Instituto de Ciências Biomédicas, USP. Departamento de Anatomia. São Paulo-SP.

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Maria do Carmo Andrade Caiado
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1 ANÁLISES DE MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA E DE TRANSMISSÃO DA ENTESE DO TENDÃO CALCÂNEO DURANTE O ENVELHECIMENTO. CURY, DP1, DIAS, FJ2, WATANABE, I1. 1 Instituto de Ciências Biomédicas, USP. Departamento de Anatomia. São Paulo-SP. 2 Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, USP. Departamento de Cirurgia e Anatomia. Ribeirão Preto-SP. Introdução: Os tendões são tipicamente descritos como tecido conjuntivo fibroso denso que inserem os músculos aos ossos. Eles possuem relativamente poucas células, mas grande número de fibras colágenas que os concedem forças tensíveis extremamente altas [1]. A interface de contato do tendão com o tecido ósseo é chamada de entese e são classificadas como fibrosa (exemplo: ligamento colateral medial) ou fibrocartilaginosa (exemplo: tendão calcâneo) [2,3]. A transição entre tendão e tecido ósseo consiste de quatro zonas: A primeira zona consiste do próprio tendão, a segunda por fibrocartilagem não mineralizada, a terceira por fibrocartilagem mineralizada e a quarta por tecido ósseo [4]. Métodos: Foram utilizados 20 ratos Wistar machos, organizados em dois grupos sendo 10 adultos com idade de 4 meses e 10 idosos com 18 meses de idade. Para MEV os animais foram anestesiados com Xilazina (10mg/kg) e Quetamina (75mg/kg), perfundidos com a solução de Karnovsky modificada [5]. As amostras foram crio-fraturadas e pós-fixadas em solução de OsO4 a 1%, durante 2h à 4ºC, desidratadas em álcool, secas em aparelho ponto crítico, montadas em stubs e cobertas com íons de ouro. Para MET os animais foram anestesiados e perfundidos da mesma maneira de MEV, as amostras foram desmineralizadas com EDTA 0,15M, ph 7,4 [6]. Em seguida as amostras foram pós-fixadas com solução de OsO 4 a 1% durante 2h à 4ºC, desidratas em álcool e óxido de propileno, embebidas em resina Spurr. Cortes ultrafinos de 60nm foram realizados, montado em telas de cobre de 200 mesh [5], contrastados com a solução de acetato de uranila a 4% por 3 min [7], e com solução aquosa de citrato de chumbo a 0,4% por 3 min [8]. Resultados: Análises de MEV mostram as fibras colágenas inserindo-se na fibrocartilagem não mineralizada em ambos os grupos (figs. 1A-B). Uma maior ampliação destas fibras revela gotículas lipídicas entre elas ou em alguns casos unindo umas às outras (figs. 1C-D). Na região de fibrocartilagem mineralizada a morfologia detalhada das lacunas de células de fibrocartilagem são observadas (figs. 2A-B), assim como lacunas de grupos isogênicos envoltos por matriz territorial (figs. 2C-D). No tecido ósseo células sanguíneas são demonstradas no interior dos espaços trabeculares, no grupo adulto nota-se com clareza aglomerados de células (fig. 2E), já no grupo idoso pela deposição de gordura as células não se tornam visíveis e o aglomerado apresenta uma consistência viscosa (fig. 2F). As análises de MET revelam em ambos os grupos as fibrilas colágenas do tendão se inserindo na fibrocartilagem mineralizada (figs. 3A-G). Osteócitos alojados

Introdução: Os tendões são tipicamente descritos como tecido conjuntivo fibroso denso que inserem os músculos aos ossos.

2 em lacunas, com seus devidos processos celulares e núcleos são demonstrados (figs. 3B-H), assim como as células de fibrocartilagem com núcleos de formatos variados e extenso retículo endoplasmático granular são presentes no grupo adulto (figs. 3C-D), um diminuído retículo no grupo idoso é notado (figs. 3I-J). O tecido tendíneo constituído por diversas camadas de fibras colágenas foi observado em ambos os grupos (figs. 3E-K) com tenócitos presentes no adulto (fig. 3E), assim como as estriações que constituem as fibrilas são demonstradas (figs. 3F-L). Discussão: A nível ultraestrutural as análises revelaram as células dos animais adultos contendo as organelas citoplasmáticas mais desenvolvidas, porém, em ambos os grupos os núcleos apresentaram formatos variados. As células de fibrocartilagem apresentam no grupo adulto processos citoplasmáticos longos e delgados e no idoso processos curtos, além de uma diminuição na quantidade e tamanho das células [9]. A diminuição da atividade celular provocada pelo envelhecimento ocorre pela diminuição do de Golgi, poucas cisternas de retículo endoplasmático granular e escassas mitocôndrias [10]. Citação Bibliográfica 1. BENJAMIN, M. Int Rev Cytol., v.196, p.85, DE PALMA, L. Foot Ankle Int., v.25, p.414, CLAUDEPIERRE, P. Joint Bone Spine., v.72, p.32, THOMOPOULOS, S. J Biomech., v.39, p.1842, WATANABE, I. Arch Histol Jpn., v.46, p.173, EVERTS, V. Methods Mol Biol., v.816, p.351, WATSON, ML. J Biophys Biochem Cytol., v.25, p.475, REYNOLDS, ES. J Cell Biol., v.17, p.208, STROCCHI, R. Foot Ankle., v.12, p.100, BENJAMIN, M. J Anat., v.179, p.127, 1991.

3C-D), um diminuído retículo no grupo idoso é notado (figs. 3I-J). O tecido tendíneo constituído por diversas camadas de fibras colágenas foi observado em ambos os grupos (figs.

3 Figura 1: Microscopia eletrônica de varredura (A-C) grupo adulto, (B-D) grupo idoso. (A) Fibrocartilagem mineralizada (FM), fibra colágena (seta menor), lacuna de células de fibrocartilagem na região não mineralizada (seta maior) e na FM (cabeças de setas). Barra: 10 µm. (B) Fibras colágenas tendíneas (**), fibrocartilagem mineralizada (FM). Barra: 20 µm. (C) Fibra colágena (seta), gotículas de gordura (cabeças de seta). Barra: 2 µm. (D) Feixe de fibras colágenas (*), gotículas de gordura (cabeças de seta). Barra: 2 µm.

(seta maior) e na FM (cabeças de setas). Barra: 10 µm. (B) Fibras colágenas tendíneas (**), fibrocartilagem mineralizada (FM).

4 Figura 2: Microscopia eletrônica de varredura. (A-C-E) grupo adulto, (B-D-F) grupo idoso. (A-B) Lacuna de célula de fibrocartilagem (**), fibrocartilagem mineralizada (*). Barras: 1 µm. (C-D) Lacuna de grupo isogênico de célula de fibrocartilagem (**), matriz territorial (*). Barras: 2 µm. (E) Células sanguíneas maduras (setas), osso trabecular (*). Barra: 100 µm. (F) Aglomerado de células sanguíneas com deposição de gordura (*), osso trabecular (**). Barra: 50 µm.

(C-D) Lacuna de grupo isogênico de célula de fibrocartilagem (**), matriz territorial (*). Barras: 2 µm.

5 Figura 3: Microscopia eletrônica de transmissão. (A-F) grupo adulto, (G-L) grupo idoso. (A-G) Fibrilas colágenas tendíneas (setas), fibrocartilagem calcificada (*). Barras: 0,2 µm e 0,5 µm. (B) Núcleo (N), lacuna (*), processo celular (seta), canalículo (cabeça de seta), fibrila colágena (**), osso (B). Barra: 0,5 µm. (C) Núcleo (N), lacuna (seta maior), retículo endoplasmático granular - REG (seta menor), processo citoplasmático (cabeças de seta), matriz territorial (*). Barra: 0,4 µm. (D) Núcleo (N), REG (setas), processo citoplasmático (cabeça de seta). Barra: 0,2 µm. (E) Fibroblasto (cabeças de seta), prolongamento citoplasmático (setas), bandas de fibrilas colágenas (*). Barra: 0,5 µm. (F-L) Fibrilas colágenas. Barras: 0,3 µm e 25 nm. (H) Núcleo (* branco), lacuna (* preto), processo celular (setas), osso (B). Barra: 0,5 µm. (I) Núcleo (N), REG (seta), matriz territorial (*), matriz interterritorial (**). Barra: 0,5 µm. (J) Núcleo (N), nucléolo (seta menor), mitocôndria (cabeças de seta), processo citoplasmático (seta maior), matriz territorial (*), matriz interterritorial (**). Barra: 0,5 µm. (K) Bandas de fibrilas colágenas (*). Barra: 1 µm.

(C) Núcleo (N), lacuna (seta maior), retículo endoplasmático granular - REG (seta menor), processo citoplasmático (cabeças de seta), matriz territorial (*). Barra: 0,4 µm.

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