Analisadores de Massas
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- Jessica Marreiro Conceição
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1 Analisadores de Massas
2 Magnéticos-Eletrostáticos BE Quadrupolos Qq Íon-Traps 3D e Íon-Traps Lineares QIT Tempos de Vôo TOF Ressonância Ciclotônica de Íons FT-MS 6- Orbitraps
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4 BE ou EB Dupla Focalização com Setor Magnético e Eletrostático Thomson Aston Dempster 1918
5 V de acelaração típico de 8.000V Energia Cinética dos íons ½ mv 2 = zev onde z = carga do íon V = potencial aplicado Para atravessar o analisador B e chegar ao detector, o íon deve descrever uma trajetória perfeita de raio r B
6 BE ou EB Dispersão de energia cinética na fonte causa perda de resolução. Correção: B + E ou E + B! Em E temos: mv 2 / r E = eze (3) sendo que ½ mv 2 = ZeV (1) (1) + (3) r E = 2V / E Íons que sofreram aceleração exatamente proporcional a V descreverão a trajetória de raio r E no analizador eletrostático e serão transmitidos. Os outros com Ec maior ou menor serão retidos! Analisador E funciona então com um analisador/filtro de energia cinética de íons, aumentando assim a resolução da análise de m/z. B resolução 1.000; B + E ou E + B + E resolução
7 Jurássico! Características principais 1 Pode operar em baixa (1.000) ou alta resolução (até ). 2 Alta precisão nas medidas de massas (5 ppm em alta resolução). 3 Análise discriminatória. Fendas filtram o sinal, baixa transmissão principalmente em alta resolução. 4 Alto custo e complexidade. 5 Íons precisam ser acelerados com alta energia cinética para compensar dispersão de energia na fonte (8 kv). 6 Escala de massas não é linear: m/z α B 2. 7 Varreduras relativamente lentas (efeito de esteresse de campo). 8 Ideal para análise isotópicas precisas: 12 C/ 14 C 1 H/ 2 H
8 Quadrupolos Lineares : Q / q Paul & Steinwedel 1953 Wolfgang Paul Prêmio Nobel 1989 y x z A varredura é feita variando simultaneamente U (DC) e V 0 (AC) mas mantendo constante a relação U/V 0.
9 Analisador de Massas Quadrupolar
10 Equação Mathieu stability diagram
11 3 ev 3,2 ev
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13 Ion Paths in Quadrupoles
14 Quadrupolo Características principais - Baixa resolução: resolução "unitária controlada por U/V 0. - Análise discriminatória. - Íons são acelerados com baixa energia cinética (~15 V). - Varreduras rápidas. - Facilmente acoplados (QqQ e QqQqQ). - Tolerantes a pressões relativamente altas: 10-4 torr. - Quando operam somente com aplicação de AC ("rf-only ) funcionam como focalizadores de íons: câmaras de colisão ou reação.
15 QIT - Quadrupolos "Ion Trap Tridimensionais (3D) Paul & Steinwedel 1953
16 QIT - Quadrupolos "Ion Trap Tridimensionais (3D) Paul & Steinwedel 1953
17 Ion traps Um eletrodo hiperbólico Ring e dois endcap
18 QIT 3D Um eletrodo hiperbólico simétrico na forma de um anel ou "doughnut" ( ring electrode ) é posicionado entre dois eletrodos hiperbólicos ( end cap electrodes ). Aplica-se sobre o ring electrode uma voltagem AC (rf) de amplitude (V) variável e freqüência (~1.1 MHz) fixa (V + coswt) que cria um potencial quadrupolar tridimensional aprisionador. Os eletrodos end cap são aterrados (V = zero). Não se aplica normalmente voltagem dc (U), portanto os QIT podem ser classificados como quadrupolos "rf-only" tridimensionais. Liga-se o filamento e todos os íons formados dentro do QIT (ou ali injetados) de m/z acima de um certo valor limite (determinado por V) são aprisionados por um certo período de tempo (~1 ms). Após este período de captura dos íons, desliga-se o filamento e obtêm-se um espectro de massas pela varredura de V; íons de m/z crescente são acelerados na direção do eixo Z, sendo assim ejetados através de orifício no eletrodo end cap, e detectados. "Bath gas": adiciona-se hélio a uma pressão típica de 10-3 Torr para aumentar sensibilidade e resolução. A repulsão entre íons de mesma carga confinados no centro do trap tende a desestabilizar suas trajetórias por dispersão (efeito "space-charge"). Colisões com o "bath gas" resfriam os íons (energia cinética), mantendo-os aprisionados com refocalização para o centro do trap. Aprisionamento seletivo de íons: Seqüência de eventos. Após o aprisionamento de vários íons, um íon de m/z específico (ex: 100) pode ser mantido no trap, e os demais eliminados. Uma voltagem rf adicional é aplicada nos eletrodos end-cap com amplitude e freqüência ajustadas para eliminar os íons mais pesados (m/z > 100). A amplitude da voltagem rf (V) aplicada no ring electrode é então aumentada até um valor limite (imediatamente inferior aquele necessário para a eliminação do íon de m/z 100), e durante a varredura de V tanto os íons pesados como os leves são sucessivamente eliminados.
19 Trajetória Estável
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24 Características principais QIT Baixa resolução: resolução "unitária". Pode trabalhar em alta resolução em varreduras lentas. Baixo custo, simples, robusto e pequeno: ~ 5 x 5 x 5cm. (Cilíndricos miniaturizados) Eletrônica simples: somente voltagem RF. Escala de massas é linear: m/z α V. Permite experimentos MS n seqüenciais no tempo (ex: MS 13 ). Trabalha com pressões relativamente altas: 10-3 torr. Devido a possibilidade de ocorrer reações íon-molécula durante aprisionamento, espectros de EI podem ser "contaminados" por CI. Fácil realização de CI a pressões relativamente baixas. Baixa precisão nas medidas de massas. Mass-shifts eletrônicos e químicos.
25 Ion traps (MS n )
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27 QIT - Quadrupolos "Ion Traps Lineares Vantagens: ~50 vezes mais sensíveis; maior capacidade de armazenamento. Reduzem os problemas de charge space : repulsão íon-íon e assim minimizam mass-shifts. Sem problemas de self-ci e perda de 1/3 m/z em MS/MS!
28 QIT - Quadrupolos "Ion Traps Lineares Skimmer Ion trap N 2 CAD Gas Dipolar Aux AC Q0 Q1 Q2 Q3 Orifice IQ1 IQ2 IQ3 Exit LINAC linear ion trap 3x10-5 Torr
29 Tempos de Vôo TOF Cameron 1948 Através de um tubo de comprimento L (~ 1m) sob alto vácuo, íons formados por ionização pulsada (~0.25 a 1 ms) são acelerados pela aplicação de uma voltagem V (~1-10 KV) e adquirem velocidades proporcionais as suas m/z's. Ocorre dispersão em tempo e íons de diferentes m/z's chegam ao detector em tempos diferentes : t = (m / 2zeV) 1/2 L O patinho feio Princípio básico: Dispersão no tempo de íons por aceleração seguida da medidas de seus tempos de vôo "livre".
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33 Reflectron Instruments
34 Analisador de Massas por tempo de Vôo. Tof Linear Resolução = 600 Tof Ortogonal Resolução = 3400
35 AumentodaResoluçãoemTOF a) Aceleração Ortogonal Lindo Cisne b) Espelho Elestrostático
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37 Aumento da Resolução em TOF TOF's lineares apresentam baixa resolução devido a duração do pulso de ionização e dispersão de energia cinética dos íons na fonte. Solução paliativa: Aumento de L ou técnicas de aceleração "pós-ionização". Reflectors (Espelhos Eletrostáticos): Uma série de grades ou eletrodos onde se aplica um potencial repulsivo crescente. Os íons penetram angularmente no reflector, são desacelerados por repulsão eletrostática, fazem uma curva, e assim retornam para o tubo de vôo. Considere dois íons de mesma m/z mas com diferentes velocidades, dispersos no tempo. O íon de maior energia cinética, a frente em tempo de vôo, penetra mais profundamente no reflector e ali permanece por mais tempo. O outro penetra menos profundamente, e ali permanece por um tempo menor. A dispersão é corrigida, e os íons são refocalizados em tempo de vôo, com conseqüente aumento da resolução (largura do pico) ou poder de separação. Aceleração ortogonal. o-tof: Íons são produzidos de forma contínua na fonte de ionização, e acelerados. O feixe de íons é focalizado com o auxílio de lentes e quadrupolos/octapolos "rf-only". Uma aceleração pulsada e ortogonal ao movimento do feixe de íons é aplicada. Íons então adquirem velocidades "ortogonais" que não são influenciadas pelas suas velocidades divergentes adquiridas pela aceleração na fonte.
38 TOF Características principais. TOF's lineares: baixa resolução. TOF's com reflector: média resolução. o-tof's com reflector: alta resolução e alta precisão ( 5 ppm). Análise não-discriminatória. Alta sensibilidade. Baixo custo, fácil manutenção. Varreduras extremamente rápidas. Ampla faixa de varredura > 10 6 u. Único analisador acoplável a MALDI de macromoléculas. Hoje, uma das melhores relações custo/benefício.
39 FTMS Espectrometria de Massas com Ressonância Ciclotrônica de Íons (ICR) e Transformada de Fourier Comosarow & Marshal 1974 Monster MS
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41 FT-MS Uma cela cúbica é posicionada no centro de um íma supercondutor (~ 3-7 Tesla). Os íons formados dentro da cela (ou ali injetados) se movem em uma trajetória circular perpendicular ao eixo do campo magnético, de frequência angular (frequência de ressonância ciclotrônica) w c proporcional ao campo magnético B e as suas m/z's: w c = zeb/m Para evitar que íons escapem da cela, uma baixa voltagem dc é aplicada aos eletrodos de aprisionamento gerando um campo elétrico E perpendicular ao campo magnético B. Uma voltagem rf é aplicada aos eletrodos transmissores (laterais). Varre-se então rapidamente a frequência da voltagem rf (pulso) mantendo-se B constante. Quando a frequência de rf (w rf ) se iguala a frequência angular de oscilação de algum íon: w c, este absorve energia com aumento de velocidade e do raio de sua orbita mas sem alterar a frequência de sua oscilação. Após poucas rotações, os íons que absorveram energia estarão se movendo sincronizadamente. Esta oscilação ciclotrônica é sentida pelos eletrodos receptores (superior e inferior), produzindo uma corrente com frequência iqual a w c. Rápida variação de w rf pode ser realizada, sendo o espectro de massas obtido pela aplicação de FT. Princípio básico: Aprisionamento de íons em uma campo magnético/elétrico, seguido da medida de suas frequências de ressonância ciclotrônica.
42 Princípios de operacão do ICR (FTMS) Partículas carregadas irão apresentar um movimento circular em um campo magnético com uma frequência ciclotrônica relacionada ao seu valor de m/z! F = z (v x B) F = massa. aceleração zvb = mv 2 r ω c = v = zb r m F = mv 2 r ν c= ω c = zb m = B 2π 2πm z 2πν c
43 Características principais FT-MS Altíssima resolução (função de B como em RMN) que diminue com o aumento de m/z. Alta sensibilidade íons precisam normalmente oscilar para serem sentidos pelos eletrodos receptores. Alto custo (supercondutores), difícil manutenção. MS n. Operação semelhante aos ion-traps. Trabalham sob altíssimo vácuo (< 10-8 Torr) enquanto a quantidade de íons aprisionados na cela é pequena ("charge-spacing"). Muito utilizados em estudos de reações íon-molécula (estudos cinéticos) e em análise de altíssima resolução-precisão.
44 Orbitrap
45 Detecção de Íons (Multiplicadores de Eléctrons)
46 Copper-Beryllium (CuBe) Discrete Dynode Multipliers Alta sensibilidade mas relativamente instáveis frente a seguidas exposições à atmosfera
47 Continuous Dynode Multipliers Duráveis e mais resistentes a exposiçoes frequentes à atmosfera
48 1- Gramofone de vidro com superfície interna de óxido de chumbo causa um gradiente de voltagem atrativo para elétrons. 2- Íons incidindo sobre a superfície em alto potencial negativo (~ V) causam a emissão de ~ 3 elétrons/íon. 3- Processo de multiplicação de elétrons em cascata: ganho de !!
49 Conversion Dynode Um eletrodo complementar onde se aplica voltagem de 3-20 KV. Aumenta a sensibilidade para íons de alta massa!
50 MCP - Micro-Channel Plates Multiplicadores de électrons compactos de alto ganho. MCP consistem de cerca de canais do mesmo diametro formados por drawing, etching, or firing in hydrogen a lead glass matrix. Diâmetro típico de ~ 10 microns.
51 Detectores MCP - microchannel plates Detectores ultra sensíveis utilizados na maioria dos espectrômetros com TOF. Vários canais multiplicadores de elétrons.
52 Detectores Fotomultiplicador dynode phosphor photomultiplier Dinodo de conversão transforma íons positivos ou negativos em elétrons. Estes elétrons atingem uma superfície de fósforo e emite fótons. Os fótons atingem um fotocatodo produzindo elétrons que são amplificados pelo fotomultiplicador.
53 Os top MS são MS/MS ou MS n e Híbridos!
54 EBqQ Triploquadrupolo Setor EBEB
55 Qtof Waters-Micromass Hybrid High-Resolution Quadrupole Orthogonal Time-of-Flight Mass Spectrometer (MS 2 ) ESI-APCI
56 Qtof Waters-Micromass Hybrid High-Resolution Quadrupole Orthogonal Time-of-Flight Mass Spectrometer (MS 2 ) ESI-APCI
57 QTrap - Quadrupolos com Ion Traps Lineares (QqLTQ) TM N 2 CID Gas Dipolar Aux RF linear ion trap 3x10-5 Torr
58 QqFT-MS The APEX-Q platform combines a Q-q- "front-end" and a high field FTMS magnet (9.4 or 12 Tesla) for the ultimate resolution proteomics mass spectrometer.
59 LCMS-IT-TOF Shimadzu introduces the first high resolution LCMS-ion trap-time-of-flight mass spectrometer Featuring MS n Capability Shimadzu's new LCMS-IT-TOF is a novel hybrid mass spectrometer for biomarker discovery, metabolite identification and human health research, and ideal for applications in forensics, drug development, and environmental chemistry. Coupling atmospheric pressure ionization with Ion-Trap (IT) and Time-of-Flight (TOF) technologies, the LCMS-IT-TOF delivers high mass accuracy and high mass resolution (10,000 at 1000 m/z) independent of MS mode.
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61 Ion Trap Linear com FT-MS
62 Ion Trap Linear com FT-MS For the first time in the history of mass spectrometry, the LTQ FT combines the ruggedness, versatility, and MS n capabilities of the most advanced ion trap mass spectrometer with the accurate mass measurement capability of a Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance analyzer. This has been achieved without compromising the analytical capabilities of either the ion trap or the FTICR-MS.
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64 Triploquadrupolos?
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