco escrotal foram mensurados utilizando-se um paquímetro clínico. Para avaliação dos dados clínicos utilizou-se um estetoscópio para mensuração da frequência cardíaca (FC) (bpm), frequência respiratória (FR) (mpm) e movimentos ruminais (MR). Na avaliação da temperatura retal (TR) (C ) utilizou-se um termômetro de mercúrio. As médias mensais dos parâmetros climáticos como, precipitação (mm 3 ), temperatura média (ºC) e umidade relativa do ar (%), foram obtidas com a unidade meteorológica local. Os dados foram expressos em média ± desvio padrão. Os dados foram submetidos ao teste de Kolmogorovi-Smirnov para verificar a normalidade. Os dados de temperatura retal, frequência cardíaca e volume testicular foram avaliados através do teste t Student. Já os demais dados avaliados foram submetidos ao teste de Kruskal Wallis. As diferenças foram consideradas estatisticamente significativas quando P<0,05. RESULTADOS Em relação às condições climáticas, a partir do mês de abril foi observado um aumento da precipitação com consequente decréscimo na temperatura no mês de maio. A umidade relativa do ar alcançou o valor máximo no mês de maio quando também foi 455

168 observado um valor máximo de precipitação, condições que caracterizam o início da estação chuvosa. Os valores de IAC apresentados pelos reprodutores não sofreram influência da estação climática. A frequência cardíaca foi significativamente superior na estação de transição em comparação ao período chuvoso e seco, enquanto a temperatura retal não revelou diferenças significativas (P > 0,05) entre as estações climáticas, o que significa que estes animais não estavam sofrendo estresse térmico, sobretudo na época seca, onde a temperatura se apresentava mais elevada. Com relação à morfologia reprodutiva, verificou-se que para os parâmetros circunferência escrotal (CE), volume testicular direito (VTD) e volume testicular esquerdo (VTE) não houve diferença significativa (P > 0,05), entre as estações climáticas avaliadas. CONCLUSÃO Os parâmetros físicos e reprodutivos de machos ovinos das raças Morada Nova e Santa Inês e caprinos da raça Anglo-nubiana sofrem pouca ou nenhuma influência da estação climática na região sul do estado do Piauí, apresentando boa adaptabilidade às condições climáticas da microrregião do Alto-Médio-Gurguéia, no sul do estado do Piauí. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS PAULA, N.R.O., ANDRIOLI, A., CARDOSO, J.F.S., SOUSA, F.M.L., SOUZA, K.C., PINHEIRO, R.R., ALVES, F.S.F., TEIXEIRA, M.F.S. Parâmetros clínicos e hematológicos de reprodutores caprinos infectados naturalmente pelo vírus da Artrite Encefalite Caprinos durante a transição da estação seca para chuvosa no Ceará. Arquivos do Instituto Biológico, v.75, p , PUGH, D.G. Clínica de ovinos e caprinos. São Paulo: Roca, p. ROCHA, D.R. Avaliação de estresse térmico em vacas leiteiras mestiças (Bos taurus x Bos indicus) criadas em clima tropical quente subúmido no estado do Ceará p. Dissertação (Mestrado em Zootecnia) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza,

169 Perfil Clínico e Andrológico de bodes Moxotó e Canindé infectados experimentalmente com lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR) Clinical and andrological profile of Canindé and Moxotó bucks experimentally infected with small ruminants lentivirus (LVPR) Ney Rômulo de Oliveira Paula 1 *, Alice Andrioli 2, Janaína de Fátima Saraiva Cardoso 1, Raimundo Rizaldo Pinheiro 2, Kelma Costa de Souza 2, Francisco Selmo Fernandes Alves 2 1 Campus de Bom Jesus, Universidade Federal do Piauí, Bom Jesus-PI, Brasil 2 Pesquisador Embrapa Caprinos e Ovinos, Sobral-CE, Brasil * neyromulo@ufpi.edu.br ABSTRACT The aim in this work was to evaluate the clinical, hematologic and andrologic characteristics of native bucks experimentally infected by CAEV. Ten native bucks from Canindé and Moxotó breeds were used, divided in a group experimentally infected and a group control non infected. The hematologic evaluation was accomplished monthly, clinical evaluation biweekly and andrologic evaluation weekly. Before the experimental infection, all the bucks presented normal at clinical and andrologic evaluation. The hematologic evaluation did not differ significantly between the experimental groups. The animals presented values below the normal for bucks for the hematocrit, hemoglobin and CHCM in some months of evaluation. The seminal volume was significantly superior in the infected animals before the infection and the sperm concentration superior only in the third month of evaluation. The caprine arthritisencephalitis virus does not alter the clinical, hematologic and andrologic parameters from native bucks recently infected in the period that precedes the seroconversion. Key words: caprine, SRLV, clinical, hematologic and andrologic parameters Palavras-chave: caprino, LVPR, parâmetros andrológicos. INTRODUÇÃO A disseminação do lentivírus de pesquenos ruminantes (LVPR), sobretudo em reprodutores nativos de alto valor genético, tem acarretado grandes problemas sanitários e econômicos, pois além da transmissão horizontal, o vírus pode estar presente no sêmen de animais infectados (Paula et al., 2009). Neste contexto, o objetivo deste 457

170 trabalho foi avaliar as características clínicas, hematológicas e andrológicas, bem como o período de soroconversão de reprodutores caprinos nativos infectados experimentalmente pelo CAEV explorados no semi-árido cearense. MATERIAL E MÉTODOS Foram utilizados dez reprodutores nativos das raças Canindé e Moxotó, divididos em um grupo experimentalmente infectado (n=5) e um grupo controle não infectado (n=5). Os animais do grupo experimentalmente infectado, inicialmente comprovadamente negativos, foram inoculados com 10 6 TCID 50 /ml com a cepa CAEV-Cork por via intravenosa. Foi utilizada a MIDGA semanalmente, a fim de detectar a soroconversão. A avaliação hematológica foi realizada mensalmente, a avaliação clínica quinzenalmente e a avaliação andrológica (CBRA, 1998) semanalmente. Os dados foram inicialmente submetidos aos testes de Kolmogorov-Smirnov e Bartlett. Nas situações em que houve homocedasticidade, foi realizada análise de variância (ANOVA) por meio do procedimento GLM do programa SAS (1999) seguido pelo teste de Student-Newman-Keuls (SNK). Nos casos em que houve heterogeneidade de variâncias, foi aplicado o teste não paramétrico de Wilcoxon. O nível de significância adotado foi de 5% e os resultados foram expressos como média ± desvio padrão. RESULTADOS E DISCUSSÃO Quatro animais soroconverteram às 16 semanas após a infecção, e um animal às 32 semanas pós-inoculação. Antes da infecção experimental (T0), todos os caprinos apresentavam-se normais aos exames clínico e andrológico. O peso corporal foi semelhante durante todo o período de avaliação, todavia o escore corporal foi significativamente inferior nos animais infectados apenas no segundo e terceiro mês de avaliação. Durante o período de avaliação, o índice articular clínico (IAC) esteve dentro da faixa considerada duvidosa para a presença de artrite somente em dois animais infectados. A freqüência cardíaca e respiratória dos animais de ambos os grupos experimentais foi considerada superior ao normal para a espécie. Na avaliação hematológica, a contagem de hemácias, VCM, HCM, leucócitos totais, neutrófilos bastonetes, segmentados, linfócitos e monócitos não diferiram significativamente entre 458

171 os grupos experimentais. Os animais apresentaram valores abaixo do normal para caprinos para os parâmetros hematócrito, hemoglobina e CHCM em alguns meses de avaliação, sendo sugestivo de infecção parasitária quando associado à elevação da contagem de eosinófilos. Durante o período de avaliação não foram observadas diferenças significativas entre os animais infectados e o grupo controle para a circunferência escrotal. O volume seminal foi significativamente superior nos animais pertencentes ao grupo infectado apenas no período antes da infecção (T0) e a concentração espermática superior apenas no terceiro mês de avaliação. Nos animais avaliados neste trabalho, a motilidade individual progressiva aos 5 min da colheita e o percentual de espermatozóides normais esteve dentro do normal para a espécie e não diferiram entre os grupos experimentais. CONCLUSÃO O lentivírus de pequenos ruminantes não altera os parâmetros clínicos, hematológicos e andrológicos de caprinos nativos no período que antecede a soroconversão. AGRADECIMENTOS À Fundação Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico FUNCAP e ao Banco do Nordeste - BNB pelo apoio financeiro; e a Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária Embrapa Caprinos e Ovinos pela estrutura e apoio técnico e financeiro. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CBRA. Manual para exame andrológico e avaliação de sêmen animal. Belo Horizonte: Colégio Brasileiro de Reprodução Animal, 2 ed., p. PAULA, N.R.O., ANDRIOLI, A., CARDOSO, J.F.S., PINHEIRO, R.R., SOUSA, F.M.L., SOUZA, K.C., ALVES, F.S.F., CAMPELLO, C.C., RICARTE, A.R.F., TEIXEIRA, M.F.S. Profile of the Caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV) in blood, semen from bucks naturally and experimentally infected in the semi-arid region of Brazil. Small Ruminant Research, v. 85, p.27-33, SAS. SAS user s guide statistic. SAS Inst., Inc., Cary, NC.,

172 Perfil sócio econômico sanitário e reprodutivo da ovinocultura da Microrregião de Teresina Piauí Socio economic, sanitary and reproductive profiles of the sheep culture at Teresina s microregion Gardênia Alves da Silva 1, Romulo José Vieira 1, Tuanny Creusa Medeiros Damasceno 1 *, José Bispo de Sousa Neto 1, Huanna Wallesca Soares Rodrigues 1, Ana Lys Bezerra Barradas Mineiro 1 1 Universidade Federal do Piauí Tuttymedeiros@hotmail.com ABSTRACT In order to define the socio-economic profile, hygiene and reproductive health of sheep production in the micro region of Teresina were analyzed properties of 18 municipalities, Teresina, José de Freitas, Union, Lake Alegre, Demerval Lobao, Lagoa do Piauí, Monsignor Gil and Nazaria this micro-region. We applied an epidemiological questionnaire on each property. Based on data obtained predominated properties with less than 50 ha, 77, 7% of the animals are raised in the open. The deworming was the only practice reported health. It was reported the occurrence of abortions in 22.2% of the herds. Key words: profile, cattle, sheep, epidemiological questionnaire Palavras chave: perfil, rebanhos, ovinocultura, questionário epidemiológico INTRODUÇÃO A ovinocultura tem grande importância sócio-econômica no Brasil, devido a sua facilidade em se adaptar as condições climáticas adversas. A criação de ovinos no Nordeste brasileiro ainda é explorada, muitas vezes de forma extensiva, como uma fonte alternativa de subsistência e com a utilização de tecnologias pouco apropriadas. Em regiões com oportunidades econômicas escassas, esse tipo criação proporciona uma fonte complementar para a renda familiar, capaz de participar no desenvolvimento e movimentação da economia local (Leite & Simplício, 2005). O objetivo desse estudo foi definir o perfil sócio econômico, higiênico sanitário e reprodutivo da ovinocultura na Microrregião de Teresina, Piauí. 460

173 MATERIAL E MÉTODOS O trabalho foi realizado em 18 propriedades de 8 municípios (Teresina, José de Freitas, União, Lagoa Alegre, Demerval Lobão, Lagoa do Piauí, Nazária e Monsenhor Gil) localizados na Microrregião de Teresina Piauí. A Microrregião de Teresina-PI está situada na Mesorregião centro-norte piauiense, no Estado do Piauí, sendo formada por quatorze municípios (Altos, Beneditinos, Coivaras, Curralinhos, Demerval Lobão, José de Freitas, Lagoa Alegre, Lagoa do Piauí, Miguel Leão, Monsenhor Gil, Nazária, Pau D`Arco do Piauí, Teresina e União), possui localização entre as longitudes 42 48` O e 42 34` O latitude entre 4 45` S e 5 4 S` O. A área total da Microrregião é de 9.213,120 Km 2, caracterizada por possuir propriedades de pequeno e médio portes consorciadas com bovinos. Durante a visita foram aplicados questionários junto ao produtor abordando dados sobre a propriedade, rebanho, manejo nutricional, reprodutivo e higiênico-sanitário. Com base nestes questionários determinou-se o perfil sócio econômico sanitário e reprodutivo dos rebanhos estudados. RESULTADOS E DISCUSSÃO Nas propriedades investigadas o número médio de animais encontrados neste estudo foi 97, com rebanhos possuindo de 10 a 300 animais, esse resultado diverge da média de 121 animais encontrada por Silva (2011), visto que difere também da média 54 encontrada por Souza Neto et al.(1995). Observou-se que do total de propriedades analisadas predominaram aquelas menores que 50 ha com 43,7% (7/18), aquelas maiores com 200 ha que representaram 27,7% (5/18). Quanto ao padrão racial foi encontrado 27,7% Santa Inês, 22,2% mestiços da raça Santa Inês, 11,1% Dorper e 33,3% sem padrão racial definido (SPRD). Esses resultados diferem dos obtidos por Silva (2011) que encontrou um percentual de 73,3% de animais SPRD. Com relação ao sistema de criação o sistema extensivo é praticado por 77,7% (14/18), das propriedades, seguido pelo sistema semi-intensivo utilizado em 16,6% (3/18) e somente 5,5%(1/18) dos produtores utilizavam o sistema intensivo. Esses dados diferem dos encontrados por Pinheiro Junior (2008) que observou 65,38% das propriedades utilizando o sistema de criação semi-intensivo. Outro ponto analisado foi a alimentação e constatou-se que a maioria dos produtores alimenta os animais a pasto, com a porcentagem de 77%,seguida pelo volumoso 27,7%. Quanto as instalações 50% 461

174 das propriedades utilizam apenas galpão, 38,8% ripado suspenso e 11,1% utilizam cama. A monta a campo foi identificada em 70% dos rebanhos, e a ocorrência de repetição cio de foi relatada em 27,7% dos rebanhos. Em 22,2% das propriedades há ocorrência de abortos. Em 94,4% dos rebanhos, os ovinos são criados em consorcio com outras espécies. Em relação ao manejo sanitário 83,3% das propriedades realizavam apenas a desverminação e 11,1% não realiza nenhum manejo sanitário. 38,8% dos produtores vacinavam os animais contra clostridioses e 27,7% contra raiva. Das criações de ovinos analisadas, as que recebiam algum tipo de assistência veterinária somaram 38,8%. CONCLUSÃO A análise dos resultados demonstrou que nos municípios da Microrregião de Teresina investigados predomina propriedades com até 50 ha, onde os animais são criados extensivamente com instalações não muito adequadas. Apresentando deficiências em relação ao manejo sanitário e reprodutivo. Sendo necessário, portanto, a adoção de medidas que forneçam assistência técnica e profissionalização dos produtores. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS LEITE, E. R.; SIMPLÍCIO, A. A. Sistema de Produção de Caprinos e Ovinos de Corte para o Nordeste Brasileiro, Acesso em 15/10/2011; disponível em: < CaprinosOvinosCorteNEBrasil/importancia.htm.> PINHEIRO JUNIOR, J. W, Epidemiologia das infecções por Brucella abortus, Brucella Ovis, Chlamydophila abortus e Toxoplasma gondii em rebanhos ovinos no estado de Alagoas p. Tese (Doutorado em Ciência Veterinária)- Curso de Pós- Graduação em Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco. SILVA,R.A.B e. Caracterização epidemiológica das lentiviroses de pequenos ruminantes na Microrregião Homogênea de Teresina, Piauí, SOUZA NETO, J.; BAKER, G. A.; SOUSA, F. B. Análise socioeconômica 692 da exploração de 693 caprinos e ovinos no Estado do Piauí. Pesquisa Agropecuária Brasileira, v.30, n.8, p ,

175 Pesquisa de anticorpos anti- B. ovis em ovinos na Microrregião de Teresina-Pi Detection of anti-b. ovis in sheep in the Microregion Teresina-Pi Gardênia Alves da Silva 1, Romulo José Vieira 1, Letícia Soares de Araujo Teixeira 1 *, Antonio Sousa Junior 1, Joice Corina Assunção Cardoso 1, Ana Lys Bezerra Barradas Mineiro 1 1 Universidade Federal do Piauí - UFPI * letycinha_araujo@hotmail.com ABSTRACT In order to conduct research on the occurrence of Brucella ovis in sheep in the cities of Teresina, Lagoa Alegre, Demerval Lobão, União, José de Freitas, Lagoa do Piauí, Monsenhor Gil and Nazária. The blood collection by venipuncture was performed between the months of September 2011 to March The search for antibodies antibrucella ovis was performed by the technique of Agar Gel Immunodiffusion (AGID), the laboratory of the pathophysiology of reproduction of the Federal University of Piaui (UFPI). Five samples of 336, 1.4% (5/336) was reactive. These results reveal that found antibodies to Brucella ovis in sheep in the properties of the four municipalities of the region of Teresina in a relatively low prevalence level. Key words: Brucellosis, Brucella ovis, prevalence, sheep Palavras chave: Brucelose, Brucella ovis, Prevalência, ovinos INTRODUÇÃO A brucelose ovina, causada por Brucella ovis, é uma doença contagiosa caracterizada por um quadro clínico de epididimite, abortamentos e mortalidade perinatal de cordeiros, diminuindo a eficiência reprodutiva nos rebanhos e provocando elevadas perdas econômicas à ovinocultura (GIL-TURNES & MAGALHÃES NETO, 1996). O objetivo do presente trabalho foi de realizar uma investigação da ocorrência de B. ovis nos rebanhos dos municípios da Microrregião de Teresina, Piauí. MATERIAL E MÉTODOS Foram analisadas amostras de 336 animais oriundos de 18 rebanhos de oito municípios da Microrregião de Teresina, Piauí. Em cada propriedade, participaram da amostra, de forma aleatória, um máximo de 20 animais por fazenda, constituído por 463

176 60% de matrizes, 30% de jovens (entre 6 a 12 meses) e 10% de reprodutores adultos. A colheita de sangue por venopunção foi realizada entre os meses de Setembro de 2011 a Março de Os tubos contendo as amostras foram mantidos numa caixa isotérmica contendo gelo para o transporte. Para obtenção do soro o sangue foi submetido à centrifugação 3000rpm por 10 minutos. A pesquisa de anticorpos anti-brucella ovis foi realizada por meio da técnica de Imunodifusão em Gel de Agar (IDGA), no Laboratório de Fisiopatologia da Reprodução da Universidade Federal do Piauí (UFPI). RESULTADOS E DISCUSSÃO De acordo com os dados obtidos no presente trabalho, 27,7% (5/18) das propriedades investigadas apresentaram pelo menos um caso de ovino soropositivo para Brucella ovis pelo teste de IDGA. Das 336 amostras analisada cinco, 1,4% (5/336) (Tabela 1) foram reagentes. Estes resultados revelam que foram encontrados anticorpos anti- Brucella ovis em ovinos nas propriedades de quatro municípios da microrregião de Teresina em um nível de prevalência relativamente baixo. Tabela 1. Distribuição da frequência de ovinos sorpositivos ao teste de IDGA por municípios da Microrregião de Teresina PI. Municípios IDGA N Positivas (%) Negativas (%) Lagoa Alegre 23 1(4,34) 22(95,66) Teresina 17 0(0,00) 17(100,0) Demerval Lobão 20 0(0,00) 20(100,0) Lagoa do Piauí 15 1(6,66) 14(9,34) José de Freitas 122 0(0,00) 122(100) Monsenhor Gil 80 2(2,50) 78(97,50) União 55 1(1,80) 54(98,18) Nasária 4 0(0,00) 4(100,0) Total 336 5(1,4) 331(98,50) Fazendo-se a comparação dos resultados deste estudo com resultados obtidos em outras investigações, a frequência de ovinos sororreagentes para Brucella ovis (1,4%) observada nesse trabalho foi próxima a relatada por Silva et al. (2009), no estado da 464

177 Bahia (3,27%). No entanto é inferior aos dados obtidos por Azevedo et al., (2004), no Rio Grande do Norte (11,3%). Essa discordância nos valores de positividade pode ser atribuída a fatores climáticos ou condições de manejo e pelas diferenças na amostragem, bem como pela utilização de testes sorológicos distintos e pela ocorrência de reações cruzadas com outras bactérias quando da utilização da técnica de Imunodifusão em Gel de Agar (BAIGÚN et al., 2000; ESTEIN, 1999;). CONCLUSÃO Com os dados obtidos neste estudo foi possível constatar que há ocorrência de anticorpos anti Brucella ovis nos municípios da Microrregião de Teresina, Piauí, sendo necessária a adoção de medidas sanitárias como a realização de exames clínicos e sorológicos nos rebanhos, bem como a eliminação dos animais positivos. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS AZEVEDO, S.S.; ALVES, C. J.; ALVES, F. S. L.; CLEMENTINO, I. J.; BATISTA, C. S. A.; AZEVEDO, A.S. Ocorrência de Anticorpos anti- Brucella ovis em Ovinos Procedentes de Quatro Municípios do Estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Agropecuária Técnica, v.25, n.2, p.45-50, BAIGÚN, R.; CONIGLIARO, A.S.; LUNA, F. Aislamiento de Brucella ovis y control de reaccion antesserológicos em epididimitis ovina. Veterinaria Argentina, v.17, n.162, p , ESTEIN, S.M. Aspectos inmunologicos em El diagnóstico y control de La Epididemites contagiosa Del carnero por Brucella ovis. Arch. Med. Vet., vol.31, n.1, p.5-17,1999. SILVA, N. S;BARROS, I N; DASSO, M G; ALMEIDA, M. G.Á. R.; LABORDA, S. S.; ANUNCIAÇÃO, A. V. M.; MOREIRA, E. L. T.; LIMA-SILVA A. E.; OLIVEIRA, E M. D. Detecção de anticorpos anti-brucella ovis em ovinos do estado da Bahia, Disponível em < Acesso em: 22 de outubro de

178 Potencial de cabras pré-púberes como doadoras de oócitos para a produção in vitro de embriões Goat prepubertal pontencial as donors of oocytes for in vitro embryo production Gerlane Modesto da Silva 1, José Arnaldo Moreira de Sousa 1*, Rafael Rossetto 1, Michelle Karen Brasil Serafim 1, Cláudio Cabral Campelo 1, José Ricardo de Figueiredo 1 1 Laboratório de Manipulação de Oócitos Inclusos em Folículos Ovarianos Pré-antrais (LAMOFOPA) - Faculdade de Veterinária (FAVET) - PPGCV - Universidade Estadual do Ceará (UECE). * arnaldomoreirasousa@hotmail.com ABSTRACT The aim of this study was evaluate the goat preantral follicles (PF) in vitro development from prepubescent or pubescent animals. PF were individually cultured for 18 days in a two-dimensional system. Follicular development parameters were evaluated. After the cultivation period was observed that all parameters were similar (P <0.05) when comparing both groups follicular (from prepubescent or pubescent animals) tested. It was concluded that caprine PF from prepubertal animals exhibit in vitro development similar to adult goats. Key words: preantral follicle; oocyte; in vitro maturation Palavras chave: folículo pré-antral; oócito; maturação in vitro INTRODUÇÃO A biotécnica de manipulação de Oócitos e Folículos Ovarianos Pré-antrais (MOIFOPA) somada à incorporação de animais juvenis pode reduzir o intervalo entre gerações e aumentar a taxa de ganho genético através do fornecimento de um grande número de oócitos maturos por fêmea para a produção in vitro de embriões. Estudos anteriores em ovinos e bovinos têm sugerido uma diferença no desenvolvimento folicular de animais pré-púberes e púberes baseado em testes comparando principalmente a maturação (MIV), fertilização e produção de embriões in vitro a partir da punção de oócitos provenientes de folículos antrais nesses dois tipos de animais (Romaguera et al., 2011). Entretanto, em caprinos, ainda não foi realizado nenhum estudo comparando o desenvolvimento in vitro de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) provenientes de animais pré-púberes e púberes. O objetivo do presente estudo 466

179 foi testar a influência do estágio fisiológico reprodutivo do animal doador de ovários no desenvolvimento in vitro de FOPA. MATERIAL E MÉTODOS Ovários de animais pré-púberes (n=12) e de cabras adultas (n=12) foram coletados e transportados ao laboratório em no máximo uma hora a 4ºC em meio essencial mínimo tamponado com HEPES acrescido de antibióticos (100 µg/ml de penicilina e estreptomicina). No laboratório, FOPA com diâmetro entre µm foram isolados por microdissecção e selecionados para o cultivo. Os folículos provenientes de ovários de animais pré-púberes constituíram o grupo experimental PP, enquanto que aqueles provenientes de cabras adultas foram chamados de AD. O meio de cultivo utilizado para ambos os grupos testados foi o α-mem suplementado com ITS (insulina 10 µg/ml, transferrina 5,5 µg/ml e selênio 5 ng/ml), glutamina (2 mm), hipoxantina (2 mm), albumina sérica bovina (3 mg/ml), ácido ascórbico (50 µg/ml), fetuína (10%), na presença de Fator de Crescimento Vascular Endotelial (VEGF-100 ng/ml) e FSH acrescido ao meio de forma sequencial: 100, 500, e ng/ml, nos dias 0, 6, e 12. Os folículos foram cultivados individualmente em gotas de 100µl de meio de base em placas de Petri sob óleo mineral, em estufas previamente calibradas a 39 C, 5% de CO 2 durante 18 dias. Para avaliar o desenvolvimento folicular os parâmetros analisados foram percentuais de sobrevivência através da microscopia de fluorescência, formação de antro, extrusão oocitária, crescimento folicular e número de oócitos crescidos obtidos para maturação in vitro (maiores que 110 µm). Com relação à análise estatística, o teste de Kruskal Wallis foi utilizado para comparar os parâmetros de desenvolvimento folicular anteriormente citados (P<0,05). RESULTADOS E DISCUSSÃO Após 18 dias de cultivo in vitro, FOPA ovarianos oriundos de animais prépúberes obtiveram taxas de sobrevivência, extrusão, formação de antro, diâmetro e taxa de crescimento (µm/dia) bem como número de oócitos destinados à MIV similares aqueles folículos que foram retirados do córtex ovariano de cabras púberes (Tab. 1). Tal resultado pode ser justificado pela seleção do diâmetro folicular inicial que foi igual nos dois grupos testados. Mais recentemente Romaguera et al. (2011) demonstrou que a capacidade oocitária não depende do estádio reprodutivo do animal 467

180 doador de oócitos, mas sim do diâmetro dos folículos desse animal. Além disso, o tamanho do folículo, morfologia e diâmetro oocitário estão correlacionados com a competência de maturação e capacidade de fecundação do mesmo, pois a proporção de oócitos competentes é diretamente proporcional ao crescimento folicular (Jinyoung et al., 2010). Sendo assim os folículos com diâmetro inicial similar e que ao longo do cultivo se comportaram de forma semelhante com relação aos demais parâmetros avaliados nos dois grupos testados no presente trabalho justificam a taxa de oócitos destinados à MIV similares. Tabela 1. Desenvolvimento in vitro de FOPA caprinos pré-púberes (PP) ou adultos (AD). GRUPO %Sobrevivência %Antro %Extrusão Diâmetro (µm) Crescimento* %Oócitos MIV PP 64,71 AB 47,06 A 58,82 A 456,63±18,04 AB 17,77±6,96 A 64,71 AB AD 51,35 B 43,24 A 45,95 AB 557,82±217,92 A 19,78±9,76 A 51,35 B Letras maiúsculas distintas, na mesma coluna, indicam diferença significativa (P<0,05) entre os grupos testados. Dados expressos média ± desvio padrão.*µm/dia CONCLUSÃO Concluiu-se que FOPA de cabras pré-púberes possuem capacidade de desenvolvimento folicular in vitro similar aos provenientes de cabras adultas sugerindo que também possam ter capacidade meiótica, de fertilização e produção embrionária similares. REFERÊNCIAS ROMAGUERA, R.; MOLL, X.; MORATÓ, R.; ROURA, M.; PALOMO, M. J.; CATALÁ, M. G.; JIMÉNEZ-MACEDO, A. R.; HAMMAMI, S.; IZQUIERDO, D.; MOGAS, T.; PARAMIO, M. T. Prepubertal goat oocytes from large follicles result in similar blastocyst production and embryo ploidy than those from adult goats. Theriogenology, v.76, p.1-11, JINYOUNG, K.; JINYOUNG, Y.; SANG-HWAN, H.; GENE, L.; JEONGMOOK, L.; EUNSONG, L. Developmental competence of morphologically poor oocytes in relation to follicular size and oocyte diameter in the Pig. Molecular Reproduction e Development, v. 77, p ,

181 Produção in vitro de embriões na espécie caprina em diferentes períodos do ano In vitro production in goats in different seasons Ricardo de Macedo Chaves; Madson Atila Vidal e Silva 1 ; Daniela Pinto Sales 1(*) ; José Ribamar de Souza Torres Júnior 2 ;Paulo Fernandes Lima 3 ; Marcos Antônio Lemos de Oliveira 3 1 Laboratório de Reprodução Animal da Universidade Estadual do Maranhão - UEMA, São Luis MA, Brasil 2 Laboratório de Reprodução Animal da Universidade Federal do Maranhão UFMA, Chapadinha MA, Brasil 3 Laboratório de Biotécnicas da Reprodução do Departamento de Medicina Veterinária da Universidade Federal Rural de Pernambuco - UFRPE, Recife-PE, Brasil. * danyhailin@hotmail.com ABSTRACT This study aims to evaluate the influence of dry and wet seasons in the capacity of developing oocytes and in vitro production ofembryos of goats. Ovaries of goats were collected at abattoirs in the dry season (October-March) and rainy (April-September) and transported to the Laboratory of Reproductive Biotechnology UFRPE. The cumulus oophorus complexes (COCs) were collected by the technique of "slicing" of follicles between 2-6 mm in diameter and selected based on morphological classification. 12 repetitions were performed, where the COCs were submitted to maturation, fertilization and cultivation. The percentage of cleaved oocytes was determined on day 3 (D-3) and the oocytes that have developed to the stage of 8-16 cells (D-4), morula (D-5) and blastocyst (D-8) after fertilization. Significant difference (P <0.05) phases of fertilization, cultivation in D-3 and morula. The results show no influence of dry and wet seasons in the capacity of developing oocytes and in vitro production of embryos of goats. Keywords: Apoptosis, cumulus oophorus complexes, fertilization, oocyte development. Palavras-chave: Apoptose, complexos cumulus oophorus, fertilização, desenvolvimento oocitário. 469

182 INTRODUÇÃO A infertilidade causada pelo estresse térmico é um problema de ordem multifatorial, pois afeta as funções fisiológicas e celulares. O estresse térmico causa no oócito e no embrião o processo de morte celular programada conhecida como apoptose, em que ocorre autodigestão controlada das células (Roth e Hansen, 2004). A manipulação dos mecanismos envolvidos na indução de apoptose embrionária após o estresse térmico representa alternativas para minimizar os efeitos negativos da temperatura elevada sobre a capacidade reprodutiva das fêmeas (Paula-Lopes e Hansen, 2002b). Diante da necessidade de conhecer os efeitos do estresse térmico calórico no oócito e no embrião, objetivou-se como este estudo avaliar a influência das estações seca e chuvosa na capacidade de desenvolvimento de oócitos e produção in vitro de embriões da espécie caprina. MATERIAL E MÉTODOS Foram utilizados ovários de cabras SRD com idade variando de 12 a 46 meses, oriundas de abatedouro, onde foram acondicionados em garrafa térmica. No intervalo máximo de uma hora os mesmos foram transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE). Os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram colhidos de folículos ovarianos que mediam entre 2 a 6 mm de diâmetro pela técnica de fatiamento slicing e o líquido folicular foi depositado em placa de Petri contendo o meio de colheita (MC). Os oócitos foram lavados (3 vezes) no meio de coleta, onde foram maturados em gotas de 100 L no meio de maturação. Antes da exposição aos espermatozóides, os mesmos foram avaliados quanto à morfologia, onde somente aqueles que apresentaram boa expansão das células do cumulus foram lavados em mdm. A fragmentação de DNA característica de apoptose foi analisada com o ensaio de TUNEL. Foram realizadas 12 repetições, sendo o número de oócitos na estação na seca (n = 1249) e na chuvosa (n = 1235), sendo que os CCOs foram submetidos à maturação in vitro (MIV), fertilização in vitro (FIV) e produção in vitro (PIV). Para a análise estatística foi realizada análise de variância pelo método dos quadrados mínimos. Considerando as medidas tratadas em percentuais procedemos ao 470

183 seguinte teste, uma comparação de variâncias, pelo teste F para variâncias ao nível de significância 5% (P < 0,05), para variâncias equivalentes ou variâncias distintas (Sampaio, 2007). RESULTADOS Em relação ao total de estruturas recuperadas, os resultados demonstram que não existem diferenças (P > 0,05) entre as médias do número de oócitos recuperados nas estações seca e chuvosa. Quanto a média dos oócitos maturados in vitro também não houve diferenças significativas (P > 0,05) em função da estação do ano. Entretanto, no que se refere à fertilização in vitro mantendo-se as mesmas condições, foi encontrada diferença significativa (P < 0,05) entre os grupos estudados nas estações seca e chuvosa. Durante o processo de produção in vitro dos oócitos fertilizados, foi observado que as médias dos embriões clivados no D-3 e dos embriões na fase de mórula (D-5) apresentaram diferenças significativas (P < 0,05) quando comparado as estações seca e chuvosa. Já os embriões cultivados in vitro (CIV) no D-4 e os que chegaram à fase de blastocistos (D-8) não apresentaram diferenças significativas (P > 0,05) entre essas duas estações do ano. Não foi encontrada diferença significativa (P > 0,05) no teste de TUNEL em blastocistos cultivados até o D-8 com relação as estações climáticas observadas neste estudo, embora, a porcentagem de blastocistos com fragmentação no DNA positivos para apoptose na seca (12,28%) tenha sido proporcionalmente superior a porcentagem encontrada na estação chuvosa (7,24%). CONCLUSÃO Conclui-se que não houve influência dos períodos do ano na capacidade de desenvolvimento de oócitos e na produção in vitro de embriões na espécie caprina. REFERÊNCIAS PAULA-LOPES, F. F.; HANSEN P. J. Heat Shock-Induced Apoptosis in Preimplantation Bovine Embryos. Is a Developmentally Regulated Phenomenon. Biology of Reproduction, v.66, p , ROTH, Z.; HANSEN, P. J. Involvement of apoptosis in disruption of developmental competence of bovine oocytes by heat shock during maturation. Biology of Reproduction, v.71, p ,

184 SAMPAIO, I. B. M. Estatística Aplicada a Experimentação Animal, 3ª Ed.. Belo Horizonte: FEPMVZ, p. 472

185 Protocolo de curta duração para indução/sincronização do estro em cabras da raça Saanen Short-term protocol for estrus induction/synchronization in Saanen goat João Vitor Fernandes Clemente, Andreia Fernandes de Souza *, Ericka Veruza Ribeiro, Marina de Paula Almeida, Maria Presciliana de Brito Ferreira, Francisco Fernando Ramos de Carvalho Universidade Federal Rural de Pernambuco * - ABSTRACT Aiming compare the estrus synchronization in Saanen goats using short protocol with five or seven days, 43 goats were subjected to estrus induction and synchronization protocol using intravaginal sponge with 60 mg of medroxyprogesterone acetate (MAP), 0.3 ml cloprostenol and 200 IU of equine chorionic gonadotropin (ecg). The percentage of goats in estrus not differ (P> 0.05) between five days [80%± (16/20)] and seven days [82.6%± (19/23)]. 24 hours after sponge removal 100% (19/19) of the females used in the protocol with seven days showed estrus and 65% (13/16) in the protocol with five days. The percentage of pregnancy was 87.5% in the protocol with five days and 43.5% in the protocol with seven days. Both studded protocols are effective to induce estrus, but the protocol with five days determines higher percentage of pregnant females. Key words: Goat, Synchronization of estrus, Short protocol Palavras-chave: Cabra, Sincronização de estro, Protocolo curto INTRODUÇÃO A caprinovinocultura apresenta um ciclo de crescimento mundial, em particular nas ultimas décadas, o que conduz à ampla necessidade de assistência reprodutiva nas criações para o aumento da eficiência reprodutiva e/ou produtiva dos rebanhos. As técnicas utilizadas para induzir estro e ovulação são importantes ferramentas nos sistemas produtivos existentes, devendo ser eficazes e simples (Maia Júnior et al, 2009). Em protocolos tradicionais, os progestágenos são aplicados por longos períodos (>11 dias), embora as ondas de crescimento folicular em caprinos ocorram a cada cinco ou sete dias (Rubianes & Menchaca, 2003), o que torna injustificável a utilização de 473

186 dispositivos liberadores de progesterona por longos períodos para indução de estro nesta espécie. Objetivou-se com esse trabalho comparar a sincronização de estro em cabras da raça Saanem utilizando protocolo curto com cinco ou sete dias. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado no Setor de Caprinos e Ovinos do Departamento de Zootecnia (UFRPE), localizado em Recife-PE, nos meses de janeiro a abril de Foram utilizados 43 cabras e 02 reprodutores da raça Saanen, submetidos ao regime intensivo com dieta a base de 150 e 500 gramas de concentrado/dia, para cada sexo respectivamente; feno de tifton, água e sal mineral ad libitum. As fêmeas foram distribuídas em quatro lotes L1 (n=10), L2 (n=10), L3 (n=10) e L4 (n=13) de cobertura e submetidas à sincronização do estro através da utilização do protocolo curto de cinco dias para os lotes L1 e L3 e de sete dias para os lotes L2 e L4. Para a sincronização/indução do estro foi utilizada no dia zero (D0) esponja intravaginal com 60 mg de acetato de medroxiprogesterona (MAP; Progespon ) e 0,3 ml de Cloprostenol Sódico (CIOSIN ) por via intramuscular. A esponja permaneceu na porção cranial da vagina durante cinco dias (D5) no protocolo de cinco dias e sete dias (D7) no protocolo sete dias, com administração de 200UI de gonadotrofina coriônica equina (ecg; Novormon 5000) por via intramuscular nos dias (D5) ou (D7), respectivamente. A identificação do estro e as coberturas foram realizadas utilizando machos caprinos adultos e o diagnóstico gestacional através de ultrassom 45 dias após a monta natural. À analise estatística foi realizado utilizando programa SSP versão 15 com nível de significância de 0,05. RESULTADO E DISCUSSÃO Das cabras submetidas à sincronização/indução do estro, 80% (16/20) do protocolo de cinco dias e 82,6% (19/23) do protocolo sete dias manifestaram estro depois da retirada do dispositivo. As taxas de ocorrência de estro foram semelhantes às observadas por Maffili et al. (2005). Com base nesses resultados, observou-se que no protocolo de sete dias, 100 % (19/19) das fêmeas apresentaram estro 24 horas após a retiradas da esponja e no protocolo cinco dias 65% (13/16) apresentaram estro em 24h, após 36 horas 10% (2/16) e 48 horas 5% (1/16), com média de 27 ± 6,92 h, estes resultados confirmam os relatados por Nogueira et al. (2008) onde o intervalo médio 474

187 entre a retirada da esponja e o início do estro foi de 23,9 ± 1,1 h. A duração do estro foi de 39,75 ±7,22 h para o protocolo cinco dias e 38,50 ± 5,4 no protocolo sete dias. O percentual de prenhes dentre as fêmeas que apresentaram estro correspondeu a 87,5% no protocolo cinco dias e 43,5% no protocolo sete dias. Os resultados encontrados no protocolo cinco dias foram superiores aos encontrados por Morais et al. (2008) em cabras da raça Saanen (80%), e menores do que apresentados por Maia Junior et al. (2009) que obtiveram taxa de prenhes de 95% no grupo de cabras tratados com o protocolo clássico para sincronização, esponja (MAP) + ecg. CONCLUSÃO Ambos os protocolos estudados são eficientes na indução do estro. Porém o protocolo de cinco dias determina maior percentual de fêmeas prenhas, deste modo à escolha do protocolo pode está condicionada aos melhores resultados de prenhes obtidos no experimento. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA MAIA JÚNIOR, A., ARAÚJO, A.A., SALLES, M.G.F. Indução e sincronização do estro e da ovulação em cabras leiteiras saanen com uso de dispositivos vaginais associados ou não à ecg ou efeito macho. Acta Veterinaria Brasilica, v.3, n.4, p , MAFFILI,V.V., TORRES,C.A.A., FONSECA, J.F., MORAES, E.A., PONTES, R.A.M. Sincronização de estro em cabras da raça Saanen com esponja intravaginal e CIDR-G. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v.57, n.5, p , MORAIS, D.A.E.F., LIMA, F.R.G., VASCONCELOS, A.M., LIMA, P.O. MORAES, J.H.G. Manifestação de estro, fertilidade e desempenho reprodutivo de cabras leiteiras de diferentes raças em ambiente quente. Caatinga 21:62-67,2008. NOGUEIRA, D.M., LOPES JÚNIOR, E.S., BORGES, G.S., MONTE, A.P.O., MARTINS, S.M. Atividade estral de cabras leiteiras exploradas na região semiárida do nordeste do Brasil utilizando diferentes protocolos de sincronização de estro. V Congresso Norte Nordeste de Produção Animal, 24 à 27 de novembro de 2008, Aracaju-SE,

188 RUBIANES, E.; MENCHACA, A.; CARBAJAL, B. Response of the 1-5 day-aged ovine corpus luteum to prostaglandin F 2α. Animal Reproduction Science, v.78, p.47-55,

189 Qualidade de corpos lúteo em ovelhas superovuladas com FSH associado à rbst Quality of corpus luteum in ewes superovulated with FSH associated with rbst Isôlda Márcia Rocha do Nascimento 1*, Marlon Araújo Castelo Branco 1, Luanna Soares de Melo Evangelista 1, Ana Lys Bezerra Barradas Mineiro 1, Leopoldina Almeida Gomes 1, José Adalmir Torres de Souza 1 1 Reprodução Animal, Universidade Federal do Piauí UFPI, Brasil * isoldamarcia@bol.com.br;. ABSTRACT The objective was to evaluate the effect of the combination of FSH with rbst in superovulation on the quality of corpus luteum and progesterone levels in ewes Santa Ines. 13 donors were used, divided into two groups (G1 and G2). In both groups, the donors were synchronized with vaginal device for 14 days and received 100μg of PGF2α on day 7 and were superovulated, from the 12th day, with 250IU of FSH in six decreasing doses. On the day of implant removal the donor G2 received 125mg of rbst, and were covered by Santa Inês male every 12 hours until the end of estrus. In the sixth day after the first mating was assessed by laparoscopy, the quantity and quality of corpus luteum. The administration protocol in rbst superovulation promoted a significant increase in the number of bodies luteum type I and an increase in the amount of progesterone. Key words: sheep; corpus luteum; progesterone Palavras-chave: ovelha; corpo lúteo; progesterona INTRODUÇÃO O corpo lúteo (CL) é uma glândula endócrina, ovariana e transitória, formada a partir de um folículo que ovulou, tendo como sua secreção primária a P 4. A formação do CL inicia-se por uma série de alterações morfológicas e bioquímicas nas células da teca e da granulosa promovidas pelo LH e somatotropina - ST (Berisha et al., 2000). A ST é um importante fator endócrino estimulador da secreção de P 4 e do desenvolvimento luteínico (Juengel et al., 1997). Também influencia a função luteínica indiretamente pelo aumento da expressão do fator de crescimento semelhante à insulina I (IGF-I) no corpo lúteo. O IGF-I tem efeitos diretos e indiretos na angiogênese do corpo lúteo, pois estimula a proliferação e a diferenciação das células endoteliais (Schams & Berisha, 477

190 2004) e a produção de fator de crescimento endotélio-vascular nas células luteínicas (Schams et al., 2001). Objetivou-se com o presente trabalho avaliar o efeito da rbst na qualidade de corpos lúteo e na quantidade de P 4 em ovelhas da raça Santa Inês. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi conduzido no Setor de ovinocultura da Embrapa Meio-Norte, no município de Campo Maior/PI. Utilizou-se 13 ovelhas Santa Inês, divididas, aleatoriamente, em dois grupos, G1 (n=07) e G2 (n=06), sincronizadas com dispositivo intravaginal (CIDR ) por 14 dias, receberam no 7 dia 100µg de PGF 2 (Ciosin ) e foram superovuladas com 250UI de FSH (Folltropin-V ) em seis doses decrescentes, a partir do 12 dia. No dia da retirada do implante as doadoras do G2 receberam 125mg de rbst (Boostin ). Caracterizada a manifestação do estro, as doadoras foram cobertas por monta natural, a cada 12 horas, até o final de estro. No 6 dia após a 1 cobertura, antes das colheitas embrionárias, as doadoras foram submetidas colheita de sangue e avaliação da resposta superovulatória, por laparoscopia. Nesse momento os corpos lúteo foram quantificados e classificados. A classificação dos corpos lúteo procedeu-se em função do seu do tamanho e intensidade de coloração da seguinte forma: CL1 - grande e com coloração vermelho intenso, e CL2 pequeno e com coloração vermelho claro. Nesse momento também se procedeu colheita de sangue para dosagem de P 4. Os dados de qualidade de corpo lúteo foram submetidos à análise não-paramétrica de Mann- Whitney e os de P 4 sofreram transformação e analisados pelo teste SNK. RESULTADOS E DISCUSSÃO A Tab. 01 demonstra que o número total de corpos lúteo em doadoras não tratadas e tratadas com rbst não diferiram estatisticamente entre si, Provavelmente, devido a aplicação do rbst ter ocorrido no final do protocolo de superovulação, momento em que os folículos encontravam-se na fase de dominância. Autores afirmam que o aumento dos corpos lúteo ocorrem quando a aplicação do rbst se dá na fase de recrutamento folicular, pois o rbst aumenta o número de folículos antrais recrutáveis (Roth et al., 2002). A tabela também demonstra que as doadoras tratadas com rbst tiveram corpos lúteo de maiores tamanhos (CL1) quando comparados com as não tratadas. Segundo Pavlok et al. (1996), a rbst potencializa a secreção de IGF-I que 478

191 acelera o crescimento do corpo lúteo. A coloração vermelho intenso verificado no CL1 talvez seja pela maior irrigação sanguínea, pois o IGF-I tem efeitos diretos e indiretos na angiogênese do corpo lúteo, estimulando a proliferação e a diferenciação das células endoteliais (Schams & Berisha, 2004) e a produção de fator de crescimento endotéliovascular nas células luteínicas (Schams et al., 2001). As doadoras tratadas tiveram uma quantidade de P 4 superior (18.881ng/mLx ng/ml), provavelmente por apresentarem corpos lúteos de melhor qualidade. Tabela 01 Corpo Lúteo em doadoras ovinas tratadas ou não com rbst no protocolo de superovulação. Corpo Lúteo Mediana Valor max. Valor min G1 G2 G1 G2 G1 G2 CL T 10 a 9,5 a CL 1 4 b 9 a CL 2 6 b 0 a Letras distintas, na mesma coluna, indicam diferença pelo teste de Mann-Whitney (P<0,05). CL T -Corpo lúteo total; CL 1 -Corpo lúteo tipo 1; CL 2 - Corpo lúteo tipo 2. CONCLUSÃO Concluí-se que a rbst no protocolo de superovulação interfere positivamente na qualidade do CL e promove um incrementa nos níveis de progesterona. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BERISHA, B.; SCHAMS, D.; KOSMANN, M.; AMSELGRUBER, W.; EINSPANIER, R. Expression and tissue concentration of vascular endothelial growth factor, its receptors, and localization in the bovine corpus luteum during estrous cycle and pregnancy. Biology Reproduction, v.63, n. 4, p , JUENGEL, J.L.; NETT, T.M.; ANRTHONY, R.V.; NISWENDER, G.D. Effects of lutheotropic and luteolytic hormones on expression of mrna encoding insulin-like growth factor I and growth hormone receptor in the ovine corpus luteum. Journal Reproduction Fertility, v.110, p , ROTH, Z.; ARAV, A.; BRAW-TAL, R.; BOR, A.; WOLFENSON, D. Effect of treatment with follicle-stimulating hormone or bovine somatotropin on the quality of 479

192 oocyte aspirated in the autumn from previously heat-stressed cows. Journal Dairy Science, v.85, n.6, p SCHAMS, D.; BERISHA, B. Regulation of corpus luteum function in cattle an overview. Reproduction Domestic Animal, v.39, n. 4, p , SCHAMS, D.; KOSMANN, M.; BERISHA, B.; AMSELGRUBER, W.M.; MIYAMOTO, A. Stimulatory and synergistic effects of luteinising hormone and insulin like growth factor 1 on the secretion of vascular endothelial growth factor and progesterone of cultured bovine granulosa cells. Experimental Clinical Endocrinology Diabetes, v.109, n. 3, p , PAVLOK A., KOUTECKA L., KREJCI P., SLAVIK T., CERMAN J., SLABA J., DORN D. Effect of recombinant bovine somatotropin on follicular growth and quality of cattle. Animal Reproduction Science, v. 41, n.3, p

193 Sincronização do estro em fêmeas caprinas nulíparas e pluríparas com CIDR reutilizado sem uso da ecg Estrus synchronization of nulliparous and multiparous goats with CIDR reused without ecg Inti Campos Salles Rodrigues 1*, Maria Gorete Flores Salles 2, Priscila Teixeira de Souza 3, Jardel Cavalcante Lemos 1, Aderson Martins Viana Neto 4, Airton Alencar de Araújo 3 1 FAVET/UECE; 2 Médica Veterinária DSc. LAP; 3 PPGCV/UECE; 4 PPGZ UFC * inti.rodrigues@yahoo.com.br ABSTRACT The objective of this study was to evaluate the response of nulliparous and pluriparous female goats in the short treatment of 5 days with CIDR reused once, in the induction and synchronization of oestrus. Was used 19 nulliparous and 18 pluriparous, which received CIDR (day 0) and the day of withdrawal of CIDR (day 5) received 50μg of PGF 2 α instead of ecg started the male effect. All females in estrus were subjected to controlled natural mating by bucks fertile. Was significant difference (P<0.05) between groups with regard to time of CIDR removal and the beginning of estrus, the lambing rate and prolificacy. The use of CIDR reused once is extremely viable for estrus synchronization of dairy goats, especially in nulliparous. Palavras chave: Sincronização do estro; cabras leiteiras; CIDR reutilizado uma vez. Key words: Estrus synchronization; milk goats; CIDR reused once INTRODUÇÃO O alto custo dos tratamentos hormonais e uma tendência para reduzir a sua utilização por causa de seus resíduos nos alimentos, busca o desenvolvimento de métodos alternativos. A diminuição do protocolo para cinco dias de tratamento com progesterona é suficiente para induzir uma significativa resposta reprodutiva e, sua combinação com métodos não-hormonais, como o efeito macho pode representar vantagens práticas e econômicas. Em caprinos, a associação de CIDR utilizado por curto período, aos agentes luteolíticos como prostaglandinas, possibilita uma taxa de sincronização do estro acima de 90% (Maffili et al., 2006). Embora o fabricante do dispositivo recomende um único uso, a pesquisa sobre a reutilização confirmou uma 481

194 resposta aceitável. Em cabras Guido et al. (2008) com a reutilização do CIDR obtiveram bons resultados de fertilidade. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência reprodutiva do CIDR reutilizado uma vez em nulíparas e pluríparas caprinas criadas em clima tropical. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado em Pacatuba-CE, latitude de 3 53'Sul e longitude de 38 34'Oeste em clima tropical, durante a estação chuvosa do ano de Foram utilizadas 37 fêmeas caprinas, sendo 19 nulíparas com idade média de 10,15 ± 0,37 meses e peso médio de 30,50 ± 3,06 Kg e 18 pluríparas com idade média de 25,88 ± 10,35 meses e peso médio de 41,05 ± 5,40 Kg, criadas em confinamento e alimentadas com concentrado contendo 22,5% de PB, forragem verde com 70% de capim elefante e 30% de leucena com água potável ad libitum. As fêmeas foram divididas em dois grupos: nulíparas e pluríparas. O dispositivo intravaginal previamente usado estava conservado limpo e fechado em papel alumínio e mantido sob refrigeração. No dia zero os CIDR contendo 330 mg de progesterona natural foram introduzidos nas fêmeas (Pfizer, São Paulo, Brasil), no dia cinco retirou-se o dispositivo e aplicou-se 50 μg de PGF 2 α por via intramuscular e, em vez do uso de ecg, foi iniciado o efeito macho duas vezes ao dia, 40 minutos pela manhã e tarde, perfazendo 80 minutos por dia, considerando como inicio do estro quando a fêmea aceitava a monta. O diagnóstico de gestação foi realizado 35 dias após a monta natural controlada, com um aparelho ultrasonográfico da marca CHISON modelo D600VET com transdutor transretal de 5,0 Hertz. Os valores foram expressos em média ± desvio padrão e as análises estatísticas realizadas pelo programa SYSTAT 12. As médias referentes ao aparecimento de estro, intervalo retirada do dispositivo e inicio do estro, taxa de parição e prolificidade foram comparadas pelo teste do Qui-quadrado a 5% de probabilidade. RESULTADOS E DISCUSSÃO O intervalo entre a retirada do dispositivo e o início do estro foi de 31,06 ± 11,27 h para as nuliparas (P<0,05) e de 61,05 ± 19,53 h para as pluríparas, intervalos inferiores aos de Uribe-Velásquez et al. (2011) que encontraram 94,74 ± 82,60 h, mas os autores utilizaram o ecg; e superiores aos achados de Vilariño et al. (2011), que encontraram 25,8 ± 2,9 h. Neste estudo, em média, as pluríparas demonstraram um 482

195 maior tempo para entrar em estro após a retirada do dispositivo, devido a alta produção leiteira de algumas fêmeas. A tabela 1 mostra que a porcentagem de nulíparas em estro foi de 89,5% (17/19) enquanto nas pluríparas foi de 88,9% (16/18). A taxa de prenhez foi de 76,5% (13/17) no grupo das nulíparas e, 68,7% nas pluríparas (11/16), superior a taxa de 66,7% de Uribe-Velásquez et al. (2011) e de 67,4% de Vilariño et al. (2011). A taxa de parição nas nulíparas de 100,0% (13/13) foi significativamente diferente (P<0,05) às pluríparas com 72,7% (8/11), superior aos resultados de Uribe-Velásquez et al. (2011) que obtiveram 44,44%. A prolificidade das nulíparas foi de 1,54 (20 cabritos/13 fêmeas) diferindo estatisticamente das pluríparas 1,87 (15 cabritos/08 fêmeas). Tabela 1 Perfis reprodutivos de nulíparas e pluríparas caprinas, com estro induzido/sincronizado por CIDR re-utilizado uma vez. Taxa de Taxa de Prolificidade Tratamento Categoria N n n1 n2 gestação (%) parição (%) CIDR nulípara ,5 100,0 a 1,54 a plurípara ,7 72,7 b 1,87 b TOTAL N: número total de fêmeas; n: número de fêmeas que entraram em estro; n1: número de fêmeas prenhes; n2: número de fêmeas paridas. Letras minúsculas indicam diferença estatística significativa (P<0,05) CONCLUSÃO O uso do CIDR reutilizado uma vez é extremamente viável na sincronização do estro de cabras leiteiras, principalmente em fêmeas que estão entrando na reprodução. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS GUIDO, S.I.; GUIDO, F.C.L.; NASCIMENTO FILHO, E.V. Avaliação de protocolos hormonais para inseminar cabras em tempo fixo. Medicina Veterinária, v.2, n.3, p.13-18, MAFFILI, V.V. TORRES, C.A.A.; BRUSCHI, J.H. Indução de estro em cabras da raça Toggenburg com dois diferentes dispositivos intravaginais. Arq.Bras.Med.Vet.Zootec., v.58, n.3, p ,

196 URIBE-VELÁSQUEZ, L.F.; TORO, C.G.; ORTIZ, E.E.C. Reutilización del dispositivo de progesterona (CIDR) associado con protocolos de corta duración en cabras. Vet. Zootec., v.5, n.1, p , VILARIÑO, M.; RUBIANES, E.; MENCHACA, A. Re-use of intravaginal progesterone devices associated with the short-term protocol for timed artificial insemination in goats. Theriogenology, v.75, p ,

197 Taxa de gestação de ovelhas da raça Santa Inês suplementadas com produto homeopático Fator Fértil Pó Pregnancy rate of ewes Santa Ines supplemented with homeopathic product Factor Fertile Powder Maíra Oliveira Paixão* 1, Rebeca Santos da Silva 1, Allan Andrade Rezende 1, Roniery Carlos Gonçalves Galindo 1, Emerson Israel Mendes 1, Antonio Matos Fraga Junior 1 1 Depto. de Medicina Veterinária da Faculdade Pio Décimo, Aracaju, SE * paixao_lila@hotmail.com ABSTRACT The objective of this study was to evaluate the efficience of a commercial homeopathic Factor Fertile Powder and examine the improvement of fertility of ewes Santa Ines, transmitted through a mineral supplement. The animals were divided in two randomized blocks forming homogeneous groups. Group 1 (G1) where the control group were maintained for a period of 60 days in paddocks with water ad libitum and supplemented with mineral salt of good quality and the Group 2 (G2) the aminals were kept in different paddocks with water ad libitum and supplemented withgood quality mineral salt plus 1.6 g/animal/day of Fertile Factor Powder. After 60 days of a ruffian was introduced in batches. The females are detected in estrus were inseminated by transcervical. The pregnancy rate observed in the experiment was 66% (33/50) for G1 (control) and 70% (35/50) for G2. The Fertile Factor Powder showed to be efficient to improve the fertility of Santa Ines sheep. Key words: Homeopathy, fertility, treatment Palavras-chave: Homeopatia, fertilidade, tratamento INTRODUÇÃO O uso da homeopatia para o tratamento de animais vem se desenvolvendo com o tempo e tem mostrado como essa prática pode ser benéfica. A homeopatia aplicada na Veterinária é uma realidade que tem apresentado excelentes resultados práticos, desmitificando alguns conceitos e apresentando vantagens. Como a medicação homeopática é exclusividade energética, já que não há matéria no medicamento, não existe o risco de animais medicados transmitirem para a carne e leite os remédios ingeridos. Viabilizando o uso desses produtos para consumo, o produtor continua a 485

198 aferir lucros e garantir alimentos saudáveis para o consumidor. Isso sem contar que os animais estão livres de sofrerem intoxicações medicamentosas (Chabel, et al., 2009). Já existe no mercado produtos comerciais homeopáticos indicados para o aumento da fertilidade das fêmeas domésticas, incluindo as ovelhas. Na região semiárida do Nordeste do Brasil, a exploração de ovinos deslanados e crioulos (tipos nativos) é efetuada para produção de carne e pele, porém o desempenho reprodutivo é fraco, principalmente pelas práticas de manejo deficientes (Menchaca & Rubianes, 2004). Dessa forma o objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia do produto comercial homeopata Fator Fértil Pó, veiculado através do suplemento mineral em uso na propriedade, sobre as taxas de fertilidade de ovelhas da raça Santa Inês,. MATERIAL E MÉTODOS Foram utilizadas 100 ovelhas da raça Santa Inês com idade variando 2,5 e 3,5 anos com escore de condição corporal (ECC) 3 (escala 1-5). O experimento foi realizado no município de Itabaiana, localizado na região agreste no estado de Sergipe. Os animais foram divididos em blocos casualizados formando dois grupos homogêneos quanto à composição genética, idade e escore corporal. O Grupo 1 (G1 - grupo controle) onde foram mantidas por um período de 60 dias em piquetes com água ad libitum e suplementadas com sal mineral de boa qualidade, o Grupo 2 (G2) os aminais foram mantidos em piquetes diferentes com água ad libitum e suplementadas com sal mineral de boa qualidade mais 1,6 g/animal/dia de Fator Fértil Pó. Após o período de 60 dias foi introduzido um rufião nos lotes e as observações de estro foram feitas durante trinta minutos em intervalos de 6 horas, durante 72 hs. As fêmeas que foram detectadas em cio foram inseminadas por via transcervical. O diagnóstico de gestação foi realizado por ultrassonografia transretal (SSD-500; Aloka Co. Ltda, Japão) acoplado a um transdutor linear de 5 Mhz após 21 dias da inseminação artificial. A análise estatística foi realizada por meio do programa estatístico SPSS 10.0 for Windows. As diferenças entre os tratamentos foram testadas pelo modelo linear de variância (ANOVA) e pelo teste t de Student com nível de significância de 5%. 486

199 RESULTADOS E DISCUSSÃO A taxa de gestação observada no experimento foi de 66% (33/50) para o G1 (controle) e 70% (35/50) para o G2 (1,6 g/animal/dia) (Tabela 1). Em trabalho semelhante Carmo et al. (2002) verificaram taxa de gestação em novilhas submetidas a um programa de inseminação artificial em tempo fixo de 48,48% (32/66) para o grupo controle enquanto que os animais do grupo tratado com o produto homeopático Fator Fértil Pó, a taxa de gestação foi de 60,60% (40/66) e que ainda o número médio de repetições de cio por mês caiu de 9,8 para 4,4. CONCLUSÃO A medicina homeopática Fator Fértil Pó, para a melhoria das taxas de fertilidade, provaram ser efetivas sob condições de campo, levando a uma maior garantia de prenhez dos animais e à melhoria dos principais índices de fertilidade avaliados no experimento. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CHABEL, J.C., VAN ONSELEN, V.J, MORAIS, M.G. Efeito de um complexo homeopático Homeobase Convert H em ovinos sob condições de restrição alimentar. Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, São Paulo, v. 46, n. 5, p , 2009 McDONALD, L. E. PINEDA, M. H. Veterinay Endocrinology and Reproduction. 4th. Philadelphia: Lea & Febiger, p MENCHACA, A.; RUBIANES, E. New treatments associated with timed artificial insemination in small ruminants. Reproduction, Fertility and Development, v.16, p ,

200 Teste de susceptibilidade antimicrobiana de bactérias isoladas do prepúcio de ovinos, aos principais antibióticos utilizados no diluidor seminal Antimicrobial susceptibility testing from bacteria isolated of ram foreskin, to main antibiotics used on semen diluter Mysa Tatiana Corrêa Gonçalves 1*, Israel Costa Pires Filho 1, Paula Miranda Costa 1, Sâmara Cristine Costa Pinto 1, Ilderlane da Silva Lopes 1, Ricardo de Macêdo Chaves 1 1 Universidade Estadual do Maranhão - UEMA * mysa_taty@yahoo.com.br ABSTRACT The aim of this study was to isolate microorganisms present in ram foreskin, and check their sensitivity to antibiotics commonly used in semen diluter. The samples were collected from 9 animals, transported in BHI and after plated on blood agar, identification was performed by catalase test and gram stain, was used for the antibiogram penicillin, streptomycin and amoxicillin. Microorganism found was Corynebacterium sp., which showed sensitivity to streptomycin in 44.4% of samples and resistance to other antibiotics. This way, is important know the microorganisms present on foreskin and antibiotics which are sensitive. Key words: Ovine; Foreskin; Antibiogram Palavras-chave: Ovinos; Prepúcio; Antibiograma INTRODUÇÃO A inseminação artificial contribui para o controle e prevenção de certas enfermidades nos animais domésticos como a brucelose e a campilobacteriose. Porém outros microrganismos não específicos procedentes do prepúcio podem contaminar o sêmen durante a coleta ou durante o processamento para congelamento (Trujillo et al., 2002). Visando reduzir essa contaminação é prática decorrente a adição de agentes antimicrobianos aos diluidores seminais, os mais comumente utilizados são pertencentes ao grupo dos ß-lactâmicos, como penicilina e amoxicilina e dos aminoglicosídeos, como gentamicina, estreptomicina e amicacina. A adição de antibióticos no meio e o posterior congelamento diminuem de forma considerável a carga microbiana presente no sêmen, porém estirpes resistentes à penicilina e a estreptomicina estão aumentando nos últimos anos (Genovez et al., 2011). Desta forma 488

201 o presente trabalho teve por objetivo avaliar a flora microbiana presente no prepúcio de ovinos, assim como a sensibilidade desses microrganismos frente aos antibióticos comumente utilizados. MATERIAL E MÉTODOS Foram utilizados 09 reprodutores ovinos mestiços oriundos da ilha de São Luís e São Bento, com idade aproximada de 6 meses, criados em regime extensivo e em bom estado nutricional. As amostras da região prepucial foram coletadas através de swabs microbiológicos estéreis introduzidos no óstio prepucial, imediatamente após a colheita os swabs foram transportados, sob refrigeração, em tubos de ensaio com caldo BHI (Brain Heart Infusion) ao Laboratório de Microbiologia da Universidade Estadual do Maranhão, onde foram incubados à 37 C por 24 horas. Após esse período, procedeu-se a semeadura em placa de ágar sangue desfibrinado de carneiro 5% com auxílio de swab estéril e incubação à 37ºC por 24 horas com a placa invertida. A identificação dos microrganismos foi realizada através da prova de catalase e características morfotintoriais, através da coloração gram. Para o antibiograma foi utilizado o meio ágar Mueller Hinton e testados os antibióticos penicilina 10U, estreptomicina 10µg e amoxicilina 10µg, o teste de sensibilidade antimicrobiana foi realizado pelo método de difusão em discos (Bauer et al., 1966). Os critérios de interpretação dos halos de inibição foram adotados conforme recomendação do fabricante dos discos antibiograma. RESULTADOS E DISCUSSÃO Ocorreu crescimento bacteriano observado através da turvação do caldo BHI, em todas as amostras coletadas. Ao ser transferido para a placa com ágar sangue observou-se o crescimento das colônias e a hemólise causada pelas mesmas, evento observado em todas as amostras. Através da coloração gram observou-se que as colônias eram gram positivas. As bactérias identificadas foram cocos isolados e Corynebacterium sp., microrganismo também em encontrado por Souza et al. (2006) ao realizarem análise do sêmen de caprinos, o que evidencia que microrganismos presentes no prepúcio podem contaminar também o sêmen. Esta contaminação é prejudicial, pois o Corynebacterium sp pode causar cistite hemorrágica, pionefrite, ulcerações e hemorragias na parede da bexiga urinária e necrose de mucosas (Biberstein et al., 1999). Quanto ao antibiograma, todas as amostras foram resistentes a penicilina e amoxicilina, 489

202 4 amostras (44,4%) foram sensíveis a estreptomicina e 1 amostra (11,11%) apresentou sensibilidade moderada a este antibiótico, os dados diferem em parte dos encontrados por Souza et al. (2006), que observou uma sensibilidade de 50% dos microrganismos aos antibióticos penicilina e estreptomicina. Este resultado corrobora com relatos de Genovez et al.(2011) quanto ao aumento do número de estirpes resistentes à penicilina e a estreptomicina nos últimos anos. CONCLUSÃO Nas condições observadas neste experimento, pode-se concluir que a realização de testes para isolamento bacteriano e de antibiograma, buscando a determinação do perfil e sensibilidade microbiana, é uma ferramenta para melhoria dos resultados na reprodução animal, visto que devido ao intensivo uso de antibióticos na medicina veterinária é crescente o fenômeno da resistência bacteriana. REFERÊNCIAS BAUER, A. W.; KIRBY, W. M. M.; SHERRIS J. C.; TURCK, M. Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. American Journal Clinic Pathology. 45:493-6, BIBERSTEIN, E. L.; HIRSH, D. C. Staphylococci. In: HIRSH, D. C.; ZEE, Y. C. Veterinary Microbiology. Inglaterra. v. 21, p GENOVEZ, M.E.; SCARCELLI E.; CARVALHO, A. F. Agentes microbianos associados ao trato genital de touros. Biológico, São Paulo, v.73, n.1, p.1-3, jan./jun., SOUZA, A. F.; GUERRA, M. M. P.; COLETO, Z. F.; MOTA, R. A.; SILVA, L. B. G., LEÃO, A. E. D. S.; SOBRINHO, E. S. N. Avaliação microbiológica do sêmen fresco e congelado de reprodutores caprinos. Brazilian Journal of Veterinary Research and Animal Science, São Paulo, v. 43, n. 3, p , TRUJILLO, L. E. A.; RIVERA, M. R. Estudio comparativo de dos tratamientos con antibióticos sobre la calidad bacteriológica y espermática del semen bovino. Revista Facultad Nacional de Agronomía, Medellín. Vol.55, No.1.p

203 Ultrassonografia para diagnóstico de patologias do sistema genital masculino: Hidrocele em carneiro Dorper Um relato de caso Ultrasonography for diagnosis of diseases from male genital system: Hydrocele in a Dorper sheep A case report Wilton Arruda Gomes 1*, Helder Melo de Souza 1, Ellen Cordeiro Bento da Silva 1, André Mariano Batista 1, Sildivane Valcácia Silva 1, Maria Madalena Pessoa Guerra 1. 1 Laboratório de Andrologia; Universidade Federal Rural de Pernambuco. * wiltonarruda@hotmail.com ABSTRACT Was objective with this case report demonstrating the importance of Ultrasonographic assay for diagnosis of diseases from male genital system in sheep specie. A sheep aged one year was conducted at the Clínica de Grandes Animais from UFRPE with a history of testicular injury in the field. A clinical-andrological and ultrasonographic exams were performed. During the clinical exam was observed substantial increase in the right testicle, without modifications of the adjacent testicle. Was observe per ultrasonography presence of liquid by formation of echogenic images in the scrotal bag, which is characteristic to hydrocele, as well as intestinal loop at the opening of the inguinal ring. The animal was conducted to surgery for partial orchiectomy, with further confirmation of the results obtained in the ultrasonography. Thus, it is evidencing that the ultrasonography is a valuable tool to support for diagnosis of diseases from male genital system. Keywords: reproductive system; ultrassonographic assay; lesion; ram Palavras chave: aparelho reprodutor; exame ultrassonográfico; lesão; ovino INTRODUÇÃO A criação de ovinos no nordeste ocupa importante destaque no cenário nacional devido à maior concentração da ovinocultura nesta região (IBGE, 2010). Em contrapartida, falhas no manejo zootécnico dos reprodutores, como superlotação dos ambientes, podem comprometer o desempenho reprodutivo dos carneiros e aumentar o percentual de acidentes e subsequentes patologias como hidrocele pós-traumática (Rimbaud, 2005); condição que é favorecida pela anatomia pendular dos testículos dos ovinos (Hafez & Hafez, 2004). 491

204 Na hidrocele a bolsa escrotal apresenta-se distendida e sem delimitação do conteúdo, fato que dificulta o diagnóstico desta patologia a campo e torna a ultrassonografia um método eficiente para avaliar a condição do testículo acometido e fornecer subsídio para conclusão do diagnóstico. Desta forma, objetivou-se com este relato de caso demonstrar a importância do uso da ultrassonografia para o diagnóstico de patologias do sistema genital masculino na espécie ovina. MATERIAL E MÉTODOS Deu entrada na Clínica de Grandes Animais da Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) um ovino da raça Dorper, com idade de um ano e histórico de lesão testicular a campo. Foi realizado exame clínico-andrológico e exame complementar com ultrassonografia, no centro de diagnóstico por imagem da UFRPE, para diagnosticar a alteração e direcionar as ações a serem tomadas. As imagens foram feitas em um aparelho de ultrassom equipado com transdutor microconvexo de 5/8 MHz (MyLAB 30 VET GOLD, ESAOTE). RESULTADOS E DISCUSSÃO Ao exame clínico-andrológico (Fig. 1A) observou-se aumento considerável na região do testículo direito sem delimitação da gônada, nenhuma movimentação na bolsa escrotal, elevação de temperatura local e desconforto à palpação; embora o testículo adjacente se apresentasse normal. No estado clínico geral, o animal mostrou-se febril (40,5 ºC), provavelmente devido a uma reação inflamatória decorrente da lesão testicular. Em virtude da impossibilidade de conclusão do diagnóstico, pela não delimitação do órgão acometido, a ultrassonografia foi utilizada. Ao exame ultrassonográfico foi possível verificar a presença de líquido através de imagem ecogênica na bolsa escrotal (Fig. 1B), característico de hidrocele, assim como a presença de alça intestinal na abertura do anel inguinal (hérnia inguinal; Fig. 1C), mediante visibilização de movimentos peristálticos, não presentes fisiologicamente nesta região. Ao término da avaliação ultrassonográfica, o animal foi encaminhado à cirurgia para realização de orquiectomia parcial, ou seja, retirada do testículo acometido pela patologia, com a finalidade de manter a atividade reprodutiva do ovino. Durante o procedimento cirúrgico foi confirmado o laudo ultrassonográfico de hidrocele pela 492

205 presença de líquido e de hérnia inguinal pela alteração na abertura do anel inguinal, o que pode caracterizar a presença das alças no espaço inguinal. Figura 1A: Aumento do volume testicular direito ao exame clínico; Figura 1B: Testículo direito com presença de líquido entre a bolsa escrotal e o testículo (estrela) ao exame ultrassonográfico; Figura 1C: Testículo direito com alteração do parênquima (triângulo), alças intestinais na região anterior do testículo e no cordão espermático (seta) ao exame ultrassonográfico. CONCLUSÃO A partir do exposto no relato de caso, constata-se que a ultrassonografia é uma ferramenta de grande valia no auxílio do diagnóstico de patologias do sistema genital masculino na espécie ovina. REFERÊNCIAS HAFEZ, E.S.E.; HAFEZ, B. Reprodução Animal. 7ª ed., São Paulo: Manole, 2004, 582p. IBGE. Pesquisa Pecuária Municipal. Acesso em 18 de abril de Disponível em: < RIMBAUD, E. Fisiopatología de la reproducción. Acesso em 20 de abril Disponível em: < 493

206 Uso de sêmen ovino resfriado em ACP102 contendo gema de ovo no estado do Piauí: resultados preliminares Use of ram semen cooled in ACP102 containing egg yolk in the state of Piaui: preliminary results Marcimar Silva Sousa 1 ; Felipe Pereira da Silva Barçante 1 ; Pollyana Oliveira da Silva 1 ; Cristiane Clemente de Mello Salgueiro 2 ; Janaina de Fátima Saraiva Cardoso 1 ; Ney Rômulo de Oliveira Paula 1* 1 Universidade Federal do Piauí, * neyromulo@ufpi.edu.br 2 ACP Biotecnologia ABSTRACT The aim of this study was to evaluate the in vivo fertility rate of ram semen cooled at 4 C in ACP-102 with and without egg yolk for the artificial insemination of crossbred Santa Inês sheep. The ewes were divided into three groups: G1: Semen cooled with 2.5% egg yolk; G2: Semen cooled without egg yolk; Control Group: fresh semen estended without egg yolk. Artificial insemination was performed 55 hours after synchronization of oestrus. It was found in G1 a pregnancy rate (33%) similar to the control group (50%). Group 2 showed 31% pregnancy rate lower than the control group, but was similar to the G1. It was observed a greater birth of female offspring for the G2. In conclusion, the use of cooled semen in ACP-102 produces satisfactory results, with greater birth female product without the use of egg yolk as the additive. Key words: ACP 102 ; artificial insemination; sheep Palavras-chave: ACP 102 ; inseminação artificial; ovinos INTRODUÇÃO No Brasil, a utilização de diluentes alternativos parece ser a solução para a adoção da inseminação artificial pelos pequenos produtores, já que a dose de sêmen, principalmente importada, ainda é onerosa. A coleta e diluição de sêmen em soluções à base de água de coco, além de ser econômica, é prática devido à disponibilidade dos frutos no nordeste do Brasil (Salgueiro et al., 2002). No intuito de adaptação do diluidor ao sêmen de cada espécie, a água de coco em pó (ACP) teve seu ph e osmolaridade ajustados para a espécie ovina e recebeu a denominação de ACP-102. Neste sentido, 494

207 este trabalho teve como objetivo avaliar a taxa de fertilidade in vivo do sêmen ovino diluído e resfriado a 4 C em ACP-102 com e sem gema de ovo na inseminação artificial por via cervical superficial em ovelhas mestiças da raça Santa Inês. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado na Fazenda Canaã ( S, O), município de Santa Cruz dos Milagres, no estado do Piauí. Foram utilizados 37 matrizes, mestiças da raça Santa Inês e um reprodutor PO (raça Santa Inês). O rebanho foi submetido à criação semi-intensiva com água de qualidade e sal mineral específico para ovinos ad libitum. Como complementação ao manejo nutricional, as matrizes foram suplementadas com 200g por animal de concentrado. As matrizes foram divididas em três grupos: Grupo Tratamento 1 (G1): Sêmen diluído em ACP-102 adicionado a 2,5% de gema de ovo, a uma concentração final de 1.000x10 6 sptz/ml à dose inseminante de 1.000x10 6 sptz/ml na palheta de 0,25 e conservados a 4ºC por 12 horas; Grupo Tratamento 2 (G2): Sêmen diluído em ACP- 102 sem gema de ovo, com concentração e conservação igual ao grupo tratamento 1; Grupo Controle (GC): Sêmen fresco diluído em ACP-102 sem gema de ovo, a mesma concentração dos demais grupos e utilizando sêmen fresco. A sincronização do estro foi realizada através da colocação de esponjas intravaginais impregnadas com 60 mg de Acetato de medroxiprogesterona (MAP) (Progespon, Syntex, Argentina) que permanecem nos animais por 14 dias. No dia da retirada das esponjas (D14) foi aplicados 300 UI de ecg (Novormon, UI, Intervet, Holanda) por via intramuscular. A inseminação artificial foi realizada 55 horas após a retirada das esponjas. O sêmen foi colhido em vagina artificial, e foi avaliado quanto ao volume, aspecto, motilidade massal, motilidade individual progressiva, concentração espermática e classificados os defeitos maiores e menores. A água de coco em pó (ACP- 102, ACP Biotecnologia, Fortaleza, Ceará, Brasil) foi diluída conforme especificação do fabricante. 495

208 O diagnóstico de gestação foi realizado 30 dias após a IA, com a utilização de um aparelho de ultrassom (Pie Medical 100 ) equipado com um transdutor transabdominal bifrequencial de 5,0-7,5 mhz. Os dados foram descritos de forma descritiva e médias foram comparadas pelo teste do qui-quadrado a 5% de significância. RESULTADOS Após o diagnóstico de gestação, foi verificado no grupo 1 (com gema de ovo no diluidor) uma taxa de gestação (33%) semelhante ao grupo controle utilizando sêmen fresco (50%). O grupo 2 apresentou 31% de taxa de gestação inferior ao grupo controle, contudo foi semelhante ao grupo 1. A taxa de gestação gemelar foi semelhante em todos os grupos testados (Tab. 1). No que se refere ao sexo das crias nascidas, pode-se verificar uma maior tendência no nascimento de crias do sexo feminino para o grupo sem gema de ovo no diluidor (Tab. 1). Tabela 1. Fertilidade de ovelhas inseminadas com sêmen diluído em ACP 102 com e sem gema de ovo em relação à taxa de gestação, taxa de gestação gemelar e sexo dos produtos. Grupos experimentais Letras diferentes na mesma coluna representam diferenças significativas entre os grupos (P<0,05) N o. Animais Taxa de gestação (%) Taxa de gestação Gemelar (%) Crias Macho (%) Crias Fêmea (%) Grupo Tratamento ab 50 a 55,6 a 44,4 a Grupo Tratamento a 50 a 16,7 b 83,3 b Grupo Controle 6 50 b 67 a 60 a 40 a CONSIDERAÇÕES FINAIS A Inseminação Artificial com a utilização de sêmen resfriado diluído em ACP 102 apresenta resultados satisfatórios, bem como apresenta uma maior probabilidade de nascimento de produtos do sexo feminino sem uso de gema de ovo como aditivo. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS SALGUEIRO, C.C.M.; NUNES, J.F.; OLIVEIRA, K.P.L VIEIRA, V.E.; GONDIM, J.M.; MATEOS-REX, E. Utilização de diluentes à base de água de coco in natura e 496

209 em pó na inseminação artificial programada de cabras. Revista Brasileira de Reprodução Animal, Supl., n. 5, p. 96-8,

210 Utilização de transdutor linear e micro-convexo para diagnóstico ultrassonográfico de gestação em cabras e ovelhas Using linear and micro-convex transducer for ultrasound diagnosis of pregnancy in sheep and goat Maria Dolores Sampaio Morais Campos 1, Marcos Antonio Lemos de Oliveira 1, Paulo Fernandes de Lima 1, Cláudio Coutinho Bartolomeu 1, Humberto Fernandes Veloso Neto 1, Alexandre Rodrigues de Paula Junior 1* 1 Universidade Federal Rural de Pernambuco *juniordepaula1@hotmail.com ABSTRACT We used 250 nanny-goats and 250 ewes devided into four groups with 50 female of each species in each experimental group. In Group I nanny-goats and ewes were between the 15 th and 29 th day of pregnancy. In Group II the females were between the 30 th and 59 th days. In Group III they were between the 60 th and 89 th days and in Group IV they were between the 90 th and the 140 th day of pregnancy. For pregnancy diagnosis there were used linear transducer by transretal and abdominal routes and a microconvex endocavitary transducer by the abdominal route. For statistical analysis it was applied the ANOVA test and the T test to compare means. The results obtained in the GI was ; and for the linear transducer by transretal and abdominal routes and for the micro-convex endocavitary transducer by the abdominal route, respectively. For the GII, ; and for the linear transducer by transretal and abdominal routes and for the microconvex endocavitary transducer by the abdominal route, respectively. For the GII, ; and for the linear transducer by transretal and abdominal routes and for the micro-convex endocavitary transducer by the abdominal route, respectively and for the GIV, 7,28 0,34; 6,20 0,23 and 5,84 0,25 49 for the linear transducer by transretal and abdominal routes and for the micro-convex endocavitary transducer by the abdominal route, respectively. We can conclude from the results that, for pregnancy diagnosis in small ruminants by ultrasonography is more advisable to use the transrectal route employing the linear transducer once it allows agility besides its versatility once it can be used by the transretal and abdominal routes. 498

211 Key words: Ultrasound, Diagnostic, Pregnancy, Caprine, Ovine Palavras-chave: Ultrassom, Diagnóstico, Gestação, Caprino, Ovino INTRODUÇÃO Considerando o custo elevado dos equipamentos ultrassonográficos, essa informação é um referencial importante quando da aquisição do modelo, da freqüência e da função do transdutor, haja vista que nenhum apresenta o mesmo desempenho durante todas as fases da gestação. Sendo assim, objetivou-se avaliar a capacidade diagnóstica do transdutor linear pelas vias transretal e abdominal e a do convexo pela via abdominal em diferentes períodos da gestação de cabras e ovelhas, utilizando o tempo de exame como principal parâmetro de avaliação. MATERIAL E MÉTODOS O experimento foi realizado em propriedades privadas da zona da mata e do sertão de Pernambuco que adotam o sistema semi-intensivo de criação com monta natural controlada. As fêmeas das espécies caprina (n = 250) e ovina (n = 250) utilizadas na mesma estação de monta apresentaram idade média de 4,5 anos e escore corporal médio de 3,5. As fêmeas foram divididas em quatro grupos distintos com um n=50 para cada espécie. No Grupo I, as cabras e as ovelhas encontravam-se entre o 15 o e o 29 o dia de prenhez. No Grupo II, as fêmeas estavam entre o 30 o e o 59 o dia. No Grupo III, estavam entre o 60 o e o 89 o dia e no Grupo IV, entre o 90 o e o 140 o dia prenhez. Foi utilizado um aparelho ultrassonográfico equipado com transdutores de dupla freqüência, sendo um linear (6,0 e 8,0 MHz) utilizado pelas vias transretal e abdominal e outro micro-convexo endocavitário (3.0 e 5,0 MHz) por via abdominal. O transdutor linear foi adaptado a um suporte de PVC revestido com fita adesiva para facilitar a manipulação no reto do animal (Oliveira et al., 2004). Para análise estatística foi utilizado o programa SPSS 16 sendo aplicado o teste ANOVA e o Teste T para comparação das médias. RESULTADOS E DISCUSSÃO 499

212 No trabalho realizado, o tempo dispensado para realizar o diagnóstico de gestação, fosse ela simples ou gemelar, foi inferior aos obtidos por Santos et al. (2004) e por Padilha-Rivas et al. (2005) utilizando as mesmas vias e equipamentos semelhantes. O tempo dispensado para diagnosticar a prenhez simples com ambos os transdutores foi menor do que na gestação gemelar. O diagnóstico de gestação é tão rápido e preciso quanto menor for o número de fetos. O exame realizado com o transdutor linear apresentou tempo inferior quando comparado ao micro-convexo, quando o esperado era que o desempenho de ambos fosse semelhante, pelo fato de o micro-convexo apresentar melhor qualidade de imagem e menor desconforto às fêmeas segundo Tenório Filho et al. (2007). O Grupo I exigiu mais tempo de exame quando comparado aos demais grupos, devido à necessidade do operador em diferenciar a presença de líquido intra-uterino, com líquido resultante da fase estrogênica (Azevedo et al. 2001) de origem patológica, como hidrometra. Tabela 1 Tempo médio em segundos ( SE) para realização dos exames ultrassonográficos Grupo Experimental (Dias após cobertura) GI (15 a 29) GII (30 a 59) GIII (60 a 89) GIV (90 a 140) pelas vias transretal e abdominal. Transretal (Transdutor Linear) SE Abdominal (Transdutor Linear) SE V i a d o E x a m e Abdominal (Transdutor Microconvexo) SE 10,21 0,49 a 14,84 0,63 a 12,84 0,45 a 14,73 0,45 a 14,05 0,38 a 13,15 0,49 a 68,21 2,67 a 134,15 1,36 b 138,68 3,49 b 7,28 0,34 a 6,20 0,23 a 5,84 0,25 a Letras diferentes na mesma linha indicam diferença estatística (P<0,05) CONCLUSÕES Para o diagnóstico de gestação em pequenos ruminantes pela ultrassonografia é mais recomendável utilizar a via transretal em conseqüência da agilidade do exame e da 500

213 versatilidade do transdutor linear que pode também ser utilizado por via transabdominal para diagnóstico de prenhez nessas espécies; REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS AZEVEDO, A. et al. Momento de detecção ultra-sonográfica de algumas características do concepto ovino Santa Inês do 20º ao 46º dia de prenhez. Revista Brasileira de Reprodução Animal, v.25, n.2, p , TENÓRIO FILHO, F., M.H.B. SANTOS, P.G. CARRAZZONI, F.F. PAULA-LOPES, J.P. NEVES, C.C. BARTOLOMEU, P.F. LIMA AND M.A.L. OLIVEIRA Follicular dynamics in Anglo-Nubian goats using transrectal and transvaginal ultrasound. Small Ruminants. Research., 72:

214 Varicocele bilateral em ovino da raça Dorper: Relato de Caso Bilateral varicocele in Dorper Ram: Case Report Nivan Antônio Alves da Silva 1, Luiz Teles Coutinho 1, Breno Barros de Santana 2*, Alexandre Tadeu Mota Macedo 1, Luis Eduardo Pereira de Andrade Ferreira 1, Gustavo Ferrer Carneiro 2. 1 Clínica de Bovinos de Garanhuns, UFRPE, Av. Bom Pastor s/n, Mundaú, Cx. Postal 152, Garanhuns, PE , Brasil. 2 UAG /UFRPE, Av. Bom Pastor s/n, Boa Vista, Garanhuns, PE , Brasil. * brenobarrossantana@hotmail.com. ABSTRACT A Dorper ram, with bilateral varicocele was presented at Clínica de Bovinos de Garanhuns, an University facility and had the diagnostic performed by palpation, ultrasound observation and scrotal circumference. Semen evaluation, showed low quality when compared with a normal ram as a control. Abnormal morphology was observed with total defects of 34,5% and major defects of 30,5 % compared with the control ram that obtained 6,5%. A motility of 10% compared with 85% of control and thrombosis of spermatic cord associated with edema, sensibility and calcification focal lesions on both testicular parenchyma. This pathology showed that thermoregulation was compromised and suggests a severe testicular degeneration. Key-words: ram, semen, thermoregulation. Palavras-chave: carneiro, sêmen, termorregulação. INTRODUÇÃO Varicocele é caracterizada por uma dilatação do plexo pampiniforme, estrutura responsável pela termorregulação testicular, causada por um aumento da pressão hidrostática neste local em função de uma possível incompetência da veia testicular. Este distúrbio local ocorre em consequência da trombose da veia espermática interna que pode culminar com a mineralização do parênquima testicular, em função do comprometimento do mecanismo de termorregulação do mesmo (Jubb et al, 1992). Nos animais, a ocorrência deste distúrbio é relatada como rara em touros e ocasional em garanhões, assim como nos carneiros onde tem sido documentada ocorrência de 1 a 2% (Jensen, 1974). Em virtude da escassez de informações na literatura e pelo impacto 502

215 negativo no desempenho reprodutivo dos animais acometidos, tivemos como objetivo relatar a ocorrência deste transtorno em um carneiro da raça Dorper. MATERIAL E MÉTODOS Foi atendido na Clínica de Bovinos, Campus Garanhuns, da Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE) um carneiro da Raça Dorper com dois anos de idade com queixa de infertilidade. O exame físico foi realizado segundo (Diffay et.al., 2004) seguido de exame do sistema reprodutivo através da palpação testicular, mensuração da circunferência escrotal, exame andrológico completo através da coleta de sêmen por vagina artificial e exame ecográfico dos testículos, cordões espermáticos e epidídimos (CBRA, 1998). Utilizou-se um carneiro Santa Inês com qualidade seminal comprovada como controle. RESULTADOS E DISCUSSÃO Foi observada circunferência escrotal de 39 cm, aumento de volume na região do funículo, de ambos os cordões espermáticos, com sensibilidade á palpação. Durante a coleta do sêmen, o reprodutor apresentou comportamento sexual satisfatório desenvolvendo todas as funções necessárias para a coleta: libido regular, demonstrando certo interesse pela fêmea manequim, ereção regular, monta, e ejaculação em aproximadamente 8 minutos. Com relação ao espermograma, o reprodutor apresentou índices insatisfatórios com motilidade de 10% e um total de anormalidades morfológicas de 34,5% das quais 30,5% de defeitos maiores com altos índices de patologia de cauda (27,5%) diferenciando-se significativamente do carneiro utilizado como controle que apresentou motilidade de 85%, e defeitos totais de 6,5%. Foi realizado ainda exame ecográfico dos testículos, epidídimos, cordão espermático com o animal apresentando sinais evidentes de varicocele bilateral (Fig. 1), e presença de lesões focais característica de calcificação no parênquima testicular e epidídimo em ambos testículos (Fig. 2). Foi observado ainda aumento na espessura das túnicas. Á palpação da região do funículo, o animal apresentou sensibilidade. O exame diferiu sensivelmente quando comparado com os testículos do carneiro controle que apresentou parênquima testicular normal (Fig. 3). 503

216 Fig. 2 Imagem ultrassonográfica longitudinal revelando cordão espermático dilatado com predomínio de áreas anaecoícas (Seta Branca) e parênquima testícular com pontos hiperecoícos sugerindo calcificação (Setas Amarelas). Fig. 3: Imagem ultrassonográfica transversal de ambos testículos revelando ecogênicidade fisiológica de carneiro sadio (Setas). CONSIDERAÇÕES FINAIS O comprometimento do mecanismo de termorregulação testicular provocado pela varicocele associado à calcificação afeta sensivelmente a qualidade espermática. De acordo com os achados no exame clínico, ecográfico e avaliação seminal, conclui-se que o caso em questão se refere a uma severa degeneração testicular com trombose e calcificação causada primordialmente por um processo de varicocele bilateral. REFERÊNCIAS BIBIOGRÁFICAS DIFFAY, B. C.; MCKENZIE, D.; WOLF, C. Abordagem e Exame Clínico de Ovinos e Caprinos. In: PUGH, D. G. Clínica de ovinos e caprinos. 1. ed. São Paulo: Roca, p

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