Diagnóstico Laboratorial de Chikungunya

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1 Diagnóstico Laboratorial de Chikungunya Fernanda Montenegro de Carvalho Araújo Dezembro/2014

2 Introdução A febre do CHIKUNGUNYA é uma doença endêmica nos países do Sudeste da Ásia, África e Oceania e emergente na região das Américas, causada por um alfavirus o chikungunya (CHIK) Sua transmissão ocorre através da picada do mosquito (arbovirose)

3 Introdução O nome chikungunya significa aquele que se curva e descreve a aparência inclinda das pessoas acometidas pelo vírus.

4

5 Características Gerais do Vírus Vírus RNA Envelopado Genoma não segmentado

6 Estrutura Viral

7 Genoma Viral

8 Genótipos Circulantes

9 Diagnóstico Laboratorial Diagnóstico Virológico Isolamento Viral Reação em cadeia da polimerase (PCR) Diagnóstico Sorológico Anticorpos IgM e IgG

10

11 Simplified Depiction of CHIK Human Viremia & Immune Response 10 6 #pfu/ml CHIK viremia IgM ELISA P/N 20 IgG Neutralizing Ab 2-14 to DAYS POST ONSET

12 Diagnóstico Laboratorial

13 Diagnóstico Laboratorial Isolamento Viral Cultura de Células Hela, C6/36, Vero, BHK21, cérebro de camundongo Amostras de soro na fase aguda (< 8 dias) Confirmação Imunofluorescência ou PCR Laboratório NB3

14 Diagnóstico Laboratorial RT-PCR PCR em tempo real Amostras de soro e sobrenadante de cultura celular

15 RT-PCR em tempo real

16 RT-PCR em tempo real

17 Real time RT-PCR Interpretação dos resultados Controle positivo ser positivo (Ct) Controle negativo ser negativo Validação do Teste Ct < 38 positivo Ct > 38 < 39 inconclusivo Ct > 39 negativo

18 Diagnóstico Laboratorial Testes sorológicos Ensaio Imunoenzimático de captura (MAC-ELISA) Teste de neutralização por redução de placas (PRNT)

19 IgM Capture ELISA 1. Coat With Goat anti-human IgM 4 Overnight 2. Add Patient 1: Hour 3. Add Antigen 4 Overnight HRP HRP 4. Add HRP anti-group McAb 37 1 Hour

20 MAC-ELISA para CHIKV realizada no LACEN-CE

21 Interpretação dos Resultados Sorologia P/N: O.D. soro paciente/o.d. controle negativo P/N < 2 = Negativo P/N 2-3 = Inconclusivo P/N > 3 = Positivo

22 Interpretação dos Resultados

23 Reatividade cruzada de AcIgM do CHIK com outros alfavirus CHIK IgM Capture ELISA (P/N) CHIK RR ONN VEE MAY EEE

24 Diagnóstico Laboratorial Confirmação Laboratorial Detecção de Ac IgM em soro e/ou líquor Soro conversão em amostras pareadas Aumento de 4x o título de IgG Detecção do vírus e/ou genoma viral Isolamento viral, qrt-pcr, RT-PCR Vigilância Ambiental Detecção do vírus e/ou genoma viral em vetores ou hospedeiros qrt-pcr, RT-PCR, e outros vírus

25 Coleta, Armazenamento e Transporte Coleta apropriada, tratamento, armazenamento e transporte das amostras são aspectos essenciais do diagnostico laboratorial. Todas as amostras clinicas devem ser acompanhadas das informações clinicas e epidemiológicas dos pacientes.

26 Amostras para diagnóstico sorológico e virológico Amostra Soro Coleta de fase aguda e fase de convalescência Fase aguda até 8 dias após o aparecimento dos sintomas Fase convalescência de 10 a 14 dias após a primeira coleta

27 Outros tipos de amostras para investigação laboratorial Líquor No caso de menigoencefalite Líquido sinovial No caso de artrite com derrame Material de autópsia

28 Transporte de Amostras O transporte deve ser refrigerado (2 C-8 C) Não congelar o sangue total, pois a hemólise pode interferir no resultado do teste de sorologia As amostras de soro para isolamento viral e o diagnóstico molecular devem ser armazenados congelados

29 Vigilância Laboratorial

30 Vigilância Laboratorial de Chikungunya Exames realizados no LACEN-CE Sorologia IgM RT-PCR em tempo real

31 Vigilância Laboratorial de Chikungunya Dados LACEN-CE

32 Descentralização da rede de laboratórios do vírus Chikungunya RR AP AM PA MA CE RN PI PB PE AC RO TO AL SE MT BA DF GO MG MS ES SP RJ PR SC RS

33 Obrigada!

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