Caracterização do perfil lipídico de espermatozoides humanos por espectrometria de massas

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1 Caracterização do perfil lipídico de espermatozoides humanos por espectrometria de massas Edson Borges Jr., Thais Serzedello, Rita de Cássia S. Figueira, Amanda S. Setti, Assumpto Iaconelli Jr., Agnaldo Nardi

2 Declaro: Ausência de Conflito de Interesse Resolução do Conselho Federal de Medicina nº 1.595/

3 Introdução Qualidade seminal - Análise seminal convencional Melhor maneira disponível para acessar a fertilidade masculina Parâmetros preconizados pela OMS Causa de alguns casos de infertilidade masculina mantem-se indefinida

4 Introdução Qualidade seminal Fragmentação do DNA Técnicas para avaliação do status da cromatina/dna do espermatozoide Teste de TUNEL Teste de dispersão da cromatina do espermatozoide (SCD) Teste de cometa Teste da estrutura do DNA do espermatozoide (SCSA)

5 Introdução Qualidade seminal MSOME Motile Sperm Organelle Morphology Examination (MSOME) Introduzida em 2001 Avaliação das organelas do espermatozoide sob alta magnificação (>6.000x) Detecção de alterações morfológicas - vacúolos nucleares

6 Introdução OMICS - Lipidômica Campo emergente e promissor na área médica Lipídeos - componentes seminais básicos envolvidos em diversos eventos que culminam com a fertilização Ácidos graxos têm sido sugeridos como marcadores de infertilidade masculina Pouco se sabe sobre a associação entre o perfil lipídico espermático e outros testes de qualidade seminal

7 Objetivo Identificar uma ferramenta prognóstica da qualidade espermática através da correlação entre o perfil lipídico da amostra seminal e (i) a idade masculina, (ii) o índice de fragmentação do DNA espermático, e (iii) o MSOME, utilizando o poder analítico da espectrometria de massas

8 24 amostras seminais Materiais e Método Desenho do estudo Fragmentação do DNA MSOME Perfil lipídico As amostras foram dividas em quartis de acordo com a idade do pacientes, índice de fragmentação do DNA e incidência de vacúolos grandes por MSOME, e comparadas de acordo com o perfil lipídico

9 Materiais e Método Idade masculina 1º quartil anos 3º quartil anos Idade masculina 2º quartil anos 4º quartil anos

10 Materiais e Método Índice de fragmentação do DNA Teste Halosperm (teste de dispersão da cromatina) Halosperm Análise de 500 espermatozoides por amostra 1º quartil 7.7%-12.5% 4º quartil 18.5%-31.5%

11 Materiais e Método MSOME Incidência de espermatozoides contendo vacúolos grandes (>13 % da área nuclear) MSOME Análise de 200 espermatozoides por amostra sob aumento de 6.600x 1º quartil 2-6 % 4º quartil %

12 Relative Abundance Materiais e Método Perfil lipídico Amostras coletadas por masturbação após período de abstinência de 2 a 7 dias Processamento por gradiente de densidade R=64300 z=? N= R=85101 z=1 N= C 19 H41 O10 N4 = RDBE ppm R=67500 z=? N= R=85404 z=1 N= C 18 13C 1 H41 O 10 N4 = RDBE ppm R=83300 z=? N= NL: 2.17E5 37#433 RT: 1.44 AV: 1 T: FTMS - p ESI Full ms [ ] NL: 7.80E C 19 H41 O10 N4 = RDBE ppm C 19 H41 O 10 N4: C 19 H41 O 10 N4 pa Chrg C 18 13C 1 H41 O 10 N4 = RDBE ppm Extração lipídica Bligh & Dyer 1959 LC-MS Q-TOF Análise em triplicata m/z Aquisição de espectros Normalização dos espectros PCA / Pls Da VIP scores

13 Resultados Perfil lipídico em relação à idade dos pacientes Componentes e VIP scores

14 Resultados Perfil lipídico em relação à idade dos pacientes - Acurácia 60%

15 Resultados Perfil lipídico em relação ao índice de fragmentação do DNA Componentes e VIP scores

16 Resultados Perfil lipídico em relação ao índice de fragmentação do DNA Acurácia 84%

17 Resultados Perfil lipídico em relação à incidência de espermatozoides com LNV Componentes e VIP scores

18 Resultados Perfil lipídico em relação à incidência de espermatozoides com LNV Acurácia 85%

19 Discussão Papel dos lipídeos no espermatozoide Homeostase Fonte de energia para o metabolismo Fluidez da membrana do espermatozoide, essencial para a fusão de membranas durante a fertilização Associados à qualidade seminal concentração e motilidade Associados à produção de espermatozoides viáveis

20 Conclusão Lipídeos específicos são diferencialmente representados no sêmen dependendo da idade, índice de fragmentação do DNA e incidência de vacúolos grandes por MSOME A espectrometria de massas pode ser uma importante ferramenta não invasiva para predizer a qualidade seminal através do perfil lipídico

21 Equipe