IMUNOFENOTIPAGEM NAS LEUCEMIAS AGUDAS

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1 IMUNOFENOTIPAGEM NAS LEUCEMIAS AGUDAS Curso Pré-Congresso: IMUNOFENOTIPAGEM NAS DOENÇAS HEMATOLÓGICAS Mariester Malvezzi Hospital de Clínicas Universidade Federal do Paraná

2 LEUCEMIA AGUDA Definição É uma neoplasia de células hematopoéticas precursoras que apresentam proliferação anormal e parada de maturação em diferentes estágios de sua diferenciação. 20% LMA

3 EPIDEMIOLOGIA 4/ /ano em geral /ano/EUA LLA: casos/ano LMA: 9.700/ano > 60 anos 10/ /ano Crianças: LLA-B : em 85% 85-90% LLA-B precursoras Linfoma linfoblástico B: < 10% LLA-T : 15%, em adolescentes Linfoma linfoblástico T: >80% 40% dos linfomas Adultos: LMA LLA: em 15%: B 75% T 25%

4 CARACTERIZAÇÃO LABORATORIAL DE UMA NEOPLASIA HEMATOLÓGICA: ABORDAGEM INTEGRADA Morfologia Citoquímica Immunofenotipagem Citogenética Biologia molecular Ciclo celular Citometria de fluxo Imunohistoquímica

5 IMUNOFENÓTIPO DAS NEOPLASIAS HEMATOLÓGICAS UTILIDADE CLÍNICA DOS ESTUDOS FENOTÍPICOS - Classificação Diagnóstica - Avaliação Prognóstica - Monitorização Correlação fenótipo X citogenética X prognóstico

6 IMUNOFENÓTIPO DAS NEOPLASIAS HEMATOLÓGICAS ESTRATÉGIA 1- Estudo do que é Normal 2- Estudo do Fenótipo das Doenças

7 IMUNOFENÓTIPO DAS CÉLULAS LEUCÊMICAS Célula normal x Célula leucêmica Identificação Caracterização Quantificação

8 CARACTERIZAÇÃO FENOTÍPICA DAS CÉLULAS LEUCÊMICAS 1. Designação da Linhagem 2. Avaliação da Maturação Celular 3. Pesquisa de Aberrâncias Fenotípicas

9 CARACTERIZAÇÃO FENOTÍPICA DAS CÉLULAS LEUCÊMICAS 1. Antígenos que definem linhagem: * Mielóide: cympo * Linfóide B: cycd79a, cycd22 * Linfóide T: cycd3 2. Antígenos associados a imaturidade: ntdt, CD34, CD117

10 CARACTERIZAÇÃO FENOTÍPICA DAS CÉLULAS LEUCÊMICAS 2. Antígenos associados à maturação das linhagens: Mielóide: CD11b, CD13, CD33, CD65 Monocítica: CD11c, CD14, CD36, CD64, CD68, lactoferr Linfóide B: CD10, CD19, CD20, CD22, CD24, CyIgμ, K, L Linfóide T: CD1a, CD2, CD3, CD4, CD5, CD7, CD8 Linfóide NK: CD2, CD11b, CD16, CD56, CD57 Eritróide: CD36, CD71, CD105, Glicoforina A Plaquetária: CD41a, CD42b, CD61 Basofílica: CD9, CD13, CD33, CD123, CD203, HLA-DR Dendrítica: CD16, CD33, CD117, CD123, HLA-DR Mastocítica: CD2, CD25, CD33, CD68, CD117

11 CARACTERIZAÇÃO FENOTÍPICA DAS CÉLULAS LEUCÊMICAS 3. Pesquisa de Aberrâncias Fenotípicas: Expressão de antígenos de outra linhagem * LLA CD13, CD15, CD33 * LMA CD2, CD5, CD7 e/ou CD19, CD22, CD56 Assincronismo de expressão dos antígenos * CD11b, CD15 ou CD16 em células CD34++ *Ausência de expressão de antígenos. CD13 neg em LMA, CD5 neg em LLA-T Superexpressão de antígenos * CD34, CD14 na LMA; CD10 na LLA Parâmetros de dispersão anormais * FSC e SSC altos ou baixos

12 APLICAÇÃO DA CITOMETRIA DE FLUXO LEUCEMIAS AGUDAS Diagnóstico de linhagem linfóide vs mielóide. Subclassificação imunológica das leucemias agudas linfoblásticas precursoras B e T. Diagnóstico das leucemias agudas M0, M6, M7, dendríticas, mastócitos. Diagnóstico das leucemias de linhagem ambígua. Triagem diagnóstica de alterações cromossômico / genéticas. Ex: LMA-M3 c/ t(15;17); LLA-B c/ 11q23, t(9;22), t(1;19), t(12;21).

13 CLASSIFICAÇÕES FAB French/American/British 1976 MIC Morfológica/Imunológica/Citogenética 1986 REAL Revised European-American Classification of Lymphoid Neoplasms 1994 OMS Organização Mundial da Saúde 2001 E 2008

14 CLASSIFICAÇÃO 0MS Estratifica as linhagens linfóide, mielóide, histiocítica/dendrítica e mastocítica Postula a célula de origem para cada neoplasia Define entidades nosológicas Utiliza várias áreas do conhecimento: clínica, morfologia, citoquímica, imunofenótipo, biologia molecular É mutável

15 OMS-2008 CLASSIFICAÇÃO DAS LEUCEMIAS AGUDAS LEUCEMIAS LINFOIDES AGUDAS LEUCEMIAS MIELOIDES AGUDAS LEUCEMIA AGUDA DE LINHAGEM AMBÍGUA

16 LEUCEMIAS AGUDAS DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL MIELÓIDE?? LINFÓIDE??

17 LEUCEMIAS AGUDAS DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL LLA-B LMA-M0 LLA-T MIELÓIDE!!! LINFÓIDE!!!

18 OMS-2008 CLASSIFICAÇÃO DAS LEUCEMIAS LINFOIDES AGUDAS 1- Leucemia/Linfoma linfoblástico B 2- Leucemia/Linfoma linfoblástico B com anormalidades genéticas: t(9;22), t(12;21), t(v;11q23), t(1;19), t(5;14), hiper e hipodiploide 3- Leucemia/Linfoma linfoblástico T 4- Leucemia/Linfoma linfoblástico NK

19 Leucemia / Linfoma Linfoblástico B

20 CD45 PerCP CD22 PE CD20 PE CD38 PE CD10 PE Esquema de Diferenciação da Célula B Normal CD10 FITC -> CD34 FITC -> TdT FITC -> Gate em CD CD34 PE -> CD34 FITC ->

21 CD38 PE -> LLA B CD34 FITC ->

22 LLA-B Pré-B cyigmμ(mu)+ CD19+, CD10+, TdT+ CD20-/+d, CD45++, CD34-/+, smigm t(1;19) 20-25% em crianças Não específico

23 LLA-B 11q23 CD19+, CD10-, CD15+, CD20-, CD34+, CD65+, q23, rearranjo MLL Sensibilidade: 95% Especificidade: 85% Khalidi, HS et al, Am J Clin Pathol, 111:467, 1999

24 LLA-B Comum Ph+ CD19+, CD10++, CD20+, CD34++, CD38-/+fr, CD13+fr t(9;22) Adultos Sensibilidade: 100% Especificidade: >90% Leukemia, 15:406, 2001

25 LLA PH+ CD10++ CD34++ CD38-/+ CD13+fr

26 LLA-L3 ou Linfoma de Burkitt FSC alto CD19+, CD20+, CD22+, CD10+, TdT- CD34-/+, migm+ Kappa ou Lambda+ Neoplasia de célula B madura

27 CD34 CD10 LLA-L3 ou Linfoma de Burkitt FSC CD79a IgM LAMBDA CD19 CD45

28 Leucemia /Linfoma Linfoblástico T cycd3+, CD7++, TdT+, CD1a-/+, mcd3-/+, CD4-/+, CD5-/+, CD8-/+, CD10-/+, CD34-/+

29 Leucemia/Linfoma de Células NK São raros tanto em adultos quanto em crianças Diagnóstico diferencial com Leucemias de células dendríticas Imunofenótipo: cycd3-, CD2-/+, CD4-/+, CD5-, CD7-/+, CD8-/+, CD16-, CD56+, TdT-, CD11b-/+, CD13-/+, CD33-/+, HLA-DR-/+.

30 OMS-2008 CLASSIFICAÇÃO DAS LEUCEMIAS MIELOIDES AGUDAS 1- LMA FAB ou não especificada 2- LMA com anormalidades genéticas: t(8;21), t(15;17), inv16 ou t(16;16), t(9;11), t(6;9), inv3 ou t(3;3), t(1;22). 3- LMA com alterações relacionadas com Mielodisplasia 4- Neoplasias mieloides relacionadas a terapia 5- Sarcoma mieloide 6- Proliferações mieloides associadas a S. Down 7- Neoplasia de célula dendrítica plasmocitoide

31 OMS-2008 CLASSIFICAÇÃO DAS LEUCEMIAS MIELOIDES AGUDAS Classificação FAB ou Não especificada LMA-M0 ou com diferenciação mínima LMA-M1 ou sem maturação LMA-M2 ou com maturação LMA-M4 ou mielomonocítica LMA-M5 ou monoblástica/monocítica LMA-M6 ou eritroide LMA-M7 ou megacarioblástica LMA-M8 ou basofílica Panmielose aguda com mielofibrose

32 CD13 Leucemia Mieloide Aguda cympo+, CD13+, CD33+, CD34+, CD117+, HLA-DR+, CD7-/+, CD11b-/+, CD15-/+ CD45 cympo negativa: M5, M6, M7, basofílica, dendrítica CD34

33 LMA com anormalidades citogenéticas recorrentes t(15;17) inv(16) ou t(16;16) t(8;21) 11q23 t(9;11) t(6;9) inv (3) ou t(3;3) t(1;22)

34 LMA com t(15;17) cympo+, CD15- CD13 heterogêneo CD33 homogêneo CD34-/+, HLA-DR- SSC alto 5-8% dos casos Hipergranular/Típica Hipo/Microgranular Orfao, A et al, Haematologica, 84:405, 1999

35 LMA M3 com t(15;17) AUTOFLUORESCÊNCIA cympo++ SSC/CD45 CD13 het CD33 homo CD34 neg DR neg

36 LMA com inv(16) ou t(16;16) Mieloblastos: cympo, CD13,CD33, CD34, CD117 Monoblastos: CD4, CD14, CD15, CD36, CD64, CD % dos casos LMMA c/ eosinofilia Número variável

37 LMA M4 com inv 16 Eosinófilos: 12,4% Mieloblastos: 36,0% Monoblastos: 28,2%

38 NEOPLASIA DE CD PLASMOCITÓIDE FSC alto MPO neg CD45++ CD56+ CD4+ CD123++ DR++

39 OMS-2008 CLASSIFICAÇÃO DAS LEUCEMIAS AGUDAS AMBÍGUAS 1- Leucemia aguda indiferenciada 2- Leucemia aguda de fenótipo misto B/Mieloide 3- Leucemia aguda de fenótipo misto T/Mieloide 4- Leucemia aguda de fenótipo misto com t(9;22) 5- Leucemia aguda de fenótipo misto com t(v;11q23)

40 LA de Linhagem Ambígua Escore Linfóide B Linfóide T Mielóide 2 CyCD79a CD3(cy/m) MPO CD22,IgM TCR 1 CD19 CD2 CD117 CD20 CD5 CD13 CD10 CD8 CD33 CD10 CD65 0,5 TdT TdT CD14 CD24 CD7 CD15 CD1a CD64 ESCORE > 2 Grupo EGIL, Leukemia, 12: 2038, 1998

41 LA de Linhagem Ambígua MPO-, cycd22+d, CD33+d

42 BLASTO: 78,9% LTN: 11,1% CD34 CD7 CD3 Doença Residual Mínima BLASTO: 0,04% LTN: 9,37% LLA-T CD34 CD7 CD3

43 A ACURÁCIA NA ESTRATIFICAÇÃO DIAGNÓSTICA DAS LEUCEMIAS AGUDAS LEVARÁ AO MELHOR MANEJO TERAPÊUTICO

44 HOSPITAL DE CLÍNICAS DA UFPR OBRIGADA EQUIPE DE IMUNOFENOTIPAGEM Ana Paula de Azambuja Edna Martins Eliana L Lima Elisa Novello Juli Pimentel Maria Tadeu L Rocha Miriam P Beltrame Noeli T Silva Suély K Weiss Juliana Y Suzuki