INVESTIGAÇÃO DE EFEITO ANTI-INFLAMATÓRIO IN VIVO DE Indigofera suffruticosa

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1 INVESTIGAÇÃO DE EFEITO ANTI-INFLAMATÓRIO IN VIVO DE Indigofera suffruticosa Campos, J.K.L. (1) ; Brito,T.G.S. (1) ; Araújo,T.F.S. (1) ; Souza, P.G.V.D. (1) ; Silva Júnior, J.G. (1) ; Siqueira, T.F. (1) ; Lima, V.L.M. (1) janinhaklc@hotmail.com (1) Universidade Federal de Pernambuco - UFPE, Recife PE, CNPq, FACEPE, CAPES. RESUMO Indigofera suffruticosa é uma planta medicinal utilizada na medicina tradicional para tratamento em processos inflamatórios. Com base em dados populares, o presente estudo avaliou os possíveis efeitos anti-inflamatórios dos extratos orgânicos obtidos a partir de sementes de I. suffruticosa (Fabaceae) em modelos de inflamação. Para tanto, a inflamação foi induzida com carragenina a 1% tanto no edema de pata (aplicação sub-plantar) quanto para peritonite (aplicação intraperitoneal) em camundongos. Os extratos acetônico e metanólico de I. suffruticosa (400mg/kg) causaram inibição significativa da inflamação no edema de pata (60,1% e 58,7 %, respectivamente). Por sua vez, no modelo experimental de peritonite, os extratos clorofórmico, acetônico e metanólico (400mg/kg) foram capazes de causar significativamente uma inibição da inflamação (59%, 46% e 49 %, respectivamente). Assim, esses resultados sugerem que alguns extratos de I. suffruticosa possuem efeito antiinflamatório, especificamente o Acetônico e Metanólico para o modelo de edema de pata e o Clorofórmico, Acetônico e Metanólico para o modelo de Peritonite, apoiando a hipótese popular no tratamento da inflamação, e indicando que compostos presentes nesta planta podem ser utilizados como

2 uma potencial fonte de substâncias promissoras para obtenção de novas drogas. Palavras-chave: Edema, Peritonite, Carragenina. INTRODUÇÃO As plantas têm sido usadas por diversos povos, como fonte de substâncias para cura de diversas doenças por diversos povos desde os tempos pré-históricos. Indigofera suffruticosa Mill é conhecida no Brasil como anil ou anileira, e vem sido utilizada na medicina popular no tratamento de infecções, espasmos e inflamações e outras doenças (Leite et al., 2003, Leite et al., 2006). Poucos estudos foram realizados com a espécie I. suffruticosa, assim, este estudo teve como objetivo estabelecer o potencial in vivo a atividade anti-inflamatória de extratos orgânicos de sementes secas de Indigofera suffruticosa. MATERIAL E MÉTODOS Coleta de materiais e preparação de extratos As sementes de I. suffruticosa foram coletadas, município de São Caetano, região do Agreste do Estado de Pernambuco, secas em estufa a 2

3 38 C, trituradas até a obtenção de um material finamente pulverizado. Os extratos (400mg/Kg) foram preparados com solventes de polaridade crescente (Éter, Clorofórmio, Acetona e Metanol), homogeneizados em agitação constante durante 2 horas, armazenados sob refrigeração (4º a 10º C) durante toda a noite, filtrados em papel de filtro e algodão e rotaevaporados para remoção completa dos solventes. Animais Camudongos albino swiss (25-30g) foram obtidos do Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami (LIKA). Os animais foram mantidos em ciclo claro/escuro (12/12h) com livre acesso de comida e água. Os animais foram divididos nos seguintes grupos (n=6, cada): controle negativo (veículo- Isopropilenoglicol); Controle positivo (100 mg/kg de Ácido Acetilsalicílico- AAS); e os diferentes extratos de I. suffruticosa (400 mg/kg). Atividade anti-inflamatória Edema de pata O edema de pata foi induzido a partir de uma injeção de carragenina a 1% na região subplantar da pata esquerda dos animais uma hora antes da administração do tratamento. O volume da pata foi mensurado nos 3

4 tempos 0h, e intervalos de 1, 2, 3 e 4 horas com auxílio de um paquímetro digital logo após a administração da carragenina. Peritonite A peritonite foi induzida a partir de uma injeção intraperitoneal de carragenina nos animais, 1 hora após o tratamento com veículo, ácido acetilsalicílico e extratos de I. suffruticosa. Após 4 horas os animais foram sacrificados para coleta do líquido peritoneal. Para preservação dos leucócitos contidos no líquido peritoneal, foi injetada uma solução de salina 0, 9% contendo EDTA (1mM) nos animais sacrificados. Para contagem das células foi utilizado um contador de célula automático (ABX MICROS 60). Análise Estatística Os resultados foram apresentados em média ± desvio padrão. A significância (p<0,05) dos dados foi avaliada através de Análise de Variância (ANOVA) seguida de teste de Bonferroni. RESULTADOS E DISCUSSÃO A injeção de carragenina nos animais do grupo do controle negativo causou um edema que variou de 5, 27 mm (Ínicio) a 4, 71 mm 4

5 (Término) de espessura. O controle positivo que recebeu a dose de 100 mg/kg de AAS promoveu uma inibição do edema de pata de 60, 3% (Tabela1). Todos os extratos (400 mg/kg) mostraram uma inibição da inflamação 35,2% para o extrato Étereo; 27, 0% extrato clorofórmico; 60, 1% extrato Acetônico; 58, 7% extrato metanólico (Tabela 1). No entanto, foi possível verificar significância apenas nos grupos tratados com acetona e metanol em todos os tempos avaliados (1-5 horas), em comparação com o grupo de controle negativo. Observou-se que os extratos acetônico e metanólico apresentaram um resultado semelhante ao grupo tratado com ASS, porém não significante (p>0,05), conforme mostrado na Tabela 1. Os resultados (Figura 1) mostraram que a administração de carragenina provocou a migração leucocitária para cavidade intraperitoneal. Os extratos provocaram um percentual de inibição de 59% para o extrato Clorofórmico, 46% extrato Acetônico e 49% extrato Metanólico de I. suffruticosa, assim como ASS reduziu a migração dos leucócitos, com percentual de inibição em 60%, quando comparado com o grupo controle negativo, p<0,0001. O extrato Étereo não apresentou significância quando comparado com o controle negativo. 5

6 Tabela 1. Efeito dos extratos orgânicos de I. suffruticosa (400mg/kg) sobre o edema de pata em camudongos. TEMPO TRATAMENTO 0min 60min 120min 180min 240min Controle negativo 4,16 ± 0,114 5,27 ± 0,321 5,04 ± 0,281 4,82 ± 0,064 4,71 ± 0,064 ASS 4,16 ± 0,182 4,90 ± 0,145* 4,55 ± 0,154* 4,42 ± 0,108* 4,35 ± 0,143* Extrato Etéreo 4,32 ± 0,07 4,41 ± 0,079 4,51 ± 0,094 4,75 ± 0,161 4,82 ± 0,07 Extrato Clorofórmico 4,26 ± 0,1 4,70 ± 0,188 4,75 ± 0,136 4,74 ± 0,037 4,74 ± 0,037 Extrato Acetônico 4,13 ± 0,072 4,6 ± 0,121* 4,5 ± 0,121* 4,4 ± 0,108* 4,26 ± 0,075* Extrato Metanólico 4,02 ± 0,115 4,43 ± 0,146* 4,39 ± 0,158* 4,29 ± 0,185* 4,2 ± 0,199* Valores expressos em Média ± Desvio padrão. ANOVA:*p<0,001 em relação ao grupo controle negativo. 6

7 Figura 1. Efeito dos diferentes extratos de I. suffruticosa na migração dos leucócitos no modelo de peritonite induzido com carragenina. Os grupos de camudongos foram pré-tratados com veículo (controle), ASS (100 mg/kg), e os extratos de I. suffruticosa (400 mg/kg) 60 minutos antes da indução da peritonite com carragenina a 1%. Os Leucócitos foram coletados e colhidos após 4 horas da administração de carragenina. Valores representados em média ± desvio padrão. ** significância, p<0,05 e ****p<0,0001, em relação ao grupo controle negativo. ANOVA seguido de Teste de Bonferroni. O uso de drogas comerciais com ação anti-inflamatória exerce uma vasta gama de efeitos colaterais (Vane & Botting, 1990), existe atualmente uma grande busca e interesse no desenvolvimento de novos agentes terapêuticos, a partir de plantas (Iwalewa et al., 2007). O presente estudo demonstrou que I. suffruticosa, possui efeitos anti - inflamatórios quando avaliada em modelos de inflamação química in vivo. Os extratos clorofórmico, acetônico e metanólico, mas não o éter de I. suffruticosa reduziram significativamente o edema da pata induzido por 7

8 carragenina. A resposta inflamatória induzida carragenina foi descrita em 1969 nos modelos de pata de camundongos (Levy, 1969) e vem sendo bastante utilizado para o desenvolvimento de novas drogas antiinflamatórias. De acordo com Gemache et al. (1986), o teste do edema da pata induzido por carragenina envolve a ativação das enzimas ciclooxigenase (COX), assim, devido ao efeito apresentado, sugere-se que os extratos clorofórmico, acetônico e metanólico de I. suffruticosa possuem compostos que podem estar atuando na diminuição da permeabilidade vascular. Upwar et al (2011) observou um efeito semelhante com extrato metanólicos de Indigofera oblongifolia a uma concentração de 500mg/kg, diminuindo em aproximadamente 40% do edema de pata em ratos. O tratamento com os extratos clorofórmico, acetônico e metanólico de I. suffruticosa inibiu a migração de leucócitos induzida por carragenina (p < 0,0001). Um resultado semelhante foi observado em um estudo com outra planta, Piptadenia stipulacea da mesma família (Fabaceae) que Indigofera suffruticosa com uma diminuição de aproximadamente 36% na migração de leucócitos (Queiroz et al., 2010). CONCLUSÃO Este estudo demonstra que extratos orgânicos de sementes de I. suffruticosa apresenta efeitos anti-inflamatórios em camundongos, e 8

9 também justifica cientificamente o uso popular desta planta para tratamento da inflamação. A propriedade relatada por esta espécie nessa pesquisa faz dela um alvo para desenvolvimento de novos compostos que podem ser utilizados como alternativas as drogas que já estão em uso. REFERÊNCIAS GAMACHE, D. A.; POVLISHOCK, J. T.; ELLIS, E. F. Carrageenan-induced brain inflammation. Characterization of the model. Journal of Neurosurgery. v. 65, p , IWALEWA, E. O.; MCGAW, L. J; NAIDOO, V., ELOFF, J. N. Inflammation the foundation of disease and disorders. A review of phytomedicines of South African origin used to treat pain and inflammatory conditions. Afric Journal of Biotechnology v. 6, p , LEITE, S. P.; SILVA, L. L. S.; CATANHO, M. T. J. A.; LIMA, E. O.; LIMA, V. L. M. Atividade anti-inflamatória do extrato de Indigofera suffruticosa. Revista Brasileira de Ciências da Saúde. v. 7, p.47 52, LEITE, S. P.; VIEIRA, J. R. C.; MEDEIROS, P. L.; LEITE, R. M. P.; LIMA, V. L. M., XAVIER, H. S.; LIMA, E. O. Antimicrobial activity of Indigofera suffruticosa. Evidence based complementary and alternative Medicina. v. 3, n. 2, p , LEVY, L.; Carrageenan paw oedema in the mouse. Life Sciences. V. 8, p , QUEIROZ, A. C.; LIRA, D. P., DIAS, T. L. M. F.; SOUZA, E.T., MATTA, C. B. B.; AQUINO, A. B., SILVA, L. M. A. C.; SILVA, D. J. C., MELLA, E. A.C.; AGRA, M. 9

10 F.; BARBOSA FILHO, J. M.; ARAUJO-JÚNIOR, J. X.; SANTOS, B. V. O.; ALEXANDRE-MOREIRA, M. S. The antionociceptive and anti-inflammatory activities of Piptadenia stipulacea Benth. (Fabaceae). Journal of Ethnopharmacology. v. 128, n. 2, p , UPWAR, N.; PATEL, R.; WASEEM, N.; MAHOBIA, N. K. Anti-inflammatory potential of alcoholic extract of Indigofera oblongifolia Forks. International Journal of Research in Pharmaceutical Sciences. v. 2, n.1, p , VANE, J. R.; BOTTING, R. M. The mode of action of anti-inflammatory drugs. Journal of Postgraduate Medicine. v. 66, p. 2-17,