Prof. Pollyana Lyra 1

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1 Aula 00 Microscopia Professor: Pollyana Lyra 1

2 Microscopia - Aula 00 Olá, Tudo bem?? Meu nome é Pollyana Lyra e estarei acompanhando vocês no curso de Específicas para o concurso do Hemocentro- CARGO- ANALISTA DE LABORATÓRIO, mas antes disso, deixe-me me apresentar. Sou Farmacêutica Bioquímica e Industrial, com experiência em Indústria Farmacêutica nas áreas de Desenvolvimento de produtos (FARMACOTECNICO) por 4 anos, tempo esse interrompido por uma nomeação no concurso público da secretaria de saúde de Caldas Novas (5º lugar), onde atuei como Responsável técnica do Laboratório de Análises Clinicas do CTA (Centro de Testagem e aconselhamento) que faz parte do programa DST/ AIDS do Ministério da Saúde, onde em poucos meses me tornei coordenadora do programa de distribuição de TARV e Talidomida. Por motivos pessoais (resolvi me casar) pedi exoneração e mudei de cidade, onde comecei a atuar na área de docência. Ministrei aulas durante 4 anos (isso mesmo, parece que minha vida profissional acontece em ciclos de 4 anos...risos) na Faculdade de Tecnologia Senai Roberto Mange. Tempo esse que aprendi a gostar da área de ensino e pesquisa e acabei me especializando em Farmacologia. Após esses 4 anos em sala de aula tive uma filha e optei por me dedicar a ela exclusivamente e após um ano voltar aos concursos (visando Policia Federal) e docência... Outros resultados de concurso: 27º lugar Farmacêutica Bioquímica da Prefeitura de Anápolis (2016), 29º lugar Fiscal Sanitário no mesmo concurso, 71º lugar em perito da Policia Civil do Distrito Federal (2016)

3 Bom, eu sei muito bem que não temos tempo a perder, então vamos começar a entender o nosso curso!!! Tenho certeza que com nossas aulas em PDF, bem como a bateria de exercícios vocês estarão preparados conquistar o almejado cargo no Hemocentro do DF! CONHECENDO O CURSO... O nosso curso é direcionado aos profissionais de laboratório (formação em BIOLOGIA, BIOMEDICINA E FARMÁCIA-BIOQUÍMICA). Ele será composto pelo conteúdo específico acompanhado de exercícios comentados...trata-se de toda a parte específica de análises clínicas de forma facilitada, esquematizada (através de tabelas, mapas mentais e artifícios mnemônicos) assim ele será mais dinâmico, mais prático, mais enxuto e direcionado! Você estará desde a primeira página treinando para a sua prova, pois, como concurseiro, você deve saber que tão importante como saber o conteúdo é saber como é cobrado esse conteúdo pela banca específica, não é mesmo? Um outro motivo para investir no nosso curso é o peso dobrado das 25 questões específicas de Análises Clínicas que pode ser o fator determinante para ocupar a almejada vaga. 3

4 Aula Conteúdo Programático Data 00 Microscopia. 15/11/16 01 Biossegurança e boas práticas em laboratórios. Garantia da qualidade. 28/11/16 02 Hemocultura. Microbiologia em hemoterapia. 06/12/16 03 Hematologia. Processamento, armazenamento, distribuição e transporte de hemocomponentes. 1.6 Tipo de hemocomponentes e suas indicações. 09/12/16 RDC no 20, de 10 de abril de Controle de qualidade. RDC no 34, de 11 de junho de /12/16 RDC no 75, de 2 de maio de Hemoterapia. 1.1 Captação, registro, pré-triagem, triagem clínica e coleta de doadores. 1.2 Aféreses. 1.3 Triagem laboratorial (Imunohematológica, sorológica e NAT). 1.4 Hemostasia. 16/12/16 Portaria no 158, de 4 de fevereiro de 2016, do Ministério da Saúde. 06 Coleta, processamento e criopreservação de células progenitoras hematopoiéticas. 20/12/16 07 Biologia molecular. Imunologia do transplantes 09/01/17 08 Transfusão sanguínea. Reações transfusionais. 17/01/17 09 Imunohematologia. Imunologia. HIV. Hepatites. HTLV. Sífilis.Chagas. Citomegalovírus. Toxoplasmose. Malária 10 Gerenciamento de resíduos. RDC no 306, de 7 de dezembro de /01/17 02/02/17 11 Validação de processos e metodologia analíticas. 07/02/17 4

5 RDC no 27, de 17 de maio de Norma Regulamentadora NR32 Segurança e Saúde no Trabalho em Serviços de Saúde, aprovada pela Portaria no 485, de 11 de novembro de 2005, do Ministério do Trabalho e Emprego. 13 Hemovigilância. Guia para a Hemovigilância no Brasil (versão 2015), da ANVISA. 14 Guia para Uso de Hemocomponentes, do Ministério da Saúde (MS/SAS/DAE). 15 Protocolo Transfusional Indicação de Hemocompontentes, da Secretaria de Estado de Saúde do Distrito Federal, com vigência a partir de março de /02/17 14/02/17 21/02/17 28/02/17 5

6 AULA 00 - MICROSCOPIA Tópicos da Aula 1. Aspectos Gerais Métodos de microscopia Em campo claro Microscopia em campo Escuro Microscopia em contraste de fase Microscopia de Fluorescência Microscopia Eletrônica Métodos de Análise Exame direto Colorações Diferenciais Colorações ácido-resistentes Colorações Fluorescentes Questões Comentadas

7 1. Aspectos Gerais A microscopia é uma ferramenta da microbiologia cujos objetivos são: Detectar e identificar (de forma preliminar ou definitiva) os microrganismos. EM análises clínicas ela é utilizada para detectar o agente causados da patologia e fechar diagnóstico. Esses agentes podem estar nos mais variados locais no organismo e no caso do concurso claro que o foco está totalmente voltado para os parasitos do sangue! Cada microrganismo tem característica específica e exige um tipo de método e de coloração para melhor visualização, por isso nossa aula é basicamente conhecer esses métodos e as diferentes formas de coloração que existem, especialmente voltadas para amostras sanguíneas. Vamos lá?? 2. Métodos de microscopia Cada método que vamos conhecer agora possui microscópios específicos e exigem um tipo de tratamento prévio da amostra, prestem atenção nisso! 2.1 Em campo claro Essa é a microscopia mais simples e rotineira em laboratórios, o equipamento consiste em uma fonte de luz, que é usada para iluminar a lâmina onde a amostra está depositada; um condensador, que é usado para focar a luz sobre o mesmo material e dois conjuntos de lentes (objetiva e ocular) usadas para ampliar a imagem das estruturas da amostra, passando primeiro pela 7

8 lente objetiva e depois pela ocular. Cada lente tem um poder de aumento e é usada para observar um tipo de microrganismo. Olha só como é simples! LENTES OBJETIVAS (3 tipos) BAIXO PODER 10X Usado para triagem ALTO PODER 40X Usado para organismos maiores Imersão em óleo 100x Bactérias, leveduras e detalhes morfológicos As lentes oculares podem aumentar ainda mais a imagem (de vezes!!!!). O aumento total da imagem é a multiplicação das duas lentes usadas, por exemplo...se você focar inicialmente com a objetiva 10X e depois com a ocular de 15x o aumento total será de 150x. Não é simples? Microscópio Optico 8

9 Veja mais detalhes... imagem fornecida pelas objetivas. As lentes oculares têm como função ampliar a Relembre melhor cada parte do microscópio e sua função! Canhão ou Tubo Braço Revólver Objetivas Platina Pinças Dá suporte ao sistema ocular. Dá suporte à platina e ao revólver. Dá suporte às objetivas e permite a sua mudança. Ampliam a imagem do objeto que está a ser observado. Dá suporte à preparação a observar. Ajudam a fixar a preparação. 9

10 Condensador Distribui regularmente no campo da preparação a luz que atravessa o diafragma. Diafragma Regula a intensidade da luz captada pelo espelho ou proveniente da lâmpada e que incide na preparação. Parafusos macrométrico micrométrico e Permitem movimentos de maior ou menor amplitude, de aproximação ou afastamento entre a preparação e as objetivas (macrométrico). Permitem ainda realizar movimentos de menor amplitude quando se pretende focar nitidamente a imagem que se está a visualizar Base ou pé (micrométrico). suporte de todos os elementos do microscópio. Sobre o poder de ampliação, no microscópio óptico A imagem obtida ao microscópio ótico apresenta as seguintes caraterísticas: ampliada, simétrica, invertida e virtual. Exemplo de imagem antes e depois de microscopia óptica. 10

11 2.2 Microscopia em campo Escuro Nesse tipo de microscopia, as mesmas lentes que são usadas na de campo claro também estão presentes, a diferença entre as duas técnicas é que o condensador aqui impede que a luz ilumine diretamente o material (como é feito na de campo claro)...por isso o nome campo escuro!! Aqui, uma luz oblíqua passa pelo material fazendo com que ele fique brilhante contra um fundo preto (Olha, essa técnica tem uma desvantagem: mostra mais a forma do que estrutura interna), mas em compensação olha a vantagem dela: VANTAGEM Maior resolução! Visualiza inclusive T. palidum e Leptospira Microscópio em campo escuro 11

12 2.3 Microscopia em contraste de fase Nesse tipo de microscopia, o problema de não observar as estruturas internas não existe, isso porque os feixes de luz passam por materiais de diferentes densidades em velocidades distintas ( o feixe que passa no material mais denso demora mais), isso é transformado em imagens tridimensionais do microrganismo por meio de uma estrutura chamada anéis anulares do condensador. Esquema de Filtros com diferentes formas de absorção Bom, nem preciso comentar que uma imagem tridimensional permite uma análise muito mais detalhada do microrganismo

13 2.4 Microscopia de Fluorescência Nessa técnica o microscópio só é útil na analise de amostras marcadas por fluoróforos. Absorvem luz UV e emitem luz visível! As lâmpadas desse microscópio também são diferentes, elas emitem luz de comprimento de onda menor do que os tradicionais. São elas: Mercúrio de alta pressão; halogênio, vapor de xenônio. Outra diferença do microscópio é que precisa ter filtro que bloqueia o calor gerado por essas lâmpadas e para selecionar o comprimento de onda específico que excita o fluorósforo que emite a sua luz no material e é visualizado através das lente objetivas e oculares. Assim, os microrganismos corados ficam com grande contraste com o fundo. Pessoal, qual você acha que é mais fácil e rápido identificar numa lâmina? Um organismo com coloração normal ou fluorescente?? Nem vou esperar a resposta...já sabemos que mesmo em lente de menor aumento o parasito pesquisado é muito mais facilmente encontrado se tiver fluorescente. 13

14 Microscopia de células em divisão por microscopia fluorescente Microscopia Eletrônica Pessoal, essa microscopia é a mais alta tecnologia em matéria de visualização de microrganismos. Para começar, não são lentes que promovem o aumento da imagem, mas sim espirais magnéticas, elas direcionam um feixe de elétrons (que vem da fonte de tungstênio e atravessa a amostra) para a tela. Como o comprimento de onda usado é muito, mas muito curto...a resolução e a ampliação são muito melhoradas. Para ter um contraste, as amostras são geralmente coradas com íons metálicos. Existem dois tipos de microscópio eletrônico e a diferença entre eles é basicamente o papel dos elétrons na formação da imagem, vejam: 14

15 DE VARREDURA DE TRANSMISSÃO Elétrons passam diretamente pela amostra. Elétrons não passam diretamente, eles encobrem a superfície do material em determinado ângulo que produz imagem tridimensional!!! Microscópio Eletrônico de Transmissão 15

16 3. Métodos de Análise Como a microscopia existe essencialmente para identificar microrganismos, nada melhor do que colorir esses agentes para melhor evidenciá-los, daí é importante estudarmos os métodos de análise usados para preparo de amostras nos mais diversos tipos de microscopia. 3.1 Exame direto Essa coloração é a mais simples e os corantes não coram de forma específica o material, apenas aumentam o contraste com o fundo e permite a análise mais detalhada do organismo. Exemplo desses corantes: lactofenol azul de algodão, iodo. 3.2 Colorações Diferenciais Esse tipo de coloração já diferencia alguns microrganismos especificamente, por exemplo a coloração de Gram diferencia bactérias Gram positivas das Gram negativas, outro exemplo é a coloração da hematoxina férrica com o tricromo que identifica alguns protozoários (Giardia) e o Wright- Giemsa é usada para identificar parasitas do sangue. 3.3 Colorações ácido-resistentes Essencialmente esse tipo de coloração avalia qual microrganismo tem a capacidade de reter a coloração inicial mesmo após lavagem com descolorante. 16

17 São exemplo Coloração de Ziehl-Neelsen, método de Kinyoun ou coloração fluorescente auramina-rodamina (é o método de escolha). 3.4 Colorações Fluorescentes A coloração fluorescente auramina-rodamina é um dos exemplos desse tipo de coloração. Temos também corante laranja de acridina (bactérias e fungos); corante calcofluor (cora a quitina da parede fúngica) e coloração anticorpo marcado com molécula fluorescente (muito importante em imunologia clínica que veremos em aula específica). Bom pessoal, encerramos a nossa aula demonstrativa com a certeza de ter vencido apenas uma batalha. Espero que vocês estejam motivados e cheios de ânimo, pois concurso com um número de vagas assim não é tão comum nas áreas laboratoriais. Não perca essa chance!! Agora chegou a hora de exercitar! Esse tema não é um dos favoritos da IADES, por isso vocês verão várias outras bancas na bateria de exercícios. Na medida que os temas forem avançando, vamos conhecendo cada vez mais o que a IADES cobra em provas! Vamos praticar? 17

18 4. QUESTÕES COMENTADAS 1.IADES UFBA- BIOMÉDICO. De acordo com a SBPC/ML, no sistema a vácuo, é correto afirmar que a sequência de coleta para tubos plásticos de coleta de sangue é a) frascos para hemocultura; tubos com citrato; tubos para soro com ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com heparina com ou sem gel separador de plasma; tubos com EDTA e tubos com fluoreto. b) tubos com citrato; tubos para soro com ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com heparina com ou sem gel separador de plasma; tubos com EDTA, tubos com fluoreto e frascos para hemocultura. c) frascos para hemocultura; tubos para soro com ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com heparina com ou sem gel separador de plasma; tubos com EDTA; tubos com citrato e tubos com fluoreto. d) tubos com EDTA; tubos com fluoreto; tubos com citrato; tubos para soro com ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com heparina, com ou sem gel separador de plasma e frascos para hemocultura. e) tubos com fluoreto; frascos para hemocultura; tubos com citrato; tubos para soro com ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com EDTA; tubos com heparina, com ou sem gel separador de plasma. COMENTÁRIO: Não está no conteúdo dessa aula, porém se há uma questão recorrente nas provas da IADES é essa! MEMORIZE, portanto a ordem de coleta. Use para isso as palavras chaves: HEMOCULTURA- CITRATO- ATIVADOR 18

19 - SEPARADOR- HEPARINA-EDTA- FLUORETO. (Eu recomendo o uso do mnemônico HCA-SHEL). Letra a, correta. 2.IADES PC-DF Perito Criminal - Ciências Biológicas. O aparecimento do microscópio eletrônico de transmissão (MET) revolucionou a pesquisa científica, aprimorando drasticamente várias áreas, tanto das ciências biológicas quanto da ciência dos materiais. Como resultado das novas observações que ele tornou possíveis, a compreensão da organização dos tecidos vegetais e animais foi enormemente ampliada, e muitos conceitos a respeito da construção e função celulares foram radicalmente alterados. Com relação à microscopia eletrônica de transmissão, assinale a alternativa correta. A) No MET, a imagem é formada por dois tipos de elétrons: os transmitidos, que atravessam o espécimen em estudo, e os elasticamente espalhados, que proporcionam o contraste obtido pelo efeito de dispersão ou espalhamento (scattering). B) A microscopia eletrônica de transmissão envolve um feixe de elétrons de alta voltagem, emitido por um cátodo (usualmente um filamento de tungstênio) e focado por eletrostática e por lentes eletromagnéticas. C) A etapa de contrastação realizada para o preparo das amostras a serem analisadas no MET é realizada por meio da impregnação da amostra com metais pesados, e tem a finalidade de estabilizar proteínas e lipídios, visto que a uranila tem afinidade com ambos. 19

20 D) A microscopia eletrônica é capaz de produzir imagens de alta resolução e apresenta como vantagens o baixo custo e a baixa toxicidade dos corantes utilizados no processamento de materiais. E) Um dos fatores que limitam a resolução do MET é conhecido como aberração cromática, a qual compreende um efeito óptico causado pelo aumento da refração dos raios luminosos, que ocorre quando esses atingem uma lente ou um espelho próximo aos respectivos limites ou às bordas, em comparação com os raios que atingem a região central da lente ou espelho. Comentário: A letra A erra ao afirmar que o efeito obtido pelo microscópio de varredura é devido à dispersão, na verdade é devido à passagem de elétrons não não ser direta, mas eles encobrem a superfície do material em determinado ângulo que produz imagem tridimensional. A alternativa C está errada já que a microscopia eletrônica de transmissão é feita com íons metálicos para coloração e não estabilizar proteínas e lipídeos. Letra D erra ao dizer que a técnica é de baixo custo. A letra E descreve um sistema de lentes diferente da técnica de MET, já que esta utiliza lentes eletromagnéticas. Correta é a letra B. 3.UFU-MG UFU-MG Técnico de Laboratório - Patologia Em relação à existência de vários tipos de microscopia de luz utilizados nos laboratórios, assinale a alternativa que apenas contém exemplos de microscópios, que usam fonte de luz visível ou não para gerar uma imagem. 20

21 A) Microscopia de contraste de fase, microscopia eletrônica de varredura, microscopia confocal. B) Microscopia de contraste de fase, microscopia de polarização e microscopia de fluorescência. C) Microscopia de contraste de interferência diferencial, microscopia de campo escuro, microscopia eletrônico de transmissão. D) Microscopia eletrônica de transmissão, microscopia eletrônica de varredura e microscopia de campo claro. COMENTÁRIO: Todas as demais alternativas trazem microscopia eletrônica entre as opções e sabemos que nela não se utiliza luz, mas sim um feixe de elétrons. Gabarito, letra B. 4.FGV FIOCRUZ- Tecnologista em Saúde - Operação e Manutenção de Plataformas Tecnológicas. Sobre microscopia eletrônica de transmissão, assinale a alternativa incorreta: A) Utiliza radiação eletromagnética gerada a partir de um filamento de tungstênio como fonte de elétrons. B) Os elétrons gerados a partir da fonte são condensados no material a ser observado por meio de um sistema de lentes condensadoras. C) As lentes dos microscópios eletrônicos são feitas a partir de vidro ou quartzo. D) Microscópios eletrônicos requerem um elaborado sistema de vácuo para remover moléculas de ar que possam desviar ou impedir o fluxo de elétrons. 21

22 E) A iluminação transmitida através do material a ser observado é focalizado em uma imagem e aumentado por um sistema de lentes objetivas, intermediárias e projetoras até que a imagem final é obtida. COMENTÁRIO: Letra C, pois na microscopia eletrônica utiliza-se lentes eletromagnéticas. 5.CESPE POLÍCIA CIENTÍFICA PE- Perito Criminal - Ciências Biológicas e Biomedicina. Com relação a microscopia ótica e eletrônica, assinale a opção correta. A) Apesar da qualidade das lentes e das técnicas atuais, os comprimentos de onda da radiação eletromagnética no espectro visível limitam a resolução na microscopia ótica convencional. B) Assim como em um microscópio eletrônico de transmissão, a lente objetiva de um microscópio ótico se localiza tipicamente entre a mesa para amostras e a lente ocular. C) O cromatismo, aberração ótica caracterizada pela presença de um halo colorido na imagem, resulta da difração da luz ao atravessar as lentes objetivas, motivo pelo qual atualmente se evita a associação de lentes em microscopia ótica. D) Resolução e aumento são parâmetros equivalentes em microscopia ótica. 22

23 E) A focalização da imagem da amostra em um microscópio ótico moderno pode ser feita ajustando-se o diafragma. COMENTÁRIO: Letra A está correta! A letra B erra ao equiparar a estrutura de um microscópio eletrônico com um óptico, pois no eletrônico a lente é eletromagnética e não está na mesma posição da lente do optico. A letra C afirma que se evita a associação de lentes em microscopia óptica, porém é comum em análises clínicas combinar as lente objetivas na triagem e oculares no confirmatório e observação de detalhes estruturais dos microrganismos. A alternativa D igual dois conceitos distintos: Resolução é a qualidade da imagem, já aumento é a capacidade de ampliação da lente. Errado! Na alternativa E está descrito que o diafragma é responsável por focar a imagem, na verdade o diafragma controla a passagem de luz para amostra, o foco está relacionado ao macrômetro e micrômetro. 6.FGV-2010-FIOCRUZ Tecnologista em Saúde - Biologia Celular e Molecular Aplicada à Virologia. Para confirmar diagnóstico de dengue em um paciente, podem ser realizados diferentes tipos de ensaios que visam à detecção de anticorpos contra proteínas virais ou do vírus propriamente dito na amostra do paciente. Todos os métodos abaixo são compatíveis com a detecção do vírus em amostras de pacientes, exceto: A) microscopia eletrônica B) Western-blot. C) PCR. 23

24 D) microscopia ótica E) ELISA-(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) COMENTÁRIO: A única técnica que não detecta virus é a microscopia ótica, pois seu poder de ampliação não permite visualização tão detalhada de estruturas tão pequenas. A eletrônica já tem essa capacidade, decido ao feixe de elétrons que formam imagem 3D do agente infeccioso, as demais alternativas igualmente detectam vírus, por métodos imunológicos que veremos em aula específica. A correta é a Letra D. 7.CESPE INMETRO- Técnico - Biotecnologia. Acerca dos corantes utilizados em microscopia óptica, assinale a opção correta. A) Os corantes não-vitais, tais como hematoxilina, eosina, ácido ósmico, lugol, vermelho escarlate e violeta genciana, não causam a morte celular. B) Os corantes ortocromáticos conferem à célula coloração diferente da observada in vitro. C) Os corantes neutros possuem efeito tintorial apenas nas estruturas que não apresentam acidofilia nem basofilia. D) Os corantes vitais, tais como verde-janus B, azul de metileno, azul brilhante de cresil e vermelho neutro, causam a morte celular. E) Os corantes metacromáticos conferem à célula a mesma cor que apresentam in vitro. COMENTÁRIO: Letra A descreve corantes tóxico como hematoxilina; a letra B erra ao dizer que a célula in vitro e in vivo tem coloração diferente quando 24

25 submetidas a corante ortocromático. A Letra C está correta! Letra D erra ao afirmar que corantes vitais provocam morte celular. Letra E erra ao afirmar que é a mesma cor, já que os componentes teciduais combinam-se com o corante para produzirem uma cor diferente da cor original. 8.FGV FIOCRUZ- Tecnologista em Saúde - Biologia Celular. Sobre o processo de coloração de materiais para microscopia, assinale a alternativa incorreta. A) É utilizado para aumentar o contraste do material a ser analisado ao microscópio. B) Existem diferentes classes de corantes, permitindo a coloração de diferentes estruturas celulares. C) Além de revelarem estruturas, corantes também podem revelar onde determinadas reações químicas ocorrem na célula. D) Amostras para microscopia eletrônica, em geral, não requerem o uso de corantes ou de contrastantes. E) Coloração também pode ser feita por meio de sondas ou proteínas fluorescentes. COMENTÁRIO: Letra D está incorreta! A microscopia eletrônica exige íons metálicos que possuem a função de corar a amostra. As demais estão corretamente descritas. 25

26 LISTA DE QUESTÕES 1.IADES UFBA- BIOMÉDICO. De acordo com a SBPC/ML, no sistema a vácuo, é correto afirmar que a sequência de coleta para tubos plásticos de coleta de sangue é A. frascos para hemocultura; tubos com citrato; tubos para soro com ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com heparina com ou sem gel separador de plasma; tubos com EDTA e tubos com fluoreto. B. tubos com citrato; tubos para soro com ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com heparina com ou sem gel separador de plasma; tubos com EDTA, tubos com fluoreto e frascos para hemocultura. C. frascos para hemocultura; tubos para soro com ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com heparina com ou sem gel separador de plasma; tubos com EDTA; tubos com citrato e tubos com fluoreto. D. tubos com EDTA; tubos com fluoreto; tubos com citrato; tubos para soro com ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com heparina, com ou sem gel separador de plasma e frascos para hemocultura. E. tubos com fluoreto; frascos para hemocultura; tubos com citrato; tubos para soro com ativador de coágulo, com ou sem gel separador; tubos com EDTA; tubos com heparina, com ou sem gel separador de plasma. 26

27 2.IADES PC-DF Perito Criminal - Ciências Biológicas. O aparecimento do microscópio eletrônico de transmissão (MET) revolucionou a pesquisa científica, aprimorando drasticamente várias áreas, tanto das ciências biológicas quanto da ciência dos materiais. Como resultado das novas observações que ele tornou possíveis, a compreensão da organização dos tecidos vegetais e animais foi enormemente ampliada, e muitos conceitos a respeito da construção e função celulares foram radicalmente alterados. Com relação à microscopia eletrônica de transmissão, assinale a alternativa correta. A. No MET, a imagem é formada por dois tipos de elétrons: os transmitidos, que atravessam o espécimen em estudo, e os elasticamente espalhados, que proporcionam o contraste obtido pelo efeito de dispersão ou espalhamento (scattering). B. A microscopia eletrônica de transmissão envolve um feixe de elétrons de alta voltagem, emitido por um cátodo (usualmente um filamento de tungstênio) e focado por eletrostática e por lentes eletromagnéticas. C. A etapa de contrastação realizada para o preparo das amostras a serem analisadas no MET é realizada por meio da impregnação da amostra com metais pesados, e tem a finalidade de estabilizar proteínas e lipídios, visto que a uranila tem afinidade com ambos. D. A microscopia eletrônica é capaz de produzir imagens de alta resolução e apresenta como vantagens o baixo custo e a baixa toxicidade dos corantes utilizados no processamento de materiais. 27

28 E. Um dos fatores que limitam a resolução do MET é conhecido como aberração cromática, a qual compreende um efeito óptico causado pelo aumento da refração dos raios luminosos, que ocorre quando esses atingem uma lente ou um espelho próximo aos respectivos limites ou às bordas, em comparação com os raios que atingem a região central da lente ou espelho. 3.UFU-MG UFU-MG Técnico de Laboratório - Patologia Em relação à existência de vários tipos de microscopia de luz utilizados nos laboratórios, assinale a alternativa que apenas contém exemplos de microscópios, que usam fonte de luz visível ou não para gerar uma imagem. A. Microscopia de contraste de fase, microscopia eletrônica de varredura, microscopia confocal. B. Microscopia de contraste de fase, microscopia de polarização e microscopia de fluorescência. C. Microscopia de contraste de interferência diferencial, microscopia de campo escuro, microscopia eletrônico de transmissão. D. Microscopia eletrônica de transmissão, microscopia eletrônica de varredura e microscopia de campo claro. 28

29 4.FGV FIOCRUZ- Tecnologista em Saúde - Operação e Manutenção de Plataformas Tecnológicas. Sobre microscopia eletrônica de transmissão, assinale a alternativa incorreta: A. Utiliza radiação eletromagnética gerada a partir de um filamento de tungstênio como fonte de elétrons. B. Os elétrons gerados a partir da fonte são condensados no material a ser observado por meio de um sistema de lentes condensadoras. C. As lentes dos microscópios eletrônicos são feitas a partir de vidro ou quartzo. D. Microscópios eletrônicos requerem um elaborado sistema de vácuo para remover moléculas de ar que possam desviar ou impedir o fluxo de elétrons. E. A iluminação transmitida através do material a ser observado é focalizado em uma imagem e aumentado por um sistema de lentes objetivas, intermediárias e projetoras até que a imagem final é obtida. 5.CESPE POLÍCIA CIENTÍFICA PE- Perito Criminal - Ciências Biológicas e Biomedicina. Com relação a microscopia ótica e eletrônica, assinale a opção correta. A. Apesar da qualidade das lentes e das técnicas atuais, os comprimentos de onda da radiação eletromagnética no espectro visível limitam a resolução na microscopia ótica convencional. 29

30 B. Assim como em um microscópio eletrônico de transmissão, a lente objetiva de um microscópio ótico se localiza tipicamente entre a mesa para amostras e a lente ocular. C. O cromatismo, aberração ótica caracterizada pela presença de um halo colorido na imagem, resulta da difração da luz ao atravessar as lentes objetivas, motivo pelo qual atualmente se evita a associação de lentes em microscopia ótica. D. Resolução e aumento são parâmetros equivalentes em microscopia ótica. E. A focalização da imagem da amostra em um microscópio ótico moderno pode ser feita ajustando-se o diafragma. 6.FGV-2010-FIOCRUZ Tecnologista em Saúde - Biologia Celular e Molecular Aplicada à Virologia. Para confirmar diagnóstico de dengue em um paciente, podem ser realizados diferentes tipos de ensaios que visam à detecção de anticorpos contra proteínas virais ou do vírus propriamente dito na amostra do paciente. Todos os métodos abaixo são compatíveis com a detecção do vírus em amostras de pacientes, exceto: A) microscopia eletrônica B) Western-blot. C) PCR. D) microscopia ótica E) ELISA-(Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) 30

31 7.CESPE INMETRO- Técnico - Biotecnologia. Acerca dos corantes utilizados em microscopia óptica, assinale a opção correta. A. Os corantes não-vitais, tais como hematoxilina, eosina, ácido ósmico, lugol, vermelho escarlate e violeta genciana, não causam a morte celular. B. Os corantes ortocromáticos conferem à célula coloração diferente da observada in vitro. C. Os corantes neutros possuem efeito tintorial apenas nas estruturas que não apresentam acidofilia nem basofilia. D. Os corantes vitais, tais como verde-janus B, azul de metileno, azul brilhante de cresil e vermelho neutro, causam a morte celular. E. Os corantes metacromáticos conferem à célula a mesma cor que apresentam in vitro. 8.FGV FIOCRUZ- Tecnologista em Saúde - Biologia Celular. Sobre o processo de coloração de materiais para microscopia, assinale a alternativa incorreta. A. É utilizado para aumentar o contraste do material a ser analisado ao microscópio. B. Existem diferentes classes de corantes, permitindo a coloração de diferentes estruturas celulares. C. Além de revelarem estruturas, corantes também podem revelar onde determinadas reações químicas ocorrem na célula. D. Amostras para microscopia eletrônica, em geral, não requerem o uso de corantes ou de contrastantes. 31

32 E. Coloração também pode ser feita por meio de sondas ou proteínas fluorescentes. 1. A 2. B 3. B 4. C 5. A 6. D 7. C 8. D Espero vocês nas próximas aulas!!! Professora Pollyana Lyra. 32

33 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS: Acessado em 14/11/ d=16&itemid=28. Acessado em 14/11/ Acessado em 14/11/2016 MURRAY, PATRICK R.; ROSENTHAL, KEN S.; PFALLER, MICHAEL A. Microbiologia Médica. 6 ed. Ed. Elsevier,