ORIANA MAYORGA NADER
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- Airton Victorio Guimarães Fialho
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1 ORIANA MAYORGA NADER Análise de diferentes adjuvantes associados ao peptídeo P10 usados no tratamento de camundongos BALB/c infectados com Paracoccidioides brasiliensis Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Microbiologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, para obtenção do Titulo de Mestre em Ciências. São Paulo 2012
2 ORIANA MAYORGA NADER Análise de diferentes adjuvantes associados ao peptídeo P10 usados no tratamento de camundongos BALB/c infectados com Paracoccidioides brasiliensis Dissertação apresentada ao Programa de Pós- Graduação em Microbiologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, para obtenção do Título de Mestre em Ciências. Área de concentração: Microbiologia Orientador: Prof. Dr. Carlos Pelleschi Taborda Versão original São Paulo 2012
3 DADOS DE CATALOGAÇÃO NA PUBLICAÇÃO (CIP) Serviço de Biblioteca e Informação Biomédica do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo reprodução total Mayorga-Nader, Oriana. Análise de diferentes adjuvantes associados ao peptídeo P10 usados no tratamento de camundongos BALB/c infectados com Paracoccidioides brasiliensis / Oriana Mayorga-Nader. -- São Paulo, Orientador: Prof. Dr. Carlos Pelleschi Taborda. Dissertação (Mestrado) Universidade de São Paulo. Instituto de Ciências Biomédicas. Departamento de Microbiologia. Área de concentração: Microbiologia. Linha de pesquisa: Estudo da Imunidade humoral e celular nas infecções causadas por fungos sistêmicos. Versão do título para o inglês: Analysis of different adjuvants associated to P10 peptide for treatment of BALB/c infected mice with Paracoccidioides brasiliensis. 1. Paracoccidiodomicose 2. Paracoccidioides brasiliensis 3. Adjuvantes 4. Dioctadecyl-dimethylammonium-bromide 5. FliC flagelina 6. P10 I. Taborda, Prof. Dr. Carlos Pelleschi II. Universidade de São Paulo. Instituto de Ciências Biomédicas. Programa de Pós- Graduação em Microbiologia III. Título. ICB/SBIB0201/2012
4 UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOMÉDICAS Candidato(a): Oriana Mayorga-Nader. Título da Dissertação: Análise de diferentes adjuvantes associados ao peptídeo P10 usados no tratamento de camundongos BALB/c infectados com Paracoccidioides brasiliensis. Orientador(a): Prof. Dr. Carlos Pelleschi Taborda. A Comissão Julgadora dos trabalhos de Defesa da Dissertação de Mestrado, em sessão pública realizada a.../.../..., considerou ( ) Aprovado(a) ( ) Reprovado(a) Examinador(a): Assinatura:... Nome:... Instituição:... Examinador(a): Assinatura:... Nome:... Instituição:... Presidente: Assinatura:... Nome:... Instituição:...
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6 Aos meus pais, pelo amor e apoio incondicional, Aos meus irmãos, pela força e o carinho imenso, Aos meus amigos pela música e os bons desejos... Obrigada!!!!
7 AGRADECIMENTOS Ao professor Carlos Peleschi Taborda por ter me dado a oportunidade de de fazer o mestrado no seu laboratório, por ter me proporcionado um grande crescimento profissional, por suas orientaçoes e conchecimentos, muito obrigada mesmo!. no Brasil. Ao professor Gabriel Padilla, por ter me dado seu apoio desde o começo aqui Ao Professor Dr. Luiz R. Travassos, agradeço por todas as sugestões e participações neste trabalho. Aos Professores Gabriel Padilla, Nilton Lincopan, Luis Carlos de Souza Ferreira, Marilis do Valle Marques, Sandro Rogério de Almeida, Welington Luiz de Araújo e por terem me recebido com gentileza em seus laboratórios e pelo apoio em vários aspectos deste trabalho. Ao meu amigo e colega Julian Esteban Muñoz por ter me orientado, por compartilhar tudos seus conhecimentos e experiencias, pela confiança e apoio, pelas sugestões e pela disposição para me ensinar, muito obrigada!!! A todos os colegas e amigos do laboratório, Martha Urán, Márcia Pinto da Silva, Leandro Buffoni, Lucas Dias e Glauce M. G. Rittner, Adriana Menezes, Fernanda Dias, Renata Amelia, Diego Rossi, Thor A. Sessa, Luciana Thomaz, Felipe Augusto, Adriana Magalhães, Juliana de Amorim, Paula Barbarian, Vinicius D. Luft, e Shirlei A. Vieira Marques. As minhas grandes amigas Adriana e Diana, por estar sempre me acompanhando e apoiando, pela força e por acreditar em mim, pelo milhão de historias que a gente tem para lembrar... Aos amigos e colegas da pós-graduação, Julian e Juan Diego, Aline, Carolina, Victor, Dani, Anderson e Inarei pela boa disposição e o convívio durante esses anos.
8 Ao técnico do biotério Carlos Augusto da Silva pelo cuidado dos animais durante o período de estagio e mestrado. Aos funcionários da Sala de Esterilização José e Elza pela colaboração. Aos secretários da Pós-Graduação e do Departamento de Microbiología, Elizabete Ribeiro, Bruno e Celso Pereira, Alice Shimabuku, Ana Maria Amaral e Naíde Farripas pela amabilidade e boa disposição no atendimento. Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico CNPq pelo apoio financeiro.
9 O melhor cientista é aberto à experiência e começa com o romance... a idéia de que tudo é possível. Ray Bradbury.
10 RESUMO MAYORGA, O. Análise de diferentes adjuvantes associados ao peptídeo P10 usados no tratamento de camundongos BALB/c infectados com Paracoccidioides brasiliensis f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia) Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, Paracoccidioidomicose (PCM), uma micose crônica, prevalente na America Latina, é uma doença sistêmica granulomatosa causada pelo fungo termo-dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. Conídios produzidos na fase de filamentosa podem iniciar a infecção. Historicamente, a proteção contra paracoccidioidomicose tem sido atribuída á vigorosa resposta imunológica, enquanto que anticorpos específicos tem sido associados com a severidade da doença. A gp43 é o principal antígeno diagnóstico que contém o peptídeo de 15 aminoácidos (QTLIAIHTLAIRYAN) designado como P10, que desenvolve a resposta imune do tipo Th1 dependente de IFN-, sendo o principal candidato para a efetiva imunoterapia de pacientes com PCM, considerado como adjuvante da quimioterapia convencional. No presente trabalho, comparamos a efetividade de diferentes adjuvantes em camundongos BALB/c infectados intratraquealmente com o isolado virulento Pb18 (3x10 5 ). Alúmen, Adjuvante Completo e Incompleto de Freund (CFA/IFA), FliC flagelina proveniente de Salmonella enterica e o lipídeo catiônico (dioctadecyl-dimethylammonium bromide), foram testados em associação ou não com P10. Após 52 dias de infecção, foi observada uma redução significativa do número de unidades formadoras de colônia (UFCs) nos pulmões de camundongos imunizados com P10, associado com os diferentes adjuvantes. O lipídeo catiônico mostrou os melhores resultados, com o menor número de UFCs, redução de fibrose determinada pela coloração de Masson s trichrome e baixo número de células fúngicas no tecido pulmonar, determinado pela coloração de Hematoxilina/Eosina (HE), além do incremento significativo de IFN- e TNF-α e a redução dos niveis de IL-4 e IL-10. A geração de células de memória foi significativa para os grupos imunizados com o peptídeo nas diferentes formulações com os adjuvantes, enquanto que na geração de células Th17, o lipídeo catiônico e a flagelina incrementaram o efeito indutor do P10 na proliferação de linfócitos T CD4 + RORγt +. Estes resultados sugerem que a interação do peptídeo P10 com o lipídeo catiônico pode gerar uma melhor resposta imune mediada por células do tipo Th1, evitando a rápida disseminação da paracoccidioidomicose experimental. Palavras-chave: Paracoccidioides brasiliensis. Paracoccidioidomicosis. P10. Adjuvantes. Dioctadecyl-dimethylammonium-bromide. FliC flagelina. Alumen. Adjuvante completo de Freund.
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