ANÁLISE COMPARATIVA DE TRÊS MÉTODOS PARASITOLÓGICOS DE FEZES EM UMA ESCOLA DO MUNICÍPIO DE MACAPÁ-AP

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1 REVISTA DE BIOLOGIA E CIÊNCIAS DA TERRA ISSN Volume 13 - Número 1-1º Semestre 2013 RESUMO ANÁLISE COMPARATIVA DE TRÊS MÉTODOS PARASITOLÓGICOS DE FEZES EM UMA ESCOLA DO MUNICÍPIO DE MACAPÁ-AP Everton Pantoja Vale 1, Tafnis Ingret dos Santos Sampaio 2, Juvante Amora Távoras 3 Os exames parasitológicos de fezes podem ser classificados de três formas: qualitativos, quantitativos e especiais. Os diferentes métodos apresentam sensibilidade variada na detecção de ovos e larvas de helmintos e cistos de protozoários. Sabemos ainda, que o sucesso do diagnóstico das parasitoses depende da qualidade da coleta das fezes e do número de amostras analisadas. O objetivo consistiu em realizar uma análise comparativa de três métodos parasitológicos de fezes em uma escola do município de Macapá-AP e verificar a sensibilidade de detecção desses métodos parasitológicos de fezes: Mertiolate, Iodo e Formol (M.I.F), Direto e Hoffmann. Foi realizado um estudo a campo do tipo qualitativo e quantitativo, na qual foram estudadas 39 crianças na faixa etária de 6 a 12 anos de uma Escola do Município de Macapá-AP, selecionados aleatoriamente, foram realizados 134 exames laboratoriais de fezes com os três métodos, que demonstraram uma excelente sensibilidade de diagnóstico. De acordo com o resultado da pesquisa, constatou-se que o M.I.F é um método mais sensível do que o Direto e até mesmo o Hoffmann, apresentando um índice de 61,5 % das amostras positivas e 38,5 % negativas. Os métodos utilizados apresentaram bons resultados em relação a sensibilidade na quantificação de parasitose intestinais. Palavras-chave: Análise; Método; Parasitoses Intestinais. ABSTRACT COMPARATIVE ANALYSIS OF THREE METHODS parasitological stool A SCHOOL IN THE CITY OF MACAPÁ-AP The parasitological examination of stools may be classified in three ways: qualitative, quantitative and special. Different methods have variable sensitivity in the detection of eggs and larvae of helminth and protozoan cysts. We know also that the successful diagnosis of parasitic diseases depends on the quality of the stool collection and the number of samples analyzed. The goal was to conduct a comparative analysis of three methods for parasites in a school in the city of Macapa-AP and check the sensitivity of detection of these methods for parasites: merthiolate, iodine and formaldehyde (MIF), Direct and Hoffmann. We conducted a field study of the qualitative and quantitative, in which we studied 39 children aged 6-12 years from a school in the city of Macapa- AP, randomly selected, 134 were performed laboratory stool with the three methods, which showed an excellent diagnostic sensitivity. According to the result of the research, it was found that the MIF is a more sensitive method than direct and even Hoffmann, with an index of 61.5% of positive samples and 38.5% negative. The methods showed good results regarding the sensitivity in the quantification of intestinal parasitosis. Keywords: Analysis, Method, Intestinal Parasites. 28

2 1 INTRODUÇÃO Os exames parasitológicos de fezes podem ser classificados de três formas: qualitativos, quantitativos e especiais. Dentre os qualitativos temos os exames que utilizam concentração e os que não utilizam. Os diferentes métodos apresentam sensibilidade variada na detecção de ovos e larvas de helmintos e cistos de protozoários. Sabemos ainda, que o sucesso do diagnóstico das parasitoses depende da qualidade da coleta das fezes e do número de amostras analisadas. Vários autores como Brener e Col.(1957), Chaia e Col.(1968), Coura e Conceição (1974), Faust e Col.(1936), Ferreira (1966), Katz e Chaia (1968), Kato e Miura (1954), Maldonado e Col.(1953), Mello e Col.(1977), têm-se ocupado em estudar comparativamente a eficácia dos diferentes métodos até hoje descritos para o diagnóstico parasitológico de fezes (CHAVES et al, 1979). Em relação aos parasitos, formas do tipo trofozoítas são usualmente encontrados nas fezes líquidas, pastosas ou muco sanguinolentas, enquanto que os cistos são diagnosticados nas fezes formadas ou semiformadas. Ovos e larvas de helmintos podem estar presentes em todos os tipos de amostras fecais, entretanto, eles podem ser mais dificilmente encontrados em espécimes líquidos e, se presentes, em pequena quantidade. As formas móveis de protozoários se degeneram mais rapidamente do que as formas císticas; por esta razão, é de extrema importância que o estudo de espécimes fecais seja realizado o mais rápido possível. A consistência das fezes não interfere na distribuição dos ovos e das larvas de helmintos, apesar de nas amostras líquidas haver uma distribuição relativamente menor do número de ovos, devido ao fator de diluição. Dessa forma, o tipo de método utilizado, o tempo entre a coleta e a realização do exame, as condições da coleta do material biológico e a forma biológica do parasito são fatores que interferem na qualidade e sensibilidade do exame parasitológico de fezes. No entanto a análise parasitológica de fezes pode ser influenciada pela qualidade da coleta do material biológico, do tempo entre a coleta e a análise e o método laboratorial utilizado para a análise. Baseado nesses fatores interferentes é que se propõe realizar um estudo comparativo de três métodos parasitológicos de fezes, em uma escola municipal de Macapá-AP, tendo como público-alvo crianças na faixa etária de 6 a 12 anos. Considera-se um trabalho de relevância científica e social, pois consiste em avaliar metodologias diferentes para o diagnóstico das parasitoses humanas, bem como a detecção de helmintos e protozoários na população estudada, permitindo assim a orientação educacional quanto às formas de controle e prevenção e que os pais busquem o tratamento nas Unidades de Saúde. 2 OBJETIVOS: 2.1 GERAL: Realizar a análise comparativa de três métodos parasitológicos de fezes em uma escola do município de Macapá-AP. 2.2 ESPECÍFICOS: 1. Analisar a sensibilidade de quantificação entre três métodos parasitológicos laboratoriais de fezes. 2. Identificar a prevalência de parasitos intestinais. 3. Orientar os pais e crianças quanto à necessidade de hábitos de higiene pessoal e alimentares. 3 REFERENCIAL TEÓRICO As enteroparasitoses humanas são problemas de saúde pública e podem ser consideradas como indicadores das condições socioeconômicas em que vive uma dada população (CASTILHO, 1980; LUDWIG, 1999; UCHÔA, 2001; STENDEL et al. 2002; CAPUANO, 2003). As helmintoses e protozooses constituem parasitoses de elevada incidência com grande repercussão na saúde do indivíduo, tornando-se um sério problema de saúde pública. Embora sejam consideradas cosmopolitas, a prevalência é maior em regiões tropicais tendo uma estreita associação com a 28 29

3 pobreza humana, por falta do saneamento básico (CASTILHO, 1980; LUDWIG, 1999; UCHÔA, 2001; STENDEL et al. 2002). As parasitoses intestinais são mais frequentes na infância, principalmente em préescolares e escolares. São consideradas problema de saúde pública, principalmente em países chamados periféricos, onde são mais frequentes, com prevalências totais, quando considerado o bloco de países mais pobres do mundo, estimadas de 26%, 17% e 15% para ascaridíase, tricuríase e ancilostomíase, respectivamente (Sociedade Brasileira de Medicina de Família e Comunidade, 2009). A coprologia parasitária põe em evidência e identifica parasitas que vivem no tubo digestivo do homem ou outros hospedeiros, ou aqueles para os quais as fezes constituem o veículo normal das suas formas de disseminação no meio exterior. Entre os determinantes de falsos resultados negativos, alguns são atribuíveis aos próprios métodos ou técnicas que são utilizadas e outros devido à biologia dos parasitas, cuja detecção está relacionada ao tipo de forma presente na amostra analisada: cística, trofozoítica, ovos e larvas. De modo geral, as principais causas de erro são geralmente: 1. Amostras mal coletada e conservada: muitas formas parasitárias sobre a qual iria basear o diagnóstico são extremamente lábeis fora do organismo hospedeiro. Isto faz com que a conservação inadequada da amostra afete, deforme ou destrua as formas biológicas presentes. 2. Escassez de parasitas na amostra. A sensibilidade das fezes métodos é relativamente baixo tal que, quando o número de elementos de parasitas nestes resíduos é muito baixo, a sua presença não pode ser detectada durante o estudo coprológico. 3. Biologia do parasita. Existem espécies de parasitas intestinais humanos que geralmente não eliminam seus elementos de dispersão misturados com fezes do hospedeiro, em tais circunstâncias, a análise de uma amostra de fezes quase sempre levaria a um resultado falso negativo. Tais problemas ocorrem geralmente no parasitismo humano por Enterobius vermicularis e Taenia sp. 4. Período de invasão parasitária. Naquelas espécies parasíticas que antes de alcançar sua forma adulta final no intestino humano, para se amadurecer sexualmente, ocorre um período de migração por diversos órgãos e tecidos do hospedeiro, como o A. lumbricoides, a análise coprológica durante o estágio migratório da larva, não revelarão o parasitismo existente. 3.1 QUANTO AOS MÉTODOS: Para a realização da análise das amostras fecais, foram escolhidos três métodos: Exame direto: é utilizado para demonstrar a presença de ovos e larvas de helmintos e cistos de protozoários. Vantagens da técnica: Rápida de preparar; Se utilizada com solução salina, não causa distorções nos parasitas; Útil para examinar fezes de pequenas aves e répteis (onde trematóides são comuns). Desvantagens da técnica: Como somente se utiliza uma amostra muito pequena das fezes, os parasitas podem não ser detectados se a sua concentração for muito baixa ou se houver excesso de debris ou gordura; Areia, sementes e outros debris fecais podem dificultar a deposição adequada da lamínula; Pode requerer muito tempo para um exame adequado Método de Hoffmann: é um teste qualitativo para a detecção de ovos e larvas de helmintos. Vantagens da técnica: Recuperar ovos e larvas das fezes, sobretudo ovos pesados de trematóides e de espirurídeos, os quais se sedimentam mesmo quando se emprega a técnica de flutuação em sal. Desvantagem da técnica: O tempo de visualização é de no mínimo 2 horas, sendo o mais indicado 24 horas Método de M.I.F. (Mertiolate + Iodo + Formol): Usado para isolamento de ovos, 28 30

4 cistos e trofozoítos. As amostras são colhidas e acondicionadas com M.I.F. (mercúrio, iodo e formol) em 3 a 5 dias, consecutivos ou alternados, ou conforme orientação médica. Vantagem da técnica: Rápida análise da amostra, pois, o método de coloração a base de iodo ajuda na identificação de helmintos. Desvantagem da técnica: Pouco tempo de conservação, colocando assim a amostra em déficit de tempo para maior análise. 4 MÉTODOS Trata-se de um estudo a campo do tipo qualitativo e quantitativo, na qual foi estudadas 39 crianças na faixa etária de 6 a 12 anos de uma Escola do Município de Macapá-AP, selecionados aleatoriamente, os pais e as crianças passaram por uma palestra sobre orientação quanto a necessidade de hábitos de higiene pessoal e alimentar, as amostra foram analisadas no Laboratório de Parasitologia da Faculdade Estácio Seama. Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisas da Faculdade Seama e todos os responsáveis pelas crianças assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE). Todos os voluntários foram submetidos a duas coletas de amostra de fezes cada, para uma analise comparativa de três métodos laboratoriais (Direto, Hoffmann e M.I.F.), visando identificar entre os métodos qual possuir a maior sensibilidade de quantificar as parasitoses intestinais independentemente da forma em que ela se encontre. No método Direto foi adicionada uma pequena amostra com a Pipeta Pasteur em uma lâmina com solução salina e outa com lugol, foi coberta com uma lamínula e analisada ao microscópio com objetiva de 10x e 40x. Para o método de Hoffmann foi colocado 5 ml de água em 2 g de fezes no frasco e triturado bem com o bastão de vidro, depois acrescentado mais 20 ml de água e filtrado a suspensão para o cálice cônico de 200 ml de capacidade, por intermédio de gases cirúrgica dobrada em 4, os detritos retirados foram lavados com mais 20 ml de água e deixado em repouso por 24 horas, o sobrenadante foi desprezado e com a Pipeta Pasteur adquiriu-se uma a duas gotas do sedimento em uma lâmina, adicionou-se uma gota de lugol, colocou-se lamínula e foi analisada ao microscópio com objetiva de 10x e 40x. E no método de M.I.F foi dissolvido o material biológico na solução conservante (M.I.F) utilizando-se um bastão de vidro, foi filtrado com gases (4x) em um tubo cônico, acrescentando-se 3 ml de éter e centrifugado durante 3 minutos a 1500 rotação por minuto, o sobrenadante foi desprezado e acrescentado 1 gota de lugol usando a pipeta pasteur em uma lâmina com a amostra, analisada ao microscópio com objetiva de 10x e 40x. 5 RESULTADOS E DISCUSSÃO Foram realizados 134 exames laboratoriais de fezes com os três métodos, que demonstraram uma excelente sensibilidade de diagnóstico, no qual os métodos de M.I.F., Direto e Hoffmann, apresentaram maior capacidade de detecção de helmintos e Protozoários respectivamente, como mostra o gráfico 1. Das 39 crianças que participaram da pesquisa 94% delas apresentaram-se sendo portador de algum tipo de parasitose intestinal e apenas 6% delas tiveram nas amostras ausência desses parasitas. As prevalências dessas parasitoses em crianças é bastante comum se comparados a adultos, podendo ser influenciado pelo fator socioeconômico de cada família. GRÁFICO 1- Análise Comparativa dos Métodos Laboratoriais 28 31

5 A incidência maior de parasitoses intestinais encontradas foi Entamoeba nana, Leveduras, Ascaris lumbricoides e outras. O gráfico 2 mostra todos as enteroparasitoses encontrados nas amostras de forma quantitativa. Pode- se observar que o método de M.I.F. apresentou a maior sensibilidade, apesar do exame Direto ter sido realizado com solução salina e outro com lugol. GRÁFICO 2- Parasitas Encontrados nas Amostras de Forma Quantitativa diagnóstico laboratoriais de fezes, M.I.F, Direto e Hoffmann respectivamente. Dessa forma podemos afirmar que a prevalência de parasitoses intestinas em crianças são bastante frequentes se comparados a adultos. De acordo com o resultado da pesquisa, constatou-se que o M.I.F é um método mais sensível do que o Direto e até mesmo o Hoffmann, apresentando um índice de 61,5 % das amostras positivas e 38,5 % negativas. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BRENER. Z. et al. Valor do método de Hoffman, Ports e Janer no diagnóstico da esquistossomose mansoni. Rev. bras. Malar., 9: , CHAIA, G. et al. Coprological diagnosis of Schistosomiasis. II Comparative study of quantitative methods. Rev. Inst. Med. Trop. S. Paulo, 10: CHAVES, Adelu; ALCÂNTARA, Olinda;CARVALHO, Omar; SANTOS, José KATZ. N. & CHAIA, G. Coprological diagnosis of Schistosomiasis. I. Evaluation of quantitative technique. Rev. Inst. Med. Trop. S. Paulo, 10:295-8, Rev. Bras. de Saúde Pública.São Paulo, A pesquisa também demostrou que uma criança pode apresentar mais de um tipo de parasitose intestinal podendo ser encontrados na forma de ovos, cistos e trofozoitos. No estudo realizado 11 crianças estava sendo portador de apenas um tipo de parasita, 9 apresentaram dois tipos diferentes, 7 apresentaram três tipos diferentes e 6 apresentaram quatro tipos diferentes de parasitas intestinais. 6 CONSIDERAÇOES FINAIS Através deste estudo, verificou-se a sensibilidade de cada método e pode-se observar que 61,5 %, 53,8 % e 48,8 % das amostras deram positivas para os métodos de COURA, J. R.,& CONCEIÇÃO, M. J. Estudo comparativo dos métodos de Lutz, Kato-Katz e Simões Barbosa no diagnóstico coprológico da esquistossomose mansoni. Rev. Soc. Bras. Med. Trop., 8:153-7, FAUST, E. C. et al. Comparative efficiency of various technics for the diagnosis of rotozoa and helminths in feces. J. Parasit., 25:241-62, FERREIRA, I. F. O exame parasitológico das fezes. Estudo comparativo das principais técnicas. Hospital, Rio de Janeiro, 70:347-68, KATO, K. & MIURA, M. Comparative examinations. Jap. J. Parasit., 3:

6 KATZ. N. & CHAIA, G. Coprological diagnosis of Schistosomiasis. I. Evaluation of quantitative technique. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 10:295-8, MALDONADO, J. F. et al. Comparative value of fecal examination procedure in the diagnosis of helminth infections. Exp. Parasit. 2: MELLO, D. A. Comparação dos métodos coprológicos quantitativos de Barbosa (1969) e Kato-Katz et al. (1972). Rev. Goiana Med., 23:53-9, NEVES, David; MELO Alan; GENARO Odair; LINARDI Pedro; Parasitologia Médica. Ed. Atheneu. 10 edição. Câmara Brasileira do Livro, SP, Brasil SOCIEDADE BRASILEIRA DE MEDICINA DE FAMÍLIA E COMUNIDADE. Abordagem das Parasitoses Intestinais mais Prevalentes na Infância. Associação Médica Brasileira e Conselho Federal de Medicina, Everton Pantoja Vale, Acadêmico do curso de Biomedicina da Faculdade Estácio Seama e estagiario do Instituto de Pesquisas Científicas e Tecnológicas do Estado do Amapá IEPA. notreve.vale@hotmail.com 2 - Tafnis Ingret dos Santos Sampaio, Acadêmica do curso de Biomedicina com Habilitação em Análise Clínicas da Faculdade Estácio Seama. 3 - Juvante Amora Távoras. Possui graduação em Biomedicina pela Universidade Federal do Pará (1988). Especialista em Saúde Publica Especialista em Controle de Qualidade de Produtos e Ambientes de Saúde pelo INCQS/FIOCRUZ Especialista em Biologia Molecular Mestre em Planejamento e Políticas Publicas Ex Diretora Presidente do Hemocentro do Amapá Ex Diretora Presidente do Laboratório Central do Amapá Membro do Conselho Estadual de Saúde Membro do Comitê Gestor da Qualidade do Hemocentro do Amapá Membro do Comitê Gestor da Qualidade do LACEN-AP Docente da Faculdade Estácio Membro do Comitê de ética em Pesquisa da Estácio Seama