MANUAL DE COLETA DIA GNÓSTICOS AVANÇADOS

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1 MANUAL DE COLETA DIA GNÓSTICOS AVANÇADOS

2 PRESTEZA, PRECISÃO E PROXIMIDADE

3 índice MORFOLOGIA CITOGENÉTICA IMUNOFENOTIPAGEM POR CITOMETRIA DE FLUXO... 2 IMUNOGENÉTICA E HISTOCOMPATIBILIDADE DOENÇAS INFECCIOSAS... 8

4 1. IMUNOFENOTIPAGEM POR CITOMETRIA DE FLUXO EXAME APLICAÇÃO MATERIAL* Imunofenotipagem para Diagnóstico de Doenças Onco-hematológicas Diagnóstico e monitoramento de Leucemias agudas e crônicas, Doenças Linfoproliferativas e Mieloproliferativas, Síndromes Mielodisplásicas e Gamopatias Monoclonais Sangue periférico: 4-5 ml colhidos em Medula óssea: 2-3 ml colhidos em Imunofenotipagem para Doença Residual Mínima Monitoração de doença residual mínima em Leucemias e Linfomas Medula óssea: 2-3 ml colhidos em Imunofenotipagem para Hemoglobinúria Paroxística Noturna Diagnóstico e monitoração de HPN Sangue periférico: 4-5 ml colhidos em Subpopulações Linfocitárias (Quantificação de Linfócitos T, B e NK) Diagnóstico e monitoração de imunodeficiências congênitas e adquiridas. Recuperação imunológica pós-transplante de CTH Sangue periférico: 4-5 ml colhidos em Quantificação de linfócitos T CD4 e CD8 Acompanhamento da resposta imunológica em pacientes HIV positivos e pacientes com outras imunodeficiências Sangue periférico: 4-5 ml colhidos em Marcadores isolados - CD3, CD19, CD20, CD56, outros A critério clínico Sangue periférico: 4-5 ml colhidos em Medula óssea: 2-3 ml colhidos em Pesquisa de ZAP 70 para LLC Fator prognóstico em Leucemia Linfocítica Crônica Sangue periférico: 4-5 ml colhidos em Medula óssea: 2-3 ml colhidos em -2-

5 EXAME APLICAÇÃO MATERIAL* Contagem de células CD34 sem viabilidade Viabilidade celular com 7AAD Contagem de células-tronco hematopoéticas em sangue periférico, medula óssea, bolsas de aférese e sangue de cordão umbilical Avaliação da viabilidade da amostra biológica Sangue periférico: 4-5 ml colhidos em Medula óssea: 2-3 ml colhidos em ou ACD Aférese -- Células-tronco hematopoéticas periféricas (CTHP): mínimo 500µl, em ACD Sangue de cordão umbilical: mínimo 500 µl, em ACD, descongelados no Banco de Sangue Imunofenotipagem de Líquor Diagnóstico de infiltração por doenças onco-hematológicas Líquor (LCR): 3-5 ml in natura, sem anticoagulante ou em 0,2 ml de estabilizador Transfix (fornecido pelo laboratório). Enviar para o laboratório imediatamente após a coleta Imunofenotipagem de outros Líquidos Biológicos Diagnóstico de infiltração por doenças onco-hematológicas Líquidos corporais (Peritoneal, Pericárdico, Pleural, Ascítico), exceto LCR, e Lavado Broncoalveolar: no mínimo 5 ml in natura. Enviar para o laboratório imediatamente após a coleta Imunofenotipagem em Aspirado (PAAF) ou Biópsia de Linfonodos Diagnóstico de doenças onco-hematológicas Linfonodo (LN): acondicionar o linfonodo ou os fragmentos da aspiração por agulha fina (PAAF) em soro fisiológico ou PBS (máximo de 5 ml). Encaminhar ao laboratório imediatamente após a coleta Imunofenotipagem de Biópsias Teciduais Diagnóstico de infiltração por doenças onco-hematológicas Biópsias teciduais: em soro fisiológico ou meio de cultura. Não colocar em formol Imunofenotipagem de Plaquetas Diagnóstico de doenças congênitas de plaquetas Plaquetas: sangue periférico em citrato de sódio 3,8% Determinação de conteúdo de DNA por citometria de fluxo Avaliação de conteúdo de DNA e Ciclo celular em LLA-B e Mieloma múltiplo Sangue periférico: 4-5 ml colhidos em Medula óssea: 2-3 ml colhidos em *MATERIAL E TRANSPORTE: vide RECOMENDAÇÕES IMPORTANTES na próxima página. -3-

6 RECOMENDAÇÕES IMPORTANTES MATERIAL O prazo máximo de chegada de medula óssea e sangue periférico ao laboratório é de 24 horas após a coleta. A quantificação de células CD34 é considerada exame de urgência, portanto, a entrega do material deve ser imediata. Não será aceito material sem identificação: nome do paciente e data de coleta. Medula óssea: Evitar colher mais que 3 ml, pois há risco de contaminação com elementos de sangue periférico. A obtenção do material NÃO deve ser realizada no mesmo orifício ósseo utilizado para a realização de lâminas (aspirado de medula óssea -- AMO); com isso, evita-se a hipocelularidade do material para imunofenotipagem. Líquor (LCR) e Linfonodo (LN): Enviar para o laboratório imediatamente após a coleta. O processamento do material deve ocorrer no máximo até duas horas após a coleta, para que não haja comprometimento da viabilidade celular. Biópsias teciduais: Enviar a maior quantidade de material possível, evitando áreas necróticas. Não usar formol. É possível processar a biópsia de medula óssea em caso de aspirado seco. Sangue de cordão umbilical para transplante: O material será descongelado no Banco de Sangue, e uma amostra encaminhada ao Laboratório. Interferentes: Amostra apresentando coágulos ou hemólise, ou acondicionada em heparina. Tempo entre a coleta e o processamento superior a 24 horas. Baixa viabilidade da amostra ou material hipocelular. Contaminação da medula óssea com elementos de sangue periférico no momento da punção. Uso de corticoide e quimioterapia pelo paciente. TRANSPORTE A amostra deverá ser transportada em recipiente adequado, que confira proteção ao material, à temperatura ambiente e devidamente identificada. Não colocar em contato com gelo. Amostras enviadas de longas distâncias podem ser acondicionadas em recipiente contendo gelo reciclável, desde que este não esteja em contato direto com a amostra. REQUISIÇÕES MÉDICAS A amostra deverá vir acompanhada de informações clínico-laboratoriais, no formulário específico de solicitação de exames fornecido pelo MANTIS Diagnósticos Avançados, preferencialmente preenchida pelo MÉDICO do paciente, com carimbo e assinatura. -4-

7 2. MORFOLOGIA EXAME APLICAÇÃO MATERIAL Mielograma Avaliação da Morfologia da Medula óssea Enviar quatro lâminas de extensão, dois squashes e dois imprints, se houver; sem corar. Coletar sem anticoagulante Citoquímicas Classificação de leucemias agudas pela morfologia mieloperoxidase e alfanaftilacetato esterase Enviar mais quatro lâminas de extensão sem corar Ferro medular Mielodisplasia, Anemia de doença crônica e Deficiência de ferro Enviar mais duas lâminas de extensão sem corar TRANSPORTE As lâminas devem estar acondicionadas em porta-lâminas e ser encaminhadas à temperatura ambiente, devidamente identificadas com o nome do paciente e a data da coleta. Não colocar em contato com gelo. Utilizar a mesma requisição médica da Imunofenotipagem. 3. CITOGENÉTICA EXAME APLICAÇÃO MATERIAL Cariótipo de Medula óssea e Sangue periférico Análise de alterações cromossômicas numéricas e estruturais Sangue periférico: 3 a 4 ml em seringa heparinizada Medula óssea: 1 a 2 ml em seringa heparinizada TRANSPORTE A amostra deverá ser transportada em recipiente adequado (que confira proteção ao material), à temperatura ambiente e devidamente identificada com o nome do paciente e a data da coleta. Não colocar em contato com gelo. -5-

8 4. IMUNOGENÉTICA E HISTOCOMPATIBILIDADE EXAME APLICAÇÃO MATERIAL Tipagem HLA-A, B, C de baixa resolução Tipagem HLA-DR e DQ de baixa resolução Tipagem HLA-A, B, C de alta resolução Tipagem HLA-DR e DQ de alta resolução Determinação da compatibilidade HLA entre doador e receptor de células-tronco hematopoéticas ou entre doador e receptor de órgãos sólidos Paciente: 16 ml de sangue periférico em 4 tubos com Doador: 8 ml de sangue periférico em 2 tubos com Tipagem HLA-B27 Auxílio-diagnóstico de Espondiloartropatias 4 ml de sangue periférico em 1 tubo com Tipagem HLA para identificação de antígenos associados a outras doenças A critério clínico 4 ml de sangue periférico em 1 tubo com Pesquisa de anticorpos HLA Identificar anticorpos HLA no soro do receptor de células-tronco hematopoéticas ou do receptor de órgãos sólidos 5 ml de sangue periférico em tubo com gel separador ou tubo seco (para separação do soro) Prova Cruzada de Linfócitos (Cross-match) para transplante Determinar a presença de anticorpos pré-formados no sangue do receptor contra antígenos expressos nos leucócitos do doador Paciente: 16 ml de sangue periférico em 2 tubos com anticoagulante ACD e 5 ml de sangue em 1 tubo com gel separador ou tubo seco para separação do soro Doador: 24 ml de sangue periférico em 3 tubos com anticoagulante ACD -6-

9 EXAME APLICAÇÃO MATERIAL Prova Cruzada de Linfócitos (Cross-match) para fertilidade Determinar a presença de anticorpos pré-formados no sangue materno contra antígenos expressos nos leucócitos paternos Mulher: 16 ml de sangue periférico em 2 tubos com anticoagulante ACD e 5 ml de sangue em 1 tubo com gel separador ou tubo seco para separação do soro Homem: 24 ml de sangue periférico em 3 tubos com anticoagulante ACD MATERIAL A amostra deve ser devidamente identificada com nome e data da coleta. No caso de familiares de pacientes com indicação de transplante (células-tronco hematopoéticas ou órgãos sólidos), deve-se escrever no tubo de coleta o tipo de parentesco com o paciente (irmão, pai, mãe, tio, avô, primo). TRANSPORTE A amostra deverá ser transportada em recipiente adequado que confira proteção ao material. Amostras para Tipagem HLA e para Prova Cruzada de Linfócitos devem ser transportadas à temperatura ambiente. Amostras para pesquisa de anticorpos HLA devem preferencialmente ser transportadas em gelo artificial (não colocar em contato direto com gelo). -7-

10 5. DOENÇAS INFECCIOSAS EXAME Antigenemia para CMV MATERIAL / COLETA* Sangue total: 5 ml com PCR em Tempo Real para Aspergillus spp. Lavado broncoalveolar: 5 ml em frasco esterilizado e novo PCR em Tempo Real para BKV Sangue total: 5 ml com anticoagulante ACD Urina: 10 ml em frasco esterilizado e novo PCR em Tempo Real para Enterovírus PCR em Tempo Real para HSV1 Sangue total: 5 ml com anticoagulante ACD Secreção de vesícula: swab específico fornecido pelo laboratório. Adicionar solução fisiológica Lavado broncoalveolar: 5 ml em frasco esterilizado e novo Biópsia: acondicionar em frasco fornecido pelo laboratório. Adicionar solução fisiológica PCR em Tempo Real para HSV2 Sangue total: 5 ml com anticoagulante ACD Secreção de vesícula: swab específico fornecido pelo laboratório. Adicionar solução fisiológica Lavado broncoalveolar: 5 ml em frasco esterilizado e novo Biópsia: acondicionar em frasco fornecido pelo laboratório. Adicionar solução fisiológica -8-

11 EXAME PCR em Tempo Real para VZV MATERIAL / COLETA* Secreção de vesícula: swab específico fornecido pelo laboratório. Adicionar solução fisiológica Lavado broncoalveolar: 5 ml em frasco esterilizado e novo Biópsia: acondicionar em frasco fornecido pelo laboratório. Adicionar solução fisiológica PCR em Tempo Real para EBV Sangue total: 5 ml com anticoagulante ACD Lavado broncoalveolar: 5 ml em frasco esterilizado e novo Biópsia: acondicionar em frasco fornecido pelo laboratório. Adicionar solução fisiológica PCR em Tempo Real para CMV Sangue total: 5 ml com anticoagulante ACD Lavado broncoalveolar: 5 ml em frasco esterilizado e novo Biópsia: acondicionar em frasco fornecido pelo laboratório. Adicionar solução fisiológica PCR em Tempo Real para HHV6 Sangue total: 5 ml com anticoagulante ACD Biópsia: acondicionar em frasco fornecido pelo laboratório. Adicionar solução fisiológica -9-

12 EXAME PCR em Tempo Real para HHV8 MATERIAL / COLETA* Sangue total: 5 ml com anticoagulante ACD PCR em Tempo Real para HPV Biópsia de lesão: coleta em frasco fornecido pelo laboratório. Adicionar solução fisiológica Swab de lesão: acondicionar em frasco fornecido pelo laboratório. Adicionar solução fisiológica PCR em Tempo Real para HIV 1 PCR em Tempo Real para HBV PCR em Tempo Real HBV Genotipagem PCR em Tempo Real para HCV PCR em Tempo Real HCV Genotipagem PCR em Tempo Real para Mycobacterium tuberculosis MTB Plasma: 5 ml de sangue com anticoagulante ACD Plasma: 5 ml de sangue com anticoagulante ACD Plasma: 5 ml de sangue com anticoagulante ACD Plasma: 5 ml de sangue com anticoagulante ACD Plasma: 5 ml de sangue com anticoagulante ACD Escarro: 1 ml em frasco esterilizado e novo Lavado broncoalveolar: 5 ml em frasco esterilizado e novo Urina: 10 ml em frasco esterilizado e novo PCR Multiplex para investigação de IVAS e Pneumonias Swab combinado de oro e nasofaringe: swab específico fornecido pelo laboratório. Adicionar solução fisiológica Lavado broncoalveolar: 5 ml de lavado em frasco esterilizado e novo -10-

13 EXAME PCR Multiplex para investigação de doenças sexualmente transmissíveis MATERIAL / COLETA* Swab de lesão: swab específico fornecido pelo laboratório. Adicionar solução fisiológica Urina: 10 ml em frasco esterilizado e novo PCR Multiplex para investigação de gastroenterites Fezes: 1 g de fezes em frasco esterilizado e novo Western Blot para HIV 1 e 2 Soro ou Plasma: 5 ml de sangue sem anticoagulante ou com anticoagulante ACD Legenda: LCR líquido cefalorraquidiano; HSV1: vírus herpes simplex tipo 1; HSV2: vírus herpes simplex tipo 2; VZV: vírus varicela-zóster; EBV: vírus Epstein Baar; CMV: citomegalovírus; HHV6: herpes vírus humano tipo 6; HHV8: herpes vírus humano tipo 8; HIV1: vírus da imunodeficiência humana tipo 1; HBV: vírus da hepatite tipo B; HCV: vírus da hepatite tipo C; HPV: papilomavírus humano; BKV: poliomavírus BK. *MATERIAL E TRANSPORTE: vide RECOMENDAÇÕES IMPORTANTES na próxima página. -11-

14 RECOMENDAÇÕES IMPORTANTES MATERIAL Volume da amostra: para testar mais de um agente infeccioso é importante que volumes maiores sejam encaminhados ao laboratório. Biópsias: identificar o sítio de coleta para que possa ser definido o procedimento de extração de ácidos nucleicos. Manipulação: amostras destinadas aos ensaios de biologia molecular não devem ser previamente manipuladas por outras seções do laboratório. Anticoagulantes para coleta de sangue periférico ACD é o mais indicado para pesquisa de agentes infecciosos por métodos de biologia molecular. EDTA é o mais indicado para o exame de Antigenemia para Citomegalovírus. Frascos específicos para coleta de outros tipos de amostras são fornecidos pelo laboratório Tampa azul qualquer amostra para pesquisa de Mycobacterium tuberculosis (MTB) Tampa verde LCR Tampa vermelha biópsias Tubo cônico de 15 ml para acondicionamento de: swab (adicionar 2 ml de solução fisiológica dentro do tubo antes de acomodar o swab); urina (deve ser acondicionada in natura); lavado broncoalveolar (deve ser acondicionado in natura). Swab para vírus respiratórios: recomenda-se a coleta de swab combinado (1 de cada narina e 1 da orofaringe). Após a coleta, o material deverá ser acondicionado em frasco com meio de transporte virológico ou em solução fisiológica. Interferentes Heparina é um anticoagulante inadequado para testes de biologia molecular. Sangue em líquor e aspirado podem comprometer o desempenho de algumas reações de biologia molecular devido à presença de inibidores. -12-

15 TRANSPORTE Tempo entre coleta e entrega da amostra no Laboratório Mantis Amostras destinadas ao ensaio de Antigenemia para Citomegalovírus e Carga Viral para HIV deverão ser encaminhadas ao Laboratório MANTIS no período máximo de 6 horas após a coleta. Atenção: esses exames são recebidos somente até as 13h00, porque devem ser processados imediatamente. Amostras para os demais exames de doenças infecciosas devem ser encaminhadas ao Laboratório MANTIS no período máximo de 24 horas após a coleta. Atenção: se os tempos entre coleta e envio estipulados acima não puderem ser cumpridos, as amostras (exceto sangue) devem ser armazenadas em freezer -20 C até o momento do encaminhamento ao Laboratório MANTIS. Amostras de sangue periférico devem ser coletadas somente se puderem ser entregues dentro do prazo estipulado para cada tipo de exame. Recipiente e temperatura A amostra para exames que empregam métodos moleculares deverá ser transportada em recipiente adequado que confira proteção ao material, obrigatoriamente à temperatura de 2 C a 8 C (gelo reciclável), devidamente identificada com o nome do paciente e a data da coleta. Amostra para o exame de Antigenemia para Citomegalovírus (CMV) deverá ser transportada em recipiente adequado, preferencialmente à temperatura de 2 C a 8 C (gelo reciclável), devidamente identificada com o nome do paciente e a data da coleta. Para este exame pode ser aceito o transporte à temperatura ambiente. REQUISIÇÕES MÉDICAS Todas as amostras deverão ser acompanhadas de requisição: formulários para solicitação de exames de Doenças Infecciosas são disponibilizados aos médicos solicitantes pelo MANTIS Diagnósticos Avançados. -13-

16 Mantis Diagnósticos Avançados R. Pe. Germano Mayer, 1949 CEP Curitiba Paraná Fone: (41) Fax: (41)