FACULDADE ASSIS GURGACZ FAG LETHYCIA LEONORA MARTINS

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1 FACULDADE ASSIS GURGACZ FAG LETHYCIA LEONORA MARTINS ANÁLISE MICROBIOLÓGICA DE ÁGUA PARA CONSUMO HUMANO NA CIDADE DE CASCAVEL - PARANÁ CASCAVEL 2008 I

2 FACULDADE ASSIS GURGACZ FAG LETHYCIA LEONORA MARTINS ANÁLISE MICROBIOLÓGICA DE ÁGUA PARA CONSUMO HUMANO NA CIDADE DE CASCAVEL - PARANÁ Trabalho de conclusão de Curso da Faculdade Assis Gurgacz, apresentado como requisito para obtenção do título de Bacharel em Ciências Biológicas. Profº. Orientador: Alexandre Carvalho de Moura CASCAVEL 2008 II

3 SUMÁRIO Resumo...IV Introdução...V Materiais e métodos...vi Resultados e discussão...vii Conclusão...XI Agradecimentos...XII Referências...XII III

4 AVALIAÇÃO MICROBIOLÓGICA DE ÁGUA PARA CONSUMO HUMANO NA CIDADE DE CASCAVEL-PR Alexandre Carvalho de Moura 1, Lethycia Leonora Martins 2. Resumo: Esse trabalho foi conduzido no município de Cascavel, no Estado do Paraná, com o objetivo de avaliar a qualidade de água para consumo humano. As amostras foram coletadas nos meses de novembro, dezembro de 2007, janeiro à março de Foram analisadas 57 amostras no total, sendo 48 águas minerais, compradas em 4 diferentes mercados, e 9 amostras coletas de 3 diferentes fontes para consumo humano. As variáveis analisadas foram: coliformes termotolerantes, totais e mesófilos. Com os resultados obtidos pode-se verificar que, apesar de todos os cuidados com a água para consumo humano, essa se encontra muitas vezes fora do padrão microbiológico de potabilidade estabelecido pela RDC 54/00, observa-se que no total das amostras analisadas 6,2% apresentaram contaminação de coliformes e 21% apresentaram contaminação de mesofilos. Os níveis de contaminação foram determinados pela prática de Numeros Mais Prováveis (NMP). Devem se adotar práticas higiênicas rigorosas em todo processamento, com o objetivo de obter-se produtos seguros, já que tratamentos não podem ser utilizados visando a redução ou eliminação da contaminação. Palavras-chaves: água, análises microbiológicas, coliformes. Summary: This work was conducted in the city of Cascavel, in the state of Parana, to evaluate the quality of drinking water. The samples were collected during November, December 2007, January to March We analyzed 57 samples in total, with 48 mineral waters, bought in 4 different markets, and 9 samples collected from 3 different sources for human consumption. The variables were analyzed: thermotolerant coliforms, total and mesophiles. With the results we can see that, despite all the care with water for human consumption, this is frequently outside the standard of drinking microbiological established by DRC 54/00, it is observed that a total of 6 samples, 2% showed contamination, and 21% showed coliform contamination of mesofilos. The levels of contamination were determined by the practice of Figures More Likely (MPN). They are due to adopt strict hygienic practices throughout processing, aiming to get to safe products, because treatments may not be used to reduce or eliminate the contamination. Keywords: water, microbiological analyses, coliform. 1. INTRODUÇÃO IV

5 Com o constante crescimento observado na população mundial, apesar de todos os esforços para armazenar e diminuir o seu consumo, a água potável está cada vez mais escassa. Essa escassez ocorre devido a diversos fatores, como o aumento observado no desperdício e contaminação de origem antrópica. De acordo com Organização das Nações Unidas (ONU) a falta de água atingirá níveis alarmantes, causando prejuízo no abastecimento no ano de 2025 para 60% de toda a população mundial (CRISTINA R, CRISTINA J, 2003). Além do problema de disponibilidade de água, observamos crescente aumento na contaminação da mesma devido aos despejos domésticos, industriais e ao chorume oriundo de aterros de lixo que contaminam os lençóis freáticos com microrganismos patogênicos, incluindo os provenientes de origem fecal (FREITAS, et al, 1997). O consumo de água contaminada por material de origem fecal pode ser responsável por numerosos casos de enterites, diarréias infantis, doenças epidêmicas, pneumonias, meningites e infecções instestinais, podendo levar o indivíduo à morte quando o tratamento não é eficaz (D AGUILA OS, et al, 2000). O monitoramento das águas, visando garantir sua boa qualidade para consumo humano é de fundamental importância na profilaxia de doenças ocasionados por patógenos de origem fecal, diminuindo o índice de morbidade e mortalidade na população. Com isso, evitam-se também sérios problemas econômicos e ambientais, possibilitando o uso sustentável da água para as gerações atuais e futuras, considerando que a água é um bem finito (FREITAS, et al. 1997). Na análise ou monitoramento de qualidade de água são empregados indicadores biológicos específicos como as bactérias do grupo coliformes. Todas as bactérias V

6 coliformes são bacilos Gram-negativos, fermentadores de lactose e anaeróbios facultativos. Essas bactérias utilizadas como bioindicadores são de suma importância, pois sua presença indica a possibilidade de ocorrerem outros microorganismos patogênicos, principalmente pelo fato dela habitar o intestino de homens ou animais endotérmicos, sendo que nesse grupo encontra-se o genêro Escherichia que é o microrganismo mais estudado em todo mundo (ZIESE T, et al 1996; KONEMAN, et al, 2001). O presente artigo tem como objetivo avaliar microbiológicamente águas utilizadas para o consumo humano, com enfoque para coliformes termotolerantes, totais e mesófilos aeróbios, sendo essas, comercializadas e de fontes situadas em parques e praças da cidade de Cascavel PR. 2. MATERIAS E MÉTODOS Para o presente estudo foram analisadas 48 amostras de águas minerais comercializadas em embalagens de diferentes volumes, adquiridas em distribuidoras e supermercados na cidade de Cascavel PR, e 9 amostras coletadas de diferentes fontes utilizada pela população para consumo. As amostras comercializadas foram mantidas em embalagens originais, lacradas e sem qualquer possibilidade de contaminação externa, enquanto as amostras de fontes foram coletadas em recipientes assépticos de 100ml. Ambos foram enviados ao laboratório de microbiologia da Faculdade Assis Gurgacz, para serem analisadas quanto a presença de coliformes e contagem de mesófilos. VI

7 Para contagem presuntiva de coliformes totais as amostras foram diluídas, em tubos com Caldo Lauril Sulfato Triptose (L.S.T), com tubos de Durhan invertidos, sendo incubadas a 37ºC entre horas. Os tubos com resultado positivo, foram repicados, em Caldo Bile Verde Brilhante 2% (V.B), incubado a 37ºC por 24horas, para teste confirmatório de coliformes totais. Para detecção de coliformes termotolerantes as amostras foram repicadas para tubos com o Caldo Escherichia coli (E.C), incubados no shaker a 45ºC com leitura em 24 horas. Os resultados positivos foram aqueles que apresentaram turvação e gás no tubo de Durhan (APHA 1999). Foi também utilizada a técnica de Pour Plate Method para contagem de mesófilos aeróbios, utilizando o ágar para contagem de microorganismos em placa (P.C.A.). As amostras com cultura pura foram diluídas a uma concentração de até 10-3 em água peptonada, sendo então adicionados 0,1ml de cada diluição no meio P.C.A e incubados a 37ºC por 24horas. Em seguida as placas com quantidade mensuravél de colônias foram avaliadas e a concentração bacteriana determinada em UFC/ml (APHA 1999). Os resultados foram comparados aos valores de referência da resolução 518, de 25 de março de 2004, segundo a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), e as amostras de água classificadas em próprias ou impróprias para o consumo. 3. RESULTADOS E DISCUSSÃO Das 57 amostras avaliadas, 48 eram amostras de águas minerais, dessas 2 (4,1%) apresentaram contaminação por coliformes totais e 1 (2,1%) por coliformes termotolerantes, com contagem de coliformes totais (9 e 4 NMP), e coliformes VII

8 termorolerantes (9 NMP), estando portanto, em desacordo com os padrões microbiológicos estabelecidos pela RDC 54/00. Das 4 marcas de água mineral comercializadas na cidade de Cascavel-PR, apenas 1 apresentou os níveis de contaminação acima citados, pertencendo a diferentes lotes e pontos comerciais. O fato de serem observadas duas amostras de água mineral com crescimento bacteriano, pode se afirmar que a contaminação pode ter sido durante a fase da captação e processamento do produto, uma vez que as condições da embalagem e do ambiente de armazenamento da água estão de acordo com os preconizados, pelas normas de higiene da vigilância sanitária. A legislação vigente para águas minerais, após sofrer atualização pela Resolução RDC 54/2000 melhorou o espectro microbiológico a ser avaliado, mas ainda é insuficiente para regularizar o controle de qualidade e aquém do que exige a legislação internacional (americana e européia) para o comércio. Por isso, o risco de contaminação da população pelo produto permanece (ANVISA, 2000). Apesar da presença de coliformes na água indicar baixas condições de higiene, impossibilitando seu consumo, a presença de bactérias do grupo coliformes observados no trabalho, se encontra de acordo com a literatura. WENDPAP et al, (1999), ao avaliarem 180 amostras de água mineral em embalagens de 0,5L, 1,5L e 20L, detectaram contaminação por coliformes totais em 21 delas, sendo que não foi detectada a presença de E. coli em nenhuma das amostras, porém em 17, detectou-se coliformes termotolerantes. A detecção de coliformes totais na ausência de E. coli pode indicar que a fonte está sendo contaminada com águas superficiais. VIII

9 VARNAM, A.H, et.al, em (1994), realizaram uma pesquisa sobre a qualidade microbiológica de 32 amostras de água mineral, detectando coliformes termotolerantes e E.coli em somente uma delas. A presença de E.coli, indica com maior segurança a possível presença de enteropatógenos. NASCIMENTO et al, (2000), avaliaram a qualidade microbiológica de 70 amostras de águas minerais consumidas em São Luís-MA, observaram que trinta e cinco (50%), apresentavam-se impróprias para o consumo humano devido ao NMP de P. aeruginosa e contagem de bactérias heterotróficas acima dos padrões. As 9 amostras, coletadas de fontes utilizadas pela população, se apresentaram isentas de contaminação. Pode-se afirmar que a água coletada nas fontes citadas na cidade de Cascavel - PR, apresentaram boa qualidade microbiológica para potabilidade, estando de acordo com a portaria nº 518, de 25 de março de 2004, na Agência Nacional da Vigilância Sanitária (ANVISA), que estabele como padrão de potabilidade, para água destinada ao consumo humano, ausência de bactérias do grupo coliformes termotolerantes (BRASIL, 2004). As fontes encontram-se em bom estado de conservação. Possuem proteção de concreto, essas formando barreiras, a água é canalizada estando portando em difícil acesso contaminações de animais, pessoas e etc. A água das fontes é de extrema importância para a vida e ao desenvolvimento das comunidades humanas, considerada uma reserva mineral barata e de direito a todos, independente de sua condição social ou econômica, devendo atender a todas as necessidades humanas. IX

10 Para a contagem de mesófilos aeróbios pela técnica de Pour Plate, observamos que das 57 amostras avaliadas 12 (21%), tanto de água mineral quanto de fontes, apresentaram valores demonstrados na tabela 1. TABELA 1. Resultados obtidos na análise de mesófilos. DATA COLETA LOTE MARCA VALORES 29/01/2008 P A 2,6 x 10 29/01/ B 1,0 x /01/ C 1,3 x 10 11/02/2008 F3 1,2 x /02/2008 P A 2,9 x /02/ B 1,1 x /02/ C 1,2 x 10 20/02/ A 2,1 x 10 26/02/ C 2,0 x 10 26/02/2008 F3 3,0 x 10 03/04/2008 F3 9,5 x 10 3 De acordo com as análises, a amostra 3 coletada na fonte F3 apresentou maior presença de mesófilos, apesar da ausência de coliformes totais e coliformes termotolerantes. O crescimento de mesófilos em mesmo lote, pode ser uma contaminação pontual, provavelmente nos estágios iniciais da produção, pois como mencionado anteriormente, X

11 as condições de armazenamento dos mercados eram visivelmente adequadas de acordo quanto as condições higiênico sanitárias. Entre as amostras comercializadas e de fontes, observou-se que as fontes encontraram-se em um nível maior de contaminção do que as amostras de águas comercializadas. Relacionando a presença de bactérias mesófilas ambientais. FRANCO, LENDGRAF, (1998), relatam que no ponto de vista sanitário, todas as bactérias patogênicas de origem alimentar ou hidrícas são mesófilas. Portanto, uma alta contagem de mesófilos, que crescem à mesma temperatura do corpo humano, significa que houve condições para esses patógenos se multiplicarem. De acordo com a legislação vigente, a contagem de bactérias mesófilas não deve exceder 500 unidades formadoras de colônia por ml (BRASIL, 2004), portanto pode-se afirmar que as amostras analisadas nesse trabalho não estão em desacordo com a literatura. No entanto sabe-se que para a água ser utilizada para consumo, a mesma deve ser pura sem qualquer nível de contaminação. 4. CONCLUSÃO Das amostras analisadas que 6,2%, econtravam-se em desacordo com os padrões microbiológicos legais para coliformes, sugerindo condições higiênico-sanitárias deficientes. Das amostras de águas mineral e fontes, 21% obtiveram contaminação por mesófilos, encontrando-se em desacordo com os padrões de potabilidade estabelecidos pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). XI

12 Acredita-se que a adoção de rigorosas práticas higiênicas sob à extração, processamento, embalagem e estocamento da água mineral e água de fontes de forma a prevenir ou minimizar as fontes de contaminação microbiológica. 5. AGRADECIMENTOS A minha família pelo enorme apoio, ao Ms. Alexandre Carvalho de Moura pelo belo e incansável trabalho de orientação, a amiga Daniele da Cruz Antônio pela ajuda nas análises e às Srtas. Ariane Spiassi e Elaine Carolino, pelo apoio na análise laboratorial. 6. REFERÊNCIAS ANVISA ( AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA). RESOLUÇÃO RDC nº 54, DE 15 DE JUNHO DE PUBLICADO EM D.O.U. DIÁRIO OFICIAL DA UNIÃO; PODER EXECUTIVO, DE 19 DE JUNHO DE APHA ( AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION). STANDART METHODS FOR THE EXAMINATION OF WATER AND WASTEWATER. 20 th ED. WASHINGTON: AWWA, WPCF, BRASIL. MINISTÉRIO DA SAÚDE. PORTARIA nº 518, DE 25 DE MARÇO DE NORMA DE QUALIDADE PARA ÁGUA DE CONSUMO HUMANO. DIÁRIO OFICIAL DA UNIÃO, BRASÍLIA, n.59,2004. CRISTINA R, CRISTINA J., ESCASSEZ DA ÁGUA, PARA MUITOS É DIFÍCIL ACREDITAR, MAS A ÁGUA PODE ACABAR. GRADUANDAS DO CURSO DE ENGENHARIA AMBIENTAL DA UNIVERDIDADE FUMEC D AGUILA OS, ROQUE OCC, MIRANDA CAS, FERREIRA AP. AVALIAÇÃO DA QUALIDADE DE ÁGUA PARA ABASTECIMENTO PÚBLICO DO MUNICÍPIO DE NOVA IGUAÇU. CAD. SAÚDE PUBLICA, RIO DE JANEIRO, JULHO -SETEMBRO, XII

13 FRANCO BDGM, LLANDGRAF M. MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS. ED. ATHENEU. SÃO PAULO FREITAS, M. B. de; BRILHANTE, O. M.; ALMEIDA, L. M. de. IMPORTÂNCIA DE ANÁLISE DE ÁGUA PARA A SAÚDE PÚBLICA EM DUAS REGIÕES DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO: ENFOQUE PARA COLIFORMES FECAIS, NITRATO E ALUMÍNIO. RIO DE JANEIRO, KONEMAN EW, ALLEN SM, JANDA WM, SCHRECKENBERGER PC, WINN JR, W.C. DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO. 5ªed. RIO DE JANEIRO, MEDSI, NASCIMENTO, A.R.; AZEVEDO, T.K.L.; FILHO, N.E.M.; ROJAS, M.O.A.I. QUALIDADE MICROBIOLÓGICA DAS ÁGUAS MINERIAS CONSUMIDAS NA CIDADE DE SÃO LUÍS- MA. Higiene Alimentar, v. 14, n. 76, p VARNAM, A.H.; SUTHERLAND, J.P BEBIDAS: TECNOLOGIA, QUÍMICA Y MICROBIOLOGIA (SÉRIA ALIMENTOS BÁSICOS 2). ACRIBIA. ZARAGOZA. 487 P. WENDPAP, L.L.; DAMBROS, C.S.K.; LOPES, V.L.D. QUALIDADE DAS ÁGUAS MINERAIS E POTÁVEL DE MESA COMERCIALIZADAS EM CUIABÁ-MT. HIGIENE ALIMENTAR, V. 13, n. 64, p ZIESE T, ANDERSON Y, DE JONG B, LOFDAHl S, RAMBERG M. SURTO DE ESCHERICHIA COLI. RELATÓRIO DE INVESTIGAÇÃO DE SURTOS. VOL. 1, n.1, XIII