CONTROLE DE COPIA: PE-LB-TX-001 ESPECTROFOTÔMETRO DE ABSORÇÃO ATÔMICA FORNO DE GRAFITE 26/10/2015
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- Emanuel Marinho Molinari
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1 1/6 1. INTRODUÇÃO A determinação de metais em material biológico é realizada por espectrofotometria de absorção atômica com forno de grafite. A espectrofotometria é o método de análise óptico mais usado nas investigações biológicas e físico - químicas. O espectrofotômetro é um instrumento que permite comparar a radiação absorvida ou transmitida por uma solução que contém uma quantidade desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substância. Todas as substâncias podem absorver energia radiante. Mesmo o vidro, que parece completamente transparente, absorve comprimento de ondas que pertencem ao espectro visível. A água absorve fortemente na região do infravermelho. A relação entre o que é absorvido (absorbância) e o que é transmitido (transmitância) é direta e inversamente proporcional à concentração dos analitos em determinação respectivamente. Quanto maior for a radiação absorvida, maior será a concentração do analito, quanto maior for a transmitância (o que passa pelo caminho óptico), menor será a concentração. A concentração destes obedece à Lei de Beer-Lambert-Bouguer, conhecida simplesmente como Lei de Beer, que fornece uma relação empírica que, na óptica, relaciona a absorção de luz com as propriedades do material atravessado por esta através da fórmula A = abc, onde A = absorbância, a = absortividade molar do analito, b = caminho óptico e c = concentração. O forno de grafite, em espectrofotometria de absorção atômica, serve para promover a excitação do átomo a fim de que seus elétrons possam emitir fótons de luz. O forno de grafite possui uma câmara interna onde são colocados tubos de grafite, onde o amostrador automático injetará a amostra. Este tubo sofrerá aquecimentos segundo as rampas de aquecimento já programadas no método. A amostra sofrerá secagem nas duas primeiras rampas; os elétrons dos átomos dos metais contidos na amostra sofrerão excitação na terceira rampa. A pirólise será a terceira etapa e durará 5 s (tempo real da leitura da absorbância que será proporcional à concentração). A última etapa será de limpeza do tubo. 2. ABRANGÊNCIA Setor de Toxicologia. 3. SIGLAS E DEFINIÇÕES AA 600: Equipamento Analyst 600, formado por um espectrofotômetro propriamente dito, um autosampler e um forno de grafite. Autosampler: Amostrador automático Forno de grafite: Equipamento acoplado ao espectrofotômetro onde serão inseridos os tubos de grafite e tubos de contato. Cooling System: Equipamento responsável pelo sistema de resfriamento do AA 600. Lâmpadas HCL: São lâmpadas de cátodo oco dos elementos de interesse (Hollow Cathode Lamps). Lâmpadas EDL: São lâmpadas de descarga sem eletrodos. Cada elemento possui a sua respectiva lâmpada.
2 2/6 Contact: Tubo de contato onde serão inseridos os tubos de grafite. Este Contact é instalado no interior do tubo de grafite. 4. ESPECIFICAÇÃO DO EQUIPAMENTO Equipamento: Espectrofotômetro de absorção atômica - Forno de grafite: Marca: PerkinElmer Modelo: Analyst 600 Número de Série: MANUTENÇÕES a) Diária: 1) Verificar a linha do gás argônio 2) Completar ou trocar a solução de lavagem do autosampler 3) Descarte do esgoto do autosampler 4) Verificação do tubo de grafite (estado após queimas, número de queimas). 5) Limpeza externa do equipamento. a.1) Semanal: 1) Limpeza dos cones internos do forno de grafite 2) Limpeza das janelas de vidro dos cones internos do forno de grafite 3) Limpeza do filtro de ar situado atrás do equipamento 4) Verificação da glicerina do Cooling System As manutenções realizadas devem ser registradas nas planilhas LAB-105-VR e LAB-140-VR b) Preventiva: As manutenções preventivas assim como os testes de desempenho são realizados pela Perkin-Elmer anualmente e os períodos em que as preventivas ocorrem são acordados entre esta e o analista responsável pelo setor. 7. c) Corretiva: As manutenções corretivas são realizados pela Perkin-Elmer, conforme contrato de manutenção entre esta e o Laboratório do Grupo Santa Helena. Tal contrato é renovado anualmente e contempla a realização de serviços de manutenções corretivas sem o fornecimento de peças. 8. CALIBRAÇÃO A verificação da calibração do equipamento e/ou a sua recalibração, quando necessária, são realizadas pela equipe técnica da PerkinElmer no momento da manutenção preventiva e/ou corretiva. 9. MATERIAIS E REAGENTES
3 3/6 Tubo de grafite Tubo de Contato (Contact) Lâmpadas HCL ou EDL dos elementos de interesse Copos para o carrossel (há 3 capacidades de copos para o carrossel do AA 600). Glicerina (para o Cooling System) Ácido nítrico (para a solução de lavagem do autosampler) Cilindro de ar sintético Cilindro de nitrogênio Cilindro de hidrogênio 10. DETALHAMENTO DO PROCEDIMENTO Ligar o microcomputador Ligar o A600 Ligar o exaustor Verificar a solução de lavagem Verificar o esgoto do aparelho Verificar o argônio Abrir o programa WinLab32 (que comandará o A600) O programa fará uma avaliação do A600, do forno de grafite e do autosampler. Clicar em File, Open e Workspace. Selecione a Workspace de sua escolha. Serão exibidas 5 janelas dentro do software Winlab32 que serão: Results, Calibration, Automated Analysis Control, Transient Peaks Display e Furnace Control. Se a Workspace ainda não foi criada, deve-se clicar nos respectivos ícones na barra de ferramentas situadas acima do Winlab32. Em seguida, clicar em File, Save As. No programa WinLab32, clicar em File, New e Method respectivamente. Abrir-se-á a janela Method Editor. Esta janela possui 6 subdivisões abaixo. Cada uma destas seções é subdividida em subseções lateralmente. A primeira seção chama-se Spectrometer, da esquerda para a direita do operador. Em sua primeira subdivisão, Define Element, deve-se escrever o nome do método, o símbolo do elemento em análise, o seu comprimento de onda e a fenda específica nas linhas Method Description, Element, Wavelength e Slit Width respectivamente. Estes dados podem ser obtidos no POP técnico do elemento. Na linhas Type, Measurement e Smoothing Points selecionar AA-BG, Peak Area e None respectivamente Na segunda subdivisão (Settings) digitar nas linhas Time, Delay time e BOC time 5s, 0s e 1s respectivamente. Na linha Replicates digitar o número de vezes que o equipamento deve ler cada amostra. Na linha Lamp Current clicar ou na opção Use Value Entered in Lamp Setup Window (para que o equipamento selecione a corrente ideal para a lâmpada ou em Use Current (caso o operador queira trabalhar com uma corrente diferente). Na seção Sampler, clicar na subseção Furnace Program. Aparecerá uma tabela com a programação da rampa do elemento em análise que pode ser obtida no respectivo POP técnico. Na linha Injection Temperature, digitar 20 o C. Na subseção Autosampler, deve-se digitar 20 em Sample Volume, e a posição do branco em Diluent Location.
4 4/6 Em Matrix Modifiers clicar apenas nos dois campos, à esquerda do operador, do primeiro modificador de matriz, digitar 5 para o seu volume e digitar sua posição no carrossel do autosampler. Na seção Calibration, clicar na subseção Equation and Units. Na linha Equation, selecionar Linear Through Zero. Nas linhas Maximum Decimal Places e Maximum Significant Figures, digitar 3 e 4 respectivamente. Na linha Units Calibration e Units Sample, selecionar as unidades de interesse. Na subseção Standard Concentration clicar no botão Calculate Standard Volumes. Abrir-se-á a janela Calculate Standard Volumes. Na coluna Concentration, digitar 10 e 20 para as linhas Standard 1 e Standard 2. Em Stock Standard, nesta mesma janela, clicar no primeiro campo em branco, digitar a localização do padrão estoque e a sua concentração. O software dará o comando para que o autosampler dilua seu padrão estoque de modo a preparar os padrões 10 e 20 ug/l. Nas linhas Location of Blank, marcar os campos em branco respectivos de Calibration Blank e Reagent Blank. Digitar ao lado destas linhas as suas localizações. Em seguida clicar em OK. O dispaly retornará à janela anterior (Method Editor) na seção Calibration, subseção Standard Concentration, mostrando uma tabela com as concentrações dos padrões da curva e as localizações dos reagentes utilizados. O operador pode optar por outros valores para sua curva de acordo com o elemento de interesse. Clicar com o botão direito do mouse na parte escura da janela e clicar em Save Method As. Se já existir o método, deve-se clicar Save Method para qualquer modificação feita. Clicar no ícone correspondente à lâmpada, na barra de ferramenta. Abrir-se-á uma janela com uma tabela onde serão mostrados, na terceira coluna, as lâmpadas dos elementos que estão instalados no equipamento. Clicar no círculo ao lado do símbolo do elemento, na segunda coluna e em seguida, no botão ao lado deste círculo, na primeira coluna. O equipamento fará um ajuste para o comprimento de onda e fenda específicas para o elemento em análise, conforme foi gravado no método anteriormente editado. Clicar em File, New e Sample Info File respectivamente. Em seguida, clicar em OK. Abrir-se-á uma janela Sample Information Editor. Digitar o nome da corrida das amostras em Batch ID. Digitar a localização e a numeração do paciente (O.S.) nas colunas A/S Location e Sample ID respectivamente. Nas colunas Aliquot e Diluted to Vol. digitar o volume aliquotado da amostra e o volume final da solução (amostra + diluente). Como botão direito do mouse, clicar na parte escura da janela e selecionar Save Info As. Na janela Automated Analysis Control, clicar em Calibration (para correr apenas os padrões), em Analyze Samples (para correr apenas as amostras digitadas em Sample Information Editor) ou em Analyze All para correr os padrões e logo em seguida as amostras. 11. BIOSSEGURANÇA Para esta atividade é necessário a utilização de luvas, jaleco, touca e máscara, conforme descrito no POP de Biossegurança em vigor. 12. COMENTÁRIOS Caso seja preciso trocar o tubo de grafite, deve-se proceder o alinhamento e o condionamento do mesmo; para isto, deve-se utilizar a janela Furnace Control na Workspace de trabalho. Deve-se ter cuidado ao manusear os tubos de grafite no momento da troca. Evitar tocá-los com as mãos para não contaminá-lo com partículas que possam vir a causar interferência nas análises.
5 5/6 Evitar que o recipiente com a solução de lavagem esvazie para evitar bolhas na bomba de amostra e de lavagem. 13. DOCUMENTOS DE REFERÊNCIA a) Bibliografia b) Documentos Complementares Manuais PerkinElmer Espectrofotômetro AA 600 Manuais PerkinElmer Autosampler Manual PerkinElmer Forno de grafite Plano da qualidade do setor de Toxicologia (Cód. PQ-LB-TX-001) PO de Orientações de Biossegurança (Cód. PO-LB-CQ-001) 14. HISTÓRICO DAS REVISÕES Pg. Natureza da Revisão Data da Revisão Versão Responsáveis Procedimento adequado para atender ao item 5.3 da Norma PALC, versão 2013 Procedimento adequado para atender ao item 5.3 da Norma PALC, versão 2013 Após Pré auditoria. 01/08/ /01/ Procedimento revisado e sem alterações. 15. ANEXOS Não se aplica. 14. REGISTRO DE TREINAMENTO DATA NOME COMPLETO ASSINATURA
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