MÉTODOS RÁPIDOS EM MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS

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1 MÉTODOS RÁPIDOS EM MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Adriana dos Reis Tassinari 3M do Brasil Ltda 3M All Rights Reserved.

2 GRANDES TEMAS DO MOMENTO INOCUIDADE QUALIDADE SAÚDE PUBLICA COMÉRCIO NACIONAL E INTERNACIONAL 2

3 INOCUIDADE E QUALIDADE MONITORAMENTO ANÁLISE MICROBIOLÓGICA 3

4 TENDÊNCIAS NA MICROBIOLOGIA Uso de métodos validados cada vez mais determinante como critério de aceitabilidade Acreditação de laboratórios componente inevitável para o comércio internacional 4

5 1. Confiabilidade 2. Precisão NOS RESULTADOS 5

6 ANÁLISE MICROBIOLÓGICA 1.MÉTODOS TRADICIONAIS OU CONVENCIONAIS 2.MÉTODOS RÁPIDOS OU ALTERNATIVOS 6

7 MÉTODOS CONVENCIONAIS GOLD STANDARD 1.POUCO EFICIENTES Trabalhosos Requerem muito material de laboratório Requerem recursos humanos treinados 2. RESULTADOS DEMORADOS 7

8 MÉTODOS CONVENCIONAIS GOLD STANDARD 3. SUJEITOS À FALHAS HUMANAS Preparo do material para análise Execução da análise Leitura dos resultados Interpretação dos resultados 4. ALGUNS TEM PRECISÃO DISCUTÍVEL 8

9 LABORATÓRIO DE MICROBIOLOGIA Implementar outras provas Maior rapidez de resultados Maior eficiência analítica Atender novos mercados Analisar alimentos distintos Exigências atuais Detectar outros patógenos Alguma outra? Cumprir com padrões e legislação 9

10 MÉTODOS RÁPIDOS 10

11 MÉTODOS NOVOS NO MERCADO n BRASIL

12 OBJETIVO DOS MÉTODOS RÁPIDOS 1. MELHORAR A EFICIÊNCIA NO LABORATORIO Simplificação do trabalho Melhor aproveitamento dos recursos humanos disponíveis Aumento da capacidade analítica Redução de custo (?) 12

13 OBJETIVO DOS MÉTODOS RÁPIDOS 2. REDUZIR O TEMPO DE OBTENÇÃO DE RESULTADOS 3. AUMENTAR A CONFIABILIDADE DOS RESULTADOS 4. AUMENTAR A PRECISÃO DOS RESULTADOS (r e R) 13

14 MÉTODOS RÁPIDOS Sensíveis Específicos Prático Algum outro? Precisos Ideais Imediato Reprodutíveis Seletivos Econômicos Aprovados 14

15 AUTOMAÇÃO LABORATORIAL 1. Pesagem da amostra 2. Homogeneização 3. Semeadura de placas 4. Contagem de colônias 15

16 MÉTODOS RÁPIDOS PARA ENUMERAÇÃO DE INDICADORES 1. MEMBRANAS FILTRANTES 2. MÉTODOS FLUOROGÊNICOS 4-metilumbeliferil-b-D-glicuronídeo (MUG) E. coli umbeliferona (fluorescente na luz UV) 16

17 MÉTODOS RÁPIDOS PARA ENUMERAÇÃO DE INDICADORES 3. SISTEMAS PRONTOS PARA USO 4. MÉTODOS INDIRETOS IMPEDÂNCIA - CONDUTÂNCIA 17

18 MÉTODOS RÁPIDOS PARA ENUMERAÇÃO DE INDICADORES BIOLUMINESCÊNCIA 18

19 MÉTODOS RÁPIDOS PARA DETECÇÃO DE PATÓGENOS MÉTODOS IMUNOLÓGICOS MÉTODOS MOLECULARES MÉTODOS BIOQUÍMICOS 19

20 MÉTODOS IMUNOLÓGICOS Técnicas imunoenzimáticas Princípio AC AC AG + AG COR + substrato + AC AC AG AC E E 20

21 TÉCNICAS IMUNOENZIMÁTICAS Imunocaptura 21

22 22 TÉCNICAS DE IMUNOMAGNETISMO

23 TÉCNICAS DE IMUNOIMOBILIZAÇÃO Positivo Negativo 23

24 24 TÉCNICAS IMUNOCROMATOGRÁFICAS

25 Sondas Genéticas MÉTODOS MOLECULARES 1. Lise celular 2. Hibridização 3. Captura do híbrido 4. Marcação Fluorescência 6. Detecção

26 REAÇÃO DE POLIMERASE EM CADEIA (PCR) 1. Denaturação da fita dupla de DNA (94 C) 2. Pareamento com primers (37 C) 3. Síntese da fita complementar por ação de polimerase (72 C) 26

27 IDENTIFICAÇÃO POR RIBOTIPAGEM 1. Preparo da amostra 2. Lise da célula 3. Corte do DNA liberado, em fragmentos, via enzima de restrição Separação dos fragmentos pelo tamanho gel de eletroforese 5. Membrana hibridizados com uma sonda de DNA e misturados com agente quimioluminescente 6. Emissão de luz câmera digitalizadora 7. Caminho Riboprint banco de dados

28 MÉTODOS BIOQUÍMICOS 1. Redução do tempo das etapas de enriquecimento 2. Enriquecimento e identificação bioquímica, simultaneamente pos neg 28

29 3. Kits de identificação de colônias 1. Manuais MÉTODOS BIOQUÍMICOS 1. Semi-automatizados 1. Totalmente automatizados 29

30 MÉTODOS RÁPIDOS IMPORTANTE Os métodos de detecção de patógenos são para TRIAGEM e todo resultado positivo é apenas PRESUNTIVO,, necessitando de confirmação pelos métodos convencionais de cultura. 30

31 VANTAGENS 1. Agilizam o trabalho no laboratório Prontos para uso MÉTODOS RÁPIDOS Requerem menos suprimentos (vidraria, equipamentos) Demandam menos mão de obra Passíveis de automação 2. Podem reduzir significativamente o tempo para obtenção de resultados Alguns pulam etapas do método convencional Alguns dão respostas instantâneas 31

32 VANTAGENS 3. São padronizados Melhor reprodutibilidade Melhor repetibilidade MÉTODOS RÁPIDOS 4. Têm certificado de fabricação Necessários para validação de Sistemas de Qualidade em laboratórios Necessários para aceitação e acreditação de laboratórios (ISO 17025) 32

33 DESVANTAGENS MÉTODOS RÁPIDOS 1. Podem sofrer interferência da matriz alimentar 2. Custo elevado de material 3. Necessitam de aprovações por agências de validação internacionalmente aceitas 33

34 DESVANTAGENS MÉTODOS RÁPIDOS O conceito de novo gera desconfiança nos microbiologistas não familiarizados com seus princípios, aplicações e limitações 34

35 Trabalhar com ele COMO DECIDIR? Responde as minhas exigências? Suporte técnico Quanto se aproxima do meu ideal? Método Rápido Algum outro? Contribui com os objetivos da operação? Avaliar Analisar a fundo a relação custo - benefício 35

36 DIFICULDADES PARA IMPLANTAÇÃO Validação do Método Aprovação por Órgãos Reconhecidos Avaliação Interna Falsos Positivos Falsos Negativos Atender às Exigências de cada Mercado Disponibilidade do Produto 36 Flutuação do Câmbio

37 GRANDES VERDADES SOBRE A IMPLANTAÇÃO DE MÉTODOS RÁPIDOS A estrutura hierárquica tradicional pode atrapalhar 37

38 GRANDES VERDADES SOBRE A IMPLANTAÇÃO DE MÉTODOS RÁPIDOS Acostume-se se a trabalhar sob pressão 38

39 GRANDES VERDADES SOBRE A IMPLANTAÇÃO DE MÉTODOS RÁPIDOS Preste atenção aos sinais do mercado 39

40 GRANDES VERDADES SOBRE A IMPLANTAÇÃO DE MÉTODOS RÁPIDOS Seja inovador; aproveite as oportunidades 40

41 GRANDES VERDADES SOBRE A IMPLANTAÇÃO DE MÉTODOS RÁPIDOS Escolha a ferramenta mais adequada para cada situação Atrasado Bêbado Batom 41

42 GRANDES VERDADES SOBRE A IMPLANTAÇÃO DE MÉTODOS RÁPIDOS Acredite em você mesmo. Tenha confiança! 42

43 GRANDES VERDADES SOBRE A IMPLANTAÇÃO DE MÉTODOS RÁPIDOS Vá até o fim!!! Obrigada! artassinari@mmm.com 43