3M TM Petrifilm TM Placa para Listeria em Monitoramento Ambiental. Guia de. Interpretação

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1 M TM Petrifilm TM Placa para Listeria em Monitoramento Ambiental Guia de Interpretação

2 M TM Petrifilm TM Placa para Listeria em Monitoramento Ambiental Este guia familiariza você com os resultados das placas M Petrifilm para Listeria em Monitoramento Ambiental. Para mais informações, entre em contato com o representante oficial da M Microbiologia mais perto de você. A Placa M Petrifilm para Listeria em Monitoramento Ambiental (EL) é um sistema de meio de cultura pronto para uso, que contém agentes seletivos, nutrientes, um agente geleificante solúvel em água fria, e um indicador cromogênico que facilita a detecção das colônias de Listeria. As Placas Petrifilm EL foram designadas para analisar amostras ambientais e ajudar a aumentar a eficiência do monitoramento da sanitização da planta. A presença do indicador Listeria, como Listeria innocua evidencia que as condições ambientais estão propícias para a ocorrência de Listeria monocytogenes. A Placa Petrifilm EL detecta a maioria das espécies de Listeria ambiental, como Listeria monocytogenes, Listeria innocua e Listeria welshimeri*. Muitos organismos no ambiente podem estar estressados devido às condições ambientais ou sanitizantes. Água peptonada tamponada (APT) é utilizada como um caldo de recuperação em conjunto com a Placa Petrifilm EL para recuperar a Listeria estressada sem aumentar o número de células. A recuperação na APT não é uma etapa de enriquecimento Esta Placa Petrifilm EL NÃO tem colônias após 28h de incubação. O teste está completo. Interpretação Quantitativa: Colônias de Listeria nesta placa: <1. Por favor, consulte a seção Amostragem Quantitativa deste guia para calcular a quantidade de Listeria por amostra ambiental. registrado como categorias que sejam significativas para seu local de amostragem e seu padrão individual da planta (ex: baixo, médio, alto, ou aceitável e inaceitável). Interpretação Qualitativa: Listeria não detectada Esta Placa Petrifilm EL tem SOMENTE colônias vermelho-violeta intenso após 28h de incubação. O teste está completo. Interpretação Quantitativa: Colônias de Listeria nesta placa: 11. Por favor, consulte a seção Amostragem Quantitativa deste guia para calcular a quantidade de Listeria por amostra ambiental. registrado como categorias que sejam significativas para seu local de amostragem e seu padrão individual da planta (ex: baixo, médio, alto, ou aceitável e inaceitável). *Para mais informações sobre a prevalência das espécies de Listeria, por favor, entre em contato com o representante oficial da M Microbiologia mais perto de você. L. ivanovii, L. grayi/murray e L. seeligeri crescem, mas não formam colônias típicas.

3 Vários fatores influenciam a velocidade na qual o indicador cromogênico muda para o vermelho-violeta intenso, incluindo a cepa e a natureza e grau de estresse na qual o organismo foi exposto. a. a. Antes do total de 0 horas de incubação, se alguma colônia estiver presente, mas não estiver vermelho-violeta intenso (por exemplo, cinza ou rosa claro, como mostrado na figura a), então continue incubando até as 0 horas. No tempo máximo de incubação de 0 horas, as colônias que não apresentarem coloração vermelho-violeta intenso (colônias que permanecem cinza ou rosa claro, como mostrado na figura a), não devem ser interpretadas como Listeria. Interpretação Quantitativa: Colônias de Listeria nesta placa: <1. Por favor, consulte a seção Amostragem Quantitativa deste guia para calcular a quantidade de Listeria por amostra ambiental. registrado como categorias que sejam significativas para seu local de amostragem e seu padrão individual da planta (ex: baixo, médio, alto, ou aceitável e inaceitável). Interpretação Qualitativa: Listeria não detectada. b. b. No tempo máximo de incubação de 0 horas, colônias que estavam cinza ou rosa claro e mudaram para vermelho-violeta intenso durante a incubação (como mostrado na figura b) devem ser interpretadas como Listeria. Interpretação Quantitativa: Colônias de Listeria nesta placa:. Por favor, consulte a seção Amostragem Quantitativa deste guia para calcular a quantidade de Listeria por amostra ambiental. registrado como categorias que sejam significativas para seu local de amostragem e seu padrão individual da planta (ex: baixo, médio, alto, ou aceitável e inaceitável). Nota: Não considere ou conte as colônias na barreira de espuma, uma vez que elas estão fora da influência seletiva do meio.

4 4 4. Uma vez que a Placa Petrifilm EL pode ser interpretada de três formas, não é sugerida nenhuma faixa de contagem. Quando houver muitas colônias, interprete o resultado (qualitativo ou semiquantitativo) ou estime a contagem (quantitativo), como descrito: Interpretação Quantitativa: Colônias estimadas de Listeria nesta placa: 600 est.. Quando grandes números de Listeria estão presentes, faça a estimativa determinando a contagem por quadrado de dois ou mais quadrados representativos. Determine a média por quadrado e então multiplique por 42. A área inoculada da placa é aproximadamente 42 cm 2. registrado como categorias que sejam significativas para seu local de amostragem e seu padrão individual da planta (ex: baixo, médio, alto, ou aceitável e inaceitável) Quando as colônias estão presentes em grandes números, as placas Petrifilm EL podem apresentar colônias muito pequenas, indistintas e/ou uma cor homogênea salmão em toda a placa. Interpretação Quantitativa: Listeria nesta placa é muito numerosa para contar (Incontável, aproximadamente 10 4, mostrada nesta figura). registrado como categorias que sejam significativas para seu local de amostragem e seu padrão individual da planta (ex: baixo, médio, alto, ou aceitável e inaceitável) A cor de fundo pode variar devido à presença de pó, terra, grão, cascalho ou outro sedimento do ambiente amostrado ou, tipo de dispositivo de coleta da amostra e/ou da marca de água peptonada tamponada (caldo de recuperação). Interprete ou conte as colônias vermelho-violeta intenso como Listeria. Interpretação Quantitativa: Colônias de Listeria nesta placa: 11. Por favor, consulte a seção Amostragem Quantitativa deste guia para calcular a quantidade de Listeria por amostra ambiental. registrado como categorias que sejam significativas para seu local de amostragem e seu padrão individual da planta (ex: baixo, médio, alto, ou aceitável e inaceitável).

5 Instruções de Uso M TM Petrifilm TM Placa para Listeria em Monitoramento Ambiental Consulte a bula que se encontra dentro da embalagem do produto para informações detalhadas sobre PRECAUÇÕES, LIMITAÇÕES DA GARANTIA, LIMITAÇÕES DE RESPONSABILIDADE DA M, ARMAZENAMENTO E DESCARTE E INSTRUÇÕES DE USO. Armazenamento Petrifilm Petrifilm Petrifilm 1 Armazene os pacotes fechados a < 8 o C. Utilize-os antes de vencer o prazo de validade impresso nos pacotes. Em áreas de alta umidade recomenda-se deixar que os pacotes atinjam a temperatura ambiente antes de serem abertos. Preparo da Amostra Para fechar os pacotes abertos, dobre a 2 extremidade e vede com fita adesiva. Para evitar exposição à umidade, não refrigere os pacotes abertos. Armazene os pacotes vedados em um local fresco e seco por um período inferior a um mês. Evite expor as placas a temperatura > 25 o C e/ou umidade relativa > 50%. Assepticamente, adicione 2 ml (swab) ou ml (esponja) de água peptonada 6 Colete as amostras ambientais usando um swab M Quick Swab ou equivalente, esponja ou outro dispositivo de coleta pré-hidratado. O agente de hidratação deve ser <10 ml de água estéril, água peptonada tamponada (APT) ou, se houver presença de sanitizantes, é recomendado tampão neutralizante, como Caldo Letheen ou Caldo Neutralizante. Inoculação tamponada estéril (caldo de recuperação), entre 20 e 0 o C, à amostra coletada. Não utilize caldos de enriquecimento nesta placa. Misture, homogeneíze, ou agite vigorosamente a amostra coletada com a APT por, aproximadamente, 1 minuto. Deixe a amostra ficar em temperatura ambiente, 20-0 o C, por 1 hora até o máximo de 1 hora e 0 minutos, então misture vigorosamente de novo. Esta etapa é necessária para a recuperação da Listeria injuriada. Coloque a Placa Petrifilm EL em uma Com a M TM Pipeta Eletrônica ou uma superfície plana. Levante o filme superior. pipeta equivalente, posicionada perpendicularmente à Placa Petrifilm EL, coloque ml da amostra no centro do filme inferior. Desça o filme superior sobre a amostra.

6 <70 F Incubação Interpretação 10 Delicadamente, coloque o difusor plástico no filme superior sobre o inóculo. Não pressione, gire ou arraste o difusor. Retire o difusor. Aguarde, ao menos, 10 minutos para permitir a formação do gel. Nota: se o inóculo espalhar sozinho, o difusor não é necessário Incube as placas com o lado transparente para cima, em pilhas de até 10 placas, por 28h ± 2h a 5ºC ± 1ºC ou 7ºC ± 1ºC. Não ultrapasse 0 horas. A incubação, além do tempo recomendado, pode dar resultados ambíguos. As Placas Petrifilm EL podem ser contadas ou interpretadas usando um contador de colônias comum ou qualquer outra fonte de amplificação. Não conte as colônias na espuma porque elas estão fora da influência seletiva do meio. O método da Placa M TM Petrifilm TM para Listeria em Monitoramento Ambiental pode ser usado como um teste quantitativo, semiquantitativo ou qualitativo. Para um teste quantitativo, conte e Para um teste semiquantitativo, registre os registre todas as colônias vermelho- resultados com base no nível relativo de violeta intenso. Você pode escolher um teste quantitativo se deseja tomar diferentes ações com base no número presente. colônias vermelho-violeta intenso presentes. Você pode escolher um teste semiquantitativo se deseja tomar diferentes ações, dependendo do nível relativo presente, e se não for necessário o registro do número atual. Para um teste qualitativo, registre o resultado da placa como detectado ou não detectado, com base na presença ou ausência de colônias vermelho-violeta intenso. Você pode escolher um teste qualitativo se uma resposta sim/não for suficiente e apropriada para o seu reporte. Colônias de Listeria nesta placa: 16 Por favor, consulte a seção Amostragem Quantitativa deste guia para calcular a quantidade de Listeria por amostra ambiental. O nível de Listeria deve ser registrado como categorias que sejam significativas para seu local de amostragem e seu padrão individual da planta (ex: baixo, médio, alto, ou aceitável e inaceitável). Não detectada Detectada

7 M TM Petrifilm TM Placa para Listeria em Monitoramento Ambiental Amostragem Quantitativa & Interpretação Se a sua empresa optar por usar a Placa M TM Petrifilm TM para Listeria em Monitoramento Ambiental de forma quantitativa, por favor, consulte a bula do produto, e então calcule as Unidades Formadoras de Colônia (UFC) por área, como mostrado abaixo. Você pode, também, querer considerar os seguintes pontos: Consistência é a chave para obter informações úteis do seu programa de monitoramento ambiental. Utilize um procedimento consistente toda vez que amostrar. O ideal é utilizar o mesmo tipo de dispositivo e técnicas de amostragem. O tamanho da área amostrada pode ser baseado na legislação, padrões internos, e/ou local do monitoramento. Por exemplo, você pode precisar amostrar uma área maior para uma linha de produto final devido ao fato do número esperado de bactéria ser baixo. Mais informações sobre amostragem ambiental podem ser encontradas nas referências listadas abaixo, e no folheto Procedimentos de Monitoramento Ambiental para Placas M TM Petrifilm TM. PARA DETERMINAR a quantidade de Listeria por área amostrada, você precisará registrar: 1) o tamanho da área amostrada 2) o volume do líquido de hidratação no dispositivo de amostragem ) o volume da água peptonada tamponada adicionada 4) o volume plaqueado 5) o número de colônias contadas APLIQUE a seguinte equação para determinar UFC/área amostrada. Exemplos são dados nas páginas seguintes. Veja a Bula e as Instruções de Uso para detalhes completos do método. Você pode também determinar o resultado por amostra, por exemplo, UFC/ralo. UFC/área = (Número de colônias x [ml de líquido de hidratação + ml APT] ml) área amostrada OU A. Número total de ml de APT + líquido de hidratação B. Número de ml plaqueado C. Divida a linha A pela linha B D. Número de colônias contadas (se o número de colônias for zero, insira <1 na linha D ) E. Multiplique a linha C pela linha D F. Área amostrada G. Divida a linha E pela linha F A linha G é igual a UFC/área ml A B C D E F G A amostragem quantitativa ambiental é consistente com as seguintes referências: Standard Methods for the Examination of Dairy Products, Section.7D, American Public Health Association, Washington D.C., Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, section.512 and.521, American Public Health Association, Washington D.C., 2001.

8 Interpretação Quantitativa Exemplo: Método de Contato por swab M Quick Swab Abril/09 Bretas Usando um swab M Quick Swab (ou equivalente) pré-hidratado com 1 ml de líquido de hidratação (veja a linha A), amostre uma área. Para este exemplo, a área é de 10 centímetros quadrados (10 cm 2 ) (veja a linha F). Coloque o M Quick Swab de volta no recipiente estéril. Adicione 2 ml de água peptonada tamponada (veja a linha A). Após a etapa de recuperação, inocule ml na Placa M Petrifilm para Listeria em Monitoramento Ambiental (veja a linha B). A. Número total de ml de APT + meio de cultura B. Número de ml plaqueado C. Divida a linha A pela linha B D. Número de colônias contadas E. Multiplique a linha C pela linha D F. Área amostrada G. Divida a linha E pela linha F Após a incubação, conte as colônias. Para este exemplo, assuma que você contou 50 colônias (veja a linha D) = cm 2 5 UFC/cm 2 A B C D E F G Exemplo: Método de Contato por Esponja 1 Usando uma esponja pré-hidratada com 10 ml de líquido de hidratação, amostre uma área (veja a linha A). Para este exemplo, a área é de 50 centímetros quadrados (50 cm 2 ) (veja a linha F). 2 Coloque a esponja de volta no recipiente estéril e adicione 5 ml de água peptonada tamponada (veja a linha A). Após a etapa de recuperação, 4 inocule ml na Placa M Petrifilm para Listeria em Monitoramento Ambiental (veja a linha B). A. Número total de ml de APT + líquido de hidratação B. Número de ml plaqueado C. Dividir a linha A pela linha B D. Número de colônias contadas E. Multiplicar a linha C pela linha D F. Área amostrada G. Dividir a linha E pela linha F Após a incubação, conte as colônias. Para este exemplo, assuma que você contou 10 colônias (veja a linha D) = cm 2 1 UFC/cm 2 A B C D E F G Microbiologia M do Brasil Ltda. Via Anhanguera, km Sumaré-SP