Comparação de métodos rápidos
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- Luiz Felipe Antas das Neves
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1 Comparação de métodos rápidos 03/05/2016 Sandra Heidtmann 3M All Rights Reserved
2 A preocupação INOCUIDADE QUALIDADE SAÚDE PUBLICA COMÉRCIO NACIONAL E INTERNACIONAL 3M All Rights Reserved 2
3 O que fazer?? INOCUIDADE E QUALIDADE MONITORAMENTO ENSAIOS MICROBIOLÓGICOS 3M All Rights Reserved 3
4 Tendências na microbiologia Laboratórios acreditados Métodos validados Usar métodos alternativos 3M All Rights Reserved 4
5 O que os labs de microbiologia tem que oferecer? RESULTADOS Confiáveis Precisos Rápidos 3M All Rights Reserved 5
6 Para isso precisam ser Acreditados Gestão laboratorial Harmoniza processos Garantia e competência analítica 3M All Rights Reserved 6
7 Métodos validados Utilizar métodos normalizados e oficiais; Se necessário fazer validações internas, utilizando replicatas, ensaios colaborativos e participações em testes de proficiência; Validar todas as matrizes utilizadas no laboratório; Fazer simulações com material de referência de modo a refletir as condições reais do laboratório. 3M All Rights Reserved 7
8 Identificação bacteriana FENOTÍPICA IMUNOLÓGICA GENOTÍPICA 3M All Rights Reserved 8
9 Metodologia tradicional PADRÃO OURO FENOTÍPICAS O QUE CONSIGO VISUALIZAR! 3M All Rights Reserved 9
10 Metodologia tradicional Vantagens: - Relativamente fácil de trabalhar; - Reconhecido internacionalmente; - Não necessita de equipamentos sofisticados; - Custo mais baixo. 3M All Rights Reserved 10
11 Metodologia tradicional LIMITAÇÕES: Depende da integridade fisiológica da bactéria (injúria por processamento, temperatura, entre outros) Controles - meios de cultura, pessoal e tempo. Maior risco de contaminação cruzada; Muitas etapas de processo; Maior demanda por área física e pessoal. 3M All Rights Reserved 11
12 Metodologia imunológica ELISA O QUE CONSIGO AVALIAR! 3M All Rights Reserved 12
13 ELISA Vantagens: FACILITAM A ROTINA TESTES DE TRIAGEM! Reação Ag-Ac (bacteriófagos) Pode ser qualitativo ou quantitativo; Alta sensibilidade; Utiliza reagentes estáveis; Pode ser adaptado tanto a testes simples quanto à automação; Não depende de formação de precipitado, aglutinado, etc. 3M All Rights Reserved 13
14 ELISA Desvantagens: Possibilidade de falsos negativos em sorovares devido incapacidade de reconhecimento de todos os antígenos possíveis. Possibilidade de falso positivos devido reação cruzada com espécies relacionadas antigenicamente. Resultados devem ser confirmados 3M All Rights Reserved 14
15 Metodologia molecular GENOTÍPICAS - tradicional - automatizado - real time EFICIÊNCIA e ESPECIFICIDADE NA DETECÇÃO! 3M All Rights Reserved 15
16 3M Sistema de Detecção Molecular (MDS): Tecnologia Amplificação Isotérmica + Detecção por Bioluminescência 3M All Rights Reserved 16
17 3M Sistema de Detecção Molecular (MDS): Tecnologia 3M All Rights Reserved 17
18 Etapas básicas 1) Preparação 2) Amplificação 3) Detecção Préenriquecimento Está ou não está? Resposta 3M All Rights Reserved 18
19 Vantagens da biologia molecular Resultados mais confiáveis (DNA) e rápidos; Ensaios de Salmonella spp em 13 horas; Maior credibilidade junto aos clientes, principalmente os internacionais; Menor tempo de espera para liberação de cargas (diminuição do custo de frio: Não tem a possibilidade de adulterar resultados; Maior otimização dos colaboradores; Menor interferência do analista; Menor gasto com laboratórios (demanda de espaço, equipamentos e materiais). 3M All Rights Reserved 19
20 Mais vantagens Pode ser usado para: Matérias primas, Produtos em processo, Produtos acabados, Amostras ambientais, Amostras de patologia avícola. Arquivo eletrônico de dados de fácil armazenagem, recuperação e impressão. O sistema é herméticamente fechado e automatizado Reduz o potential de contaminação Os reagentes já vem prontos em tabletes: com padrão interno de controle reduz os erros de operação 3M All Rights Reserved 20
21 Desvantagens Não permite fazer a tipificação; Necessita de colaboradores treinados e com senso crítico; Preso ao fornecedor do equipamento (reagentes) 3M All Rights Reserved 21
22 Método rápido 3M All Rights Reserved 22
23 Validação (NBR ISO IEC item ) É a confirmação por fornecimento de evidência objetiva, que os requisitos específicos do método para um determinado uso foram satisfeitos para o uso pretendido Ou verificação 3M All Rights Reserved 23
24 Porque validar um método analítico Características de desempenho; Limitações de um método; Identificar as influências que podem alterar essas características e qual extensão. 3M All Rights Reserved 24
25 Porque e quando deve ser validado: Modificações no método normalizado; Novo método desenvolvido para um problema específico; Método utilizado em laboratórios, equipamentos ou equipes diferentes; Situações fora do controle interno da qualidade; Desempenho insatisfatório em PEP; Demonstração de equivalência entre dois métodos (ex: um método novo rápido x método normalizado. 3M All Rights Reserved 25
26 Acurácia = Precisão + veracidade Acurácia Grau de concordância dos resultados experimentais com o valor referência aceito ou valor verdadeiro convencional = exatidão do método analítico. eferência aceito ou valor verdadeiro convencional = exatidão do método analítico Pra) Precisãoecisão Grau de concordância entre resultados de ensaios independentes obtidos sob condições específicas Repetitividade => Recuperação/Bias => Reprodutibilidade => Incerteza b) Veracidade Erro sistemático/valor correto 3M All Rights Reserved 26
27 Desvios aleatórios e sistemáticos 3M All Rights Reserved 27
28 Dificuldades para implantação Validação do Método; Aprovação por Órgãos Reconhecidos; Avaliação Interna; Falsos Positivos/ Falsos Negativos; Atender às Exigências de cada Mercado; Disponibilidade do Produto; Flutuação do Câmbio 3M All Rights Reserved 28
29 Conclusões Conhecer a nova metodologia na realidade do seu laboratório e suas matrizes; Comparar e definir as relações de custo X benefício na utilização da metodologia; Fazer validações com diferentes marcas de meios de cultura, equipamentos e equipes. 3M All Rights Reserved 29
30 Escolher as ferramentas corretas 3M All Rights Reserved 30
31 Obrigada (11) M All Rights Reserved 31
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