Imunologia Médica Segundo Módulo

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1 Imunologia Médica Segundo Módulo Antígenos e indução da resposta imune Prof. Imaculada Antígeno X Imunógeno: qual a diferença? - Antígenos = são moléculas capazes de serem reconhecidas por um anticorpo ou receptor de célula T. - Imunógeno = é um antígeno capaz de induzir uma resposta imune contra ele. Epítopo X determinante antigênico: há diferença? Não. Epítopo = determinante antigênico. É a porção do antígeno que é, de fato, reconhecida pelo receptor do linfócito T ou B. Na natureza, alguns epítopos são mais frequentes devido à existência de enzimas que clivam os antígenos de maneira específica ou pela capacidade (ou facilidade) do MHC de apresentar alguns tipos de epítopos. [Parênteses] Quais são as possibilidades de falso negativo em uma imunização? (Pesquisar! Algo relacionado à formação de defesa a outros antígenos que não ao injetado) (Talvez seja o seguinte... A aplicação de uma vacina que teve o seu conteúdo alterado - por ser mal acondicionada, passar do prazo de vacidade, etc - poderá fazer com que o organismo seja apresentado a outros epítopos que não são os de interesse; assim, haveria resposta imune contra epítopos que não estariam relacionados com o agente causador da doença) O que é um hapteno? Trata-se de uma molécula que, sozinha, não consegue desencadear uma resposta imune. Contudo, ela pode se ligar a uma outra molécula e passar a induzir resposta. São exemplos de hapteno: - penicilina: se associa a proteínas sanguíneas e, assim, modifica a estrutura de uma molécula própria. Logo, essa proteína conjugada ao hapteno leva à formação de

2 resposta imune e memória; - brincos de cobre: o cobre presente no local onde está o brinco pode funcionar como hapteno e levar a respostas imunológicas de alergia. De modo geral, a partir do momento em que há apresentação do imunógeno às células T, haverá duas possibilidades: - formação de linfócitos Th1, com produção de anticorpos IgM e, depois, IgG; ou - formação de linfócitos Th2, com produção de IgE. Caso haja uma segunda exposição ao antígeno, essa classe de anticorpos produzida em excesso pode levar o indivíduo ao choque anafilático. São características do antígeno: - Natureza química: antígenos podem ser proteínas (maioria), lipídeos, carboidratos, DNA ou RNA. [Parênteses] Por que é difícil desenvolver memória imunológica contra antígenos que não são protéicos? E por que as respostas geralmente são lentas? Isso se deve ao fato dos linfócitos T somente serem capazes de reconhecer antígenos protéicos apresentados no CPH. Com isso, a única resposta capaz de ser desencadeada contra antígenos não protéicos é timo-independete (que não leva à memória). Por exemplo: a cápsula do estreptococo é formada por polissacarídeos. Contudo, o receptor clássico do linfócito T só reconhece sequências protéicas. Então, as respostas a esse tipo de antígeno não protéico são timo-independentes,

3 incapazes de formar memória. Além disso, a resposta demora porque não há memória prévia. A chance de fazer infecções graves por esse patógeno é maior. Nas respostas timo-independentes, somente há produção de IgM. "Os linfócitos T só conseguem produzir resposta contra antígeno protéico; os outros tipos de moléculas induzem uma resposta que é muitas vezes ineficiente". [Parênteses 2] No lúpus, são formados auto-anticorpos contra o DNA celular que se encontra acoplado a pedacinhos de proteína. - Requisitos para imunogenicidade: o primeiro requisito para ocorrer a resposta imune é que a molécula seja estranha ao organismo (não seja própria). Isso porque tudo o que é próprio foi apresentado aos linfócitos produzidos (selecionados positiva e negativamente lá na medula ou no timo) ou simplesmente não causa resposta devido aos mecanismos de tolerância periférica ao antígeno (que serão tratados depois). Além disso, moléculas muito pequenas ou muito grandes podem não ser reconhecidas pelo sistema imune. Ou seja, o tamanho tem de ser adequado para ocorrer resposta. E, por fim, a complexidade química faz com que seja maior a chance de uma molécula de caber na fenda do CPH. Resumindo, são requisitos: - ser estranho ao organismo; - ter tamanho ideal para reconhecimento; - quanto maior a complexidade química, maior a chance de resposta. - Genética do indivíduo: a genética de cada pessoa influencia na resposta imune. Isso porque essa resposta depende de fatores do próprio indivíduo, como a capacidade de apresentar antígenos (envolvendo os tipos de CPHs existentes, os tipos de enzimas presentes no organismo para clivagem dos antígenos, a capacidade de fagocitose das células). Ou seja, a genética está relacionada desde as competências individuais da célula, passando pela capacidade do CPH, as vias intracelulares estimuladas quando se entra em contato com o antígeno, etc. É por isso que respondemos de maneiras diferentes a um mesmo antígeno. - Via de administração (ou de entrada) do antígeno: quando uma vacina é aplicada intravascular, seus antígenos são diluídos na circulação sanguínea. Já na aplicação intradérmica, ocorre irritação do local, boa absorção dos antígenos, atração de células por substâncias adjuvantes (presentes na vacina, como o sulfato de alumínio). Quando um antígeno entra por via oral, ele tende a apresentar baixa imunogenicidade. Isso porque, de maneira geral, a resposta imune por essa via tende a ser de tolerância. Contudo, há exceções: a vacina da poliomielite é

4 administrada por via oral e consegue ser eficiente; isso acontece porque ela mimetiza a contaminação natural do microorganismo (por meio de VO, com apresentação por células M à placa de Peyer, etc). Sempre que se mimetiza a via de contaminação natural se torna a mais eficiente para a imunização. Resumindo: - Via mais eficiente: Via intradérmica; - Via menos eficiente: Via oral (porque tende a ser uma resposta de tolerância); [Parênteses] Já que ela tende a induzir tolerância aos antígenos, a via oral está sendo utilizada na pesquisa para tratamento de doenças auto-imunes. [Parênteses 2] Quando um microorganismo está no intestino delgado, ele pode ser captado pelas células M presentes na mucosa. Essas células jogam o microorganismo para o interior das placas de Peyer, que são áreas de linfócitos B, com linfócitos T e macrófagos ao redor. O linfócito da Placa de Peyer que é estimulado sai por um vaso linfático e se encaminha para as cadeias de linofodos para-aórticos. Lá, ele se multiplica intensamente e se converte em plasmócito produtor de IgA. Então, por via sanguínea, volta para uma região de mucosa (como a própria mucosa ileal, por exemplo) e passa a secretar IgA a todo vapor. Esse IgA atravessa o epitélio e passa a combater os microorganismos que estejam na superfície, impedindo-os de entrar no organismo. É isso o que acontece com o vírus da poliomielite, por exemplo. Quando um antígeno entra em contato com o organismo, o que acontece? O organismo pode fazer resposta imune, ser indiferente ou induzir tolerância específica para o antígeno. Mas como isso acontece? Se o linfócito T for apresentado ao antígeno por meio de CPH com os segundos sinais necessários, ele será ativado e produzirá resposta imune. Contudo, se o linfócito T reconhecer um antígeno que não tenha sido apresentado por CPH, esse linfócito entra em estado de deleção clonal ou de anergia, sendo incapaz de produzir resposta ou levando à tolerância ao antígeno. É importante lembrar que o linfócito T somente reconhece estruturas lineares. Já o linfócito B é capaz de reconhecer a estrutura espacial do antígeno (estrutura tridimensional). Geralmente, ele vê o que está por fora da bactéria ou do vírus.

5 Como ocorre uma resposta timo-dependente? (Isso será abordado com mais detalhes na próxima aula) Numa resposta timo-dependente, o linfócito B em contato com um antígeno reconhece a sua estrutura tridimensional. Em seguida, para ativar o linfócito T, ele faz duas coisas: apresenta um fragmento desse antígeno ao linfócito T por meio de CPH de classe II; passa um segundo sinal por meio de B7 e CD28. Assim, o linfócito T passa um estímulo de volta (por CD40) ao linfócito B (por ligante CD40 também), levando-o à expansão clonal e produção de anticorpos (no início, IgM e, depois, IgG). Nesse caso, há formação de linfócitos T e B de memória. As respostas timo-independentes são mais primordiais, mais inespecíficas e incapazes de produção de memória. Os experimentos de Zinkernagel e de Nanuni (ou algo parecido com isso) mostraram que os CPHs estabelecem identidade ao organismo, restrição à espécie. (Ler mais sobre eles se der). Falando um pouquinho sobre a apresentação de antígenos A célula dendrítica é a mais eficiente na apresentação de antígenos porque ela produz constitutivamente (sem precisar de estímulo) a molécula B7, que participa do segundo sinal. Assim, ela estimula mais facilmente a resposta de linfócitos T virgens. São dois os sinais necessários para a ativação de um linfócito T: - CPH + antígeno = primeiro sinal - B7 (da célula apresentadora de antígeno) + CD28 (no linfócito T) = segundo sinal Esses dois sinais são evolutivamente importantes porque, assim, não há resposta imune à toa. O macrófago e o linfócito B são bons apresentadores de antígeno para linfócitos T de memória (efetores).

6 Quando um macrófago ativa o linfócito T efetor, esse linfócito ativa o macrófago. Isso se dá por meio de ligação CD40 (do linfócito) com CD40 ligante (do macrófago), o que leva à produção de um super macrófago (com maior capacidade fagocítica, mais enzimas, etc). O linfócito que é estimulado pelos dois sinais passa a produzir interleucina 2 e receptores para essa interleucina 2. Assim, essa IL-2 atuará sobre a própria célula produtora, com expansão clonal, etc. Quando a célula dendrítica encontra um antígeno e fica ativada, ela pode passar até 100 horas apresentando o antígeno, além de aumentar muito o número de moléculas de CPH em sua superfície. Quando o macrófago tem de processar um antígeno para depois apresentá-lo, a resposta imune geralmente é mais eficaz do que se o antígeno tivesse sido previamente processado in vitro. Como se dá a apresentação de antígeno por meio de CPH de classe I? O antígeno que vai ser apresentado pelo CPH de classe I está no citoplasma da célula. Essas proteínas vão ser ubiquitinadas (marcadas molecularmente por ubiquitina) e carreadas até o proteassoma (que funciona como um tubo para clivagem de proteínas). Então, ao passar no interior do proteassoma, a proteína é esticada e clivada por sítios enzimáticos em peptídeos de 7 a 10 aminoácidos. Em seguida, a proteína TAP joga esses peptídeos para dentro do retículo endoplasmático rugoso, onde a molécula de CPH de classe I é formada. Os peptídeos se encaixam no CPH de classe I e são expostos na membrana.

7 [Parênteses] O que aconteceria em um indivíduo sem TAP? Indivíduo sem TAP não consegue apresentar antígenos por CPH de classe I. Assim, ele tem respostas auto-imunes frequentes devido a déficits na apresentação de antígenos no timo por CPH de classe I, sendo liberados para a circulação periférica linfócitos que reagem contra o próprio. Mas porque ele não apresenta maior número de infecções virais? Porque ele conta as respotas imunes de linfócitos NK e de anticorpos (já que os linfócitos B e linfócitos T CD4 funcionam bem). [Parênteses 2] Com relação à apresentação de antígenos pelo CPH de classe II, existe um mecanismo que é controlado pela chamada "cadeia invariante". Quando o CPH de classe II é produzido no retículo endoplasmático, a cadeia invariante (molécula protéica) se liga à fenda do CPH. Assim, eles são colocados em vesículas que vão para o citoplasma. Após a fusão dessa vesícula com o fagossoma e o lisossoma, as enzimas clivam a porção mais externa da cadeia invariante, ficando apenas uma parte (chamada de CLIP) no interior da fenda. Nesse momento, uma outra molécula presente dentro do fagolisossoma, chamada HLA-DM, faz com que o CLIP seja removido da fenda do CPH. Assim, os peptídeos antigênicos se ligam ao CPH e podem ser apresentados na membrana. Imagine o que aconteceria em um indivíduo que não fosse capaz de expressar a cadeia invariante ou o HLA-DM.

8 Obs: A cadeia invariante, na verdade, é um trímero. Cada uma delas fecha as fendas de três moléculas de CPH Ativação e diferenciação dos linfócitos T e B Prof. Érica Alessandra O objetivo da aula de hoje é falar sobre a ativação do linfócito. O que acontece com um linfócito quando encontra um antígeno para o qual é específico? Os linfócitos passam por um processo de maturação nos órgãos linfóides primários. Esse processo é extremamente ordenado. Isso serve para garantir que sejam produzidos linfócitos úteis ao organismo. As células adequadas saem do órgão linfóide primário como um linfócito virgem (ou

9 seja, que ainda não entrou em contato com os antígenos nos órgãos linfóides periféricos). Lá, eles não estabelecem uma morada definitiva: sofrem um processo de recirculação. Assim, as células interagem com diversas células do organismo nos mais diversos locais para aumentar a chance de encontrar o antígeno para o qual é específico. Se o antígeno não for encontrado, o linfócito morre. O linfócito, quando entra em contato com o antígeno, sofre ativação e se multiplica. Esse fenômeno de multiplicação é chamado de expansão clonal. Essa multiplicação é necessária porque é preciso que se combata demais antígenos presentes no organismo e para acompanhar a taxa de multiplicação do microorganismo. Depois da expansão, o linfócito ainda não tem o fenótipo que dá capacidade para combate ao antígeno. Pra isso, ele tem de passar pela etapa de diferenciação (adquirir a capacidade de combater o organismo). Assim, passam a ser linfócitos T e B EFETORES (atuam combatendo o microorganismo). Ex: quando linfócitos T de memória são ativados, eles geram linfócitos T efetores que migram para o local a fim de eliminar os antígenos por meio da ativação de macrófagos teciduais (graças à liberação de interferon gama), tornando-os super macrófagos. A atuação das células efetoras faz com que os antígenos sejam destruídos e a sua quantidade seja diminuída. No final, o antígeno pode ser eliminado ou sobrar em pequenas quantidades. Então, as células que resultaram da expansão clonal sofrem apoptose. Porém, algumas sobrevivem e tornam-se células de memória. Por que é importante eliminar a grande massa de linfócitos resultante da expansão clonal? Porque esses linfócitos, por estarem ativos, ficariam o tempo inteiro produzindo citocinas e estimulando os macrófagos. Assim, poderiam causar danos ao "próprio". Além disso, alguns linfócitos ativados podem produzir TNF, que é deletério para o organismo quando não é necessário. Logo, esses linfócitos precisam ser eliminados após a resposta ao antígeno (fase de declínio de sua existência). O TNF induz inflamação e causa inapetência (perda de função). Leva à perda de peso, à febre e quadros de choque (bradicardia e hipotensão). Linfócito T pode ser ativado nos linfonodos, no baço e no TLAM (tecido linfóide associado à mucosa). Nesses locais, isso acontece porque existe a célula apresentadora de antígeno.

10 Uma vez que o antígeno esteja presente no organismo, ele pode: - ser capturado por uma célula apresentadora de antígeno, que se destaca do tecido e migra até o linfonodo; - o próprio antígeno pode migrar diretamente para o linfonodo e ser apresentado por células que estejam nesse local; - podem ser carreados por via hematogênica para o baço. A ativação dos linfócitos T depende de dois sinais (primeiro e segundo sinais). A célula apresentadora de antígeno tem de expressá-lo associado ao CPH (primeiro sinal); além disso, ela precisa apresentar moléculas B7, que atuam como coestimuladoras ao se ligarem ao CD28 do linfócito T (segundo sinal). Por que é necessário ter dois sinais (via CPH e B7)? Porque, se isso não existisse, poderia haver respostas excessivas de linfócitos auto-reativos contra o "próprio". Isso é um mecanismo de segurança. As células apresentadoras de antígeno expressam grande quantidade de moléculas coestimuladoras porque há contato constante com o antígeno. As células dendríticas, por exemplo, são ótimas apresentadoras de antígenos justamente porque têm muitos CPHs e moléculas B7 em sua superfície. Após o reconhecimento do primeiro e do segundo sinal, o linfócito entra em um processo de expansão clonal, expressando receptor de il-2 e expressando a própria il-2. Esse é um processo autócrino. Só depois que há expressão do receptor do il-2, há início da divisão celular (expansão clonal). Além disso, essa célula é induzida a sobreviver porque ela mesma começa a expressar moléculas do tipo Bcl (xl e 2). Após a expansão clonal, inicia-se a etapa de diferenciação, com formação de linfócitos T efetores e de memória.

11 O reconhecimento do segundo sinal é uma etapa fundamental para a ativação do linfócito T. Se isso não acontecer, esse linfócito pode entrar em anergia por ausência de coestimulação. Assim, se em um segundo momento ele for exposto a um antígeno, ele não coseguirá reconhecê-lo e levar a resposta imune. Contudo, quando um linfócito T CD4 é apresentado a um antígeno, pode ser que o B7 da célula apresentadora de antígenos não se ligue ao CD28 do linfócito, mas à sua molécula de CTLA 4. Assim, essa ligação com o CTLA4 faz com que haja diminuição da resposta dos linfócitos. Então, quando um linfócito entra em contato com o antígeno, há três possibilidades: - Expansão clonal e diferenciação (quando há o primeiro e segundo sinais); - Apoptose ou anergia do linfócito (quando não ocorre o segundo sinal); - Inibição da proliferação do linfócito (quando o B7 se liga ao CTLA 4); Obs: B7 = CD80/86

12 O macrófago, quando entra em contato com o antígeno, reconhece padrões moleculares de patógenos (ou seja, moléculas que normalmente estão expressas em patógenos de um modo geral). Esse reconhecimento leva à expressão de mais moléculas coestimulatórias na superfície. Contudo, a fagocitose de células próprias não leva a essa expressão de moléculas coestimulatórias (já que não possuem padrões moleculares de patógenos). Assim, quando um macrófago fagocita uma hemácia ou uma célula velha, por exemplo, não há inflamação no local. : ) [Parênteses] Adjuvantes da formulação de vacinas estimulam a inflamação e, assim, fazem com que as células apresentadoras de antígenos expressem mais moléculas coestimuladoras. Se fosse administrado só o antígeno, a vacina poderia até mesmo induzir que os linfócitos específicos se tornassem anérgicos (devido à falta de expressão de coestimuladores). Cada adjuvante tem um papel que leva à expressão de coestimuladores. Depois que o linfócito reconhece os dois sinais, há expressão do CD40 ligante no linfócito T. A ligação do CD40 ligante ao CD40 da CAA. Isso amplifica a capacidade da célula apresentadora de antígenos de ativar linfócitos T CD4 e CD8. Há, também, expressão do CD69 (provoca a retenção do linfócito no local onde está acontecendo a ativação da célula). À medida que o linfócito vai respondendo ao antígeno, ele passa a expressar o CTLA-4, que tem função supressora. Podemos dizer que quando o CD28 se liga na molécula B7, o linfócito é ativado. Quando o CTLA-4 se liga na molécula B7, o linfócito tem a sua função suprimida. Esse é um balanço de sinais que rege a permanência da função do linfócito.

13 O que acontece dentro do linfócito T para que ele passe a expressar il-2, seu receptor, CD69 e CTLA-4? Quais são as vias internas de sinalização? [Não é preciso decorar essas cascatas] A ligação do antígeno ao RLT (receptor do linfócito T) faz com que a Lck (que está na cauda citoplasmática do CD4 ou CD8) fosforile as cadeias zeta e as moléculas de CD3. Essa fosforilação forma pontos de ancoragem de proteínas intracitoplasmáticas (da família ZAP-70). Essas enzimas fosforilam a LAT (trasmembrana). A GRB2 e a Sos se ancoram na LAT e levam à ativação da via das MAP cinases e da via do fosfatidilinositol. Na via das MAP cinases, há por fim, a expressão do fator de transcrição AP-1, que vai ao núcleo do linfócito e estimula a transcrição dos genes importantes para a ativação do linfócito. A via do fosfatidilinositol se dá por ativação da fosfolipase C. O fosfatidilinositol é clivado em IP3 e DAG. A presença de IP3 leva à ativação de reservas de cálcio intracelular. A presença da DAG estimula a PKC, que ativa o NF kappa B, que vai para o núcleo estimular a transcrição de genes. A ação dos íons cálcio sobre a calmodulina/calcinerina torna-a ativa, que cliva a NFAT e a torna ativa. Ela vai para o núcleo e estimula a transcrição de genes. A ciclosporina atua inibindo a calcineurina e, consequentemente, a formação de NFAT ativo, com baixa produção de proteínas essenciais para a ativação de linfócitos. Resumindo: A presença do primeiro e do segundo sinal leva à ativação das vias do fosfatidilinositol (que forma os fatores de transcrição NF kappa beta e NFAT) e das MAP cinases (que forma o fator de transcrição AP-1). Se somente há o primeiro sinal, não há expressão de cofatores e eles não levam à formação de proteínas que ativem o linfócito. Resumindo todas as etapas de ativação do linfócito T CD4: 1. Primeiro e segundo sinal: apresentação de antígeno por CPH de classe II ao TCR do linfócito T CD4; segundo sinal com B7 se ligando a CD28 do linfócito; 2. Expressão de fatores de transcrição no linfócito: NF kappa beta, NFAT e AP-1;

14 3. Ativação e expansão clonal frente à expressão de IL-2, de seu receptor e da ação autócrina; 4. Expressão de Bcl (xl e 2), que leva à sobrevivência dos clones; 5. Diferenciação dos linfócitos: formação de linfócitos T efetores e de memória; 6. Linfócito T passa a expressar CD40 em sua superfície. Ele se liga ao CD 40 ligante da célula apresentadora de antígeno, que se torna mais capaz de ativar linfócitos T CD4 e T CD8; 7. Expressão de CD 69, que leva à retenção dos linfócitos ao local onde foram ativados; 8. À medida que a resposta ocorre, há maior expressão de CTLA-4, fazendo com que haja declínio da resposta. A ativação do linfócito T CD4 pode fazer com que ele se diferencie em subpopulações: Th1, Th2 ou Th17. Isso vai depender de fatores locais como: - Tipo de antígeno; - Quantidade de antígeno; - Tipo de célula apresentadora do antígeno envolvida; - Genética do indivíduo; - Citocinas presentes no meio. A célula Th1 surge mais quando há vírus no meio, além da presença de Il-12 e INF gama. Assim, quando ela surge, passa a produzir mais INF gama, que ativa macrófagos e leva à produção de anticorpos IgM e IgG. A célula Th2 surge frente à presença de helmintos e de Il-4 no meio. Então, ela passa a produzir Il- 4, Il-5 e Il-13, que induzem linfócitos B a secretarem IgE, além de ativarem os eosinófilos e estimularem as secreções mucosas. A célula Th17 surge quando há Il-1, Il-6, TGF beta, bactérias e fungos. Ela libera Il-17 e Il-22, que induzem inflamação.

15 E quanto aos linfócitos T CD8? Como eles são ativados? Eles são apresentados a antígenos por quaisquer células do organismo (exceto espermatozóides e hemácias) através do CPH de classe I. Então, ele apresenta ação citotóxica sobre a célula, liberando perforinas e granzimas. Contudo, o linfócito T CD4 do tipo Th1 pode estimular essa citotoxicidade do linfócito T CD8. Isso se dá através de: - secreção de citocinas, que atuam na membrana do linfócito T CD8 como um segundo sinal; ou - estimulação de células apresentadoras de antígenos, que irão ativar mais linfócitos T CD8. (Achei isso estranho... Como uma célula apresentadora de antígenos, que tem CPH de classe II, poderia estimular linfócitos T CD8?) :P Falando um pouquinho sobre os linfócitos T de memória... Os linfócitos T de memória sobrevivem por anos após a eliminação do antígeno, já que possuem altos níveis das moléculas antiapoptóticas Bcl-2 e Bcl-xL. Respresetam cerca de 50% dos linfócitos de pessoas com mais de 50 anos. A il-7 e a il-15 são as responsáveis pela autorrenovação dessas células. Essas células são menos dependentes de coestimulação para responder ao antígeno, combatendoo com maior eficiência. Existem os linfócitos T de memória: - centrais (presentes nos linfonodos), que têm alta proliferação e baixa capacidade efetora; -efetores, que estão localizados nos tecidos periféricos, com baixa capacidade de proliferação mas grande capacidade efetora. A exposição ao antígeno estimula a sobrevivência das células de memória. Existem dois mecanismos descritos para a formação do linfócito T de memória: por conversão de um efetor ou independentemente. (Esses mecanismos serão vistos com detalhe posteriormente)

16 Falando um pouco de linfócitos B... Os linfócitos B são ativados nos mesmos locais que os linfócitos T (linfonodos, TLAM, baço). Os folículos linfóides que são as regiões de linfócitos B. Ele é capaz de reconhecer antígenos protéicos, polissacarídicos e lipídicos. Se ele reconhece antígenos proteicos, ele precisará do auxilio de linfócito T CD4. Ou seja, será uma resposta timo-dependente. Se não houver esse auxílio, não há resposta. Se houver, o linfócito B é ativado e passa a produzir IgM, IgG, IgA e IgE (dependendo do tipo de linfócito T CD4 que é formado - se Th1 ou Th2). Nesse processo, ocorrem a troca de classe e a maturação da afinidade (clones com maior afinidade pelo antígeno vão sobreviver, devido à produção de proteínas antiapoptóticas). Isso gera plasmócitos de longa vida (memória), que ficam na medula óssea produzindo anticorpos por anos e anos. Se a resposta é realizada contra um antígeno polissacarídico ou lipídico, haverá uma resposta timo-independente. Nesse caso, o linfócito só produzirá IgM e pouquinho IgG, convertendo-se em plasmócito de vida curta (que não é capaz de formar memória). Olhando a curva de anticorpos, vemos que há uma resposta primária ao antígeno, por meio de produção de IgM e pouco IgG. Se a resposta foi contra um antígeno protéico, quando a exposição for repetida, os linfócitos B de memória serão ativados produzindo a resposta secundária, com grande produção de IgG, IgA ou IgE. O isotipo do anticorpo vai depender do tipo de antígeno apresentado (helminto, microorg de mucosa, etc). Vamos supor que um antígeno protéico consiga chegar ao folículo linfático de um linfonodo. O que aconteceria? As células apresentadoras de antígeno ou o antígeno em si podem entrar em contato com as células T CD4 e ativá-las (pelos mecanismos vistos anteriormente). Contudo, esses linfócitos T CD4 se encontram ao redor dos folículos linfáticos, distantes dos linfócitos B. Para acontecer uma resposta timo-dependente contra esse antígeno proteico, seria necessário que esse linfócito T CD4 entrasse em contanto com os linfócitos B. Então, o linfócito T CD4 ativado migra para a periferia do folículo linfático, onde ele se encontra com o linfócito B (que também migrou pra lá). Lá, eles se encontram, se reconhecem, se ativam e

17 vão juntos para ao interior do folículo linfóide. Os linfócitos B podem se converter em plasmócitos de longa vida (que vão para a medula) e células B de memória (que podem permanecer no linfonodo ou ir para outros locais). Já os linfócitos T permanecem no folículo linfático, de modo a ativar mais linfócitos B, promover troca de classe, etc. Mas como exatamente que os linfócitos B e T interagem entre si? São dois mecanismos: - O linfócito B apresenta antígeno para o linfócito T CD4 a partir de CPH de classe II. O segundo sinal é a ligação do ligante do CD40 (que é expresso pelo linfócito T) com o CD40 do linfócito B. - Passagem de citocinas (INF gama) do linfócito T CD4 para o linfócito B. Assim, ele entra em proliferação e maturação de afinidade. Os três subgrupos de linf T CD4 são capazes de auxiliar o linfócito B nesse processo. Na resposta timo-independente, o linfócito B entra em contato com antígenos multivalentes (com subunidades regularmente repetidas; um lipídeo, por exemplo). Isso faz com que várias moléculas de Ig que funcionam como receptores possam se ligar a cada uma dessas subunidades e ativar o linfócito B. Assim, esse linfócito pode formar plasmócito produtor de IgM. Se são necessários dois sinais para que uma célula T se ative, será que o mesmo acontece com o linfócito B na resposta timo-independente? Sim. O primeiro sinal se dá através da ligação do antígeno ao receptor do linfócito B (BCR). O segundo sinal ocorre através da ligação do antígeno a uma molécula Toll ou CR2 presente na membrana.

18 Como é essa ligação com o CR2? Ocorre por meio de um fragmento resultante da cascata do complemento: o C3d. E quanto ao receptor Toll? O antígeno também pode se ligar ao receptor do tipo Toll diretamente, sem o auxílio de fragmento do complemento. Tanto a sinalização via CR2 quanto via receptor Toll levam à proliferação e à diferenciação. A existência dos dois sinais para ativação serve para garantir que o linfócito B seja ativado somente em momentos adequados. A descoberta de cooperação entre linfócitos T e B foi importante para o desenvolvimento de vacinas. A associação de carbohidratos a proteínas para a produção de vacinas (vacinas conjugadas) faz com que a parte protéica ative o linfócito T e a não protéica, o linfócito B. A ativação mútua faz

19 com que haja memória imunológica contra um microorganismo que só desencadearia resposta timo-independente. Isso acontece nas repostas contra pneumococo, meningococo e Haemophilus. Alguns microorganismos apresentam moléculas que são chamados de superantígenos. Ou seja, ele é capaz de ativar INESPECIFICAMENTE vários clones de linfócitos simultaneamente, tanto linfócitos B quanto T. Isso porque esse superantígeno se liga a regiões que não são as de reconhecimento de antígeno tanto no receptor do linfócito T quanto no receptor do linfócito B. Logo, como esse superantígeno age de maneira inespecífica e simultânea para vários linfócitos, ele causa ativação policlonal de linfócitos T e B. E isso é ruim porque: - nesse processo, linfócitos auto-reativos podem sofrer expansão, levando a doenças auto-imunes; - pode haver imunossupressão temporária, devido à indução da morte de muitos linfócitos ao mesmo tempo; MONITOR MONOGRAFIA Levi Bezerra Sena levibsena@gmail.com Respostas mediadas pelos linfócitos T Prof. Imaculada

20 Existem as fases de indução e efetora. A de indução consiste no processamento e na apresentação do antígeno. A fase efetora compreende a resposta que o linfócito terá após ter sido ativado. Tipos de respostas mediadas pelos linfócitos T: - Linfócitos T CD4 exercem função auxiliar (na maior parte das vezes) ou citotóxica. Antígeno processado é apresentado a esse tipo de linfócito. Assim, ele fica ativado e entra na fase efetora. Passa a secretar citocinas para ativar macrófago, estimular inflamação ou funcionar como auxiliar para o linfócito B produzir anticorpos ou para o linfócito TCD8 ser citotóxico. - Linfócitos T CD8 exercem função citotóxica (na maior parte das vezes) ou auxiliar. Ele é efetor por contato célula-célula, matando a célula alvo (qualquer célula que esteja infectada e que esteja apresentando antígenos não-próprios na sua superfície). Conclusões de um certo experimento: - Proteção contra bactérias intracelulares não pode ser dada por anticorpos; - Mas pode ser dada por linfócitos T CD8; - Linfócitos T (CD4) sozinhos, in vitro, não conseguem levar o microorganismo extracelular à morte. Ou seja, eles dependem de outros elementos para conseguirem matar microorganismos. Isso porque o braço efetor da resposta do linfócito T CD4 é o macrófago. Ou seja, é o macrófago que mata o microorganismo que não está presente dentro da célula. A resposta dos linfócitos se dá nos órgãos linfóides secundários. Os antígenos têm de ser capturados e levados até lá. Após ter sido ativado, o linfócito tem de ser jogado no sangue ou na linfa para ir exercer função no local onde está acontecendo a infecção. Esse linfócito chega até o local de infecção por quimiotaxia. Citocinas aumentam a permeabilidade do vaso, sendo que leucócitos passam a migrar para esse local. E as quimiocinas levam ao recrutamento dos linfócitos, que expressam receptores para reconhecimento de ligantes presentes no endotélio da área de infecção. Existem os linfócitos T CD8 tipo 1 e tipo 2, assim como linfócitos Th1 e Th2.

21 FALANDO DE LINFÓCITOS T CD4 O linfócito Th2 : - produz il-4, il-5 e il-13 que fazem: ativação de linfócitos B (para produção de IgE); ativação de eosinófilos e aumento de secreção mucosa; - produz il-10, que inibe o Th1. - inibe o macrófago graças à ação pela via da arginase. O linfócito Th1: - produz INF gama, que ativa macrófagos e estimula linfócitos B a secretarem IgM e IgG; - inibe a resposta Th2 também através da produção de INF gama. Bactérias extracelulares não levam à uma polarização evidente do tipo de linfócito T auxiliar. Contudo, quando se trata de bactérias intracelulares, essa polarização pode acontecer. Na hanseníase, por exemplo, que tem patógeno intracelular, há formação de uma população de linfócitos T auxiliares que são ou Th1 OU Th2. A resposta polarizada totalmente para um lado (Th1 ou Th2) nunca é benéfica para o organismo. Se polariza para a forma de Th1, no caso da hanseníase, surge uma forma tuberculosa da hanseníase. A resposta é tão forte que leva à morte do bacilo de Hansen, mas mata e destrói células do organismo também. São formadas lesões de pele bem evidentes. É forma lepromatosa.

22 Por outro lado, se polarizar para o lado Th2, há inibição total das funções do macrófago (devido à via da arginase). Como o Mycobacterium leprae fica dentro do macrófago, devido à supressão, o patógeno passa a se multiplicar intensamente. O indivíduo pode passar a ter até 2kg de bactérias no corpo, formando placas na pele. Essa é a forma tuberculóide (ou virchowiana). O ideal é fazer uma resposta tendendo para o Th1 a fim de matar o microorganismo, mas com presença de Th2 também. O ideal é não polarizar! Mas o que determina que o linfócito T CD4 virgem forme linfócitos Th1 ou Th2? - Antígeno: dependendo das característica do antígeno, há uma resposta. A maioria dos organismos intracelulares (como vírus) induzem resposta Th1. Larvas de Schistosoma, por exemplo, induzem reposta Th2. - Estado de ativação da célula apresentadora de antígeno: se for macrófago forte produtor de INF gama, tenderá para Th1. Se for uma célula dendrítica, a resposta tenderá para Th2. - Células presentes no local: presença de mastócitos secretores de Il-4 podem levar o linfócito T CD4 virgem a virar Th2. A presença de células NK ou de macrófagos produtores de INF gama leva à formação de Th1. - Citocinas: após um macrófago ter fagocitado um antígeno, ele passa a produzir il-12. Essa il-12 estimula células NK que produzem INF gama. Essa citocina, por sua vez, atua sobre o macrófago inicial estimulando a expressão de B7 e produção de Th1. - Genética do indivíduo: são as vias metabólicas de ativação que a célula irá utilizar preferencialmente dentro da célula. Se for T bet e STAT 1, vira Th1. Se for GATA-3 ou STAT6, vira

23 Th2. Para uma criança ser alérgica, ela tem de tender para a via Th2 uma vez que tenha entrado em contato com o antígeno. Essa formação de Th2 será favorecida se houver um microambiente rico em Il-4. Th2 estimula os linfócitos B a produzirem IgE e IgA. Esse IgE se liga a receptores presentes na membrana de eosinófilos e mastócitos. Quando há uma segunda exposição ao antígeno, esse IgE leva essas células à degranulação, promovendo alergia, choque anafilático, etc. O primeiro fator de melhora da criança contra a alergia é anatômico: crescimento dos brônquios. Além disso, com o passar do tempo, essa criança tende a desviar para respostas imunes do tipo Th1. Papel da IL-12 e da IFN gama na diferenciação da Th1 O próprio microorganismo em contato com a CAA, a célula NK (que produz INF gama) e a ligação de linfócito T CD4 por meio de CD40/ligante do CD40 ativam a CAA a produzir il-12. Assim, essa CAA expressa IL-12 que atua sobre células T CD4 virgens a se tornarem linfócitos Th1. Esse tipo de linfócito secreta INF gama que estimula o macrófago a matar o microorganismo (efetor). Como a Th1 tem ação efetora? - Ao se ligar ao macrófago (que fagocitou o microorganismo), há ligação CD40/ligante do CD40. Assim, os macrófagos se sentem mais estimulados a matarem os microorganismos do meio em que estão. O macrófago ativado é aquele que tem sua expressão de receptores aumentada para facilitar fagocitose; expressa mais CHP de classe 2 para facilitar apresentação de antígenos; aumenta toda a produção de suas moléculas microbicidas (radicais de nitrogênio e oxigênio; lisa membrana, destrói proteína, DNA, RNA). Como Th1 tem função auxiliar? - Ele auxilia o linfócito B a produzir anticorpos, uma vez que ele secreta INF gama e estimula o linfócito B a produzir IgM e IgG (resposta timo-dependente). Essas Ig atuam como opsoninas. - Ele auxilia o linfócito T CD8 a se transformar em linfócito citolítico ativado para matar a célula infectada.

24 O teste intradérmico (como no caso da tuberculina) mede a capacidade de resposta Th1. É uma reação de hipersensibilidade retardada porque demorou 48 horas. Significa que o indivíduo tem linfócitos de memória para o antígeno que está sendo apresentado. E são linfócitos de memória porque, se fossem somente linfócitos virgens, a resposta somente viria após uma semana. Teste de Fernandes: é como o PPD da tuberculose, mas aplicado à hanseníase. Tem de ser feita com duas leituras: uma de 48 horas e outra de 40 dias depois (que mede a resposta Th2). Na região de reação do PPD, há uma expressão histopatológica de granuloma. Ou seja, há uma coleção de células do sistema imune organizadas e estruturadas, que se forma em resposta à estimulação antigênica crônica, no contexto de fatores mediados pelo macrófago. É uma resposta demorada. No granuloma é encontrada uma bainha de linfócitos circundando uma região (centro) de macrófagos que fagocitaram e morreram. Ao redor, há macrófagos muito ativados que podem formar células gigantes de Langerhans. Depois, uma bainha de linfócitos que, na maior parte das vezes, é do tipo Th1. Como o Th2 atua? - Inibe Th1 (através da produção de il-10); - Estimula linfócito B a produzir anticorpos da classe IgE e IgA. O IgE se liga à superfície de mastócitos. Quando entra em contato com um alérgeno (mastócito) ou helminto (eosinófilo), a célula se degranula. Faz também defesa contra parasitas; - Estimula produção de IgG (pouco) por linfócitos B por meio de Il-4; - Inibe o macrófago através da via da arginase.

25 O linfócito Th17 e Treg são subpopulações recentemente descobertas. Th17 é produzido pela presença de il-6 e TGF beta, usando a via de ativação ROR gama t. A célula, então, passa a produzir il-17 e il-22, combatendo bactérias extracelulares. O linfócito Treg é produzido pela presença de Il-2 e TGF beta, usando a via de ativação FOXp3. Faz regulação negativa do sistema imunitário. FALANDO DE LINFÓCITOS T CD8 A fase de indução consiste na apresentação do antígeno por meio de CPH de classe I. A fase efetora do linfócito T CD8 se dá por contato célula-célula. Mas como ele mata a célula irregular? São três os mecanismos envolvidos na morte: - FAS - Granzima - Perforina Uma vez ativado, ele vira linfócito T CD8 citolítico. Ele mata especificamente a célula infectada. Na maior parte das vezes, ele induz a morte por apoptose. Como não há necrose/estouro da célula, não há liberação de tantos fatores que estimulam a inflamação e a sintomatologia clínica. A programação de morte da célula (apoptose) se dá por meio da via do FAS/ligante do FAS (que ativa caspases dentro da célula) e da liberação de perforinas e granzimas.

26 Há conexão de membrana entre o linfócito T CD8 e a célula infectada que apresenta antígeno. Quando ele libera perforina, elas formam um poro na membrana da célula alvo. Em seguida, joga granzimas que entram na célula e induzem a apoptose. Além disso, se as perforinas fizeram muitos buracos, a célula pode sofrer entrada muito grande de água e, depois, sofrer necrose. O linfócito que tem o ligante do FAS (veja na figura). As células alvo podem passar a expressar o FAS. Se ocorre ligação, o linfócito T CD8 pode levar à apoptose da célula alvo. Quando o linfócito libera as perforinas (que já estavam formadas dentro das vesículas), elas se polimerizam e formam um poro na membrana da célula alvo. Se for em pequena quantidade, somente as granzimas passam pelo poro. Contudo, se forem muitos poros, a célula pode sofrer necrose por entrada excessiva de água. As células alvo são as células tumorais ou infectadas por vírus. Por vezes, podem ser células que foram infectadas por bactérias que fugiram para o citoplasma.

27 FALANDO UM POUQUINHO SOBRE CÉLULA NK (QUE NÃO É LINFÓCITO T) A célula NK não tem o receptor do linfócito T. Então, ela não é tão específica. Mas possui mecanismos de destruição muito semelhantes aos do linfócito T CD8. Ela aparece no início de uma resposta a uma infecção viral. A célula NK age diferente do linfócito T CD8 no sentido de que, se não houver CPH de classe I com antígeno próprio, a célula NK mata. Já o linfócito T CD8 não mata se não houver CPH de classe I Regulação da resposta imuntária Profª Érica Alessandra Como vimos na aula anterior, existe uma dinâmica na resposta imunológica, com as fases: - Expansão clonal; - Diferenciação; - Ação contra o antígeno; - Eliminação do antígeno (por respostas celulares ou humorais); - Apoptose de clones ; - Permanência de linfócitos de memória. Em cada uma dessas etapas, há mecanismos de regulação. Isso é importante porque, regulando cada uma das etapas, a ação do sistema imune é adequada e sem excessos (matando o antígeno sem causar danos ao próprio). Mas quais são os mecanismos envolvidos nessa modulação da resposta imune?

28 REGULAÇÃO POR ANTÍGENO Os antígenos ajudam a regular a resposta imunológica. De que forma? "Se ele está presente, há resposta imunológica." Como? O linfócito T, ao reconhecer uma célula que esteja apresentando um antígeno, produz il-2 e, assim, sofre proliferação. Ao final da resposta, se o sistema imune elimina os antígenos, o linfócito fica privado da estimulação de que ele precisa para sobreviver. Então, ele entra em apoptose a partir da ativação interna de caspases. Essa é a chamada morte passiva ou morte por negligência: quando antígeno é eliminado, faltam estímulos para fazer com que os linfócitos permaneçam vivos. Em contrapartida, se o antígeno fica presente no meio por um tempo muito prolongado e, mesmo após o ataque inicial do sistema imune, ele permanece vivo, há um estímulo excessivo dos linfócitos que o combatem. Esses linfócitos acabam expressando o Fas e o ligante do Fas. Assim, caspases-b são ativadas dentro dos linfócitos e eles entram em apoptose. Essa é a morte celular induzida por ativação. Se não houvesse esses sistemas de apoptose, a cada ativação, aumentaria muito a quantidade de linfócitos no organismo, podento criar mesmo linfócitos que o atacassem. A forma de controlá-los é justamente pela indução da apoptose. Pessoas e animais que têm defeitos na via do FAS e do ligante do FAS apresentam doenças. A síndrome linfoproliferativa autoimune (ALPS) é um quadro clínico em que não se consegue expressar o Fas. Assim, são mantidos muitos linfócitos vivos na circulação do indivíduo. Ele desenvolve uma linfoadenomegalina não maligna, além de esplenomegalia e uma série de citopenias autoimunes (pela manutenção de células auto-reativas na circulação do indivíduo). REGULAÇÃO POR MOLÉCULAS CTLA-4: via de regulação inibitória CTLA-4 significa Antígeno-4 do Linfócito T Citotóxico. O linfócito virgem possui baixíssima concentração de CTLA-4 na sua membrana.

29 Se, em uma apresentação de antígeno a um linfócito T virgem, existe o primeiro sinal (CPH e antígeno) mas não existe o segundo (B7 se ligando em CD28), a célula T virgem entra em anergia ou apoptose. No entanto, se essa célula T virgem é apresentada a um antígeno com coestimulação (CD28 do linfócito ligando a B7 da célula apresentadora de antígeno), essa célula T entra em proliferação, diferenciação e função efetora. Depois que está ativa, essa célula passa a matar os antígenos. Contudo, ela também aumenta a sua expressão de CTLA-4. Essa molécula se liga ao B7 da célula apresentadora de antígeno. Uma vez que isso anconteça, o linfócito T ativo deixa de produzir il-2 e entra em modo de repouso. Essa via permite que, enquanto alguns linfócitos são ativados, outros sejam "desligados", havendo, então, uma população adequada de linfócitos. O CTLA-4 faz com que a célula entre em repouso tanto por modificação de vias intracelulares do linfócito quanto por inibição da ligação do B7 ao CD28 (que promove ativação). A via do CTLA-4 também é importante para a contenção de células auto-reativas. Isso porque o tecido próprio que está sendo agredido não apresenta coestimulação, fazendo com que esses linfócitos auto-reativos parem de se proliferar. Essa via está sendo utilizada para tratamento de doenças em que há ativação excessiva de linfócitos. Para isso, utiliza-se uma molécula semelhante ao CTLA-4 (é o CTLA-4Ig). Essa molécula, ao se ligar ao B7 da célula apresentadora de antígenos, faz com que não haja ativação dos linfócitos responsáveis pela patogenia. A artrite reumatóide é um exemplo de doença que poderia ser tratada com CTLA-4Ig. Um outro exemplo de terapia que explora essa via é o uso do anticorpo anti-ctla-4, com função de bloquear o CTLA-4. Assim, essa via seria inibida, o que é interessante no contexto dos tumores (quadro em que se deseja manter ativos os linfócitos que combatem tumores). Anticorpos

30 Os anticorpos se ligam aos antígenos e fazem com que eles sejam removidos através de fagocitose. Assim, há menor taxa de ativação de linfócitos B e T. Eles também participam da regulação negativa por anticorpos. Como é isso? Quando um linfócito B produz IgG, esse anticorpo se liga a receptores presentes na superfície do próprio linfócito que o produziu. Assim, um antígeno que esteja presente no meio e que vá se ligar ao linfócito, acaba grudando tanto no receptor do linfócito B quanto na IgG que estava na membrana. A ligação à IgG faz com que as enzimas necessárias para a ativação do linfócito B não atuem. Assim, a ativação do linfócito B é suprimida. Essa via é importante porque ela inibe que muitos anticorpos sejam produzidos pelo linfócito B. Anticorpos em excesso são danosos para os tecidos (é o que acontece na glomérulo nefrite, por exemplo). CD22 O CD22 uma molécula presente na membrana do linfócito B. Quando é ativada, ela faz inibição do linfócito B. Contudo, não se conhecem os ligantes do CD22. A proteína SHP-1 está ligada na cauda do CD22. Os camundongos knockout para SPH-1 desenvolvem autoimunidade grave com ativação descontrolada de linfócitos B e produção de autoanticorpos. Revisando: Até agora, vimos como mecanismos de regulação: - O próprio antígeno; - via do CTLA-4; - atuação de anticorpos; e - via do CD22.

31 Existe interferência mútua entre as subpopulações de linfócitos T? Durante a resposta imunológica dos linfócitos T, a população de linfócitos T auxiliares se diferencia em Th17 (bactérias, fungos), Th2 (helmintos e microorganismos extracelulares), Th1 (microorganismos intracelulares), Treg (que tem papel de regulação da resposta). Em uma lesão cutânea por leishmaniose, por exemplo, o linfócito Th1 é o responsável por ativar o macrófago, para que ele produza radicais de oxigênio e nitrogênio para matar a Leishmania. Contudo, nesse mesmo local, as outras subpopulações de linfócitos T auxiliares estão presentes, a fim de regular a atividade do linfócito Th1. Obs: Na forma cutâneo-mucosa, a resposta Th1 é muito forte. O linfócito Treg diminui a atividade tanto de Th1 quanto de Th2. Relembrando: - A população Th2 produz citocinas como a il-10 e TGF beta para diminuir a atividade da população Th1. - A Th1 produz INF gama para inibir a Th2. - Além disso, Th1 e Th2 juntas inibem a ação da Th17 (por meio de il-4 e INF gama). Na leishmaniose, o indivíduo que faz a forma muco-cutânea possui uma ativação de população Th1 muito importante, com altos níveis de TNF alfa e IFN gama nos tecidos, com grande ativação de macrófagos. Na forma visceral da leishmaniose, há indícios de que o indivíduo polariza para Th2, não conseguindo combater o parasito intracelular. Há baixa produção de INF gama nesse caso. Linfócitos T reguladores Existem várias populações de linfócitos Treg. A mais bem caracterizada é aquela que é CD4 +, FOXP3 +, CD25+ (uma das cadeias do receptor para il-2) e CTLA-4 +.

32 Essa população é dependente de Il-2 para se desenvolver. Esses linfócitos Treg podem ser gerados no timo ou na periferia. Mas como? Durante o processo de formação de linfócitos T no timo, aqueles que se ligam a auto-antígenos podem sofrer apoptose ou virar linfócito Treg (não se sabe ainda quais são os mecanismos responsáveis por fazê-lo sofrer apoptose ou virar Treg). Para ser Treg, ele ganha o receptor FOXP3 ao entrar em contato com o antígeno na periferia ou no timo. Isso dá funcionalidade ao linfócito Treg. Mas como o linfócito Treg atua depois de ter sido formado? São dois os mecanismos: - Ele pode fazer inibição da ativação de células T virgens, por meio da inibição da célula apresentadora de antígeno. - Ele pode atuar diretamente sobre as células T efetoras, diminuindo a sua função. [Cada um desses mecanismos será descrito em detalhes um pouco mais adiante] Indivíduos com deficiência de FOXP3 desenvolvem uma doença chamada IPEX (Endocrinopatia e enteropatia autoimunes) devido à ausência de linfócito Treg. Nesse caso, são duas as explicações: - Por não conseguirem expressar a FOXP3, os linfócitos T auto-reativos no timo não são convertidos em Treg e, assim, podem continuar vivos e cair na circulação; - A ausência de linfócitos Treg conduz para ação excessiva dos outros linfócitos. Se há pouco linfócito Treg: - o patógeno é eliminado, mas a ação excessiva dos linfócitos causa dano tecidual. Se há muito linfócito Treg: - o patógeno permanece, há maior transmissão da doença, que pode destruir o hospedeiro e, por vezes, levar à reativação da doença.