LER ALTERAÇÕES DESTACADAS
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- Baltazar Artur Sintra Castanho
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1 LER ALTERAÇÕES DESTACADAS bioblot HCV tests Ensaio imuno-enzimático qualitativo para a detecção de anticorpos IgG contra o vírus da Hepatite C em soro ou plasma humanos. É indicado como teste complementar mais específico para amostras de soro ou plasma humanos nas quais se verifica uma reatividade repetida por procedimentos de triagem como a técnica de ELISA. Sumário O HCV foi identificado como o principal agente causador da hepatite não-a, não-b (NANB) de transmissão parenteral. Atualmente há uma ampla disponibilidade de testes de crivagem para o diagnóstico da infecção por Hepatite C. Estas análises habitualmente incluem antigénios da região estrutural (Core) bem como um ou mais antigénios específicos de regiões não estruturais do vírus (NS3, NS4, NS5). As amostras, que apresentam reatividade repetida utilizando procedimentos de crivagem, requerem análises de confirmação de seropositividade de HCV mais específicas, dado que os atuais métodos de crivagem do ELISA HCV podem dar lugar a falsos resultados positivos. O uso previsto do kit bioblot HCV apresenta-se como uma análise complementar mais específica para amostras de soro ou plasma humanos nas quais se verifica uma reatividade repetida com o teste ELISA. É um teste enzimático de imuno-blot que incorpora na mesma tira quatro proteínas combinatórias do HCV provenientes do núcleo e das regiões NS3, NS4 e NS5 do genoma do HCV. Cada tira também inclui um controle interno da adição de amostras para reduzir o máximo possível o risco de falsos resultados negativos em decorrência de erros operativos e para garantir a adição das amostras. Os possíveis perfis serológicos definidos pelo bioblot HCV são os seguintes: HCV seropositivo, HCV seronegativo e indeterminado. Princípio As fitas de nitrocelulose contêm proteínas recombinantes do HCV, do Core e das regiões NS3, NS4 e NS5 do genoma viral. Estas proteínas são expressas como proteínas de fusão na proteína GST. Portanto, incluiu-se na tira uma banda de controle GST para detectar a reatividade à GST nativa. As fitas também contêm uma banda de controle do IgG e anti-igg. As fitas de nitrocelulose incubam-se individualmente com o soro ou plasma diluído nas amostras e nos controles. Os anticorpos diante do HCV, caso estejam presentes, unir-se-ão às proteínas do HCV presentes na fita. As fitas são lavadas para eliminar o material que não se fixou e incubam-se, posteriormente, com anti-igg humana de cabra purificada por afinidade conjugada com fosfatasa alcalina. O anticorpo conjugado se unirá a qualquer complexo antigénio-anticorpo formado nos blots. O conjugado não unido elimina-se mediante lavagens. As bandas de proteínas reativas são visualizadas nas tiras ao acrescentar o substrato BCIP/NBT. Componentes 1. STRIPS FITAS DE NITROCELULOSA: 18 tiras de nitrocelulose que contêm antigénios recombinantes estruturais e não estruturais do HCV e duas bandas de controle de adição (anti-igg humana e IgG humana). As fitas são numeradas consecutivamente do número 1 ao 18, ou do 19 ao 36. É preciso mantê-las secas e protegidas da luz. 2. CONJ 1000x CONJUGADO CONCENTRADO: 1 x 120 µl de anticorpos de cabra anti-igg humana conjugados com fosfatase alcalina. Contém azida sódica. 3. CONTROL CONTROLE NEGATIVO: 1 x 80 µl de soro humano inativado negativo em anticorpos contra HCV, HIV-1, HIV-2 e em antígeno de superfície de da hepatite B (HBsAg). Contém azida sódica e mertiolato sódico. 4. CONTROL + CONTROLE POSITIVO: 1 x 80 µl de soro humano inativado contendo um elevado título de anticorpos contra HCV. Negativo em antígeno de superfície da hepatite B (HBsAg) e em anticorpos contra HIV-1, HIV-2 e HTLV-I/II. Contém azida sódica e mertiolato sódico. 5. WASH SOLN 20x SOLUÇÃO DE LAVAGEM CONCENTRADA: 1 x 70 ml de tampão Tris concentrado (20x). Contém Tween 20 e mertiolato sódico. 6. BLOT BUF 10x TAMPÃO DE BLOTTING CONCENTRADO: 1 x 20 ml de tampão Tris concentrado (10x). Contém soro de cabra normal inativado pelo calor e mertiolato sódico. 7. SUBS SUBSTRATO: 1 x 100 ml de solução de 5-bromo-4-cloro-3-indolil fosfato (BCIP) e azul de nitrotetrazólio (NBT). Pronto para usar.
2 8. BLOT POW PÓ DE BLOTTING: 10 x 1 g de leite desnatado em pó. 9. TRAYS BANDEJAS DE INCUBAÇÃO: 2 bandejas de incubação de 9 pocinhos. 10. FORCEPS PINÇAS: 1 par. Precauções bioblot HCV é para o diagnóstico IN VITRO. Para uso exclusivamente por profissionais. Consulte os rótulos do produto para obter informação sobre os componentes potencialmente perigosos. INFORMAÇÃO SANITÁRIA E DE SEGURANÇA PRECAUÇÕES: Este kit contém material de origem humana. Nenhum método de teste pode oferecer garantia total que os produtos de sangue humano não transmitam infecções. MANUSEIE AS AMOSTRAS ASSIM COMO OS CONTROLES POSITIVO E NEGATIVO COMO POTENCIALMENTE INFECCIOSOS. Recomenda-se que os componentes e as amostras do teste sejam manuseados de acordo com as boas práticas de laboratório. O descarte deverá ser realizado de acordo com procedimentos de segurança vigentes. O controle positivo e o controle negativo contêm mertiolato e azida sódica, enquanto o tampão de blotting concentrado e a solução de lavagem contêm mertiolato; o conjugado contém azida sódica. A azida sódica pode reagir com o cobre e o chumbo usados em alguns encanamentos formando sais explosivos. Embora as quantidades usadas neste kit sejam pequenas, o descarte de materiais contendo azida deve ser feito por lavagem com volumes relativamente altos de água de forma a evitar a formação de azida metálica no sistema de canalização. As frases de risco (R) pertinentes são: R20/21/22 Nocivo por inalação, por ingestão e em contato com a pele. O substrato contém 5-bromo-4-cloro-3-indolil fosfato e azul de nitrotetrazólio, classificado pelas Diretivas da Comunidade Ecónomica Européia (CEE) aplicáveis como nocivo (Xn). As frases de risco (R) pertinentes são: R20/21/22 Nocivo por inalação, por ingestão e em contato com a pele. 1. Evite a contaminação microbiana dos reagentes ao abrir e retirar alíquotas dos frascos originais. 2. Não pipete com a boca. 3. Manuseie as amostras em teste, as fitas de nitrocelulose e os controles positivo e negativo como agentes potencialmente infecciosos. 4. Use vestuário de laboratório e luvas descartáveis durante a realização do teste. Descarte as luvas em sacos plásticos para lixo biológico perigoso. A seguir, lave bem as mãos. 5. É altamente recomendável que este teste seja realizado numa câmara adequada para material biológico perigoso. 6. Mantenha todo o material longe de alimentos e bebidas. 7. Em caso de acidente ou contato com os olhos, lave imediatamente com água em abundância e procure ajuda médica. 8. Consulte imediatamente um médico caso ocorra ingestão de materiais contaminados ou contato destes com feridas abertas, ou outras soluções de continuidade da pele. 9. Enxugue imediatamente derramamentos de materiais infecciosos com papel absorvente e limpe imediatamente a área contaminada com solução de hipoclorito de sódio a 1 % antes de continuar o trabalho. O hipoclorito de sódio não deve ser usado em derramamentos contendo ácidos, a não ser que a área seja antes enxugada com papel absorvente. O material usado (inclusive as luvas descartáveis) deve ser descartado como material biológico potencialmente perigoso. Não esterilize em autoclave material que contenha hipoclorito de sódio.
3 10. Antes do descarte, esterilize em autoclave a 121 C e 15 p.s.i, durante 30 minutos, todo o material contaminado utilizado. Alternativamente, descontamine o material em solução de hipoclorito de sódio a 5% durante minutos antes de descartar em sacos para lixo biológico perigoso. 11. Descontamine todos os produtos químicos e reagentes usados adicionando um volume suficiente de hipoclorito de sódio para obter uma concentração final de pelo menos 1%. Deixe agir durante 30 minutos para garantir uma descontaminação eficiente. 12. Não é recomendável reutilizar as bandejas de incubação. PRECAUÇÕES ANALÍTICAS: 1. É possível utilizar amostras de soro ou plasma com o EDTA ou citrato. As amostras de plasma com heparina não devem ser utilizadas, pois podem causar uma reação não específica com a banda de core. 2. Para garantir um desempenho perfeito do teste é necessário SEGUIR À RISCA os procedimentos descritos neste Manual de instruções. A inobservância destes procedimentos pode acarretar resultados anômalos. 3. NÃO MODIFIQUE OU SUBSTITUA REAGENTES DE UM LOTE DE KIT PARA OUTRO. Os controles, o conjugado e as fitas de Western Blot são combinadas entre si para oferecer um desempenho perfeito. Use somente reagentes fornecidos com o kit. 4. Não use componentes do kit após a data de validade impressa na caixa do kit. 5. Evite a contaminação microbiana dos reagentes ao abrir e retirar alíquotas dos frascos originais. A contaminação reduz prematuramente a vida útil dos kits e fornece resultados errôneos. Use técnicas assépticas como por exemplo pipetas ouponteiras de pipetas descartáveis para retirar alíquotas dos frascos. 6. Em cada processamento de amostras de pacientes, deve-se testar os controles do kit em paralelo. 7. Use uma ponteira de pipeta nova para cada alíquota de amostra, para evitar contaminação cruzada, 8. Para melhores resultados, aplique todos os reagentes enquanto ainda estiverem frios e retorne-os ao armazenamento entre 2 C e 8 C, o mais depressa possível. 9. Recomenda-se que a vidraria a ser usada com os reagentes seja lavada com ácido clorídrico 2M e enxaguada abundantemente com água destilada ou deionizada antes do uso. 10. Use somente água de qualidade grau reagente, deionizada ou destilada, para diluir os reagentes. 11. Todos os reagentes devem ser bem misturados antes do uso. 12. A solução de conjugado de trabalho, a solução de lavagem diluída e o tampão de blotting devem ser preparados logo antes do uso. 13. A solução de Conjugado de Trabalho deve ser preparada usando um recipiente ou Beker de polipropileno. 14. Não exponha os reagentes nem realize testes em áreas que apresentem altos níveis de vapores de desinfetantes químicos (e.g., vapores de hipoclorito) durante as etapas de armazenamento ou de incubação. O contato inibe a reação colorida. Da mesma forma, não exponha os reagentes à luz intensa. 15. O teste deverá preferencialmente ser realizado à temperatura ambiente (25 C ± 3 C). 16. Certifique-se que as fitas de teste estão dispostas com os números nas fitas voltados para cima. 17. Para a prova de Western Blot, é importante usar um agitador de plataforma oscilante e não um agitador rotativo. Caso contrário, o desempenho do kit ficará comprometido. A velocidade e o ângulo de inclinação recomendados para o agitador são de 12 a 16 ciclos por minuto, e 5 a 10 graus, respectivamente. 18. Se usar equipamento automático, confira se está aferido antes do uso.
4 19. Certifique-se que as amostras são adicionadas longe da fita. A bandeja pode ser agitada e a amostra adicionada no local onde a solução-tampão for coletada na extremidade inferior. Isto evitará a formação de manchas escuras devido à adição de amostra na fita. 20. Evite o uso de congeladores do tipo self-defrost para armazenar reagentes e amostras. Instruções de conservação 1. Conserve o kit bioblot HCV e seus componentes a 2 C - 8 C quando não se estiverem utilizando. 2. Todos os reagentes e fitas do teste permanecem estáveis até a data de validade declarada no kit, se conservados entre 2 C e 8 C. Não congele os reagentes. A. Fitas de antígeno - Evite a exposição desnecessária das fitas de antígenos à luz. B. Reagentes - Conserve os reagentes em seus recipientes originais e mantenha-os tampados ao armazená-los. - Utilize todos os reagentes ainda frios e volte a armazená-los entre 2 C e 8 C o mais rápido possível. - Quando o substrato for conservado entre 2 C e 8 C poderão se formar precipitados. Isto não afetará o desempenho do kit. PRECAUÇÃO: Evite a exposição desnecessária do substrato à luz. Coleta das amostras Podem ser usadas amostras de soro ou plasma coletadas em EDTA ou citrato de sódio. É preferível não utilizar amostras de plasma com heparina, já que podem apresentar reação não específica com a banda do core do HCV. Antes do armazenamento, certifique-se que os coágulos e/ou as células sangüíneas foram separadas por centrifugação. As amostras devem ser conservadas entre 2 C e 8 C se o teste for realizado dentro de 7 dias após a coleta, ou congeladas a -20 C se for previsto que o teste será realizado em mais de 7 dias após coleta. É preferível usar amostras límpidas e não hemolisadas. Amostras lipêmicas, ictéricas ou contaminadas (por partículas ou bactérias) devem ser filtradas (0,45 μm) ou centrifugadas antes do teste. O soro dos pacientes pode estar inativo, mas isso não é um requisito indispensável para o ótimo funcionamento da análise. Inative da seguinte forma: 1. Solte a tampa dos recipientes com o soro. 2. Aqueça o soro a 56 C durante 30 minutos em banho de água. 3. Deixe o soro arrefecer antes de voltar a ajustar as tampas. 4. O soro pode ser conservado congelado até a análise. Recomendamos que não se submeta o soro dos pacientes a ciclos repetidos de congelamento e descongelamento antes de realizar o teste. Material necessário não incluído no kit - Água deionizada ou destilada. - Luvas descartáveis. - Agitador de plataforma oscilante (com velocidade de balanceio de oscilações por minuto e inclinação de 5-10 para lavar as fitas uniformemente). - Pipetas e ponteiras de volumes adequados. - Sistema de aspiração com depósito de hipoclorito sódico. - Banho- maria de 56 C (opcional). - Hipoclorito sódico para a descontaminação. Operações prévias 1. SOLUÇÃO DE LAVAGEM DILUÍDA (a) A SOLUÇÃO DE LAVAGEM DILUÍDA deve estar recém preparada. (b) Dilua 1 volume de SOLUÇÃO DE LAVAGEM CONCENTRADA (20X) com 19 volumes de água de qualidade reagente. Misture bem.
5 2. TAMPÃO DE BLOTTING DE TRABALHO (a) O TAMPÃO DE BLOTTING DE TRABALHO deve estar recém preparado. (b) Dilua 1 volume de TAMPÀO DE BLOTTING CONCENTRADO (10x) com 9 volumes de água de qualidade reagente. Misture bem. (c) Adicione 1 g de PÓ DE BLOTTING por cada 20 ml de TAMPÀO DE BLOTTING diluído preparado no passo anterior 2(b). Agite até que o pó se dissolva totalmente. (d) Agite de novo antes de aplicar a mistura. 3. SOLUÇÃO DE CONJUGADO DE TRABALHO NOTA: prepare a solução em um recipiente ou Beker de polipropileno. (a) A SOLUÇÃO DE CONJUGADO DE TRABALHO deve estar recém preparada. (b) Prepare a SOLUÇÃO DE CONJUGADO DE TRABALHO diluindo o CONJUGADO CONCENTRADO em TAMPÃO DE BLOTTING DE TRABALHO em proporção de 1:1000; p. ex., 5 μl de CONJUGADO em 5 ml de TAMPÃO DE BLOTTING DE TRABALHO. 4. SOLUÇÃO SUBSTRATO (pronta para usar) (a) Distribua o volume necessário diretamente do frasco. Use uma pipeta limpa. Feche bem o frasco depois de usá-lo. Realização do teste NOTA: a) Aspire todos os produtos químicos e reagentes utilizados para um recipiente de contenção com hipoclorito sódico. b) Todas as incubações devem ser realizadas em uma plataforma de agitação por oscilação. PRECAUÇÕES: Algumas amostras provocam manchas escuras no ponto da fita em que são aplicadas. Para evitar este problema, deve-se: I. Aplicar a amostra somente após a adição do TAMPÃO DE BLOTTING. II. Incline a bandeja ligeiramente, elevando a extremidade superior ou inferior da bandeja. O Tampão de Blotting fluirá para a extremidade mais baixa da bandeja. Adicione a amostra na zona onde o Tampão de Blotting está acumulado. Quando todas as amostras tiverem sido adicionadas, retorne a bandeja à posição horizontal original. Certifique-se que as fitas mantêm-se sempre úmidas durante o processo. III. Alternativamente, caso não deseje inclinar a bandeja, as amostras podem ser adicionadas na extremidade superior ou inferior do pocinho. Desta forma, a leitura da fita não será afetada caso tenham se desenvolvido manchas escuras. Procedimento: 1. Utilizando pinças, retire com cuidado do tubo o número de FITAS necessárias e coloque cada fita em um pocinho com o número para cima. Inclua fitas para os controles positivo e negativo. 2. Adicione 2 ml de SOLUÇÃO DE LAVAGEM DILUÍDA a cada pocinho. 2 ml 3. Incube as fitas durante 1-2 minutos a temperatura ambiente (25 3 C) em um agitador de plataforma oscilante (velocidade ciclos por minuto). Extraia o tampão por aspiração. 2 minutos 4. Adicione 2 ml de TAMPÃO DE BLOTTING DE TRABALHO a cada pocinho. 2 ml 5. Adicione 20 μl de cada soro de paciente ou de controles, nos pocinhos correspondentes. Deve tomar cuidado para evitar adicionar as amostras diretamente nas fitas. 6. Cubra a bandeja com a tapa fornecida e incube durante 1 hora a temperatura ambiente (25 3 C) na plataforma oscilante. 20 μl 60 minutos 7. Destape a bandeja com cuidado para evitar respingos e não misturar as amostras. Incline a bandeja para aspirar a mistura dos pocinhos. Trocar as ponteiras do aspirador entre amostras para evitar a contaminação cruzada.
6 8. Lave 3 vezes cada fita com 2 ml de SOLUÇÃO DE LAVAGEM DILUÍDA, deixando de molho durante 5 minutos no agitador entre os lavados. 3 x 2 ml 9. Adicione 2 ml de SOLUÇÃO DE CONJUGADO DE TRABALHO a cada pocinho. 2 ml 10. Cubra a bandeja com a tapa fornecida e incube durante 1 hora a temperatura ambiente (25 3 C) na plataforma oscilante. 60 minutos 11. Aspire o CONJUGADO dos pocinhos. Lave como no passo 8. 3 x 2 ml 12. Adicione 2 ml de SOLUÇÃO SUBSTRATO a cada pocinho. 2 ml 13. Cubra a bandeja e incube durante 15 minutos na plataforma oscilante. 15 minutos 14. Aspire o SUBSTRATO e enxágüe as fitas pelo menos de três vezes com água de qualidade reagente para parar a reação (o enxágüe insuficiente nesta etapa pode provocar a aparição de um fundo escuro). 3 x 2 ml 15. Usando pinça, retire cuidadosamente as fitas e coloque-as sobre toalhas de papel. Cubra com toalhas de papel e seque. Alternativamente, deixe as fitas secarem nos pocinhos da bandeja. 16. Monte as fitas sobre folha de papel branco não absorvente. Não aplique fita adesiva sobre as bandas reveladas. Observe as bandas (ver Interpretação de resultados) e interprete os resultados. Para armazenamento, conserve as fitas em local escuro. RESUMO DOS PROTOCOLOS DO TESTE Reagentes Cantidade Tempo Fitas de nitrocelulose 1 - Solução de lavagem 2 ml 2 min Tampão de blotting 2 ml - Amostra 20 μl 60 min Solução de lavagem 3 x 2 ml 3 x 5 min Conjugado 2 ml 60 min Solução de lavagem 3 x 2 ml 3 x 5 min Sustrato (listo para usar) 2 ml 15 min Água destilada 3 x 2 ml - QUANTIDADE DE REAGENTES NECESSÁRIA PARA DIFERENTES NÚMEROS DE FITAS Reagentes Número de firas a utilizar Solução de lavagem diluída (ml) Tampão de blotting de trabalho (ml) Conjugado de trabalho (ml) Substrato (ml) Pó de blotting (g) Controle de qualidade Os controles negativo e positivo devem ser testados em todos os ensaios, independentemente do número de amostras a analisar. Para que os resultados obtidos em qualquer ensaio sejam considerados válidos é preciso cumprir as seguintes condições: 1. BANDAS DE CONTROLE (IgG e anti-igg) As duas bandas de controle (ver figura 1 na última página) devem ser apreciadas em todas as tiras. A presença de uma banda anti-igg indica que se acrescentou soro na primeira incubação. A ausência de controle anti-igg e a presença da banda IgG significariam uma falha ao acrescentar o soro. A ausência das duas bandas nas tiras, incluindo os controles, indicaria um erro na técnica ou em um dos componentes do kit.
7 2. CONTROLE NEGATIVO Só devem aparecer a banda de controle anti-igg e a banda de controle IgG na tira do controle negativo. 3. CONTROLE POSITIVO Devem observar-se todas as bandas das proteínas recombinantes do HCV na tira utilizada com o controle positivo. Além disso, devem observar-se as bandas de controle anti-igg e IgG. A banda de controle GST não deve apreciar-se (fig. 1). Interpretação de resultados NOTA: as fitas reveladas devem estar completamente secas para evitar erros de interpretação. A presença ou ausência de anticorpos contra o HCV na amostra é determinada pela comparação de cada fita de nitrocelulose sob teste com as fitas de controle analisadas com os controles NEGATIVO e POSITIVO. Por favor, observe na figura 1 (última página deste inserto) o perfil dos antigénios e controles presentes nas tiras de nitrocelulose. Localize e identifique a intensidade das bandas de controle. O 3+ de intensidade corresponde à banda anti-igg. O valor 1+ corresponde à intensidade das bandas IgG. Estas duas bandas devem visualizar-se em todas as tiras. A intensidade de cada banda reativa deve comparar-se com estas duas bandas como referência. Esta comparação é realizada para atribuir um valor de reatividade a cada antigénio da tira. REATIVIDADE PONTUAÇÃO Não reativa - Reatividade < controle 1+ ± Reatividade = controle Reatividade > 1+ e < Reatividade = controle Reatividade > controle PERFIL Não aparecem bandas específicas de HCV com reatividade 1+ Só banda de controle GST Duas ou mais bandas do HCV com reatividade 1+ Só uma banda no Core com reatividade 2 + Só uma banda no Core com reatividade 2 + Só uma banda de HCV em NS3, NS4 ou NS5 com reatividade 1 + Várias bandas de HCV e também reatividade 1+ na banda controle de proteína GST INTERPRETAÇÃO NEGATIVO NEGATIVO POSITIVO POSITIVO INDETERMINADO INDETERMINADO INDETERMINADO Limitações do procedimento Para obter os resultados ótimos com este método, é preciso seguir, de forma estrita, os passos descritos no procedimento. Qualquer desvio pode dar lugar a resultados aberrantes. Um resultado NEGATIVO não exclui a possibilidade de uma exposição ou infecção ao HCV. Um resultado INDETERMINADO não deve ser utilizado como base para o diagnóstico de uma infecção de HCV. Um resultado com só uma banda de antigénio HCV com reatividade 1+ pode ser decorrente de uma reação não específica, ou pode ser um indicador de infecção anterior resolvida ou de seroconversão recente. Recomenda-se repetir o teste uma vez passados entre 2 e 6 meses, utilizando amostras frescas. Um resultado INDETERMINADO por meio da banda GST indica que a amostra possui anticorpos que reagem com a proteína de fusão presente nos antigénios recombinantes deste ensaio. A amostra deve ser testada com outro método de confirmação que utilize outra proteína de fusão. As amostras indeterminadas devem ser testadas com PCR para determinar se uma pessoa foi exposta ou infectada pelo HCV.
8 Características funcionais As características funcionais do bioblot HCV para a detecção de anticorpos anti-hcv são avaliadas por meio de amostras de banco de sangue, de pacientes conhecidos positivos de anticorpos anti-hcv, de pacientes com patologias relacionadas com o HCV e de pacientes com patologias não relacionadas com o HCV. Alem disso, testaram-se painéis de seroconversão disponíveis comercialmente. Sensibilidade: Foram estudadas 330 amostras reativas com o ELISA anti-hcv, das quais 329 foram diagnosticadas como positivas pelo bioblot HCV. A amostra discordante corresponde a um falso resultado positivo de ELISA. A sensibilidade calculada foi > que 99,9%. A sensibilidade também foi comprovada analisando-se 14 painéis de seroconversão e 4 painéis de título misto ou baixo, todos eles disponíveis comercialmente. A funcionalidade do bioblot HCV foi comparável com a do Chiron HCV RIBA 3.0. Além disso, o bioblot HCV foi capaz de detectar as amostras do painel de genótipos de HCV (genótipo 1 a 6) de BBI (PHW 201). Especificidade: Foram testadas 200 amostras de banco de sangue, das quais 193 foram negativas e 7 indeterminadas. Testou-se também o total de 280 amostras clínicas que incluíam espécies de fase aguda de infecções virais e bacterianas, de mulheres grávidas, amostras lipémicas, ictéricas e hemolisadas. Obteve-se alta especificidade com estas amostras. Cláusula de isenção de responsabilidade O fabricante não oferece nenhuma outra garantia expressa senão a de que o kit de teste funcionará como um ensaio de diagnóstico in vitro dentro das especificações e limitações descritas neste Manual de Instruções do Produto quando usado em conformidade com as instruções nele contidas. O fabricante isenta-se de qualquer garantia, expressa ou implícita, incluindo as garantias expressas ou implícitas em relação à capacidade de comercialização, de utilização ou utilidade implícita para quaisquer outros fins. A responsabilidade do fabricante limita-se à substituição do produto ou ao reembolso do preço de compra do produto. O fabricante não será considerado responsável pelo comprador nem por terceiros por quaisquer danos, prejuízos ou perdas de caráter econômico causados pelo uso ou aplicação do produto. Problemas técnicos Caso haja algum problema técnico ou queixa, solicitamos proceder da seguinte forma: 1. Anote o número de lote do kit e a data de validade e o número de lote da fita. 2. Conserve o kit e os resultados obtidos. 3. Contate o seu distribuidor local.
9 FIGURA 1. PERFIL DOS ANTIGÉNIOS E CONTROLES FIXADOS NO BIOBLOT HCV. Anti-IgG controle 3+ Core NS3-1 NS3-2 NS4 NS5 GST controle (não visível) IgG controle 1+
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