DOENÇA EPITELIOCÍSTICA EM TILÁPIA-DO-NILO CRIADAS EM TANQUES-REDE CYSTIC EPITHELIAL DISEASE IN NILE TILAPIA REARED IN CAGES

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1 DOENÇA EPITELIOCÍSTICA EM TILÁPIA-DO-NILO CRIADAS EM TANQUES-REDE CYSTIC EPITHELIAL DISEASE IN NILE TILAPIA REARED IN CAGES Gabriela Pala (1) Jaqueline Custódio da Costa (2) Suzana Kotzent (3) Thaís Heloísa Vaz Farias (4) Fabiana Pilarski (5) Resumo O estudo tem como objetivo relacionar o aparecimento de infecções por bactérias da Ordem Chlamydiales com os ectoparasitos da Classe Monogenoidea em tilápia-do-nilo, criadas em tanques-rede. Para isso, os parasitos dos peixes foram coletados e quantificados. Foram realizadas análises histopatológicas das brânquias com maior e menor grau de infestação. As maiores abundâncias e intensidades de infestação pelos monogenóideos nos peixes aconteceram concomitantemente com o aparecimento das lesões decorrentes da doença epiteliocística. As brânquias estavam hipertrofiadas e hiperplasiadas, com a presença de cistos basofílicos e material amorfo em seu interior. O método de Gram detectou a presença de bactérias gram-negativas. Estes resultados sugerem que os monogenóideos possam participar como vetores na transmissão desta bactéria às tilápias. Palavras-chave: Bactérias. Ectoparasitos. Prevenção. Abstract The study aims to relate the appearance of bacterial infections of the Order Chlamydiales with ectoparasites Class Monogenoidea in Nile tilapia, raised in cages. Thus, fish parasites were collected and quantified. Histopathological analysis of the gills with greater and lesser degree of infestation were carried out. The greatest abundance and intensity of infestation by Monogenoidea in fish occurred in conjunction with the appearance of the lesions arising from epiteliocística disease. The gills were hypertrophic and hyperplastic, with the presence of cysts and basophilic amorphous material inside. The Gram detected the presence of gram- 1 Doutoranda em Medicina Veterinária pela Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias da UNESP, Jaboticabal. gabi.caunesp@gmail.com 2 Mestranda em Aquicultura pelo Centro de Aquicultura da UNESP, Jaboticabal. jaque.custodio@gmail.com 3 Mestranda em Microbiologia Agropecuária pela Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias da UNESP, Jaboticabal. su_kotzent@hotmail,com 4 Doutora em Aquicultura pelo Centro de Aquicultura da UNESP, Jaboticabal. thais.vfarias@yahoo.com.br 5 Pesquisadora do Centro de Aquicultura da UNESP, Jaboticabal. faapilarski@hotmail.com

2 negative bacteria. The results suggest that Monogenoidea can participate as vectors in the transmission of this bacteria to fish. Keywords: Bacteria. Ectoparasites. Prevention. 1 Introdução A doença epiteliocística em peixes é causada por bactérias gram-negativas intracelulares da Ordem Chlamydiales (MITCHELL et al., 2010), sendo responsável por surtos de mortalidade na criação de peixes (GRAU et al., 2003). O sítio preferencial de infecção são as brânquias, provocando assim, um quadro crônico com hipertrofia e hiperplasia do epitélio lamelar formando cistos com material basofílico em seu interior, ocasionando distúrbios circulatórios, inflamação e necrose nos animais infectados (PÁDUA et al., 2015), sendo as lesões histopatológicas utilizadas como diagnóstico definitivo da doença (NOWAK e LAPATRA 2006). Em pisciculturas, as infecções bacterianas estão relacionadas com infestações parasitárias (MORI et al., 2015). Diante disso, o objetivo deste estudo é relacionar se ectoparasitos da Classe Monogenoidea predispõem o aparecimento/agravamento de infecções por bactérias clamidiais na criação de tilápia. 2 Material e Métodos Foram coletados 30 peixes por mês entre setembro de 2013 a agosto de 2014, em uma produção de tilápias (Oreochromis niloticus) em tanque-rede no estado de São Paulo. Após a captura dos animais, os peixes foram abatidos por secção da medula espinhal. As brânquias foram removidas (in loco) e colocadas em frascos plásticos contendo formalina (1:4000) (RAWSON e ROGERS, 1972). O material foi transportado ao Laboratório de Microbiologia e Parasitologia de Organismos Aquáticos do Centro de Aquicultura da UNESP e as brânquias raspadas suavemente com bisturi e o conteúdo analisado em placas de petri no estereomicroscópio binocular Coleman XTB/2B. Os parasitos encontrados foram coletados, quantificados e armazenados em microtubos com álcool 70%. A prevalência, intensidade média e abundância média de infestação foi calculada como proposto por Bush et al. (1997). As brânquias com maiores e menores níveis de parasitismo foram armazenadas em frascos contendo formalina 10% tamponada para a análise histopatológica. O método de Gram foi realizado sob a lâmina histológica para evidenciar a presença das bactérias no tecido branquial. Os dados foram analisados usando teste-z para verificar diferenças entre a

3 prevalência parasitária nos diferentes meses de coleta. A abundância e a intensidade média de parasitismo foram comparadas pelo teste não-paramétrico de Kruskal-Wallis, seguido pelo método de Dunn. 3 Resultados e Discussão Foi alta a prevalência parasitária por monogenóideos em todo período do estudo (93,33%-100%), não ocorrendo diferença estatística entre os meses avaliados (p>0,05). Diferentemente aconteceu com a abundância média e intensidade média de parasitismo (Figura 1). Nos meses de dezembro de 2013 e janeiro de 2014, assim como nos meses de abril e maio de 2014 foram observadas as maiores taxas de parasitismo, diferindo estatisticamente dos demais meses (p<0,05). Figura 1 Abundância média e Intensidade média do parasitismo por monogenóideos em tilápia-do-nilo analisadas no período setembro de 2013 a agosto de As brânquias dos peixes menos parasitados apresentaram hiperplasia do epitélio branquial e fusão das lamelas secundárias, decorrente das alterações causadas pela fixação do monogenóideo na lamela branquial. Em aproximadamente 90% das brânquias que apresentaram maiores infestação por monogenóideos, foram observados de 1 a 20 cistos bem delimitados, de coloração basofílica nas lamelas secundárias, além das alterações histopatológicas causadas pela infestação parasitárias (Figura 2). Diversos estudos relatam a ocorrência de infecções mistas entre bactérias da Ordem Chlamydiales e helmintos da Classe Monogenoidea como Microcotyle sp. e Lamellodiscus sp. (PADRÓS e CRESPO, 1995) e Zeuxapta seriolae (MONTERO et al., 2004) e com protozoários ciliados como Chilodonella hexastica, Trichodina centrostrigeata e

4 Paratrichodina africana (PÁDUA et al., 2015), sugerindo que os monogenóideos atuam como vetores das bactérias causadoras da doença epiteliocística (PILLOUX et al., 2015). Figura 2 (a) Brânquia de tilápia corada com HE sem alterações. Barra de escala: 50µm. (b) Dois monogenóideos fixados na parte basal do epitélio lamelar, com área com total fusão interlamelar (cabeça de seta). Barra de escala: 100µm (c) Monogenóideo parasitando o filamento branquial, hipertrofia do epitélio basal (seta pontilhada), intenso infiltrado de células inflamatórias eosinofílicas e mononucleares (asteriscos), debris celulares (ponta de seta vazia) ao redor do parasito. Barra de escala: 50µm. (d) Fusão parcial do epitélio lamelar (cabeça de seta) e um cisto (seta curta). Barra de escala: 50µm. (e) Diversos cistos nas lamelas secundárias, com proliferação do epitélio em diferentes graus. Barra de escala: 100µm. (f) Detalhe para um cisto basofílico com material amorfo no interior presente na lamela secundária. Barra de escala: 100µm. 4 Conclusões Altos níveis de parasitismo por monogenóideos estão associados ao aparecimento da doença epiteliocística branquial em tilápia-do-nilo criada em sistema de produção intensivo, tornando estes animais mais suscetíveis a surtos de mortalidade. 5 Agradecimentos/Apoio financeiro

5 logístico. I CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA AGROPECUÁRIA, A piscicultura pelo fornecimento dos peixes e a empresa Trouw Nutrition pelo apoio Referências BUSH, A.O.; LAFFERTY, K.D.; LOTZ, J. M. & SHOSTAK, A.W. Parasitology meets ecology on its own terms: Margolis et al. revisited. The Journal of parasitology, v. 83., n. 4., p , GRAU, A.; CRESPO, S.; PASTOR, E.; GONZALEZ, P.; & CARBONELL, E. High infection by Zeuxapta seriolae (Monogenea: Heteraxinidae) associated with mass mortalities of amberjack Seriola dumerili Risso reared in sea cages in the Balearic Islands (western Mediterranean). Bull Eur Assoc Fish Pathol, v. 23., n. 3., p , NOWAK, B. F.; LAPATRA, S. E. Epitheliocystis in fish. Journal of fish diseases, v. 29., n. 10., p , MITCHELL, S. O.; STEINUM, T.; RODGER, H.; HOLLAND, C.; FALK, K.; & COLQUHOUN, D. J. (2010). Epitheliocystis in Atlantic salmon, Salmo salar L., farmed in fresh water in Ireland is associated with Candidatus Clavochlamydia salmonicola infection. Journal of fish diseases, v.33., n.8., p , MONTERO, F. E.CRESPO, S.PADRÓS, F.DE LA GÁNDARA, F.GARCÍ, A.; & RAGA, J. A. Effects of the gill parasite Zeuxapta seriolae (Monogenea: Heteraxinidae) on the amberjack Seriola dumerili Risso (Teleostei: Carangidae). Aquaculture, v. 232., n. 1., p , MORI, R. H.; CHEDID, R. A.; BRACCINI, G. L.; RIBEIRO, R. P.; DE OLIVEIRA, C. A. L.; PRETTO-GIORDANO, L. G.; & VARGAS, L. Prevalence of ectoparasites and bacteriological diagnosis in Nile tilapia bred in net-tanks in the Corvo s river, Paraná, Brazil. Semina: Ciências Agrárias, v. 36., n. 2., p , PÁDUA, S. B.; MENEZESFILHO, R. N., MARTINS, M. L., BELO, M. A. A., ISHIKAWA, M. M., NASCIMENTO, C. A., & CARRIJOMAUAD, J. R. A survey of epitheliocystis disease in farmed Nile tilapia (Oreochromis niloticus Linnaeus, 1758) in Brazil. Journal of Applied Ichthyology, v. 31., n. 5., p , PILLOUX, L.; AEBY, S.; GAÜMANN, R.; BURRI, C.; BEURET, C.; & GREUB, G. (2015). The high prevalence and diversity of Chlamydiales DNA within Ixodes ricinus ticks suggest a role for ticks as reservoirs and vectors of Chlamydia-related bacteria. Applied and environmental microbiology, v.81., n. 23., p , RAWSON, M.V., & ROGERS, W.A. Seasonal abundance of ancyrocephalinaen (Monogenoidea) parasites of bluegill, Lepomis macrochirus (RAF). Journal of wildlife diseases, v.8., n.3., p , 1972.