Validação Microbiológica de Desinfetantes
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- Thiago Barata de Almeida
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2 ' 1+ Objetivos: remover matéria orgânica e arrastar microrganismos das superfícies aplicadas; Causa: Matéria orgânica favorece proliferação microbiana; Ferramenta: Água + detergentes (neutros + enzimas) + auxiliares mecânicos; Pré-requisito: à desinfecção e à esterilização; Efeito: Facilitar acesso do agente desinfetante ao microrganismo.
3 Procedimentos de Desinfecção Procedimentos para eliminar microrganismos patogênicos, com exceção dos esporos. Fatores interferentes: limpeza prévia do item; concentração do agente químico; tempo de exposição; temperatura e valor de ph do produto dissolvido.
4 Níveis de Desinfecção Desinfecção de baixo nível: destruição das células, vírus e fungos. Sobrevivem: Mycobacterium tuberculosis, esporos bacterianos, vírus da Hepatite B (HBV) e esporos. Desinfecção de médio nível: destruição Mycobacterium tuberculosis, a maioria dos vírus (inclusive o HIV) e dos fungos. Sobrevivem: Mycobacterium spp, esporos bacterianos e vírus. Desinfecção de alto nível: Sobrevivem: esporos bacterianos mais resistentes.
5 ' 2 +! " Objetivo: Eliminação ou destruição completa de todas as formas de vida: vírus, bactérias, fungos, protozoários, esporos; Assegurar: Nível de segurança de esterilidade; Garantir: CONSERVAÇÃO do item.
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7 Indicador Biológico (IB) O indicador biológico é uma suspensão caracterizada de microrganismos específicos resistentes a um determinado processo. Os indicadores biológicos não devem ser patogênicos. Devem multiplicar-se rapidamente facilitando sua detecção. Permitir a reprodutibilidade e a precisão do teste. Apresentar resistência ao agente esterilizante, desinfetante ou sanitizante independente da microbiota presentes no artigo ou ambiente.
8 ÁGUA Sistemas de Tratamento e Purificação
9 ÁGUA Principais Contaminantes Contaminantes particulados: originários da fonte (poço ou superfície), incrustação das tubulações, material das válvulas, lamas, poeiras, pólen, areia, minerais não dissolvidos e materiais orgânico (restos de vegetais, animais, etc); Contaminantes inorgânicos: incluídos o cálcio, magnésio, zinco, ferro, alumínio e outros sais, assim como metais pesados (cromo, níquel, cobalto etc), os gases dissolvidos de carbono, que alteram o valor de ph > 7,0;
10 ÁGUA Principais Contaminantes Contaminantes orgânicos: são os subprodutos resultantes da degradação vegetativa natural. TOC (carbono orgânico total), presentes no pó e em substâncias aderentes à superfície. Contaminação microbiológica: microrganismos em geral e subprodutos, incluindo endotoxinas e pirogênios. Indicador biológico representativo ao bioburden específico da superfície a ser limpa.
11 Sistemas de Purificação de Água A pureza da água depende da sua utilização. A água na indústria farmacêutica é o principal insumo : -Incorporação ao produto; -Processos de limpeza, enxague, desinfecção e higiene pessoal e diluição de desinfetantes. O sistema de purificação da água deve atender a qualidade esperada.
12 Sistemas de Purificação de Água Devido ao procedimento de limpeza e desinfecção do sistema de purificação de água ser Clean in Place (CIP), pode propiciar a formação de biofilmes em suas tubulações. Este biofilme pode albergar e conseqüentemente espalhar microrganismos dentro do sistema, aumentando o números de particulados, bactérias e o nível do carbono orgânico total (TOC).
13 ÁGUA Formação de Biofilmes
14 Fluxo de um Sistema de Purificação de Água
15 Tratamento de Água Poço artesiano Decationizador Torre de descarbonatação Pré-Filtro 3µm Tanque 7500L Tanque 25000L Carvão ativo WFI EM RECIRCULAÇÃO Osmose reversa D ei Pré-Filtro 1,0-1,2 µm o n iz a d o r Anfótero 80ºC
16 Padrões Farmacopeicos de Qualidade de Água Água Purificada Condutividade TOC Microrganismos Limites < 1,3 µs/cm < 0,5 mg/l < 100 UFC/mL
17 Validação de Desempenho Água de alimentação Ponto 1 Filtros Multimeios Ponto2 Abrandadores Ponto 3 Filtro de Carvão Ponto 4 Filtro de 5 micras Ponto 5 Osmose Reversa Ponto 6 Deionização continua Ponto 7 Água Purificada Ponto 8 UV- Ponto 9 Filtros de 0.05 micras Ponto 10 Pontos de Uso Ponto 11,12,13
18 Monitoração Microbiológica e de Pirogênio Amostragem: Pontos sanitizados com álcool 70%, e água recebida em sacos estéreis de polietileno Filtração: As amostras são filtradas por membrana 0,45 um e incubadas em meio específico para contagem total e coliformes totais.
19 U F C /1 0 0 m L Bioburden por Ponto de Amostragem pontos de amostragem
20 Isolamento e identificação microbiana Microrganismos P. aeruginosa P. picketti P. vesiculares P. diminuta F. aureum P. fluorescences A. lwoffi P. putida P. alcaligenes P. paucimobilis F. multivorum Contagem Total Colônias % 32,05 23,08 12,82 11,54 6,42 5,13 2,56 2,56 1,28 1,28 1,28 100%
21 Áreas úmidas: drenos, baldes, mops... a pele... Podem ser fontes permanentes de cepas de Pseudomonas, espalhando-se para outras áreas. Desinfecção pode ser ineficaz e selecionar cepas resistentes.
22 Agentes químicos Agente [ ] de uso (%) ph Ponto de Uso Tempo de Contato (min) Aplicação Minncare PAA (0,45%) + H2O2 (2,2%) 2,1 Osmose Reversa, Deionizador 180 Desinfetante Álcool Pontos Externos 1 Desinfetante Hipoclorito de Na + 0,5 10 Tanque de Água e linha de distribuição 60 Desinfetante Bissulfito de Na + 1,0 4,0 Filtros Multimeios, Abrandadores, Filtro de Carvão 90 Declorinação NaOH 0,4 12,8 Osmose Reversa, Deionizador 30 Ajuste de ph Ác. Cítrico 0,5 2,4 Osmose Reversa 30 Ajuste de ph HCl 0,5 0,3 Deionizador 30 Ajuste de ph
23 Concentração Inibitória Mínima - MIC Avaliação do espectro de ação do agente químico, e determinação da concentração mínima inibitória, Utilizando-se do método clássico de diluição sucessiva. Aferindo a resistência inicial do microrganismo, Portanto, MIC é um parâmetro importante para a escolha do desinfetante.
24 Concentração Inibitória Mínima - MIC
25 MIC - Resultados Agente Químico inicial 70% Etanol 1% Minncare 0,4% NaOH 0,5% Hipoclorito de Na + 0,5% Ác. Cítrico 0,5% HCl 0,5% Bissulfito de Na + P. aeruginosa 17,5 0,5 0,3 0,25 0,25 0,16 0,078 E. coli ATCC ,18 0,06 0,1 0,06 0,125 0,16 0,03
26 Tempo de Redução Decimal- Valor D Tempo necessário para reduzir 1 ciclo logarítmico (90%) na população microbiana inicial frente ao agente químico que está sendo testado.
27 Valor - D
28 Valor D Hipoclorito de Sódio 0,5% Log (UFC/m L) 2 1,5 1 0,5 0 P.aeruginosa D=9min E.coli D=4min tempo de contato (min) MIC P.aeruginosa = 0,25%; E.coli = 0,06%
29 Ciclos Logarítmicos Reduzidos Hipoclorito de Sódio 0,5% N= (tempo total de aplicação)/valor D N= 60 min de contato/ 9 min 5 ciclos
30 Valor D Minncare 1,0% Minncare 1% Log (UFC/mL) 2,00 1,50 1,00 0,50 0,00 P.aeruginosa D=5min E.coli D=4min tempo de contato (min) MIC P.aeruginosa = 0,50% E.coli = 0,06%
31 Ciclos Logarítmicos Reduzidos Minncare 1,0% N= (tempo total de aplicação)/valor D N= 180 min de contato/5 min 36 ciclos
32 Ambiente Hospitalar Microrganismos são introduzidos por diversas fontes (ex.: humanas, medicamentos, alimentos contaminados e, até mesmo, por germicidas). O ambiente mais susceptível a contaminação e proliferação de microrganismos é o berçário, pois nele estão os recém-nascidos, que por não terem seu sistema imune completamente formado contraem doenças e infecções com grande facilidade.
33 Ambiente Hospitalar " %. / * % " 8 $ 9: - - " " " + ;< =. +!
34 Ambiente Hospitalar 6 & > 011? 0111" + + > " - + &" - 9
35 Ambiente Hospitalar A * 3 3 * 9 B - - C D: $ E D" 9
36 Ambiente Hospitalar : - >@@>C F 9: +. / &9 - " 4 G - F E - E - 9 H >@@>C - - * " & +. / 9
37 Ambiente Hospitalar Surtos de infecção hospitalar podem ser controlados por adequação dos métodos de limpeza, desinfecção e esterilização, respeitando as áreas, equipamento e materiais médicoodontológicos.
38 Microrganismos Testados (Gramnegativos e Gram-positivos) E.coli S.aureus B.subtilis B.stearothermophilus
39 Desinfetantes Concentrações e Tempos de Contato Agente Clorexidina Hipoclorito de Sódio NaDCC Glutaraldeído Formaldeído Concentração 0,4% 0,5% 1 e 2% 2,2% 0,5% Tempo de Contato 30 segundos 10 a 1h 10 a 1h 30 a 10h 30 a 18h
40 MIC Tabela Bactéria Agente (%) Clorexidina Glutaraldeído Formaldeído Álcool CRA ph>7 NaDCC B. stearo B. subtilis A. calcoaceticus E. cloacae E. coli S. marcencens S. aureus Obs CRA: Compostos liberadores de cloro ativo
41 Lavagem das Mãos
42 Lavagem das Mãos
43 Valor - D C : 1 >@ 0"J 0 > J ; A
44 Valor - D Clorexidina 0,4% x S.marcences Log UFC 1,5 1,2 0,9 0,6 0,3 0 D= 4 min tempo de contato
45 Valor - D F. / CK L 4@">A M 0">A2?, > B + " C B L 0)@">A B L ;
46 Valor D CLOREXIDINA (400mg/L) Desinfectio n n=6 Sterilization n=12 Microorganism ph Concentration D Value t(min)=n.d t(min)=n.d (mg/l) (min) A.calcoaceticus E. cloacae E. coli S. aureus S.marcescens B. stearothermophilus B. subtilis
47 Valor D CLOREXIDINA (400mg/L) log CFU A calcoaceticus E. cloacae E.coli S. aureus S. marcescens Time (min)
48 Compostos Liberadores de Cloro Ativo Aplicações Desinfecção em geral de objetos e superfícies inanimadas, inclusive as contaminadas com sangue e outros materiais orgânicos; Recipientes de descarte de materiais. Desinfecção de superfícies e artigos semicríticos não-metálicos e artigos de lactários.
49 Valor D Hipoclorito de Sódio (0,5% ou 500mg/mL) Desinfection Sterilization n=6 n=12 Microorganism ph Concentration D Value t(min)=n.d t(min)=n.d (mg/l) (min) B. stearothermophilus B. subtilis E. coli
50 Valor D Hipoclorito de Sódio (0,5% ou 500mg/mL) log CFU B.stearothermophilus B. subtilis E.coli Time (min)
51 Valor D LIBERADORES DE CLORO ATIVO Desinfection n=6 Sterilization n=12 Microorganism ph Concentration D Value t(min)=n.d t(min)=n.d (mg/l) (min) A.calcoaceticus B. stearothermophilus E. coli S. aureus S.marcescens B. subtilis E. cloacae
52 Valor D LIBERADORES DE CLORO ATIVO A calco aceticus E. clo acae E. co li S. aureus S. m arcencens log CFU Time (min)
53 Valor D DICLOROISOCIANURATO DE SÓDIO (NaDCC) Desinfection n=6 Sterilization n=12 Microorganism ph Concentration D Value t(min)=n.d t(min)=n.d (mg/l) (min) A.calcoaceticus E. cloacae E. coli S. aureus S.marcescens B. stearothermophilus B. subtilis
54 Valor D DICLOROISOCIANURATO DE SÓDIO (NaDCC) log CFU A calcoaceticus E. cloacae E. coli S. aureus S. marcescens Time (min)
55 GLUTARALDEÍDO Aplicações Esterilizante e desinfetante de equipamento médico - cirúrgicos que não podem ser submetidos a métodos físicos de esterilização. Desinfecção rigorosa de endoscópios de fibra ótica, para equipamento de anestesia gasosa, artigos metálicos e equipamentos de aspiração.
56 Valor D GLUTARALDEÍDO (2000mg/L) Desinfection Sterilization n=6 n=12 Microorganism ph Concentration D Value t(min)=n.d t(min)=n.d (mg/l) (min) A.calcoaceticus B. stearothermophilus B. subtilis E. cloacae E. coli S. aureus S.marcescens
57 Valor D GLUTARALDEÍDO (2000mg/L) A calcoaceticus B. stearothermophilus B. subtilis E.cloacae E.coli S. aureus S. marcescens log CFU Time (min)
58 FORMALDEÍDO Aplicações Fumigação de ambientes fechados ; Esterilizante de artigos críticos termossensíveis; Desinfecção de artigos semicríticos; Desinfecção de capilares dos sistemas dialisadores; Não é recomendado para desinfecção rotineira de superfícies, devido a sua toxicidade.
59 Valor D FORMALDEÍDO (500mg/L) Desinfection Sterilization n=6 n=12 Microorganism ph Concentration D Value t(min)=n.d t(min)=n.d (mg/l) (min) A. calcoaceticus B. stearothermophilus B. subtilis E. cloacae S. marcescens
60 Valor D FORMALDEÍDO (500mg/L) log CFU A calcoaceticus B.subtilis S. marcescens B.stearothermophilus E.cloacae Time (min)
61 Valor D HYDROGEN PEROXIDE (1.5%) Auxiliar de limpeza Desinfection Sterilization n=6 n=12 Microorganism ph Concentration D Value t(min)=n.d t(min)=n.d (%) (min) B. stearothermophilus 2,5 23 4,67 28,02 56,04 B. subtilis 2,5 1,5 4,9 29,4 58,8 E. cloacae 2,5 1,5 1,74 10,44 20,88 E. coli 2,5 1,5 2,25 13,5 27 S. aureus 2,5 1,5 3,13 18,78 37,56 Obs. Recomendação à concentração de 7,5%, como desinfetante.
62 Valor D HYDROGEN PEROXIDE (1.5%) lo g CF U B. stearothermophilus B. subtilis E. coli S. aureus time (min)
63 Valor D H 2 O 2 + PERACETIC ACID Desinfection Sterilization n=6 n=12 Microorganism ph Concentration D-value t(min)=n.d t(min)=n.d (mg/l) (min) A.calcoaceticus B. stearothermophilus B. subtilis E. cloacae E. coli S. aureus S.marcescens
64 Valor D H 2 O 2 + PERACETIC ACID lo g C F U A calcoaceticus B. subtilis E. cloacae E. coli S. aureus S.marcescens B. stearothermophilus Time (min)
65 Fenol + detergentes Adicionado em baldes com água e detergente neutro, na limpeza de superfícies não críticas. Resultados prévios: Contagem geral de microrganismos inferior a 30 UFC/ ml de água
66 5 ( $ ( 8 3 K + N B C 0A)3 7 ): 6 $ 7 01< < " >00)3 7 ): 6 $ " 012)3 7 ): $ < J" 00J)3 7 ): $ J" 0>>)B 6 011J" >00)3 7 ): 6 $ " 7 * 0>J;>" 01? <!9 O 1J@>? : 011>9B P - 6 * +. P 9B + Q / "8 & "7. / 0" 90>>? 14< 0";7 9011>9 C C))R R R ) 9 9, S : 9B + "7 : * - K, S : 6 R T U " K - 011< 9>1> 9 S S "' 9S U K, 9? >C>< A4JA29011? 9S S CS U K, 011? "? >C>< A4JA2
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